Prokariotoen zitologia

Post on 14-Jul-2015

272 views 6 download

Transcript of Prokariotoen zitologia

Bakterioen morfologia eta fisiologia

Analisia eta Kontrola

Entseiu mikrobiologikoa

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

1

Arizmendi Ikastola Lanbide Heziketa

Juan Arbulu

Eskema • Mikroorganismoak, zer dira? • Tamaina eta forma • Antolaketa zelular mota desberdinak • Pareta (gram +, gram-, Archaea) • Mintza • Zitoplasma eta genoma • Ohiko egiturak:

– Finbriak, piliak, flageloak, endosporak, inklusio zitoplasmatikoak, kapsula.

• Bakteria, Archaea eta Eucarya-renm arteko desberdintasunak.

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

2

Zer dira mikroorganismoak?

• Begiz ikustezinak diren organismoak dira

• Zelula isolatu bezala bizi diren organismoak dira eta erreplkatzeko gai diren azido nukleikoa

• Aukak, onddoak, protozooak, bakterioak eta birusak

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

3

Mikrobiologiaren historia

• 1664, Robert Hooke, landare zelulak.

• 1673, Anton van Leeuwenhoek, mikroorganismoen deskribapena.

• 1877, Robert Koch, kultibo solidoen garapena.

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

4

Mikroskopioak

• Giza ikusmena 0.2mm.

• Mikroskopio optikoa, erresoluzio handiena 0.2 mikra (1 mikra).

• Mikroskopio elektronikoa, erresoluzio handiena 0.5nm

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

5

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

6

PROKARIOTAK

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

7

TAMAINOA: zelula eukariota versus zelula prokariota

Tamainak

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

8

Formak

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

9

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

10

kokoak baziloak espiriloak

BAKTERIOEN FORMAK

Bakteria Erraldoia (Epulopiscium fishelsoni - 80x600 µm)

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

11

Azalera vs. bolumena

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

12

Tamaina txikia elkartuke korragoa, abiadura metaboliko handiagoa bermatzen du

Egitura zelularra

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

13

Pareta zelularra

• Bakteria:

– Gram positiboa

– Gram negatiboa

– Paretarik gabe

• Archaea:

– Egitura desberdinak

– Paretarik gabe

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

14

Paretaren funtzioak

• Zurruntasuna (forma mantendu, lisia ekiditu).

• Kanpo ingurunearekin komunikazioa.

• Patogeneizitatean eduki dezake eragina (LPS)

• Molekula batzurentzako hezia.

• Espazio periplasmikoa (garraio entzimak, hidrolitikoak, etab.)

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

15

Protoplastoen formakuntza

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

16

Soluto kontzentrazio handia

Soluto tzentrazio txikia

Lisozima – Peptidoglikanoan 1-4 lotura glikosidikoa apurtzen duen proteina

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

17

ZELULAREN ESTALKIA

GRAM POSITIBOA GRAM NEGATIBOA

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

18

Gram +

Gram- Bakteria

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

19

MUREINA EDO PÉPTIDO-GLIKANOA

Peptidoglikanoaren egitura

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

20

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

21

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

22

Pareta Zelularra Gram Positiboa

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

23

Azido Teikoikoak

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

24

Gram positiboen paretaren polisakarido azidoak Peptidoglikanoari kobalenteki lotuta (NAMeko C6-ko OHa)

Pareta zeharkatzen dute eta bakterioaren gainazalera heltzen dira

Mintz zelularrarekin lotura hidrofobikoa

Gram + paretako beste osagai batzuk

• Azido teikuronikoak

• Azido mikolikoak

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

25

Gram – kanpo mintza

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

26

Porinak – mintzean zeharreko molekula txikien komunikazioa bideratzen duten proteinak -- espezifikoak eta ez-espezifikoak

Lipopolisakaridoak (LPS)

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

27

Gram – diren bakterioetan bakarrik Kanpo mintzetik ateratzen da

LPS

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

28

Lotura glikosidikoa: C2 KDO - C6 LipA

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

29

Lipopolisakaridoak (LPS)

• A lipidoa (NAG-P + azilo taldeak)

• Polisakaridoaren nukleoa

– KDO (zetodesoxioktonatoa) eta beste karbohidratoak ditu (ramnosa, azido galakturonikoa)

– Espeziekiko espezifikoa

• O-antigenoa

– Errepikapen aldakorrak

– Karbohidratoak ere baditu

– Zeparekiko espezifikoak

• Sarritan animalientzako toxikoa- endotoxina

• Gainazal hidrofilikoak sortzen ditu

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

30

E. Coli-ren Periplasma

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

31

E.coli-ren periplasmaren proteinak.

Lotura proteinak

aminoazidoentzako (adb., histadina, arginina)

azukreentzako (adb, glukosa, maltosa)

bitaminentzako (adb., thiamina, bitamina B12)

ioientzako (adb., fosfatoa, sulfatoa)

Biosintesi entzimak

mureinaren elkarketa

finbrien erakuntza

Polimeroen degradazio entzimak

fosfatasak

proteasak

Entzima detoxifikatzaileak

Beta-laktamasak (adb., penicillinasa)

aminoglikosidoen fosforilazioa

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

32

• Bakterio batzuk ez dute paretarik

• Mycoplasma

• Mintz zelular sendoagoa. Esterolak eta lipoglikanoak eduki dezakete.

• Pleiomorfikoak

Archaearen pareta zelularra

• Ez du peptidoglikanoreik

• Osakera izan daiteke – pseudopeptidoglikanoa (pseudomureina) G+ tindatzen du

– pseudomureina proteinaz estalita, G+ tindatzen du

– Proteinazko gainazleko geruza bakarra edo glikoproteina, pseudomureinarik gabe (alg halofiloak, alg.metanogenikoak eta termoazidofiloak) G- tindatzen du

• Paretarik gabeko Archaeak badaude

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

33

Archaearen pseudopeptidoglikanoak

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

34

Paretaren funtzioak

• Zurruntasuna eta erresistentzi osmotikoa (forma mantendu, lisia ekiditu).

• Kanpo ingurunearekin komunikazioa.

• Patogeneizitatean parte hartu dezake (LPS)

• Molekula batzurentzako hezia (porinak gram negatiboetan).

• Espazio periplasmikoa (garraio entzimak, hidroltikoak, etab.)

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

35

Peptidoglikanoaren sintesia

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

36

•Baktoprenola (C55 alkohol isoprenoidea) – zitoplasmatik periplasmara

disakarido pentapeptidoa garraiatzen duen “carrier” lipidikoa da,

hazkuntzan dagoen paretan txertatuz

•Transpeptidazioa penizilinak inhibitzen du

Transpeptidazioa

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

37

G penizilinak inhibitzen du.

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

38

Peptidoglikanoaren sintesia: transpeptidazioa

G penizilinak inhibitzen du.

Pareta zelularraren sintesia

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

39

Pareta zelularra autolisinen eraginez zabaldu egiten da eta peptidoglikano berria depositatuz.

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

40

Egitura: • Proteinak txertatuta dituen bikapa

fosfolipidikoa; kolesterolaren antzeko egiturak ere eduki dezake.

• Archaean, alkohol isoprenoideen esterrak, batzuk geruza bakarrak eratzen dituzte.

Mintz zelularra

Mintz zitoplasmatikoaren egitura

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

41

Bicapa fosfolipídica

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

42

Bakteria eta Archaea-n dauden lipidoak lotura kimiko desberdinak dituzte

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

43

Ester - Bakteria Eter - Archea

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

44

Garraio mota desberdinak

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

45

•Kontzentrazio gradiantearen aurkako solutoen gehikuntza •Espezifizitatea

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

46

Mintz zitoplasmatikoaren funtzioak

• Iragazkortasunaren hezia

– Molekula txikiak, karga gabekoak eta hidrofobikoak zeharka dezakete mintza difusioz.

• Proteinen finkapena

– Garraioa, energia ekoizpena, kimiotaxia

• Fototrofoetan: aparatu fotosintetikoa bereganatzen du (besikulak, tubuloak, tilakoide erakoak)

• Pareta eta zelula kanpoko egituren sintesia.

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

47

E.coli-ren mintz zitoplasmatikoa

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

48

Prokariota zelulen egitura - ADN

• Ez dute nukleorik. ADNa zitoplasman dago:

“nukleoidea” : ADNak okupatzen duen zonaldea.

• Haploidea da. Genoma: kate bikoitzeko AND molekula bakarra eta zirkularra.

• Genoma 1 - 6 x 106 base bikotez dago osatua (bp) bizi libreko prokariotoetan; 1000-5000 gene.

• Ez dute histonarik.

• Biziarentzako beharrezkoak ez diren beste elementu gentikoak eduki dezakete: plasmidoak eta genoma fagikoak.

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

49

Prokariotak

• Ez dute mintz nuklearrik.

– ARNm-aren prozesaketarik ez dago

– Transkripzioa itzulpenari lotuta dago.

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

50

Genomaren tamaina

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

51

Kromosometako ADNa

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

52

Zitoplasma

• Proteinak (entzimak, konplexu entzimatikoak, egiturazkoak)

• Erribosomak (70S: 55 proteinak, rRNA 5S, 16S, 23S)- polisomak

• mRNA, tRNA

• Beste makromolekulak, solutoak

• Mikroskopioz ikus daitezken egiturarik gabe.

• Ez dute zitoeskeletorik.

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

53

Egitura esanguratsuenak

• Funtzio espezifikoak dituzten egiturak.

• Mikroorganismo guztiak ez dituzte.

• Genero eta espeziearekiko ezaugarriak dira (taxonomia).

• Adibideak: – finbriak, flageloa, pilia, endosporak, kapsula,

inklusio zitoplasmatikoak

04/09/01 Analisia eta Kontrola

Entseiu Mikrobiologiakoa 54

Finbriak - Piliak

• Finbria – proteinazko zuntz motza, gainazaletan itsasteko funtzioetan parte hartzen da.

• Ile sexuala – konjugazioan zelula hartzailearekin bat egiten du.

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

55

Flageloak

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

56

Flageloa

04/09/01 Analisia eta Kontrola

Entseiu Mikrobiologiakoa 57

> 40 gene parte hartzen dute

1000 H+ / revolución

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

58

Tindaketa berezi bidez antzematen dira

Flageloak

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

59

Marrak 0,5 mikra

Anaerobaculum mobile sp. nov. Aldameneko flageloa

Flageloaren ekintzaren mekanismoa

• Oinarrizko gorputzean ematen den eraztunen errotazioa H+ -en gradienteagatik zuzenduta egongo zen - ATPa ez .

• Ordulariaren aurkako errotazioak aurreruntz mugiarazten du.

• Ordulariaren aldeko errotazioak aurreruntzko mugimendua geldiarazten du

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

60

Endosporak

• Beroarekiko, irradiazioarekiko eta lehortzearekiko erresistentzia.

• Bacillus eta Clostridium generokoak produzitzen dituzten gehienbat.

• Egokiak ez diren inguruetan bizi irautea bermatzen dute.

• Azido dipikolinikoak eta proteinak ADNa babesten dute

• Stressaren eraginez aktibatzen direnean, nutrienteak izanez gero ernalketa eta hazkuntza bizi hasten da.

• Endosporaren kokapena zelulan identifikatzeko erizpide bezala erabili daiteke.

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

61

Esporaren egitura

04/09/01 Analisia eta Kontrola

Entseiu Mikrobiologiakoa 62

Azido Dipikolinikoa

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

63

Endosporen ezaugarria

Endosporen formazioa

A- ADNa bikoiztu eta erdiguneko ardatzaren (zuntz axiala) inguruan kiribiltzen da

B- Bi kromosometatik bat mintz plasmatikoz inguratzen da.

C- Ama zelulak protoplastoa inguratzen du.

D- Esporaren gainazalak sintetizatzen dira.

E- Ura galdu egiten du eta beroarekiko erresistentea den egitura bat sortzen da.

F- Ama zelularen lisiaren ondorioz espora askatu egiten da.

B. Subtilis-en 6-7 ordu, 50 gene.

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

64

Inklusio zitoplasmatikoa

• Bakterio batzuk barne egiturak dituzte

– Biltegi granuloak - polifosfatoa,azufrea, polihidroxibutiratoa (PHBak)

– Gas besikulak – flotazioa

– Karboxisomak, klorosomak.

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

65

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

66

Inklusio zitoplasmatiko.

Zer bizidunetan dauden Osagaia Funtzioa

Glikogenoa Hainbat bakterioetan

(E. coli)

poliglukosa C eta energiaren biltegia

Polihidroxi

Butiratoa

Hainbat bakterioetan

(Pseudomonas)

Dihidroxibutirato-aren polimeroa

C eta energiaren biltegia

Polifosfatoa Hainbat bakterioetan

(Corinebacterium)

Fosfatoaren polimeroak Fosfato erreserba

S granuloak Saren fototrofoak

Saren litotrofoak

S elementala S erreserba

Gas besikulak Bakterio urtarrak Egitura proteikoa Flotazioa

Magnetosomak Bakterio urtar batzutan Magnetita Fe3O4 Kanpo magnetikoan orientazioa

Karboxisomak Bakterio autotrofikoetan CO2aren finkapen entzimak CO2aren finkapena

Klorosomak Bakteria berdeetan Lipidoak, proteinak bakterioklorofila

Argiaren hartzailea

Poly-ß-hydroxybutyrate (PHB)

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

67

Poly-ß-hydroxybutyrate (PHB)

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

68

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

69

Zelulaz kanpoko beste polisakarido batzuk

• Glikokalixa: Pareta zelularraren kanpoaldean kokatzen da – Kapsulak – zelularen gainazalean ageri den materiala

– Geruza muzilaginosoak – ahulago itsatsita dagoen materiala

– S geruza: Azpiunitate proteiko edo glikoproteikoak. G+, G- eta Archaea. Partea era dezakete

• Funtzioak – Defentsarekiko babesa (fagozitosia)

– Desekazioarekiko babesa

– Birus eta toxinarekiko babesa

– Gainazlaei itsastea (zelulak, bizigabeak)

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

70

Glikokalixa

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

71

Tindaketa negatiboa

Mikroskopio elektronikoa

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

72

Tindaketa negatiboa

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

73

Archaea

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

74

Halofilo muturrekoak

• Gatz kontzentrazio handia behar dute

• Kimioorganotrofoak, aerobio derrigorrezkoak

• Halobacterium

• Sodio ioiak glikoproteinazko partea egonkotu egiten du

• Potasio ioia – konpatiblea den solutoa

• Zitoplasmako proteinak potasio ioien kontzentrazio handia behar dute

• Batzu ATPa sortzeko argia erabili dezakete, bakteriorhodopsin erabiliz

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

75

Metanogenikoak

• Anaerobio derrigorrezkoak, orokorrean mesofiloak

• Dibertsitate handia

• Habitats

• Sustratoak metanon bilakatzen dira

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

76

Thermoplasmatalak

• Termofilikoak (hobezina 55ºC), azididofilikoak, kimiorganotrofoak, fakultatiboak

• Thermoplasma pareta zelularrik gabe

• Picrophilus pH 0 baino bajuagoetan haz daitezke, hobezina pH 0.7

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

77

Thermokokkalak

• Hipertermofiloak (hobezina >80ºC)

– Thermococcus 70-95ºC

– Pyrococcus 70-106ºC

• Kimiorganotrofo anaerobio derrigorrezkoak

• S-a erabiltzen dute elektroien azken hartzaile gisa

• Mugikorrak flagelo multzo bidez

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

78

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

79

Bakteria, Arkhaea eta Eukarya-ren arteko desberdintasun zelularrak

Propietateak Bakteria Eukarya Arkhaea

Mintz nuklearra EZ BAI EZ

Organuloak EZ BAI EZ

Erribosomaren tamaina

70S 80S 80S

Paretan peptidoglikanoa

BAI EZ EZ

Mintzean esterolak EZ

(hopanoideak)

BAI BAI

Mintzeko lipidoak Glizerolari lotutako esterrak

Glizerolari lotutako esterrak

Eterra, adarkatuak

Analisia eta Kontrola Entseiu Mikrobiologiakoa

80

http://www.arizmendipro.eu juarbulu@gmail.com

@jarbulu