Los viroides de los cítricos:

Enfermedades y control

Núria Duran-Vila

Departamento de Protección Vegetal y Biotecnología

Instituto Valenciano de Investigaciones Agrarias

I V I ANSTITUTO ALENCIANO DE NVESTIGACIONES GRARIAS

• El descubrimiento de los viroide como

agentes patógenos de citricos está

ligado a su propagación por injerto.

LOS VIROIDES DE LOS CITRICOS

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Historia de los cítricos injertados (1)

España 1850: Utilización de plantas injertadas

en lugar de plantas de semilla. Elección de un

buen patrón (cidro, limonero, naranjo dulce,

naranjo agrio,....

España 1862: La mayoría de patrones resultaron

ser sensibles a Phytophthora.

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Phytophthora gummosis

on sweet orange seedling tree,

Bijayachap, Nepal, 1994

Daños producidos por PhytophthoraI V I ANSTITUTO ALENCIANO DE NVESTIGACIONES GRARIAS

Historia de los cítricos injertados (2)

España 1862: La mayoría de patrones resultan ser

sensibles a Phytophthora. EL NARANJO AGRIO

resultó ser resistente.

España 1870: Auge del naranjo agrio como patrón

tolerante en España, los países de la cuenca del

Mediterráneo, California y América del Sur.

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Una nueva enfermedad en árboles

injertados en naranjo agrio: Tristeza

1904. Declinamiento de

árboles en Sudáfrica.

1930. Declinamiento rápido

de árboles en Argentina.

1937. La misma enfermedad

en Brasil.

1939. La misma enfermedad

en California.

Declinamiento rápido afectaba los árboles sobre naranjo

agrio, pero no los árboles sobre otros patrones. Riverside,

California.

Una nueva enfermedad en árboles

injertados en naranjo agrio: Tristeza

1946. La enfermedad es trasmisible por injerto

Probablemente causada por un virus

Los pulgones actuan como vectores

1963. Se observa el virus (CTV) por EM

Control de la TristezaCTV:

Afecta la combinación de dos individuos: patrón

(naranjo amargo) y variedad (naranjo dulce,

mandarino y otros)

Búsqueda de patrones alternativos que den

combinaciones tolerantes:Poncirus trifoliata y sus híbridos (citranges,

citrumelo), naranjo, mandarino Cleopatra,

tangelos, limón rugoso, lima Rangpur,

Citrus volkameriana,…I V I ANSTITUTO ALENCIANO DE NVESTIGACIONES GRARIAS

Problemas asociados con la sustitución

del naranjo amargo (1)

Exocortis (California, 1948)

Scaly butt (Australia, 1949)

Rangpur lime disease (Brazil, 1956)

Descamaciones: P. trifoliata,

citranges, citrumelos (?), lima

Rangpur, .....

Un viroide es el agente causal: CEVd

Xiloporosis (Palestina, 1934)

Caquexia (Florida, 1950)

Acanaladuras y exudación de goma

en algunos patrones: lima dulce de

Palestine, tangelo Orlando, lima

Rangpur, C. macrophylla

Variedades: mandarinas, clementinas,

satumas, ....

Un viroide es el agente causal: HSVd

Problemas asociados con la sustitución

del naranjo amargo (2)

¿Qué son los viroides?

Los viroides no son virus

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Viroides• Moléculas circulares de RNA monocatenario.

• Los viroids no codifican para proteínas.

• Replicación autónoma.

• Pequeño tamaño (246 y 401 nt.)

• Fósiles moleculares de un mundo precelular.

• Agentes fitopatógenos.

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Viroides• Moléculas circulares de RNA monocatenario.

• Los viroids no codifican para proteínas.

• Replicación autónoma.

• Pequeño tamaño (246 y 401 nt.)

• Fósiles moleculares de un mundo precelular.

• Agentes fitopatógenos.

I V I ANSTITUTO ALENCIANO DE NVESTIGACIONES GRARIAS

Viroides• Moléculas circulares de RNA monocatenario.

• Los viroids no codifican para proteínas.

• Replicación autónoma.

• Pequeño tamaño (246 y 401 nt.)

• Fósiles moleculares de un mundo precelular.

• Agentes fitopatógenos.

I V I ANSTITUTO ALENCIANO DE NVESTIGACIONES GRARIAS

• No EM

• No serología

• Análisis de ácidos nucleicos

Diagnóstico de viroides

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• No EM

• No serología

• Análisis de ácidos nucleicos

Diagnóstico de viroides

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• No EM

• No serología

• Análisis de ácidos nucleicos

Diagnóstico de viroides

exocortis

caquexia- xiloporosis

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• Auto-complementaridad.

• Estructura secundaria en forma de varilla.

• Apareamiento de bases alternando con bucles.

• Estabilidad.

• Transmisión mecánica.

Estructura secundaria de los viroides

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• Auto-complementaridad.

• Estructura secundaria en forma de varilla.

• Apareamiento de bases alternando con bucles.

• Estabilidad.

• Transmisión mecánica.

Estructura secundaria de los viroides

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Criterios de clasificación

• Pospiviroidae (PSTVd)

• Avsunviroidae (ASBVd)

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Viroides de cítricos

Familia Género Especie

Pospiviroidae Pospiviroid CEVd

Hostuviroid HSVd

Cocadviroid CBCVd (CVd-IV)

Apscaviroid CBLVd (CVd-I)

Apscaviroid CDVd (CVd-III)

Apscaviroid “CVd-OS”

Apscaviroid “CVd-V”I V I ANSTITUTO ALENCIANO DE NVESTIGACIONES GRARIAS

CBLVd

HSVd

CEVd

CDVd

CVd-IV

Viroides de cítricos

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CBLVd

HSVd

CEVd

CDVd

CVd-IV

Viroides de cítricos

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Enfermedades

producidas por viroides

Viroide Enfermedad

CEVd Exocortis

HSVd Caquexia (xiloporosis)

CBCVd

CBLVd

CDVd

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Enfermedades

producidas por viroides

• Exocortis producida por CEVd

• Caquexia producida por HSVd

• Efecto de otros viroides

• Métodos de control

• Otras enfermedades atribuidas a viroides

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CEVd es el agente causal de exocortisDescamaciones de la corteza en P. trifoliata

Exocortis•Clementino injertado en Poncirus trifoliata

•Escamas en el patrón Poncirus trifoliata

•Enanismo acusado

EnanismoI V I ANSTITUTO ALENCIANO DE NVESTIGACIONES GRARIAS

Exocortis: CitrangesI V I ANSTITUTO ALENCIANO DE NVESTIGACIONES GRARIAS

Exocortis: Citranges I V I ANSTITUTO ALENCIANO DE NVESTIGACIONES GRARIAS

Exocortis: Citranges I V I ANSTITUTO ALENCIANO DE NVESTIGACIONES GRARIAS

Exocortis: Clementino / C. carrizo

Exocortis: Navelina / C. carrizo

Síntomas en lima RangpurI V I ANSTITUTO ALENCIANO DE NVESTIGACIONES GRARIAS

Síntomas en lima RangpurI V I ANSTITUTO ALENCIANO DE NVESTIGACIONES GRARIAS

HSVd es el agente causal de caquexiaExhudaciones de goma en tangelo Orlando

Síntomas en Citrus macrophylla

Síntomas en C.macrophylla como

patrón de limonero

Síntomas en clementino

Cachexia

No-cachexia

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Síntomas de cachexia en

mandarino Parson’s I V I ANSTITUTO ALENCIANO DE NVESTIGACIONES GRARIAS

¿Qué producen los otros viroides?

Otros síntomas causados por

viroides en P. trifoliata

CEVd HSVd CVd-IV

Estos síntomas están asociados con

síntomas en corteza y madera

Viroide Escamas Grietas Enanismo

CEVd + + Acusado

CBLVd - - Leve

CVd-III - - Moderado

CVd-IV - + -

HSVd - + Leve

Resumen

Alteraciones en P. trifoliata

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Other alterations:

Enanismo

El enanismo causado por viroides

conduce a una reducción de la cosecha

Enanismo Cosecha

Control - 100%

CEVd Acusado 54%

CBLVd Leve 81%

CDVd Moderado 66%

CVd-IV - 99%

HSVd Leve 98%

Disminución de la cosecha

Las plantaciones de cítricos

Cualquier árbol sobre Poncirus trifoliata,

lima Rangpur, citrange Troyer o Carrizo es

sensible a exocortis y a otros viroides.

Cualquier árbol sobre C. macrophylla

es sensible a caquexia – xiloporosis.

Todos los mandarinos, clementinos,

satsumas e híbridos sobre cualquier patrón

son sensibles a caquexia – xiloporosis

El material vegetal en relación a estas

enfermedades

Disponibilidad de plantas libres de viroides

(viveros autorizados)

Distribución de plantas portadoras de viroides

(viveros clandestinos)

Coexistencia de plantaciones antiguas sobre

naranjo amargo que aunque no manifiestan

síntomas son portadoras de viroides

Control

Epidemiología

• No se conocen vectores

• No hay transmisión por semilla

• Dispersión de las enfermedades:

Propagación de material infectado

Transmisión mecánica

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Las plantas portadoras de viroides son

reservorios desde los que pueden ser

transmitidos a plantas inicialmente sanas

Modo de transmisión:

• Propagación

• Sobreinjerto

• Transmisión mecánica

Control de las enfermedades

producidas por viroides

• Utilizar material de propagación sano

• Utilizar yemas procedentes de plantas

sanas para el sobreinjerto

• Evitar la difusión de viroides mediante

transmisión mecánica

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Uso de material libre de viroides para la

propagación

Se necesitan métodos de detección

Se necesitan métodos de saneamiento

Cuarentena y certificación

Evitar la transmisión mecánica

Viveros

Plantaciones comerciales

Control de las enfermedades

producidas por viroides

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Métodos de detección

Bioensayo

Transmisión a plantas indicadoras

Observación de síntomas

Detección por métodos de laboratorio

Análisis de ácidos nucleicos

Detección biológica + laboratorio

El cidro actua como amplificador

Análisis de ácidos nucleicosI V I ANSTITUTO ALENCIANO DE NVESTIGACIONES GRARIAS

Bioensayo

Bioensayo de exocortis

Uso de cidro Etrog como indicator

Se detectan los otros viroides

Bioensayo de caquexia

Mandariono Parson’s Special

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Respuesta del cidro Etrog

• Inoculation por injerto del cidro Etrog

• Incubación a 28-32ºC durante 3-6 meses

• Observación de síntomas

CEVd HSVd

Respuesta del mandarino Parson’s Special

• Inoculación por injerto del mandarino Parson’s

propagado sobre un patrón vigoroso.

• Incubación a 28-32ºC durante 9-15 meses

• Observación de síntomas en la unión

Métodos de diagnóstico

+

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Métodos de diagnóstico

+

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Métodos de diagnóstico

+

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Hibridación Northern

RT-PCR

Evitar la transmisión mecánica

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Otras enfermedades atribuidas a

viroides

“Quebra galho”

Corteza gomosa (“gummy bark”)

Bolsas de goma-acanaladuras gomosas

(“Gum pocket - Gummy pitting”)

Enfermedad de Kassala (“Kassala disease”)

“Quebra-galho”

Desorden observado en limón Persa

“Quebra-galho”: CEVd

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“Quebra-galho”: CEVd

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“Quebra-galho” no es “Wood pocket”

“Gummy bark”

Desorden descrito en naranjo dulce

Descrita en países del este del Mediterráneo,

Norte de Africa and Oriente próximo.

“Gum pocket - Gummy pitting”

Desorden descrito en P. trifoliata

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“Kassala disease”

Desorden observado en toronja

I V I ANSTITUTO ALENCIANO DE NVESTIGACIONES GRARIAS

Dra. Carmen Fagoaga

Dr. Juan Romero Durbán

Dra. Ana Palacio Bielsa

Dr. Mohammed Chaffai

Dr. Ziad Ghaleb Nimer Fadda

Dra. Mónica GandíaDra. Cristiane de Jesús Barbosa

Dra. Karelia Velázquez

Dra. Lucía Bernad Palomares

Dr. Pedro Serra Alfonso

Mehdi Beni Hashemian, becario

Nubia Murcia, becaria

Esther Debón, becariaI V I ANSTITUTO ALENCIANO DE NVESTIGACIONES GRARIAS

Dra. Carmen Fagoaga

Dr. Juan Romero Durbán

Dra. Ana Palacio Bielsa

Dr. Mohammed Chaffai

Dr. Ziad Ghaleb Nimer Fadda

Dra. Mónica GandíaDra. Cristiane de Jesús Barbosa

Dra. Karelia Velázquez

Dra. Lucía Bernad Palomares

Dr. Pedro Serra Alfonso

Mehdi Beni Hashemian, becario

Nubia Murcia, becaria

Esther Debón, becaria

Dolores Abanto Peiró

Margarita Bazzi

Ana Gabriela Pagliano

José María Corvera Llúcia Martinez Priego

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