MICROSCOPIOS ESPECIALES

TRAYECTO OPTICO SEGUIDO POR EL

MICROSCOPIO OPTICO

Luz artificial y condensador que concentra la luz

Objetivo: forma imagen real aumentada e invertida (real por luz pasa por el lugar de la imagen)

Ocular: diverge los rayos, forma imagen virtual, aumentada e invertida (virtual porque los rayos no pasan por la imagen).

TIPOS DE MICROSCOPIOS

ESPECIALES

1. De campo oscuro

2. De contraste de fase

3. De Interferencia

4. De polarizaciòn

5. De fluorescencia

6. Ultravioleta

7. Electrónico

1. MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO.

Posee un condensador especial (parabólico de

Siedentof) desvía los rayos de luz para que no

penetren en el objetivo.

El resultado: Objetos aparecen brillantes sobre un

fondo oscuro.

Uso: determinación del treponema pallidum (sífilis).

Treponema Palidum

2. MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE

Permite ver estructuras vivas sin colorear.

Son de bajo costo.

No mide la masa.(datos cualitativos)

Se agrega un diafragma anular al objetivo y al condensador.

Transforma las diferencias de contraste de fase en diferencias de amplitud.

3. MICROSCOPIO DE

INTERFERENCIA

Se usa como interferómetro para medir el grosor o índice

de refracción del objeto (datos cuantitativos)

Permite ver estructuras vivas sin colorear

y calcular masa del objeto

Permite ver el contraste de fase de la luz que

atraviesa objeto y las convierte en diferencias de amplitud

(intensidad y brillo)

4. MICROSCOPIO DE POLARIZACION

Posee 2 filtros: polarizador (transforma la luz

en polarizada) y un analizador (registra las

variaciones de la polarizaciòn)

Luz polarizada al pasar el objeto produce:

desviación luz (estructuras birrefringentes o

anisotròpicas) y no desviación de la luz

(isotropicas)

MICROSCOPIO DE POLARIZACION

5. MICROSCOPIO DE

FLUORESCENCIA

Algunas sustancias

absorben energía de la luz

UV. Y emiten

fluorescencia.

Tipos de fluorescencia:

Primario o auto

fluorescencia:

Vit. A (verde) clorofila (roja

Secundaria: uso de

fluocromos

(anaranjado de acrilina,

quinacrina)

Se utiliza en:

Inmunoflurescencia (Ag-

Ac),

citogenética

identificación de sustancia

químicas y proteínas.

6. MICROSCOPIO DE LUZ

ULTRAVIOLETA

Sus lentes son de cuarzo

Utiliza la luz ultravioleta de pequeña

longitud de onda

Mayor resolución que la luz visible

MICROSCOPIO DE LUZ

UTRAVIOLETA

Se utiliza para ver ácidos nucleicos

en células vivas. para cuantificarlos

utiliza el espectrofotómetro

Se ven las estructuras en pantalla

fluorescente y placas fotográficas.

DIFERENTES TIPO DE CAMPOS:

7. MICROSCOPIO

ELECTRONICO.

LIMITACIONES DEL ME.

1. Emplea un sistema de alto vació, esto

imposibilita el estudio de células vivas.

2. Tiene bajo poder de penetración el haz

electrones, por ello espesor del tejido debe

ser 50 – 150 nm.

3. Da imágenes en blanco y negro.

PREPARACION DE LA MUESTRA

PARA EL ME

Fijación: Técnica doble fijación, la primera con

glutaraldehido, seguido de fijación en tetraòxido de

osmio.

Medio de Inclusión: Resina (en vez de cera)

Corte: ultramicrotomo (cuchilla de diamante)

Tinción: Teñido tejido con átomos de metales

pesados (tungsteno, acetato uranio y hidróxido de

plomo).

VENTAJAS DEL ME

Su alto poder de resolución de 0.2 nm.

Emplea electrones, que produce longitud de onda de 0.005 nm (0.5 Aº)

Consigue aumentos de mas de 500,000 veces.

A menor longitud onda mayor poder

resolución, por lo tanto mayor aumento.

LO de luz visible : 500 nm

LO luz ultravioleta: 260 nm

LO del electrón : 0.005 nm

PODER DE RESOLUCIÒN (PR)

Distancia mínima entre dos puntos próximos

que pueda verse separados.

PR del ojo : 0.2 mm.

PR del MO : 0.2 um.

PR del ME : 0.2 nm.

ELEMENTOS DEL ME PARA

PRODUCIR TRAYECTO OPTICO

1. Un filamento tungsteno (cátodo) emite

electrones de alto voltaje (50,000 a 100,000

voltios)

2. Un ánodo que forma flujo de electrones

3. Un lente condensador electromagnético,

concentra el haz y lo dirige al objeto

4. Un lente objetivo electromagnético que

amplia el cono del haz de electrones

5. Lente de proyección (Ocular del MO) que

amplia la imagen

6. Pantalla fluorescente o placa fotográfica que

registra la imagen.

7. Posee un sistema de vacío.

TIPOS DE MICROSCOPIOS

ELECTRONICOS

1. Microscopio electrónico de transmisión

(MET)

2. Microscopio electrónico de Barrido (MEB)

1. MET

Es el microscopio estándar mencionado

Permite ver ultra estructuras celulares en un

plano.

2. MEB

Los electrones no atraviesan el objeto, la

imagen se forma indirectamente por

acumulación puntiforme de detalles de la

superficie del preparado.

FUNCIONAMIENTO MEB

Basa en que la muestra es recorrida por haz

de electrones finos (10 nm ) que se dispersan,

provoca electrones secundarios, que son

medidos por un detector adaptado a un

amplificador con pantalla de TV. La imagen

formada se registra fotográficamente.

VENTAJAS DEL MEB

1. Tiene gran profundidad de

campo

2. Produce imagen de alta

resolución

3. Da imagen tridimensional

4. Haz no atraviesa el

preparado

< capacidad de aumento

que MET.