Post on 27-Oct-2018
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Raúl Rigo BonninLaboratori Clínic
Hospital Universitari de Bellvitge
MS Techonology DaysSesión Clínica
• Motivos metrológicos y post-metrológicos• Problemas con everolimus
• Mejores características metrológicas que los inmunoanálisis
• Incoherencia de resultados de algunos pacientes debido a interferencias:
• Anticuerpos
• Hematocrito
• Reducir tiempos de respuesta de entrega de resultados• Permite medir, simultáneamente, la concentración de ciclosporina A, everolimus, sirolimus y tacrolimus
• Motivos organizativos
• Iniciativa de la directiva de nuestro hospital de apostar por nuevas tecnologías y potenciar la Investigación, Desarrollo e Innovación (I+D+i),
• Solicitud por parte de los clínicos para medir:• Antirretrovirales
• Hormonas (testosterona libre),
• Fármacos (voriconazol, meropenem, valproato y fenitoína libres, daptomicina, ganciclovir, gencitabina, fulvestrant, NVP-BEZ235)
• Proyecto conjunto con la Unidad de Trasplante de nuestro hospital
• Motivos económicos• Reducción de personal
•A medio-largo plazo sale más rentable: coste inicial elevado, coste/muestra reducido
2011 2012 2013 2014 2015
• Otros motivos
• Cada vez son más los laboratorios clínicos europeos que utilizan sistemas de medida basados en LC-MS/MS, debido a:
• Procedimiento de referencia
• Incremento de la automatización
• Existen mejoras en programas de gestión de datos que facilitan la interpretación de los resultados
• Existe un mayor número de protocolos de trabajo y reactivos validados (marca CE)
MassTrak Immunosuppressants XE(Waters)
tacrolimus + everolimus
MassTox Immunosuppressants(Chromsystems)
Ciclosporina A+everolimus+sirolimus+tacrolimus
ClinMass Immunosuppressants(Recipe)
Ciclosporina A+everolimus+sirolimus+tacrolimus
Reactivos con Marca CE IVD Directiva 98/79/EC
• ¿ Necesitaremos una persona especializada en HPLC y MS/MS, tal y como se comenta ?
• ¿ Por qué esta tecnología está poco implantada en la rutina de los laboratorios clínicos españoles ?
• ¿ Estará la industria del diagnostico in vitro que fabrica este tipo de analizadores a la altura de las necesidades de un laboratorio clínico de un hospital ?
• Tiempo de respuesta tras una avería ≤≤≤≤ 1 día
• Soporte técnico en todo momento
• ¿ Podremos asumir la carga asistencial de nuestro laboratorio ?
MassTrak Immunosuppressants XE RUO(Waters)
• 7 materiales de calibración
• 3 materiales de control
• Mezcla de estándares internos
• Solución de ajuste de masas (tunning)
• Características metrológicas
• Imprecisión intraserial• Imprecisión interdiaria• Sesgo• Error de medida• Límites de detección y cuantificación• Intervalo de medida (linealidad)• Selectividad• Contaminación por arrastre• Recuperación, efecto matriz y eficiencia del proceso
• Estudio de intercambiabilidad
EVALUACIÓN REALIZADA
EP10-A3__________
Preliminary Evaluation of QuantitativeClinical Laboratory Measurement
Procedures; Approved Guideline—ThirdEdition
C50-P___________
Mass Spectrometry in the ClinicalLaboratory: General Principles and
Guidance; Proposed Guideline
Límites de detección, límites de cuantificación e intervalos de medida
Límite de detección
Límite de Cuantificación
Intervalo de medida(linealidad)
Ciclosporina A 7,2 µµµµg/L 17 µµµµg/L (17-2290) µµµµg/L
Tacrolimus 0,4 µµµµg/L 0,7 µµµµg/L (0,7-35) µµµµg/L
Sirolimus 0,6 µµµµg/L 1,6 µµµµg/L (1,6-35) µµµµg/L
Everolimus 0,4 µµµµg/L 0,9 µµµµg/L (0,9-35) µµµµg/L
14 %
Ciclosporina A
EMIT® 2000 Cyclosporin (Siemens Healthcare Diagnostics) adaptado al analizador Cobas Mira ® (Roche Diagnostics)
SanCiclosporina; c.massa (µ g/L)
0 200 400 600 800 1000 12000
200
400
600
800
1000
1200
1400
UPLC ACQUITY TQD
CO
BA
S M
IRA
Ciclosporina A
Cobas Mira (Immunoanàlisi) = 1,26·ACQUITY (UPLC-MS/MS)
• Existe un sesgo proporcional entre los resultados
• Los resultados del UPLC-MS/MS son un 26 % más bajos
TDx FLx (Immunoanàlisi) = ACQUITY (UPLC-MS/MS)
SanEverolimus; c.massa (µ g/L)
1 3 5 7 9 11 131
3
5
7
9
11
13
UPLC ACQUITY TQD
TD
x
Everolimus
• Los resultados son intercambiables
Architect i1000 (Immunoanàlisi) = ACQUITY (UPLC-MS/MS)
SanSirolimus; c.massa (µ g/L)
2 4 6 8 10 12 14 16 182
4
6
8
10
12
14
16
18
UPLC ACQUITY TQD
AR
CH
ITE
CT Sirolimus
• Los resultados son intercambiables
Architect i1000 (Immunoanálisis) = 1,11·ACQUITY (UPLC-MS/MS)
SanTacrolimus; c.massa (µ g/L)
0 5 10 15 20 25 300
5
10
15
20
25
30
UPLC ACQUITY TQD
AR
CH
ITE
CT Tacrolimus
• Existe un sesgo proporcional entre los resultados
• Los resultados del UPLC-MS/MS son un 11 % más bajos
• Mejora en la calidad de los resultados (más fiables):• CV, sesgos y errores de medida menores
• Mayor capacidad de detección e intervalos de medida más amplios.
• Mayor selectividad y especificidad (reducción de posibles interferencias con otros fármacos, “Hematocrito”, …)
• Se consigue disminuir la variabilidad asociada a la medición de la concentración de los inmunosupresores (variabilidad metrológica)
• Es el procedimiento de referencia: • Se han establecido los intervalos terapéuticos vigentes
• Se realizan la mayoría de estudios farmacocinéticos y farmacodinámicos.
• Permite medir la concentración de CSA, EVR, SRL y TAC simultáneamente.
• Permite reducir el tiempo de procesamiento de las muestras:• 50 muestras = 2,3 horas
• A medio-largo plazo es rentable
• En un año se amortiza el coste del analizador.
• Aplicabilidad no tan lejana en los laboratorio clínicos
• Existen equipos de reactivos que facilitan enormemente la aplicación en los laboratorios
• Permite incorporar nuevas magnitudes en el catálogo del laboratorio
• Promueve e incentiva la I+D+i• Colaboración con diversos servicios clínicos
• ¿ Necesita esta tecnología personal especializado ?
• Más que una persona especialista en LC-MS/MS:
• Se necesita una persona dedicada con nociones básicas de cromatografía y MS/MS
• Protocolos de trabajo bien detallados
• Servicio técnico que de una respuesta inmediata y solucione con rapidez y eficacia los problemas que puedan surgir
• Un técnico de laboratorio y un facultativo especialista (Bioquímico clínico)
• ¿ Se han de revisar y visualizar los cromatogramas de todas las muestras ?• Sí, la intensidad de los picos (TIC), la forma de los picos, los tiempos de retención
• En un futuro, y con un software adecuado, quizás se pueda prescindir de este proceso
• ¿ Ha estado la industria del diagnóstico in vitro que fabrica este tipo de analizadores a la altura de las necesidades de nuestro laboratorio ?
• SI, hemos tenido soporte técnico en todo momento.
• Punto que más hemos valorado en nuestro servicio (rapidez y eficacia del servicio técnico)
• Tiempo de respuesta tras una avería ≤≤≤≤ 1 día
• ¿ Por qué en España esta tecnología está poco implementada en la rutina de los laboratorios ?
• En nuestra opinión es viable implementarla, eso sí, dependerá de cada laboratorio:
• Personal disponible
• Recursos económicos
• Número de muestras diarias
• Entrega de resultados diaria
• ¿ Cuál ha sido el número de averías graves generadas durante un año ?
• Ninguna
• No hemos requerido del servicio técnico
• ¿ Y averías menores ? • Falta de cebado de circuitos y cánulas
• Obstrucciones menores en el circuito
• Pérdida del vacío del analizador de masas como consecuencia de apagones de luz
• ¿ Qué tipo de mantenimientos son necesarios ?DIARIO (≈≈≈≈ 30 min)
• Limpieza de cono de muestra
• Preparación de fases móviles
• Comprobación de las presiones y fluídicas del sistema
• Cebado del sistema
SEMANAL (≈≈≈≈ 30 min)
• Ventilación de la bomba de vacío
MENSUAL (≈≈≈≈ 20 min)
•Revisión de los niveles de aceite de la bomba de vacío
•Limpieza de los filtros metálicos de la fase móvil
ANUAL