Post on 24-Sep-2018
Bioq. Mariela B. Monreal
Estudio de
Linfomas No Hodgkin y
Neoplasias de Celulas Plasmaticas
por Citometria de Flujo
Primera Parte
Conceptos Generales
Introducción
Aportes de la Citometria de Flujo
en el estudio de Linfoma
1- Herramienta DIAGNOSTICA
Diferenciar NORMAL – REACTIVO – NEOPLASICO
2- CLASIFICACION
Reconocimiento de ENTIDADES NEOPLASICAS distintas
Relación con el pronóstico
Reconocimiento de grupos de riesgo diferente, nuevos
protocolos de tratamiento
3- Evaluación de EFECTIVIDAD del TRATAMIENTO
Detección de Enfermedad Mínima Residual
Biología Molecular - FISH
Citogenético
Estudio de CMF para en el diagnostico de Linfomas
Enfoque actual
Inmunofenotipo
Biología Molecular - FISH
Citogenético
Sintomas
Presentación Clínica
Morfología / Citoquímica
Resultados de Laboratorio
Cómo / Cuándo solicitar CMF?
La clasificación de la WHO establece la importancia de
la evaluación conjunta de morfología, genética y
fenotipo para la correcta clasificación de diferentes
entidades.
Realizar los estudios en un mismo centro que pueda
CORRELACIONAR datos de las diferentes metodologias
realizadas ES INDISPENSABLE - sobre todo en ciertas
situaciones diagnósticas.
Frecuentemente, NO es necesario /efectivo (costo / beneficio) realizar
varios CMF y/o en diferentes muestras…..
El Consenso Internacional de Citometría (2006, Bethesda) identifica
situaciones clínicas en las que la citometría es UTIL en la identificación de
neoplasia y caracterización de la misma.
Mujer joven, derrame pericárdico
Posteriormente, hematólogo provee MAS DATOS :
gran masa mediastinal , derrame pleural.
Biopsia de tumor derivada a otro centro.
Diferentes centros: Limitación diagnóstica
Citometria de Flujo : una herramienta extremadamente UTIL
…..que necesita de DATOS para realizarse correctamente
Historia clinica (diagnosticos previos!, tratamientos recibidos).Edad, sexo
Indicacion medica actual– datos clinicos, laboratorio…que motivan el
estudio.
Datos de CMF previas !
Las decisiones del TEST de CMF a REALIZARSE son tomadas
en
BASE A ESTOS DATOS
Anemia severa, MDS?
Citometría de Flujo Análisis de células en suspención
Células en suspención
“Marcadas” con
Anticuerpos
Monoclonales
conjugados a
fluorocromos
Células pasan en fila una a una
Rayo Laser
Detectores de luces
Computadora
•Almacenamiento
de datos
•ANALISIS
•Gráficos-Reporte
Identificación de Neoplasia Linfoide de celula B madura
(B- CLPD , B-NHL) . CMF “convencional”
RESTRICCION DE CADENAS LIVIANAS de Ig - K o L
FENOTIPO ABERRANTE – COMPARACION CON FENOTIPO NORMAL
Evaluación de 4 antigenos
Multiples combinanciones con CD19 y CD45
como marcadores comunes
CD19
CD45
Evaluación de fenotipo. Detección de anomalías.
Asociacion a entidades clinico patológicas de la WHO
CD5+ CD10-
PLL
MZL
DLBCL (Richter)
LPL-B
CD5- CD10+
HCL
LPL
MZL
MCL
CD5- CD10- : GRUPO MUY HETEROGENEO
MCL CD5neg ; FCL CD10neg
CD5+ CD10+
Entidades mas infrecuentes
DLBCL
FCL
MCL
CLL
BL
Para cada grupo, CMF ADICIONAL , morfologia y biologia molecular /
citogenetico colaboran en la mejor definicion de las ENTIDADES
CD19
CD20
CD45 Evaluación de 8 antigenos
SIMULTANEAMENTE
MAS INFORMACION
VENTAJAS :
DEFINIR MEJOR LAS PATOLOGIAS (DCO)
MAYOR ESPECIFICIDAD (MRD)
MAYOR SENSIBILIDAD (MRD)
MAS INFORMACION en pocas CELULAS
NUEVA TECNOLOGIA
Evaluación de fenotipo en combinaciones multiples
INFORMACION PANEL 8 COLORES
SITUACION MAS COMPLEJA
SE REQUIERE
UN CAMBIO
PARA ABORDAR ESTA
NUEVA TECNOLOGIA
NUEVA TECNOLOGIA
Evaluación de fenotipo en combinaciones multiples
ESTANDARIZACION TOTAL DE LA METODOLOGIA
RESULTADOS TOTALMENTE COMPARABLES (en el tiempo / entre centros)
LST
LST : TUBO SCREENING para B, T o NK SLP
IDENTIFICA LINFOCITOS ANORMALES Combinacion de 12 anticuerpos monoclonales (8 colores)
LST : TUBO SCREENING para B, T o NK SLP
12 muestras de SP NORMAL , DIFERENTES DONANTES SANOS
A LO LARGO DE DOS MESES
Identificación de Neoplasia Linfoide de celula T madura
FENOTIPO ABERRANTE – COMPARACION CON FENOTIPO NORMAL
SCREENING INICIAL TUBO LST
NEOPLASIAS DE CELULAS T MADURAS
(PERIFERICAS) WHO
PREDOMINANTEMENTE LEUCEMICAS /DISEMINADAS
• Leucemia Prolinfocítica T
• Leucemia de Células Grandes Granulares T
• Leucemia NK Agresiva
• Leucemia/Linfoma T Del Adulto (HTLV-1+)
PREDOMINANTEMENTE NODALES
• Linfoma T Angioinmunoblástico
• Linfoma T Periférico sin otra caracterización (NOS)
• Linfoma De Grandes Células Anaplásico, T o Nulo, Primario Sistémico
PREDOMINANTEMENTE EXTRANODALES
• Micosis Fungoides / Síndrome de Sezary
• Linfoma De Grandes Células Anaplásico, T o Nulo, Primario Cutáneo
• Linfoma T Subcutáneo Paniculítico
• Linfoma Extranodal T/NK, Tipo Nasal
• Linfoma T Intestinal Tipo Enteropatía
• Linfoma T Hepatoesplénico
CLL MCL
B-CLPD panel APS
CLL vs MCL
1 sIgM 14.02
2 CD200 13.76
3 CD79b 11.94
4 CD23 8.57
5 CD38 7.73
UTILIDAD CLINICA PRINCIPAL
NUEVO ENFOQUE DIAGNOSTICO en base a FENOTIPO
1- El total de la información de los 5 tubos del panel es UNIFICADO en
un solo “TUBO” (unico FILE)
2- El fenotipo TOTAL de la población de interés (por ej, CELULAS B) , se
ubica en una zona de los nuevos gráficos llamados “APS” :
Separador Automático de Poblaciones
ENFERMEDAD MINIMA RESIDUAL
Conceptos generales
Nuevos regimenes de tratamiento en Linfoma No Hodgkin – B prolongan sustancialmente la SLE (sobrevida libre de enfermedad) y sobrevida global.
Inmunoquimioterapia : Combinaciones de anti CD20 con diferentes regimenes de altas dosis de quimioterapia
Transplante autólogo
Sin embargo, ciertos pacientes sufren de recaídas tempranas.
Es de gran interés predecir tempranamente la duración y calidad de la respuesta, que posibiliten tomar decisiones terapéuticas alternativas.
Después del tratamiento, es posible identificar pacientes con depleción de células neoplásicas a muy bajos niveles (EMR), lo cual se asocia a pronostico favorable.
La erradicación de la enfermedad se plantea actualmente como un objetivo necesario para superar riesgo de recaida o progresion.
CONCLUSIONES
En los últimos 15 años, la citometría de flujo ha evolucionado enormemente como metodología diagnóstica .
Lejos de ser considerada una técnica auxiliar de estudios morfológicos, provee información extremadamente útil y completa, en menos de 24 horas.
La misma debe ser considerada CONJUNTAMENTE con los resultados anatomo-patologicos , para la correcta clasificación de muchas de la entidades ya descriptas.
Los ENORMES avances tecnológicos de los ultimos 5 años, han planteado la necesidad imperiosa de ESTANDARIZACION de esta COMPLEJA metodologia con la que hoy contamos, para lograr aprovechamiento total de los datos, y obtener resultados COMPARABLES entre laboratorios, y a lo largo del tiempo.
ESTE trabajo ha sido lanzado por el grupo EUROFLOW.
El análisis de fenotipo cambia radicalmente a partir de esta propuesta.
Esta NUEVA citometría permite identificar y subclasificar las mayoría de las entidades definidas (WHO actual) , y permitirán el reconocimiento de nuevos grupos de patológías.