MEDIOS DE CULTIVO Y MÉTODOS DE SIEMBRA

Área de Bacteriología. Departamento de Ciencias MicrobiológicasFacultad de Veterinaria -UdelaR

MEDIO DE CULTIVO

Una sustancia líquida o sólida, de naturaleza definida o no, natural o sintética, simple o compuesta que permite el desarrollo de diferentes microorganismos.

Preparación de medios de cultivo

A.A partir del medio comercial deshidratado

B. A partir de sus distintos componentes

Preparación de medios de cultivoPROCEDIMIENTO:

1. Pesar la cantidad estimada2. Hidratarlo con el volumen de agua destilada

correspondiente3. Calentar agitando lentamente

hasta su disolución4. Controlar pH y apariencia5. Envasar y esterilizar a

121°C por 15 min6. Enfriar y realizar control de esterilidad

CLASIFICACIÓN

1) SEGÚN SU ESTADO FÍSICO

A. SÓLIDOSB. LÍQUIDOSC. SEMISÓLIDOSD. SEMILÍQUIDOS

3) SEGÚN SU USO

A. Nutrientes (sólidos y líquidos)

B. Selectivos (sólidos)C. Diferenciales D. De enriquecimiento

(líquidos)

2) SEGÚN SU USO

• Medios nutrientes

•Pueden ser sólidos o líquidos•Son aquellos que presentan los nutrientes mínimos para el crecimiento de los microorganismos que no necesitan requerimientos especiales

• Medios selectivos

•Favorecen el crecimiento de un determinado grupo de bacterias•La selectividad se consigue normalmente con un producto químico agente, tinta o antibiótico.•Son sólidos

2) SEGÚN SU USO

• Medios diferenciales

• Sólidos o líquidos•Permite diferenciar un microorganismo de otro según determinadas propiedades de crecimiento en dichos medios•Presentan algún indicador•Ej: TSIA, Citrato, etc (T-P de pruebas bioquímicas)

• Medios de enriquecimiento

•Son medios que tienen aditivos adicionales para favorecer el crecimiento de determinados microorganismos•Son líquidos

Medios de cultivo MÁS COMUNES

•Agar Nutritivo (AN)

•Tryptic Soy Agar (TSA)

•Agar Sangre (AS)

•Agar Muller-Hinton (MH

•Caldo Nutriente (CN)

Medios de cultivo MÁS COMUNES

•Agar McConkey (McC)

•Xilosa-Lisina-Tergitol 4 Agar (XLT4)

•Salmonella-Shigella Agar (SSAgar)

•MSA ( Manitol Sal Agar):

•LOEWENSTEIN

•Cooked meat

MEDIOS DE CULTIVO MÁS COMUNES

¿Qué significa sembrar?

Transferir una muestra microbiológica de un

ambiente determinado a un medio de cultivo con

fines cuantitativos o cualitativos

Promover intencionalmente el

desarrollo de un microorganismo en medios de cultivo y

condiciones de laboratorio controladas

Tener en cuenta: • Temperatura de incubación• Condiciones de oxígeno• Tiempo de incubación

¿Dónde sembramos? y ¿Para qué sembramos?

Sembramos en medios de cultivo para hacer que las bacterias se reproduzcan con el objetivo de

aumentar el número de individuos de una población.

Técnica AsépticaASÉPTICO= sin microorganismos

•Se refiere a las prácticas que reducen la posibilidad de que mi cultivo de interés se

contamine con un microorganismos externo a la muestra.

•Técnica usada para evitar la contaminacióndurante la manipulación de cultivos y de medios

de cultivos

Principios del cultivo microbiológico1. Facilitar el crecimiento y el aislamiento de un

microorganismos presente en una muestra clínica

2.Tratar de determinar que microorganismo de los que podemos encontrar en una muestra es más probable que sea el causante de la afección

3.Obtener un desarrollo de microorganismos suficiente para poder identificarlos y caracterizarlos

SIEMBRA: en medio líquido

MEDIO LÍQUIDO

MEDIO LÍQUIDO

MEDIO SÓLIDO• Placa•Tubo

SIEMBRA: en medio líquido

MEDIO LÍQUIDO MEDIO LÍQUIDO

Esterilización del asa

Agitar el tubo con la muestra(Homogenización)

Destapar el tubo y flambear la boca

SIEMBRA: en medio líquido

Tomar la muestra Volver a flambear la boca del tubo

Tapar el tubo

SIEMBRA: en medio líquido

Sembrar la muestra

Destapar el tubo con el medio a inocular y flambear la boca

Flambear la boca del tubo

SIEMBRA: en medio líquido

Tapar el tubo

Esterilización del asa

INCUBAR

SIEMBRA: en medio líquido

MEDIO SÓLIDO• Placa•Tubo

MEDIO LÍQUIDO

INCUBAR

SIEMBRA: en medio semisólido

MEDIO SÓLIDO• Placa• Tubo

MEDIO SEMISÓLIDO

INCUBAR

Definición importante:

COLONIA BACTERIANA

Agrupación de bacterias originadas a partir de una bacteria madre que se establecen y

extienden en un medio.

SIEMBRA: en medio sólido

Siembra en placa:1. Por extensión2. Por inclusión3. Por estría

Siembra en tubos:A. Con agar inclinado

(Columna y Pico de flauta)

B. Con medio sólido horizontal (Pico de Flauta)

SIEMBRA: en medio sólido

1. Siembra en placa: Por extensión•Se extiende el inóculo uniformemente con una varilla acodada estéril por la superficie del medio de cultivo•Las células diseminadas sobre la superficie formaráncolonias aisladas

2. Siembra en placa: Por inclusión

SIEMBRA: en medio sólido3. Siembra por estría: PARA AISLAMIENTO

Colonias aisladasCultivo puro: colonias de igual morfología

CultivoAXÉNICO

SIEMBRA: en medio sólido

A. Siembra en tubos: En agar inclinado (Columna y Pico de flauta)

Se siembran por punción y estría (con hilo)

B. Siembra en tubos: En medio sólido horizontal (Pico de flauta)

Se siembran por estría en la superficie (con asa)