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Facultad de Farmacia y Bioquímica INTRODUCCION La Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) se obtiene de un arbusto originario de Paraguay que se utiliza desde hace miles años ya por los Guaraníes como endulzante. Las hojas de la planta son 30 veces más dulces que el azúcar y 200 veces más que los edulcorantes químicos. Se utiliza mucho en Japón, Malasia y en Extremo Oriente como edulcorante, tanto en refrescos, como en chicles, hasta para saltear las salsas. Los japoneses han realizado muchísimos estudios clínicos sobre la Stevia y su extracto Las hojas secas de la Stevia contienen un 42% aproximadamente de sustancias hidrosolubles, además contiene proteínas, fibra, hierro, fósforo, calcio, potasio, zinc, rutina, vitamina A y C. Diversos estudios aseguran que es apto para diabéticos, ya que regula los niveles de glucosa en sangre, también muestran que es una planta antibacteriana bucal, digestiva, diurética, vasolidatadora, con efectos beneficiosos en la absorción de la grasa y la presión arterial, entre otros beneficios. La Stevia también tiene aplicaciones cutáneas para solventar problemas como el acné, la dermatitis, el eczema e incluso como mascarilla. Aunque las bondades como sustituto del azúcar han generado gran demanda entre diabéticos y personas que buscan reducir el consumo de carbohidratos en la dieta diaria (Sojaerto et al., 1983), el progreso comercial ha sido lento, debido principalmente a las dificultades en la producción del cultivo, la calidad pobre de extractos de Stevia y la ausencia de normas regulatorias para los edulcorantes tanto en el mercado americano como europeo. 1

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INTRODUCCION

La Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) se obtiene

de un arbusto originario de Paraguay que se

utiliza desde hace miles años ya por los

Guaraníes como endulzante.

Las hojas de la planta son 30 veces más dulces

que el azúcar y 200 veces más que los

edulcorantes químicos.

Se utiliza mucho en Japón, Malasia y en Extremo Oriente como

edulcorante, tanto en refrescos, como en chicles, hasta para saltear las

salsas. Los japoneses han realizado muchísimos estudios clínicos sobre la

Stevia y su extracto

Las hojas secas de la Stevia contienen un 42% aproximadamente de

sustancias hidrosolubles, además contiene proteínas, fibra, hierro, fósforo,

calcio, potasio, zinc, rutina, vitamina A y C. Diversos estudios aseguran

que es apto para diabéticos, ya que regula los niveles de glucosa en

sangre, también muestran que es una planta antibacteriana bucal,

digestiva, diurética, vasolidatadora, con efectos beneficiosos en la

absorción de la grasa y la presión arterial, entre otros beneficios.

La Stevia también tiene aplicaciones cutáneas para solventar problemas

como el acné, la dermatitis, el eczema e incluso como mascarilla.

Aunque las bondades como sustituto del azúcar han generado gran

demanda entre diabéticos y personas que buscan reducir el consumo de

carbohidratos en la dieta diaria (Sojaerto et al., 1983), el progreso

comercial ha sido lento, debido principalmente a las dificultades en la

producción del cultivo, la calidad pobre de extractos de Stevia y la

ausencia de normas regulatorias para los edulcorantes tanto en el

mercado americano como europeo.

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Nombre binomial:

Stevia rebaudiana

II. HISTORIA

Descubierta por los Guaraníes y otras tribus originarias de Paraguay y

Brazil y clasificada por el sabio Moisés

Bertoni en 1899, la Stevia es una hierba

natural originaria de América del Sur.

Los españoles no le prestaron mucha

atención en su uso debido a que

utilizaban la miel como endulzante. En el

siglo XVI, notaron que los aborígenes del

Paraguay usaban con mucha frecuencia el

Kama he'ê, para diferentes

preparaciones, una de ellas para endulzar

sus alimentos.

A fines del Siglo XIX el cónsul inglés en Asunción escribió y comunicó a su

país sobre las propiedades de la Stevia y comentó “nada más que unas

pocas hojas son suficientes para endulzar una taza de té”. Después de

1908, el agrónomo Juan B. Aranda Jiménez y su esposa Vera Bertoni

comenzaron a establecer técnicas de producción y multiplicación.

El Dr. Ovidio Rebaudi comenzó los primeros trabajos del conocimiento

químico de la planta; esto le valió su nombre en los principios, también

comenzaron los primeros trabajos de industrialización. En 1921 el

Comisionado de comercio de los Estados Unidos en Paraguay, George

Brady, presentó un trabajo al departamento de Agricultura de su país en

el cual escribe “nueva planta dulce con grandes posibilidades

comerciales”; y en 1941, durante la Segunda Guerra Mundial, Inglaterra

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comisiona a investigadores para que vean la posibilidad de que la Stevia

sea utilizada como un posible sustituto del azúcar.

En 1954, los japoneses comenzaron su cultivo y en 1970 se inició su

industrialización como edulcorante. Simultáneamente, los agricultores ven

que otras propiedades adornan a esta planta, y cómo los nativos

paraguayos comienzan a darle otras aplicaciones, especialmente en el

campo medicinal y agropecuario.

III. PROPIEDADES MEDICINALES

Una planta saludable a todas luces De todas las propiedades medicinales

que pueden enumerarse de la Stevia destacan los efectos que tiene para

la calidad de vida de los diabéticos. Buena parte de los afectados por esta

enfermedad (se calcula que más de 135 millones en todo el mundo)

podrían beneficiarse de las propiedades reguladoras de los niveles de

azúcar en sangre que aporta la ingesta de hojas tiernas de la Stevia.

Los estudios médicos constatan que el principio activo de la planta induce

a las células beta del páncreas a producir por ellas mismas importantes

cantidades de insulina, lo que contribuye a reducir la glucosa en sangre,

que es la causa de la diabetes mellitus 2. Beneficios para el corazón:

protege el corazón debido a que posee una acción cardiotónica la cual

actúa regulando los latidos del mismo. Es además un excelente

vasodilatador y tiene la cualidad de bajar la presión arterial. Azúcar en

sangre: estudios realizados en Dinamarca, específicamente en el

Departamento de Endocrinología y Metabolismo del Aarhus University

Hospital, dan a la Stevia propiedades muy importantes ya que la misma

cuenta con un principio activo llamado Estiviosido , el cual tiene acción

directa sobre las células del páncreas y lo estimula para que

este produzca insulina en forma normal. La Stevia puede ser utilizada sin

ningún problema por personas diabéticas ya que no afecta para nada los

niveles de azúcar en sangre. Sus cualidades bactericidas: está

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considerada como un bactericida de amplio espectro, es muy eficaz para

combatir bacterias en la mucosa bucal y también del tipo Candida

Albicans, que provocan vaginitis en forma recurrente. También actúa

sobre la Escherichia Colis y estafilococos aureus. Cuida la piel: la Stevia es

usada en Estados Unidos como loción, la cual combate arrugas, líneas de

expresión y ayuda a acelerar los procesos de cicatrización en la piel. Tiene

la cualidad también de mejorar lesiones causadas por el acné y

de eliminar manchas. Propiedades en el organismo: estimula el

metabolismo para activar la absorción de grasas y de esa manera ayuda a

bajar de peso, también evita la acidez estomacal y favorece la digestión.

3.1.- Propiedades de la Stevia

- Tiene 0 calorías o sea es totalmente acalórico.

- La Stevia es ideal para los diabéticos ya que regula los niveles de

glucosa en la sangre. En algunos países incluso se

- utiliza como tratamiento para mejorar la diabetes ya que parece

regular los niveles de insulina.

- Muy aconsejable para perder peso ya que reduce la ansiedad por la

comida (tomar de 10 a 15 gotitas 20 minutos

- antes de las comidas) y al regular la insulina el cuerpo almacena

menos grasas.

- La Stevia disminuye también el deseo o apetencia por tomar dulces

y grasas.

- Realza el aroma de las infusiones o alimentos donde se añada.

- Retarda la aparición de la placa de caries (por eso se usa también

para hacer enjuagues bucales y como componente

- de la pasta de dientes). Se pueden añadir una gotitas a las pasta de

diente.

- La Stevia es un hipotensor suave (baja la presión arterial que esté

demasiado alta).

- Es suavemente diurético.

- Mejora las funciones gastrointestinales.

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- Puede ayudar en la desintoxicación del tabaco y del alcohol, ya que

el té de Stevia reduce el deseo hacia estos dos

- tóxicos.

- Previene e inhibe la reproducción de bacterias y organismos

infecciosos y mejora la resistencia frente a resfriados y gripes.

Su importancia en el tratamiento de la Diabetes

Según un informe del Instituto Internacional de

Diabetes, publicado en Helsinki, esta enfermedad

afecta a unos 135 millones de personas en el

mundo, con una predicción de 300 millones para el

año 2025 realizada por la Organización Mundial de

la Salud. La diabetes, causa la muerte de 3

millones de personas por año, convirtiéndose en

epidemia en algunos países donde es la causa

principal de fallecimientos. También sabemos que

produce trastornos de la erección.

El Instituto señala que, el tratamiento por

medicamentos, ha cambiado muy poco el panorama, desde el desarrollo

de las inyecciones de insulina en 1921. Apuntan, en cambio, a modificar el

estilo de vida de las personas, con un énfasis renovado en el ejercicio

físico y la dieta saludable.

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Este cambio de hábitos implica, entre otras cosas, suprimir el consumo de

azúcar y volcarse a sustitutos de origen natural. Es así que la demanda

mundial por edulcorantes poderosos está en constante crecimiento,

estableciéndose la Stevia como la "única opción" saludable y de origen

totalmente natural.

La hoja de Stevia Revaudiana Bertoni de buena calidad es hasta 70 veces

más dulce que el azúcar de caña y los extractos que de ella se obtienen

(Steviosidos, etc.) alcanzan un poder edulcorante de 100 a 300 veces

mayor y no se altera con la cocción. Pero reducir su consumo solamente a

sus poderes endulzan tes, nos priva de disfrutar los múltiples beneficios

que esta planta milagrosa puede aportar a nuestra salud.

IV. HABITAT

4.1.- Variable climática

La distribución de los cultivos en el mundo está marginada por los límites

climáticos, por defecto o por exceso de las necesidades vitales para los

individuos que conforman los distintos biotipos. Desde que se efectúa la

siembra, las plantas están sometidas a las variaciones asincrónicas de los

elementos componentes del clima y es el clima el principal factor

determinante de la probabilidad de éxito del cultivo.

Falacia y Alberic (2003) estudiaron el clima del hábitat natural de la

especie y de los departamentos en los cuales hoy es posible su cultivo en

Paraguay. Posteriormente verificaron el área argentina que presenta

idénticas condiciones a la zona de producción paraguaya, determinando el

bioclima de la Stevia rebaudiana (Falacia y Alberic, 2004).

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Según la bibliografía, (Shock, 1982) las condiciones óptimas son:

precipitaciones anuales entre 1000 a 1400 Mm y temperaturas de 15 a

30[grados]C, con medias de 20[grados]C y una mínima de 5[grados]C,

siendo los límites extremos -6 y 43[grados]C. Las heladas de baja

intensidad y duración corta son toleradas aunque pueden disminuir el

rendimiento hasta un 25%.

La habilidad para resistir inviernos parece radicar en la temperatura del

suelo. Mudas de 5 cm con 10 hojas soportaron -5[grados]C durante 70

minutos (Sakaguchi e Tatsuiko, 1982).

Stevia es una planta de día corto y la duración crítica del día es de 13

horas. Sin embargo, fue reportada una elevada variabilidad en

poblaciones con diferente sensibilidad a la duración del día (Valio and

Rocha, 1966; Zaidan et al., 1980). Las plantas pueden iniciar la floración

con sólo 4 hojas verdaderas (Carneiro, 1990).

Desarrolla mejor donde la estación de crecimiento es larga, donde la

intensidad de luz es alta con temperaturas tibias, riesgos mínimos de

heladas luego de la brotación y sin períodos de larga sequía. Los

fotoperíodos largos aumentan la longitud de los entrenudos, área foliar,

peso seco y aceleran la aparición de hojas. La producción de materia seca

se reduce a la mitad con fotoperiodos cortos. Azúcares, proteínas y

esteviósidos aumentan tanto en valores absolutos como relativos en días

largos (Sakaguchi e Tatsiuko, 1982).

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V. CULTIVO

5.1.-Posibilidades de producción

5.1.1 Antecedentes

La producción del cultivo de la stevia es considerado como un rubro

agrícola mas a ser utilizado en pro de la diversificación agrícola del

pequeño productor. En general, no se presenta como un cultivo que

desplace a cultivos de renta tradicionales como el café, plátano, piña, etc.,

sino como un rubro complementario que permite un ingreso de capital en

periodos en que los cultivos de renta no lo hacen.

En la producción del cultivo de stevia se utiliza gran cantidad de mano de

obra tanto en el manejo agronómico y en la post cosecha, por lo que se

recomienda no superar las 0.25 ha. por agricultor de manera a que no

interfiera con las labores de los otros cultivos que hacen parte del sistema

de producción de la finca.

Criterios a tener en cuenta para determinar superficie de

producción del cultivo

de Stevia por agricultor.

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• Superficie total utilizable de la finca del pequeño productor

• Facilidad de comercialización de la materia prima producida

• Implementos disponibles para las labores agrícolas.

• Agua abundante y de buena calidad para el riego.

5.1.2 Productividad y perspectivas de

rendimiento

Las nuevas técnicas de producción permiten mejorar sustancialmente en

rendimiento y en calidad en comparación al sistema tradicional de

producción no tecnificado.

Obviamente, esto es posible si se aplican los conocimientos técnicos

relacionados al manejo del cultivo, en condiciones que puedan desarrollar

el potencial de producción que poseen, tal es así que ha altitudes menor

a 1000 m.s.n.m los rendimientos alcanzan hasta las 12 Tm/año

considerando un distanciamiento de 0.40 m. entre surcos y 0.20 m entre

plantas, así mismo está en función al mayor número de cortes, además de

las características edáficas y climáticas. En tal sentido las zonas donde se

recomienda masificar su producción es en la zona de selva, y en

condiciones de sierra en los valles interandinos a altitudes menores a

1800 m.s.n.m.

5.2. Técnicas de propagación

5.2.1 Técnicas de propagación por semilla

botánica

Los almácigos deben establecerse en una parcela que satisfaga los

requisitos que se

mencionan a continuación:

- Tener en cuenta que la semilla botánica tiene bajo porcentaje de

germinación y

longevidad corta.

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- Que sea un lugar alto, para facilitar el drenaje del exceso de agua; sin

árboles

frondosos que puedan interferir con la exposición a la luz solar; próximo

a la vivienda

del dueño o encargado para facilitar el cuidado de las plantitas, con

abundante agua

limpia (manantial o pozo profundo) para el riego que se les deberá

aplicar.

- Que este alejada de una plantación comercial o de algún lugar en el

que, en

recientes años, haya sido cultivada la misma especie u otras

susceptibles al ataque de

las mismas enfermedades o plagas que el ka’a he’e.

- Que ofrezca la posibilidad de construir los almácigos con una

orientación de Este a

Oeste, para un mejor aprovechamiento de la luz solar por las futuras

plantitas.

- Que no se halle infestada de malezas de difícil erradicación.

- El suelo de las almacigueras deberá ser profundo (por lo menos 30 cm.

de

profundidad), con pH 6 a 6,5, fértil, suelto, con buen drenaje interno

(desagüe) y, en lo

posible, con alto contenido de materia orgánica bien descompuesta.

- Se recomienda un área de 100 m2 de almácigo para una producción de

100,000

plantines.

- La semilla deben presionarse suavemente en las camas de almácigo y

regar

frecuentemente por 7 días.

- Utilizar media sombra al 50%, colocada sobre arcos, permaneciendo de

20 a 30

días después de la siembra.

- Realizar labores culturales oportunas.

- El repique se realiza a raíz desnuda o en bolsas de polietileno.

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Foto 1 y 2. Vivero de producción de plantones de stevia – Mandinga San Ignacio

5.2.2. Técnicas de propagación por semilla vegetativa.

Las camas de propagación deben establecerse en una parcela que

satisfaga los

requisitos que se mencionan a continuación:

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- Usar plástico transparente de 120 a 150 micras de espesor colocados en

la cama de

propagación en forma de túnel.

- Utilizar esquejes terminales y sub. terminales de 10 cm (3 – 4 nudos)

antes que la

planta madre haya emitido botones florales.

- La profundidad de siembra del esqueje no debe ser menor a 3 cm y no

quitar las

hojas ya que propician mejor enrizamiento.

- Humedecer previamente el sustrato a capacidad de campo, luego los

esquejes son

regados en forma abundante.

- Transcurridos los 20 días se procede a retirar en forma lenta los

extremos del túnel

(plástico) de manera que se disipe lentamente la humedad y los

esquejes se adapten

al medio ambiente normal.

- A los 60 días retirar la totalidad del plástico.

- Realizar las prácticas culturales convenientemente.

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Foto 3 y 4. Sistema de propagación de plantines de stevia por semilla vegetativa

5.3. Técnicas de producción

5.3.1. Manejo Agronómico

- Realizar oportuna y buena preparación de suelos, aplicando 20 – 30

Tm/ha de

compost.

- El pH del suelo recomendado es 5.5 – 6.5.

- El distanciamiento de siembra es de 0.40 a 0.50 m x 0.20 m teniendo

una densidad

de 100,000 plantines/ha.

- Entre los 60 – 70 días realizar el corte de uniformización para permitir un

brotamiento homogéneo.

- Para la fertilización deberá tenerse en cuenta el análisis de suelos de un

laboratorio

especializado, esta debe hacerse a la siembra y después de cada

cosecha con la

siguiente formulación: 162 – 19 – 140.

- El riego es fundamental (no resiste la sequía).

- Una de las operaciones que determinan el éxito en la producción del

cultivo de stevia

es el control eficiente de malezas, por sobre todo en forma oportuna.

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- Necesariamente el cultivo deberá estar libre de la presencia de malezas

las cuales

compiten en agua y nutrientes con el cultivo, siendo muy recomendable

el uso de

cobertura muerta.

- Realizar el corte en botón floral o hasta el 10% de floración (flor abierta),

mínimo a 5

cm. sobre el nivel del suelo, realizando inmediatamente la PRE limpieza

(eliminación

de hojas basales negras y marrones).

- Cosechar en tiempo seco o cuando el rocío se haya levantado.

Foto 5 y 6. Siembra y manejo agronómico de la stevia (Campos de Chota y San

Ignacio)

5.3.2. Variedades estudiadas.

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Variedad local San Ignacio. Variedad naturalizada en la zona de ceja

de selva, se

desconoce su lugar de procedencia y nivel de edulcorante.

Variedad Criolla Paraguaya. Su nivel de edulcorante en el país de

origen alcanza el

12%.

Variedad Eireté. Es de características superiores a la variedad criolla,

con un nivel

de edulcorante superior al 18%.

5.3.3. Plagas y enfermedades

El cultivo de stevia puede ser afectado por las plagas y enfermedades que

afectan su

rendimiento y la calidad de la hoja, siendo las más frecuentes las que se

describen a

continuación:

• Seda blanca

Causada por el hongo Sclerotium rolfsii. Este hongo ataca a las plantas

adultas y puede causar alta mortandad en el lugar definitivo. Produce

mancha algodonosa alrededor del cuello de la planta. El hongo sobrevive

en el suelo por mucho tiempo por lo tanto el control debe estar orientado

a una prevención. La transmisión se da por heridas causadas por insectos,

implementos agrícolas y por ataques de nemátodos.

• Mancha foliar o septoriosis

Tiene como agente causal a la Septoria steviae Speg., Presenta los

siguientes síntomas: pequeñas manchas foliares de color marrón claro a

marrón oscuro, de forma irregular y contorno (halo) amarillento. Es

favorecido en condiciones de alta humedad (lluvias continuas, rocío y

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neblina) y temperaturas elevadas; con suelos mal drenados y aireación

deficiente.

• Mancha negra o alternariosis:

Tiene como agente causal al hongo Alternaria steviae, Presenta manchas

más grandes que las provocadas por la Septoria que empiezan a

desarrollarse en la margen de las hojas y llegan a afectar el tallo y los

órganos florales. Cuando entra en esta última etapa se produce la caída

de las hojas, principalmente de las inferiores.

Los factores predisponentes son la alta humedad (lluvias frecuentes, rocío

y neblina) y

temperaturas relativamente cálidas.

• Oidio

Tiene como agente causal al Oidium sp. Los síntomas se inician con un

crecimiento blanco en la superficie de las hojas y ramas. A medida que el

hongo crece las zonas afectadas se vuelven amarillas y finalmente se

necrosan.

• Roya Blanca

Enfermedad que tiene como agente causal al Albugo sp, se reporta sobre

los 1700 m.s.n.m, se presenta en forma de pústulas de color blanco

amarillento en el envés de la hoja, afectando fuertemente la calidad de la

hoja.

Entre las principales medidas preventivas de control de las enfermedades

y plagas que atacan a esta especie vegetal, cabe citar que se deberá

escoger para su plantación una parcela de terreno no utilizada en el año

anterior con algún cultivo susceptible a las mismas enfermedades que

afectan a la stevia tales como el tomate, girasol; el tratamiento químico

hacerlo en base a productos cupricos tal como el caldo bordales.

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Las principales plagas que se presentan son: comedores de hojas y

picadores

chupadores; siendo las más importantes al pulgón (Aphidae), cigarrita

(Cicadellidae); pulga saltona (Curculionidae) grillo (Acetta) hormiga

(Formicidae), mosca blanca; así mismo la presencia de babosa (molusco

de la familia Limicidae) afectan el rendimiento, por lo que se recomienda

tomar medidas preventivas.

5.4. Técnicas de post - producción

- El número de cortes está superdidato a la zona agro ecológica,

llegándose a

cosechar hasta 8 cortes al año, en las zonas más bajas de selva.

- El momento ideal del corte dependerá de la forma de comercialización,

se

recomienda cortar cuando la planta está en botón floral o hasta el 10 %

de floración,

es en esta etapa donde se alcanza en máximo nivel de edulcorante.

- Inmediatamente al corte, se debe realizar la pre limpieza de las ramas,

que consiste

en la eliminación de las hojas básales (hojas negras y marrones) que de

lo contrario se

mezclaran con las hojas de primera afectando la calidad final de la

materia prima, con

esta sencilla actividad se logra obtener mayor cantidad de hojas secas

de calidad

superior.

- Realizar el secado en carpas de polipropileno utilizando módulos de

secado

previamente implementadas.

- La altura de secado no debe pasar los 10 cm de espesor

- Las hojas secas deben contener 10 % de humedad.

- Empacar adecuadamente.

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- Almacenar en depósitos secos y bien ventilados. Después de seco, el

producto

guarda su propiedad por mucho tiempo, sin perder su poder edulcorante.

Foto 7 y 8. Módulos de secado de hoja en Matibamba – Chota y Yandiluza San Ignacio.

VI. ECONOMIA

6.1.- Importancia Económica

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Su importancia económica radica en que, en sus hojas, posee una

sustancia denominada esteviósido, constituida por una mezcla de por lo

menos seis glucósidos diterpénicos,1 que es 100 a 400 veces más dulce

que la sacarosa y que por sus características físico-químicas y

toxicológicas permite su inclusión en la dieta humana para ser utilizada

como un edulcorante dietético natural, sin efectos colaterales. Su

inclusión en el Código Alimentario Argentino (CAA, resolución 101 del 22

de febrero de 1993) define al esteviósido como un “polvo blanco

cristalino, inodoro, no higroscópico, no fermentescible, de sabor dulce aún

en soluciones muy diluidas, muy soluble en agua”. La posibilidad de

exportación ha incrementado el interés de esta especie por parte de los

productores. Sin embargo, el principal obstáculo para su comercialización

es, además de su retrosabor y su costo de producción, la competencia con

los otros edulcorantes sintéticos que actualmente se encuentran a la

venta.

No obstante, este segmento del mercado está en franca expansión y

admitiría la coexistencia entre ellos, además las ventajas del esteviósido

que le permiten competir con los demás son su falta de toxicidad, que es

natural, estable y de muy alto poder edulcorante.

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6.2.- Obtención de edulcorantes

6.2.1 Materiales y métodos

• Químicos

Los estándares de esteviósido y rebaudiósido A se obtuvieron de Waco

Pure Chemical, los reactivos fueron de Merck. Las hojas secas de Stevia

rebaudiana se compraron a cultivadores de Antioquia.

• Extracción sólido-líquido (Lixiviación)

En la extracción de los glucósidos se desarrolló un diseño de

experimentos factorial: solvente extractor (agua-etanol) a 3

concentraciones de etanol (0%, 35% y 70%), relación hojas/solvente

(1/6.25 y 1/8 kg/L) y pH (3, 7, 11)

• Precipitación con sales/pH

El extracto de Stevia se mezcló con sales de calcio en diferentes

proporciones, durante 15 minutos o se varió el pH del extracto entre 2 y

11 para retirar impurezas; se centrifugó a 14000 rpm. por 5 min. y al

sobrenadante se le realizó DNS para cuantificar azúcares reductores.

• Filtración con membranas (UF)

Se empleó un equipo MILLIPORE con cartuchos de ultrafiltración de 10.000

Da y 3.000 Da, con un flujo de 8 mL/min.

• Adsorción

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Se realizó la cinética de adsorción, a una agitación de 100 rpm. y

temperatura ambiente, con el adsorbente seleccionado y la mejor relación

extracto/adsorbente.

• Cristalización

Se saturó la muestra a presión reducida, a una temperatura de 50°C.

• Cuantificación de endulzantes

Se realizó el método del ácido 3,5 - dinitrosalicílico para cuantificación

indirecta de azúcares reductores (Método de DNS).

• Espectroscopía de Infrarrojo

Las muestras se analizaron en un equipo Perkin Elmer y se compararon

con los resultados de los estándares de esteviósido y rebaudiosido A.

• Cromatografía de capa fina (TLC)

Se empleó el sistema de solventes Isopropanol:Agua:Acetato de Etilo,

revelando con ácido sulfúrico.

• Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC)

Se realizó en una columna C18 y CN de 2.1X50 mm cada una y un tamaño

de partícula de 5 μm; a una temperatura de 35°C y un flujo de 0.1 ml/min,

con un detector UV a 210 nm. Se hizo elusión isocrática con dos sistemas

de solventes: Metanol:Agua (columna C18) y Acetonitrilo:Agua (columna

CN).

6.2.2.- Resultados y discusión

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• Lixiviación

Los resultados estadísticos Anova, obtenidos con el software StatGraphics,

muestran que los factores pH, relación hoja/solvente y concentración de

solvente no presentan efectos significativos con respecto a la variación de

la concentración de azúcares reductores, esto se debe a que el valor de P

correspondiente a cada uno de ellos es mayor que 0.05, a un nivel de

confianza de 95%; sin embargo, al emplear agua como solvente se mejora

la extracción, lo que se representa en la Fig. 1.

Cuando se estudió el efecto de la temperatura se encontró que ésta sí es

relevante en la concentración de azúcares reductores en el extracto crudo

(Fig. 2)

Fig. 1. Efecto de los factores involucrados en la lixiviación sobre la extracción de glucósidos.

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Fig. 2. Diagrama de Pareto para la interacción entre pH y temperatura.

• Precipitación con sales/pH

El carbonato de calcio (CaCO3) no precipitó glicósidos ni color por ello, la

concentración de azúcares reductores no se afectó. El hidróxido de calcio

(Ca(OH)2), presentó la mayor remoción de color con una reducción de

más del 50% en la concentración de azúcares reductores. Con el cloruro

de calcio (CaCl2) hay buena clarificación del extracto y baja reducción de

azúcares en solución. Las cantidades de sal empleadas no afectaron la

concentración de glicósidos, pero sí al color del extracto, siendo 0.01g la

mejor cantidad de sal (Fig. 3).

A pH ácido (2 y 3) hay una disminución de color del 35% con respecto al

extracto crudo, cuya intensidad va aumentando al disminuir la

concentración de H+ (medio básico). A pH cercanos a 7 no se observan

reducciones significativas de color, mientras que a pH muy básicos el

color se hace más intenso que en el extracto crudo (Fig. 4). La

concentración de azúcares reductores disminuye a pH extremos, siendo

más significativa en los básicos. En los pH cercanos a 7 no se presentan

disminuciones de concentración lo que coincide con la estabilidad del

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Facultad de Farmacia y Bioquímica

color (Fig. 5). Estos resultados muestran que el color y la concentración de

azúcares reductores están estrechamente relacionados.

Fig. 3. Precipitación con diferentes concentraciones de sales de Calcio.

Fig. 4. Determinación de color a 670nm en la precipitación variando pH.

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Fig. 5. Concentración de azúcares reductores después de modificar pH.

• Filtración con membranas (UF)

Con las membranas empleadas no se logró mejorar la pureza de la

solución debido a que el corte de peso molecular es mayor que el peso

molecular promedio de los glicósidos (800Da para esteviósido).

• Adsorción

En las últimas horas de la adsorción se dan las mayores concentraciones

de azúcares reductores, coincidiendo con las mínimas intensidades de

color en solución, por ello se determina que el tiempo mínimo requerido

en el proceso es de 15h (Fig. 6).

Fig. 6. Cinética de adsorción.

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Facultad de Farmacia y Bioquímica

• Cristalización

Los cristales obtenidos presentan las siguientes características: color

blanco, sin olor, con un sabor dulce intenso que perdura en la boca y sin

sabor amargo.

• Espectroscopía de Infrarrojo

Hay una gran similitud entre los dos estándares; sin embargo, el

rebaudiósido A tiene un pico más pronunciado a 1076 cm-1 cuya longitud

coincide con el mismo pico presentado por los cristales obtenidos,

mientras que para el esteviósido éste es más corto a la misma longitud de

onda. A 656 cm-1 se observa otra banda con leves diferencias en los picos

mostrados, siendo la del rebaudiósido A y la de los cristales obtenidos

más semejantes. Debido a la semejanza en los espectros obtenidos, por la

similitud en sus estructuras, no se puede decir con certeza que tipo de

glicósido es.

• Cromatografía de capa fina (TLC)

Al realizar la cromatografía de capa fina (TLC) al extracto crudo se

evidenciaron ocho (8) bandas, lo que indica la presencia de diversos

compuestos en el extracto resultante de la lixiviación. Después de la

purificación y cristalización, se observó la presencia de tres bandas: una

que aparece a la misma distancia del estándar de rebaudiósido A, otra a

la distancia del estándar de esteviósido, y otra banda intermedia que

sugiere la presencia de un tercer glicósido en la muestra. Según la

intensidad de las bandas, los cristales obtenidos contienen

mayoritariamente rebaudiósido A.

• Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC)

El extracto de Stevia analizado, presentó 5 picos entre los 2.031 min. y

6.189 min., que corresponden a diferentes compuestos (Tabla 1).

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Comparando el tiempo de retención de los dos estándares (2.007 min.

para esteviósido y 2.014 min. para rebaudiósido A) (Tablas 2 y 3), se

dificulta la determinación de la cantidad de estos glicósidos en la muestra

obtenida debido a que no es posible diferenciarlos. Sin embargo, en la

muestra se encuentra un pico a los 2.031 min., que coincide con los

estándares, con lo que se puede asegurar la presencia de al menos uno

de estos en el extracto. Estos resultados son muy similares a los

obtenidos con la columna C18.

VII. COMPOSICION QUIMICA

Las hojas de stevia cierran glycosides cuyo poder endulzante, una vez

purificados, se sitúa entre 250 y 400 veces su equivalente en azúcar. Es

demostrado que estos compuestos son sintetizados en los chloroplastos,

en cambio, el modo en el que la síntesis interviene no es conocido con

precisión.

Los compuestos más representados han sido denominados en la

literatura científica como sigue:

- Steviosido (más abundante)

- Rebaudiosidos A a E (menos abundantes pero más

endulzantes que el steviosido el Rebaudiosido A es el más abundante

de rebaudiosidos)

Dulcosido A

Estos steviosidos están presentes a la altura de 5 al 22 % del peso seco

de la hoja de stevia. El rendimiento de steviosido depende de la calidad

de las plantas seleccionadas y de las condiciones de cultura: insolación,

terreno, regadío… La literatura utiliza regularmente la cifra del 10 %

cuando se habla de concentración media de allí steviosido en las hojas de

Stevie.

Además de los steviosidos anteriormente mencionados, se encuentra

también en las hojas de stevia, aceites esenciales, flavonoidos, minerales,

vitaminas, taninos, el calcio, el cinc, el potasio, el magnesio, el sodio, el

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flúor, las fibras, la clorofila, el agua y muchos otros constituyentes en

forma de rastro.

LOS ESTEVIÓSIDOS

Las hojas de la Stevia rebaudiana contienen una mezcla de ocho

glicósidos diterpénicos (entre los que se encuentran principalmente el

esteviósido y el rebaudiósido). El esteviósido es un edulcorante natural no

nitrogenado extremadamente dulce. En estado puro es 300 veces más

dulce que la sacarosa.

Entre sus propiedades físico-químicas deseables para la elaboración de

alimentos podemos destacar:

• La resistencia al calor. Su estructura no se modifica por su exposición a

altas temperaturas y por lo tanto no pierde su poder edulcorante. Es apto

para alimentos calientes u horneados. Es estable a temperaturas

normales empleadas en el procesamiento de los alimentos:

pasteurización, esterilización, cocción.

Formula química del esteviosido

VIII. USOS DE LA STEVIA

8.1.-Uso Agrícola

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Consiste en un método de cultivo en el cual de emplea el extracto de

hojas y tallos de la stevia diluido para rociar la parte aérea de un cultivo

agrícola con el fin de estimular el proceso fotosintético que permitirá

elevar el tenor de azúcares y con ello mejorar el sabor de la cosecha.

También se aplica el extracto con el agua de riego para aumentar la

población de microorganismos benéficos del suelo o se mezclan las hojas

y tallos finamente pulverizados con el compost parcialmente fermentado

para acelerar su fermentación y estimular las actividades de los

microorganismos benéficos. Cuando se incorpora al suelo, el tallo de la

stevia finamente pulverizado se logra recuperar notablemente a un suelo

contaminado con los fertilizantes químicos, transformando el mismo en un

suelo fértil, incrementando la población de microorganismos benéficos.

Igualmente, al aplicar el extracto de la Stevia a los cultivos hortofrutícolas

entre ellas a la propia stevia, con lo que se logra una mayor resistencia de

los mismos a enfermedades y se obtienen frutos de mejor calidad, con

mayor contenido de azúcares y más duraderos.

Utilizar 100 a 150 cc. del extracto de stevia en 20 litros de agua en

pulverizaciones quincenales en cultivos como el tomate, frutilla, melón,

maíz, algodón y en plantaciones de estevia. Al suministrar a un cultivo

extracto o parte de la planta de Stevia pulverizada, se logra acelerar la

descomposición de los residuos de productos químicos y los

microorganismos benéficos activan, lo cual estimula la formación de los

agregados del suelo y como resultado, se tendrá un suelo con mejor

retención de humedad y nutrientes.

Además, debido a la presencia de numerosos microorganismos que

contienen gran cantidad de nitrógeno inorgánico que se congregan en la

rizósfera, se protege contra agentes patógenos y se convierte en un suelo

donde los cultivos podrán absorber los nutrientes cuando lo necesiten y

cantidad necesaria.

Aumenta igualmente la emisión de pelos absorbentes en las raíces, con lo

cual aumenta la absorción de calcio y magnesio, haciendo que el cultivo

sea menos propenso a trastornos fisiológicos y aumenta la fotosíntesis.

Como resultado de esto, el cultivo gana en vigor, contrae menos

enfermedades y los productos cosechados resultan más durables.

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Facultad de Farmacia y Bioquímica

Otra acción de la stevia es la capacidad de descomponer agroquímicos, lo

que hace que queden muy pocos residuos y por lo tanto aumenta el grado

de seguridad de los productos agrícolas.

Así mismo, como la stevia contiene muchos minerales, aumenta también

el tenor de minerales en los productos agrícolas. Esto hace que estos

adquieran un mejor sabor, especialmente aumentando el grado de

contenido de azúcares incidiendo favorablemente en la calidad de las

frutas cosechadas. Además, los productos cosechados duran

considerablemente más por la capacidad antioxidante que tiene la stevia.

Igualmente los diversos efectos que presenta la Stevia hacen que la

capacidad que tienen las plantas de emitir raíces se fortalezca. En

consecuencia, se incrementa el rendimiento de los cultivos.

8.2.-Uso Ganadero

En ganadería y lechería, deja más saludable al ganado previniendo

enfermedades y mejorando la calidad de la carne y la leche. Desde el

inicio del engorde se ha suministrado 10 ml. de extracto de Stevia

mezclado con la leche durante un mes y medio. Posteriormente durante

un mes y medio se ha suministrado pequeñas dosis de stevia en polvo

mezcladas con el forraje (2%), de mañana y tarde. De allí en adelante, se

ha agregado esporádicamente stevia en polvo mezclada con el forraje.

Efectos y resultados: el cuerpo del vacuno tomó brillo y éste consumió

mayor cantidad de forraje y en el momento de la venta los animales

alimentados con Stevia han pesando 50 Kg. más.

8.2.1.-Usos en Porcinos

Durante 50 días a partir del destete, se suministró a los lechones el

extracto de Stevia mezclado por agua, a la razón de 30 ml en 5 litros de

agua. Efectos y resultados: los lechones no se han engripado, y su venta

se adelantó en 10 días. Ha mejorado la calidad de la carne y su cotización

en el mercado.

8.2.2.-Usos en Pollos

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Se ha suministrado Stevia mezclada con el balanceado y a los 43 días, en

el momento del faenamiento de los pollos se vio que aquellos que la

consumieron pesaron en promedio 150 gramos más que aquellos que no

lo hicieron (Giber, P. M. Comunicación Personal). También disminuyó la

mortandad en las gallinas. Suministrando al 2% del balanceado hojas

molidas de ka’a he’e, y en el agua suministrar 10 ml en 5 litros de agua

diariamente.

8.3.- Uso Medicinal

Uso terapéutico de la stevia, recomendado con base científica (Midmore y

Rank, 2002; Slow Food Huesca, 2007) Diabetes. El Departamento de

Endocrinología y Metabolismo de Hospital University Aarhus de

Dinamarca, llegó a la conclusión que la estevia actúa estimulando a las

células beta del páncreas, de manera que producen su propia insulina, por

lo tanto tiene un importante rol antihiperglucémico en las personas con

diabetes tipo 2 (no insulino dependiente). Se hacen estudios sobre sus

efectos en diabetes tipo 1 (insulino dependiente). Presión alta. La

División de Medicina Cardiovascular de la Universidad Médica de Taipe-

Taiwan, trabajando con 106 hipertensos chinos de ambos sexos, con

edades de 28 a 75 años, determinó que la estevia actúa como hipotensor

y cardiotónico (regula la presión y los latidos del corazón). Obesidad. Los

estudios determinaron que la stevia ayuda en la perdida de peso por que

no produce calorías, reduce las ansias por los alimentos grasos y dulces,

ya que disminuye los mecanismos de hambre a través de su efecto sobre

el hipotálamo que regula sobre el hambre, el apetito y la saciedad.

La medicina popular le atribuye a la stevia, utilizándola en su estado

natural, varios efectos sobre el metabolismo humano, a saber:

hipoglicemiante (especialmente en para el tratamiento de la diabetes Tipo

I), para el tratamiento de la hipertensión, regulación de la digestión y la

circulación sanguínea, etc. Como fitoterápico, es muy común en el

Paraguay, la utilización en infusiones y para endulzar el mate o Ka’a y.

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Facultad de Farmacia y Bioquímica

IX. RECOLECCION

La variedad que se cultiva es Stevia Rebaudiana Bertoni, es un cultivo de

amplia adaptación para nuestra selva tropical.

En el Perú, la mayor superficie cultivada se encuentra en el departamento

de Cajamarca Provincia de SAN IGNACIO, además, pequeñas áreas en la

provincia de Rodríguez de Mendoza y en Huanuco.

La chacra demostrativa “QUINTA SAN ANTONIO” ubicada en la provincia

de San Ignacio – Cajamarca es dirigida por profesionales de campo

agrícola, especializados en diferentes cultivos. En el cultivo de la Stevia

estuvieron orientados a ver las mejores alturas y suelos para la

adaptación del cultivo, sobretodo, aun mejor rendimiento, buen tamaño y

peso de hoja

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Facultad de Farmacia y Bioquímica

X. ESTUDIO BOTANICO

9.1.-Descripción de la Orden Asterales

El orden Asterales, con cerca de 1000 géneros y 19000 especies, está

distribuido por todas las latitudes, y

representa uno de los grupos más rico

en formas de las Angiospermae. Se

trata de un grupo bastante

heterogéneo respecto a la morfología

del sistema vegetativo debido a su

representación en todos los tipos de

ambientes distintos; hay desde plantas

herbáceas o leñosas sólo en la base, en

la región mediterránea, a especies con

estructura arbustiva o suculenta, en las

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Facultad de Farmacia y Bioquímica

zonas tropicales. En cambio todo el orden Asterales es bastante

homogéneo en cuanto a la morfología de la inflorescencia, que es siempre

una cabezuela o capítulo, estructura altamente diferenciada, con

funciones de atracción de los vectores de polinización, formada por un

receptáculo basal sobre el que se insertan las flores y circundada por

hojas involucradas estériles denominadas escamas. El receptáculo puede

ser lampiño o provisto de pelitos, que representan el resto de las brácteas

de la base floral. Las flores son hermafroditas y raramente unisexuales,

presentan un cáliz muy reducido, que constituye un collar continuo o

lobado, o, algunas veces, falta del todo. Después de la fecundación del

verticilo floral se origina una estructura denominado vilano, el cual

asegura la dispersión por el aire a grandes distancias, incluso de algún

kilómetro. La corola, gamopétala, puede ser de tres tipos: a) tubulosa,

actinomorfa, originada por la fusión de 5 pétalos y constituida por un tubo

bastante largo coronado por 5 dientecillos; b) ligulada, zigomorfa, con una

porción inferior tubular y una superior con una prolongación cintiforme

llamada lígula, normalmente con 5 o, más raro, 3 dientecillos; c) bilabiada,

zigomorfa, con corola tubular terminada en 2 labios, el inferior originado

por la fusión de 2 pétalos, y el superior de 3. Este último tipo de corola no

se encuentra en las especies de nuestra flora. El androceo consta de 5

estambres, alternados con los pétalos, con filamentos generalmente libres

y anteras soldadas en un manguito que circunda el estilo. El gineceo está

formado por 2 carpelos concrescentes que forman un ovario ínfero

unilocular provisto de un único óvulo, y de un estilo provisto de pelos

colectores que termina en un estigma profundamente bífido.

9.2.-Descripción de la Familia Asteraceae

Las asteráceas (Asteraceae), también

denominadas compuestas (Compositae

Giseke, nom. cons.), reúnen más de

23.000 especies (Jeffrey, 2007; Stevens,

2001)2 3 por lo que son la familia de

Angiospermas con mayor riqueza y

35

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diversidad biológica. La familia está caracterizada por presentar las flores

dispuestas en una inflorescencia compuesta denominada capítulo la cual

se halla rodeada de una o más filas de brácteas (involucro). El nombre

"Asteraceae" deriva del género tipo de la familia Aster, término que -a su

vez- proviene del griego ἀστήρ que significa "estrella" y hace alusión a la

forma de la inflorescencia. Por otro lado, el nombre "compuestas", más

antiguo pero válido, hace referencia al tipo particular de inflorescencia

compuesta que caracteriza a la familia4 y que solo se halla en muy pocas

familias de Angiospermas. Las Compuestas presentan una considerable

importancia ecológica y económica. Los miembros de esta familia se

distribuyen desde las regiones polares hasta los trópicos, conquistando

todos los hábitats disponibles, desde los desiertos secos hasta los

pantanos y desde las selvas hasta los picos montañosos. En muchas

regiones del mundo las Compuestas llegan a integrar hasta el 10% de la

flora vernácula. La familia contiene algunos géneros con una gran

cantidad de especies, como es el caso de Senecio (con 1250 especies),

Hieracium (1000 especies) y Helichrysum (600 especies).

9.3.-Descripción del Género Stevia:

Stevia es un género de plantas

fanerógamas perteneciente a la familia

de las asteráceas. Tiene 407 especies.

Son hierbas y arbustos de la familia del

girasol (Asteraceae), nativa de

regiones subtropicales y tropicales de

América del Sur y América Central. La

especie Stevia rebaudiana Bertoni,

conocida comúnmente como dulce

hoja, o, simplemente, Stevia, es

ampliamente cultivada por sus hojas dulces. Como un sustituto del

36

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Facultad de Farmacia y Bioquímica

azúcar, la Stevia tiene un sabor más lento al comienzo y una duración

más larga que la de azúcar, aunque algunos de sus extractos, puede tener

un sabor amargo o como gusto a regaliz en altas concentraciones.

Con sus extractos, que tienen hasta 300 veces el dulzor del azúcar, Stevia

ha llamado la atención con la creciente demanda de bajos carbohidratos,

y alimentos bajos de azúcar en la alimentación alternativa. La

investigación médica también ha demostrado los posibles beneficios de la

Stevia en el tratamiento de la obesidad y la hipertensión arterial porque

tiene un efecto insignificante en la glucosa en la sangre, es atractivo

como un edulcorante natural para las personas con dietas en

carbohidratos controlados. Sin embargo, la salud y controversias políticas

han limitado la disponibilidad de la Stevia en muchos países, por ejemplo,

los Estados Unidos prohibió que a principios de 1990 a menos que la

etiqueta lo indique como un suplemento. Stevia se utiliza ampliamente

como un edulcorante en el Japón, y está ahora disponible en Canadá como

un suplemento dietético.

9.4.- Descripción de la Especie Stevia rebaudiana

Stevia rebaudiana es un arbusto perenne, que alcanza los 9 dm de altura.

Las hojas, lanceoladas o elípticas y dentadas, son alternas, simples, de

color verde oscuro brillante y superficie rugosa, a veces algo vellosas, de

hasta 5 cm de largo por 2 de ancho. Los tallos son pubescentes y rectos,

ramificándose sólo después del primer ciclo vegetativo, con tendencia a

inclinarse. Las raíces son mayormente superficiales, aunque una sección

engrosada se hunde a mayor profundidad; son fibrosas, filiformes y

perennes, y son la única parte de la planta en la que no se presentan los

esteviósidos.

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Facultad de Farmacia y Bioquímica

Es dioica, presentando a comienzos de primavera flores pequeñas,

tubulares y de color blanco, sin fragancia perceptible, en panículas

corimbo idees formadas por pequeños capítulos axilares; S. rebaudiana

tarda más de un mes en producir todas las flores. En estado silvestre son

polinizadas por abejas, normalmente del género Megachile. Los frutos son

aquenios dotados de un vilano velloso que facilita su transporte por el

viento.

Los rendimientos en esteviósidos y rabonósidos entre los distintos cultivos

son muy pronunciados, alcanzando incluso proporciones de 5:1, y siendo

la Estevia peruana, hoy día, la de mejor calidad y la de mayor

rentabilidad con hasta 4 cosechas anuales.

9.4.1.-RAIZ

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• Corte transversal

• Corte Longitudinal

39

Corteza

Epidermis

EndodermisMedula

Periciclo

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• Corte Tangencial

9.4.2.- TALLO

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Protodermis

Meristemo Apical

Tejido Fundamental

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• Corte Longitudinal

• Corte transversal

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Vaso leñoso

espiralado

Vaso leñoso

punteado

Vaso leñoso

anillado

Vaso leñoso escaleriform

e

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9.4.3 HOJA

42

Xilema

Floema

Parénquima Medular

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• Corte Paradermal o Superficial

• Corte Transversal

43

Células EpidermaticasCélulas

Oclusivas(Estomas)

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9.4.4. FLOR

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EpidermisSuperior

Epidermis Inferior

Parénquima Clorofiliano

(Empalizada)

Parénquima Lacunar

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X. BIBLIOGRAFIA

• INTRODUCCION

http://www.camdipsalta.gov.ar/INFSALTA/economia/estevia.htm

02- 07-09

• IDENTIFICACIÓN

Título: Enciclopedia práctica de las medicinas alternativas.Autor: Sin MenciónEditor: Ediciones LEA, 2005

• PROPIEDADES

Más allá de la propiedad intelectual: los derechos de las comunidades indígenas y locales a los recursos tradicionalesAutores: Darrell Addison Posey, Graham DutfieldN. º de páginas: 323 páginas

• CULTIVO

Seminario Cunya. J. 2008. Estudio etnobotánico de la Stevia. Informe de consultoríaFacultad de Ciencias Agrarias de la Universidad Nacional de Cajamarca. 80 ppCasaccia, J; Alverez E, 2006. Recomendaciones Técnicas para una ProducciónSustentable de Ka a He e en el Paraguay. Ministerio de Agricultura y Ganadería,Subsecretaría de Estado de Agricultura, Dirección de Investigación Agrícola; Instituto

• COMPOSICION QUIMICA

http://www.lamaisondustevia.com/article_info.php?articles_id=4&language=es02- 07-09

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