Post on 28-Jan-2016
ACTIVIDAD ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA ANTIMICROBIANA DE MIELES Y DE MIELES Y PROPÓLEOSPROPÓLEOSLic. Miriam Iurlina
Departamento de QuímicaFacultad de Ciencias Exactas y NaturalesUNIVERSIDAD NACIONAL DE MAR DEL PLATA
COMPOSICION DE LA MIELCOMPOSICION DE LA MIELCarbohidratos (75-80%)Glucosa y fructosa (monosacáridos reductores, 85-95%)Disacáridos: sacarosa, maltosa e iso-maltosaOligosacáridos
Agua (14-20%)
Otros compuestos (1-5%)Ácidos orgánicos (0.1-0.5%)Proteínas y aminoácidos (0.2-2%)Sales minerales (0.1-1.5%) y vitaminasEnzimasCompuestos fenólicos, sustancias aromáticas y pigmentosCera, granos de polen
La miel a través de la historia…….…alimento, elixir, medicina
1892 La actividad antibacteriana de la miel
1919 Se establece que la miel posee actividad antibacteriana
1930 Tratamiento de heridas con infecciones bacterianas
1940 Estudios de las propiedades biológicas de la miel
En la actualidadtratamiento de heridas infectadas, quemaduras y úlcerasdesórdenes gastrointestinalesen el tratamiento de asma acción anti-inflamatoria y antioxidante
DESDE ENTONCES ...
Actividad antibacteriana
Sensibilidad de distintos microorganismos
Comparar en mieles de distinto origen la potencia de su acción inhibitoria
La naturaleza de las sustancias antibacterianas
FACTORES RESPONSABLES DE LA FACTORES RESPONSABLES DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE LA MIELACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE LA MIEL
Osmolaridad, baja actividad de agua (aw)
Acidez, bajo pH
Sistema glucosa-oxidasa
glucosa-oxidasa Glucosa + H2O + ½ O2 ------------------ Acido glucónico + H2O2
H2O2 - glucosa-oxidasa, catalasa
iones metálicos y/o ácido ascórbico
Componentes fitoquímicos aportados por el néctar Compuestos fenólicos: Pinocembrina y ácidos fenólicos; Lisozima; Terpenos; Compuestos volátiles
Otros factores que contribuirían a la naturaleza antimicrobiana de la miel
Bajo contenido proteico
Alta relación carbono/nitrógeno
Bajo potencial de óxido-reducción
Viscosidad
ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA EN MIELES
Actividad antimicrobiana total
Peróxido de hidrógeno
Compuestos no peróxido de hidrógeno
ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Métodos microbiológicos estándar
Métodos de difusión Métodos de dilución
Difusión en agar por Macro o micro dilución
discos de papel en caldo Difusión en agar Dilución en agar por pocillos
Actividad antibacteriana total de la miel
H2O2
componentes no H2O2
Método de difusión en agar en placa
Staphylococcus aureus
osmotolerante
EVALUACION DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA EN MIEL
ESPECIES MICROBIANAS SENSIBLES A LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE LA MIEL
Bacterias Gram positivas
Staphylococcus aureusBacillus cereus
Bacillus megateriumBacillus pumilus
Listeria monocytogenesMicrococcus luteus
Streptococcus faecales
Bacterias Gram negativas
Escherichia coliProteus mirabilis
Pseudomonas aeruginosaSalmonella thyphimurium
Salmonella enteriditisShigella flexneri
Klebsiella pneumoniae
Mohos y levadurasAspergillus sp., Candida sp., Penicillium sp.,
Saccharomyces sp.
VARIACION EN LA ACTIVIDADANTIBACTERIANA DE LA MIEL
Origen floral
Origen geográfico condiciones climáticas
y ambientales
Prácticas de manejo de la colmena
VARIACION EN LA ACTIVIDADANTIBACTERIANA DE LA MIEL
Mieles oscuras elevada actividad antibacteriana
Miel de manuka, una arbusto nativo de Nueva Zelanda – Leptospermun scoparium
Miel de brezo, miel de Erica spp.
color -- contenido en pigmentos tales como
carotenoides y de flavonoides ---- poder antioxidante
Mieles claras baja actividad antibacteriana Miel de trébol (Trifolium spp.)
CARACTERIZACIÓN FISICOQUÍMICA, BOTÁNICA Y BIOACTIVIDAD DE MIELES ARGENTINAS
Muestras 41 mieles obtenidas desde apiarios, 2003 – 2005
Análisis de polen Contenido polínico según el método de Loveaux y col., 1978
Determinaciones fisicoquímicas color, humedad, pH y acidez total, hidroximetilfurfural, actividades de glucosa-oxidasa y diastasa
Actividad antimicrobiana Staphylococcus aureus ATCC 25923
Aromas suaves a intensos
Mieles liquidas, cristalizadas (excepción de la miel de caatay)
Análisis de polen
Mieles mixtas tipos polínicos: Eucalyptus sp., Lotus sp., t. Fabáceas
Mieles monoflorales miel de caatay, Helianthus sp., Eucalyptus sp., Lotus sp., t. Fabáceas
Mieles poliflorales
Características fisicoquímicas de mieles
Mieles
Color
(420nm)
Humedad
(%)
Acidez
(meqNaOH/kg) pH
HMF
(mg/kg)
Mixtas 0,610 ± 0,123 17,5 ± 0,73 14,99 ± 4,19
4,01 ± 0,36 0,85 ± 1,32
Monoflorales 0,634 ± 0,103 17,83 ± 0,97 17,69 ± 2,55
3,87 ± 0,30 2,95 ± 4,50
Poliflorales
0,541 ± 0,113
17,43 ± 0,63
19,58 ± 3,83
3,85 ± 0,22
2,16 ± 6,28
Color (420nm), acidez (meqNaOH/kg) y pH para mieles de Lotus sp., Eucalyptus sp. y Fabáceas.
Parámetro evaluado Mieles
(promedio ± desvío
estándar) Lotus sp. Eucalyptus sp. t. Fabaceae
Color (420nm) 0,623 ± 0,082 0,712 ± 0,060 0,542 ± 0,099
Acidez (mgNaOH/kg) 16,53 ± 2,68 17,22 ± 2,74 18,05 ± 2,91
pH 3,95 ± 0,36 3,89 ± 0,23 4,01 ± 0,31
Distribución de las mieles mixtas, mono- y poliflorales de acuerdo a la actividad antimicrobiana
Halo de inhibición
Mieles mixtas n=10 (%)
Mieles monoflorales n=15 (%)
Mieles poliflorales n=16 (%)
(mm) 50 % (p/v)
25 % (p/v)
50 % (p/v)
25 % (p/v)
50 % (p/v)
25 % (p/v)
≤ 10 (NS) 2 (20%) 4 (40%) 1 (7%) 7 (47%) 3 (18.7%) 5 (31.25%)
11 a 20 (S) 4 (40%) 3 (30%) 7 (47%) 4 (27%) 1 (6.25%) 0 (0%)
21 a 30 (MS) 1 (10%) 2 (20%) 3 (20%) 3 (20%) 4 (25%) 9 (56.25%)
≥ 31 (AS) 3 (30%) 1 (10%) 4 (27%) 1 (7%) 8 (50%) 2 (12.5%)
CONCLUSIONES
Todas las mieles presentaron bioactividad, ejerciendo un efecto variable de inhibición del crecimiento de S. aureus
No habría una asociación con la fuente floral.
No habría una asociación clara entre el color de la miel y el potencial de su acción antimicrobiana.
La profundización de este tipo de estudios resulta de interés en la búsqueda de mieles de alta actividad que podrían ser usadas como alternativa natural frente a sustancias antimicrobianas.
EL PROPÓLEOS, GOMO-RESINA ELABORADO POR LAS ABEJAS DE LA MIEL (APIS MELLIFERA L.) A PARTIR DE EXUDADOS RESINOSOS DE CIERTOS
ÁRBOLES
FUNCIONES EN LA COLMENA
fortalecimiento de las celdas impermeabilización de la colmena
bloqueo de grietas y agujeros acción antibiótica
recubrimiento de los cadáveres de invasores
COMPOSICION DEL PROPOLEOS
50-55% de resinas (compuestos polifenólicos)
30-40% de ceras
5-10% de aceites esenciales
5% de polen
5% minerales, vitaminas, aminoácidos
Se detectaron más de 250 elementos constitutivos y unos 50 principios biológicamente activos
PROPIEDADES DEL PROPOLEOS
Actividades farmacológicas
antitumorales, anti-inflamatoria, antibacteriana, antioxidante, antiviral, antifúngica, regeneradora de tejidos, inmunomoduladora, analgésico, hipotensor y termoestabilizador
PROPIEDADES DEL PROPOLEOS
Las propiedades antimicrobianas fracción polifenólica
flavonoides y ácidos fenólicos, cumarinas
apigenina, kaempferol, pinocembrina, galangina, quercetina, y hesperidina.
Propiedades antioxidantesminimizando la peroxidación lipídica y el
efecto de los radicales libres, reducen el riesgo de
afecciones cardiovasculares, previenen el envejecimiento.
ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DEL PROPOLEOS
El propóleos no puede ser utilizado como material crudo siendo necesaria su extracción con solventes preservar la fracción fenólica
El extracto etanólico de propóleos es el más estudiado
La actividad antimicrobiana -bacterias Gram positivas > negativas
ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DEL PROPOLEOS
El mecanismo de acción sinergismo entre componentes fenólicos y otras sustancias de la resina
Actividad antimicrobiana de ciertos flavonoides–Formación de agregados celulares –Inhibición en la síntesis de ácidos
nucleicos–Cambios en la integridad y funcionalidad
de la membrana citoplasmática –Inhibición del metabolismo energético
Inhibición del crecimiento de Inhibición del crecimiento de Escherichia coli Escherichia coli en en presencia de extractos etanólicos y extractos acuosos presencia de extractos etanólicos y extractos acuosos
de propóleosde propóleos
Muestras de propóleos Apiarios de la región sudeste de la provincia de Bs Aires
Extractos de propóleos Maceración en una solución etanol-agua y en agua destilada
Actividad antibacteriana Disminución de la viabilidad de E. coli ATCC 25922 en presencia de los extractos se
determino por ensayos de dilución en agar.
0
10
20
30
40
50
60
70
0 0.20 0.40 0.80 1.60 3.50
EEP % (p/v)
Dis
min
ució
n d
e la
via
bili
dad
(%)
muestra 1
muestra 2
muestra 3
muestra 4
Disminución de la viabilidad de E. coli con distintasconcentraciones de extractos etanólicos de propóleos
Extractos etanólicos de propóleos Compuestos polifenólicos totales
--> 190-250 mg/g de extracto
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muestra 1
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muestra 3
muestra 4
Disminución de la viabilidad de E. coli con distintas concentraciones de extractos acuosos de propóleos
GRACIAS !