Post on 06-Aug-2020
Biología molecular en el trasplante de
médula ósea
Linus Pauling, padre de la biología molecular
1990
Biología molecular en TMO:
ü Selección de donador ü Seguimiento de quimerismo ü Identificación de infecciones
En México se
trasplantan menos del 10% de los
pacientes quienes necesitan un TMO
90%
1988
1996
BBMT 2009; 15:1628
2000
El Método Mexicano: n Fármacos accesibles (BU, Cy, FLU) n Conducción extrahospitalaria n Número ajustado de aferesis (1-6 x 106/Kg
células CD34) n Pocas transfusiones n No uso de ganciclovir n No uso de Ig IV n No uso de factores de crecimiento n ILD sólo en caso necesario (< 5%)
El Método Mexicano:
n BSF: 4 mg/Kg, días -6, -5 n Cy: 350 mg/m2, días -4, -3, -2 n FLU: 30 mg/m2, días -4, -3, -2 n CyA: 5 mg/Kg, días –1 a +180 n MTX: 5 mg/m2 días +1, +3, +5, +11
403 alotrasplantes:
ü 13 días para > 500 granulocitos ü 12 días para > 20 000 plaquetas ü EICH aguda: 21% ü EICH crónica: 17% ü Mortalidad a 100 días: 17% ü Supervivencia a 150 meses: 48% ü Mediana de SV: 1350 días
0 20 40 60 80 100
403 alotrasplantes (165)
Hematology 2012; 17:195
1386 alotrasplantes
BBMT 2006; 12:422
Months after BMT
Princess Margaret, Toronto
Supervivencia global
CHMI + HUNL
TMO alogénico usando el “método Mexicano”
20 000 USD (300 000 USD en FHCC)
(500 000 USD en MDACC)
ü Causa menos EICH ü Es menos nefrotóxico ü Se asocia menos a reactivación de CMV ü Se puede emplear en niños ü Se puede emplear en sujetos añosos ü Tiene menos morbimortalidad ü Requiere menos transfusiones
TMO con el “método Mexicano”
ü “Cura” la misma proporción de pacientes ü No es una forma “sencilla” de trasplantar ü Necesita mucho apoyo de laboratorio ü No requiere de unidades especiales ü No requiere de un hospital ü Es mucho más barato
TMO con el “método Mexicano”
TMO en México: P Más pacientes trasplantados P Más pacientes curados P Más trabajos publicados ü Mejor educación de médicos ü Mejor atención médica
Biología molecular en TMO:
ü Selección de donador ü Seguimiento de quimerismo ü Decisión de trasplantar ü Definición de remisión ü Identificación de infecciones
Selección del donador:
ü Antígenos HLA A, B y DR ü Los antígenos se estudian por biología molecular ü Tres del padre, tres de la madre ü Compatibilidad para TMO: 6 / 6 o 5 / 6
Molécula HLA
0 10 20 30 40 50 60
0
0.2
0.5
0.7
1
Time in months
Overall survival
6/6
5/6
2004
CTSP ± LD
Receptor Donador Quimera mixta
Quimera completa
R R R
RL RL RL
R R R
RL D D
D D D
D D D
D D D
D D D
D D
D D
D D
D D ! ! !QUIMERISMO
Quimerismo post-trasplante:
P XX / XY P Microsatélites
Enumeracion de cromosomas sexuales
X
Y
Microsatélites
Microsatélites
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
MW O S TPOX FGA vW AMEL D5S818 D16S539
D R R O S O S O S O S
501 pb
404 pb 353 pb
242 pb
190 pb
147 pb
110 pb 89 pb
CITOMETRÍA DE FLUJO PARA GRUPOS SANGUÍNEOS
ERITROCITOS A+
PMT2LO6
Eritrocitos A+ (19.5%)
Respuestas en LGC: P Cariotipo
P BCR / ABL, PCR
P BCR / ABL, qPCR
2005
2008
Rev Invest Clin Méx 2004; 53:235-239
M3
M2
M4Eo
Reacción en cadena de la polimerasa
Marcadores moleculares en LMA 1) PML / RARa 2) AML1 / ETO 3) inv16 4) cKIT 5) CEBPA 6) NPM-1 7) FLT3 8) BCR / ABL
Marcador Riesgo Frecuencia
en LAM PML / RARa Favorable 12-25%
AML1 / ETO Favorable 7-8%
INV16 Favorable 7-9%
cKIT Desfavorable 5%
CEBPA Favorable 8%
NPM1 Favorable 25-35%
FLT3-ITD Desfavorable 18-20%
BCR / ABL1 Desfavorable 0.8-1.2%
Riesgos en LMA a) Bajo
b) Intermedio
c) Alto
Riesgos en LMA a) Bajo:
PML / RARa inv 16 AML1 / ETO
Excepto si tiene FLT3 mutado
Riesgos en LMA b) Intermedio:
Cariotipo normal Trisomía 8 NPM-1 FLT3
CEBPA
Riesgos en LMA b) Alto:
Monosomía 5 Monosomía 7 Cariotipos complejos NPM-1 FLT3
CEBPA
Rev Invest Clin Méx 2005; 57:415
Rev Invest Clín Méx 2011; 63:25-30
Riesgo Hermano idéntico
ó compatible MUD, haploidéntico
ó cordón
Bajo, excepto: No No c-KIT Si Posible
Intermedio, excepto: Si Posible NPM1+/FLT3-ITD - Posible No CEBPA+/FLT3-ITD - Posible No FLT3-ITD + Si Si
Alto Si Si
FLT3
NPM1
Leucemia mieloblástica
Pronóstico FLT3 NPM1 Malo Positivo Negativo Intermedio Negativo Negativo Bueno Negativo Positivo
TMO en LMA
Hermano HLA compatible Cordón umbilical Haploidéntico MUD
TMO en LMA
Mieloablativo Intensidad reducida
2004; 45:1191 2004; 45:1191
2004
2007; 12:193
2007
2006
2006
Biología molecular (microsatélites) para demostrar
que las células leucémicas son del donador
2006
CMV
CMV en TMO
ü Antígeno pp 67 del CMV, definido por biología molecular, indica reactivación
ü Anti-CMV (IgG, IgM) indican exposición al virus
2004
American Journal of Hematology, (2004) in press
1Centro de Hematología y Medicina Interna de Puebla. Puebla, Mexico2Laboratorios Clínicos de Puebla, Puebla, Mexico
3Instituto Nacional de Ciencias Médicas y de Nutrición "Salvador Zubirán“, Mexico City4Departamento de Química y Biología, Universidad de las Américas-Puebla, Puebla Mexico
1,2Ruiz-Argüelles GJ, 1,2Gómez-Rangel JD, 3Ponce-de-León S, 3González-Déctor L, 2Reyes-Núñez V and 2,4Garcés-Eisele J.
The Mexican Schedule to Conduct AllogeneicStem Cell Transplantation Is Related to a Low Risk
Of Cytomegalovirus Reactivation And Disease.
American Journal of Hematology, (2004) in press
1Centro de Hematología y Medicina Interna de Puebla. Puebla, Mexico2Laboratorios Clínicos de Puebla, Puebla, Mexico
3Instituto Nacional de Ciencias Médicas y de Nutrición "Salvador Zubirán“, Mexico City4Departamento de Química y Biología, Universidad de las Américas-Puebla, Puebla Mexico
1,2Ruiz-Argüelles GJ, 1,2Gómez-Rangel JD, 3Ponce-de-León S, 3González-Déctor L, 2Reyes-Núñez V and 2,4Garcés-Eisele J.
The Mexican Schedule to Conduct AllogeneicStem Cell Transplantation Is Related to a Low Risk
Of Cytomegalovirus Reactivation And Disease.
La biología molecular es crítica en
el trasplante de médula ósea