Post on 20-Jul-2015
Identificación de nuevos
biomarcadores para el
pronóstico del ictus isquémico
Teresa García Berrocoso, Dolors Giralt,
Israel Fernández, Anna Penalba, Cristina Boada,
Alejandro Bustamante, Joan Montaner
Laboratorio de Investigación Neurovascular
Vall d’Hebron Institut de Recerca (VHIR), Barcelona
6a Jornada Científica VHIR – Barcelona, 29-30 Noviembre 2012
6a Jornada Científica VHIR – Barcelona, 29-30 Noviembre 2012
Coágulo
bloqueando el flujo
cerebral
• 36,7% de pacientes sufrirá discapacidad1
• Segunda causa de muerte2,3
El ictus
2. Roger VL. Circulation. 2012;125:e2-e220.
3. INE, Defunciones según causa de muerte – 2010. 2012
1. Estrategia en Ictus, SNS. 2009
6a Jornada Científica VHIR – Barcelona, 29-30 Noviembre 2012
Causas empeoramiento
Reoclusión del vaso
tPA
Transformación
hemorrágica
Problemas
cardíacos Infecciones
Crecimiento del infarto
y edema cerebral
Urgencias Unidad de ictus
Todos los
ictus
peor
estable
Test
Biomarcador
• Información al paciente y familia
• Riesgo/beneficio del tratamiento
• Asignación de los pacientes
¿Cómo predecir la evolución?
mejor
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¿Biomarcadores pronósticos?
6a Jornada Científica VHIR – Barcelona, 29-30 Noviembre 2012
ajuste
Whiteley W. Stroke. 2009; 40:e380-9
Actualmente ningún biomarcador es
utilizado para predecir la evolución del ictus
Aportar información
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Montaner J. Cerebrovasc Dis. 2012; 34, 240-5
BNP + Clínica
Sólo clínica
Sólo BNP
Los biomarcadores deben mejorar la
predicción basada en los datos clínicos
(uso de nuevos tests estadísticos)
Descubrir cambios moleculares generales
que nos permitan identificar biomarcadores
para la predicción del pronóstico en la fase
subaguda del ictus isquémico
Objetivo
Proteínas mRNA
Leucocitos y
plaquetas (Buffy coat)
Plasma
Eritrocitos
Proteínas
NIHSS en
admisión
Edad
Muestras
individuales
(N = 36)
NIHSS al alta
Empeoramiento Estabilidad Mejoría
N = 4
N = 4
N = 4
N = 4
N = 4
N = 4
N = 4
N = 4
N = 4
15,6 ± 5,7
75,7 ± 8,1
16,7 ± 3,7
70,1 ± 13,6
14,5 ± 4,5
69,7 ± 11,4
28,1 ± 4,5 15,0 ± 3,5 1,7 ± 1,4
Pools de plasma
Librería de 177
anticuerpos SearchLight®
(ELISA múltiple)
Varios anticuerpos
en cada pocillo
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29 proteínas asociadas con empeoramiento
y 6 proteínas asociadas con mejoría
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Proteínas - Discovery
García-Berrocoso T (Manuscript in preparation).
6a Jornada Científica VHIR – Barcelona, 29-30 Noviembre 2012
Proteínas - Replicación
10 candidatos: β-defensina-2, MIP-3b, PAI-1 activo,
BCA-1, Exodus-2, IL-4R, IL-12p40, LIF, MIP-1b y
TWEAK.
ELISA simple y múltiple SearchLight® Muestras individuales
(N = 80)
Empeoramiento 24h
p=0,046 p=0,062
García-Berrocoso T (Manuscript in preparation).
Proteínas - Replicación
6a Jornada Científica VHIR – Barcelona, 29-30 Noviembre 2012
Regresión logística ajustada por edad y sexo.
BD-2 > 1,15 ng/mL (82%se, 48% sp) y IL-4R > 503,40 pg/mL (53% se, 72% sp).
BD-2 e IL-4R son predictores
independientes de empeoramiento a las 24h
Niveles elevados de BD-2 e IL-4R suponen 3,8
veces mayor riesgo de empeorar a las 24h
García-Berrocoso T (Manuscript in preparation).
Proteínas – Modelo predictivo 24h
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Clínica Biom. +
clínica
Clínica Biom. +
clínica
No Empeoran Empeoran
Prob. disminuida
1,9% para no-eventos
Prob. aumentada
7,6% para eventos
Combinación BD2 + IL-4R
Mejora discriminación
9,5 % (IDI) (p=0,033)
BD-2 e IL-4R aportan información a la
predicción de la evolución en la fase
subaguda del ictus
Integrated Discrimination Improvement (IDI)
García-Berrocoso T (Manuscript in preparation).
Leucocitos y
plaquetas (Buffy coat)
Plasma
Eritrocitos
mRNA
NIHSS en
admisión
Edad
Muestras
individuales
RIN # 5-7
(N = 41)
NIHSS al alta
Empeoramiento Estabilidad Mejoría
16,2 ± 6
77,5 (65 - 80)
16,9 ± 4,5
77 (67,5 - 80)
14,8 ± 4,1
77,5 (66 – 80,5)
27,9 ± 4,7 15,4 ± 4,4 2,8 ± 2,4
Pools de RNA
N = 3
N = 2
N = 3
N = 3
N = 2
N = 3
N = 4
N = 2
N = 2
N = 2 N = 2
N = 2
N = 3
N = 2
N = 3
N = 3
Affymetrix GeneChip Human Exon 1.0 ST Array
6a Jornada Científica VHIR – Barcelona, 29-30 Noviembre 2012
6a Jornada Científica VHIR – Barcelona, 29-30 Noviembre 2012
mRNA - Discovery
EMP EST MEJ
4581 tránscritos
diferencialmente expresados
6a Jornada Científica VHIR – Barcelona, 29-30 Noviembre 2012 6a Jornada Científica VHIR – Barcelona, 29-30 Noviembre 2012
mRNA - Discovery
22
20 5 25
031
22
EMP vs EST EMP vs MEJ
MEJ vs EST
85 tránscritos alterados
(p<0,01) entre grupos de
evolución
14 tránscritos correlación +
24 tránscritos correlación –
(R>0,500, p<0,05)
Correlación positiva Correlación negativa
Me
dia
dif
ere
ncia
NIH
SS
Me
dia
dif
ere
ncia
NIH
SS
Expresión normalizada Expresión normalizada
En total, 85 genes presentan alteraciones en su
expresión según la evolución neurológica
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mRNA - Replicación
Muestras individuales
(N = 60)
30 candidatos (tarjetas microfluídicas)
RT-PCR (2 controles endógenos: GAPDH, PPIA)
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mRNA - Replicación
A B C D E F
Menor expresión de genes implicados en
señalización y reparación se asocia con
empeoramiento en la fase subaguda del ictus
6a Jornada Científica VHIR – Barcelona, 29-30 Noviembre 2012
Todos los
ictus
peor
estable
mejor
Proteínas mRNA
BD-2
IL-4R
A
B
C
D
E
F
Proteínas mRNA
BD-2
IL-4R
A
B
C
D
E
F
Futuro
Resumen
o Nuestra estrategia de pooling nos ha permitido
determinar cambios generales en el proteoma y el
transcriptoma según la evolución neurológica de los
pacientes con ictus
o La diferenciación de linfocitos T a Th2 (IL-4R) y el papel
de defensa frente a infecciones (BD-2) son procesos
inmunes asociados al empeoramiento de los pacientes con
ictus
o Procesos de señalización y reparación están disminuidos
en los pacientes que van a empeorar
6a Jornada Científica VHIR – Barcelona, 29-30 Noviembre 2012
Resumen
o Nuevos análisis estadísticos (IDI, NRI) deben ser
implantados para conocer la utilidad real de los
biomarcadores
o Aunar los resultados de ambas ómicas permitirá generar
un panel de moléculas para ayudar en la predicción de la
evolución en los pacientes con ictus
6a Jornada Científica VHIR – Barcelona, 29-30 Noviembre 2012
J. Montaner
T. García-Berrocoso
V. Llombart
A. Bustamante
A. Penalba
C. Boada
I. Fernández-Cadenas
C. Carrera
P. Delgado
I. Riba
C. Nafría
I. Fernández
M. Hernández- Guillamon
C. Merino
A. Rosell
A. Morancho
V. Barceló
M. Campos
J. Montaner
N. Corbeto
D. Giralt
I. Cristobo
F. Ma
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