I. Resuelve los siguientes problemas.

A) Un investigador está interesado en los efectos de una mutación en la expresión de un gen que codifica para una proteina de 472 aa. Este polipéptido se expresa en hojas de las plantas. Debido a que la masa molecular promedio de un amino acido es de 120 Daltones, esta proteina tiene una masa molecular de 56,640 Daltones. Haz un dibujo que muestre los resultados esperados de un Western blot, usando proteínas que fueron aisladas de los siguientes individuos:

Carril 1) Una planta homociga para un gen no mutado (es decir, tipo Silvestre)Carril 2) Una planta homociga para una mutación que remueve el promotor de este gen.Carril 3) Una planta heteróciga en la cual un alelo no se mutó y el otro tuvo una mutación que cambió el codon 112 por uno de paro.Carril 4) Una planta homociga que cambia el codon 108 de fenilalanina a leucina.

II.

Ustedes quieren expresar una proteína rara en bacterias para tener grandes cantidades. Para ayudarse en la purificación, deciden agregarle un fragmento de 6 histidinas en el extreme N-terminal o en el C-terminal. Con ese fragment de histidinas la proteinna se va a poder purificar a través de una columna de Ni2+.La secuencia de nucleotidos (y de aminoacidos) de la proteinna se muestra a continuación:

1) Diseña un par de primers, cada uno con 18 nucleótidos de homología al gen, que amplifique la secuencia y agregue un codon de inicio seguido por 6 codones de histidinas al N-terminal. 2) Diseña un par de primers que agreguen 6 codones de histidina seguido por un codon de paro al C-terminal.

3) Discute qué características tiene que tener el vector de expresión para que se produzca la proteina? Cuáles son las diferencias con los vectores de clonación?