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5/16/2018 Trabajo de Investigación - slidepdf.com
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EFECTOS ANTIOXIDANTE, ANTIPROLIFERATIVO,
ANTI-INFLAMATORIO Y QUIMIOPREVENTIVO
DE LA Buddleja incana (Quishuar).
El objetivo de este trabajo fue determinar: la capacidad antioxidante,
los niveles de polifenoles y flavonoides, la actividad antiinflamatoria, y
los efectos sobre el sistema inmune, sobre la proliferación de células
tumorales y fibroblastos normales y sobre la inflamación aguda y
crónica in vivo, de los extractos acuoso y metanólico de la planta
peruana Buddleja incana .
La actividad antiinflamatoria se determinó en ratas midiendo la
inhibición de COX-1 y COX-2 en un modelo de inflamación aguda
gastrointestinal. Mientras que la producción de IL-2 y IFN-γ fue
determinada en cultivo de linfocitos humanos mediante la técnicaELISPOT. El efecto sobre la proliferación celular se evaluó sobre la
línea celular de hepatocarcinoma humano (ATCC) mediante la técnica
XTT y fibroblastos normales de ratón. El efecto sobre la inflamación
crónica fue evaluado en el modelo murino usando como agente
inflamatorio y promotor del cáncer cutáneo el Forbol 12-miristato 13-
acetato (PMA) (Sigma Inc.,) y como marcadores de inflamación
crónica y premalignidad las moléculas COX-2 y NF-kB.
Los resultados muestran que la Buddleja incana tiene baja capacidad
antioxidante (0,82 mM/100 g ms) pero alto contenido de polifenoles
(11,78 g Ac gálico/100g ms) y flavonoides (112,86 mg
catequina(+)/100 g ms) en comparación con 14 plantas estudiadas
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previamente. Tiene alto efecto antiinflamatorio al inhibir COX-2 en
yeyuno y estómago de ratas con inflamación gastrointestinal aguda
inducida por Indometacina, manteniendo niveles normales de COX-1.
Actúa favorablemente sobre el sistema inmune al estimular la
producción de IL-2 y IFN-γ en linfocitos humanos normales. In vitro
mostró notable efecto antiproliferativo de la línea celular
hepatocarcinoma humano produciendo una TIC de 83% a dosis de
60µg/mL mientras que la TIC sobre fibroblastos normales fue de 59%.
In vivo demostró inhibición de COX-2 y NF-kB en la piel de ratones
tratados con Forbol por 39 días así como de las lesiones premalignas
encontradas en el grupo control.
Se concluye en que la Buddleja incana tiene moderados efectos
antioxidantes, alto porcentaje de polifenoles y flavonoides, notableefecto antiproliferativo sobre células de carcinoma hepático
humano(HepG2) y bajo sobre fibroblastos normales, inhibe la
inflamación gastrointestinal aguda y cutánea crónica in vivo, y tiene
efectos quimiopreventivos de la promoción del cáncer cutáneo
inducido experimentalmente por Forbol 12-miristato 13 acetato, al
inhibir, tanto lesiones histológicas, como, la producción del Factor
Nuclear kappa B y Ciclooxigenasa-2.
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Figura 1. Ratones luego del tratamiento con PMA. Se muestran animales representativos
de cada grupo, G-I: grupo control que recibió suero fisiológico topical. G-II: tratadossolamente con PMA, notar áreas alopécicas con pequeñas granulaciones. G-III. Grupo
control del solvente. G-IV: grupo tratado con PMA y decocción de B. incana por vía oral,
notar ausencia de lesiones cutáneas en área tratada.
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Figura 2. Histopatología de la piel de los 4 grupos de estudio. G-I piel normal de ratón. G-II: tratados con PMA, apreciar notable hiperplasia epidermal y dermal. G-III: tratados con
solvente. G-IV: PMA + decocción de B. incana oral, se aprecia ligera hiperplasia
epidermal. Flecha amarilla indica epidermis. Tinción H/E. 10X.
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Figura 3. Patrón histológico de inflamación crónica y lesiones pre neoplásicas del grupo G-
II con Forbol. (A) hiperplasia epidermal, atrofia folicular, vasculitis e hiperemia. (B)
Dermis con atrofia glandular, células balonizantes, necrosis, intensa proliferación celular.
(C) Aumento de matriz extracelular y colágeno, hiperplasia de fibroblastos, polimorfismo
celular con células muy basófilas, figuras mitóticas. (D) Células balonizantes en epitelio
glandular, anisocitosis y anisocariosis, necrosis. H/E. 40X.
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Figura 4. Inmunohistoquímica de doble marcación para detectar COX-2 y NF-kB. (A) G-I
(control)ausencia de inmunoreactividad (0). (B) G-II(Forbol) intensa marcación de COX-2
(+++) en epidermis (flechas azules) y regular marcación de NF-kB(+) (flecha amarilla).(C) G-IV ( B. incana)muy escasa marcación de COX-2 (0) (flecha azul) y ausencia de NF-
kB. (D) G-II dermis con expresión de COX-2 (++) (flechas azules)y abundante NF-kB
(+++). 40X.