5.-RESULTADOS Y DISCUSIÓN

5.1 Áreas de Muestreo

Los datos obtenidos del muestreo piloto realizado en Hermosillo se

muestran en la tabla 4. De acuerdo con ellos, los niveles de arsénico en agua

potable en Hermosillo parecen seguir un patrón en el cual los niveles más bajos se

encontraron en la zona sur de la ciudad. En la zona centro se observaron niveles

intermedios, los cuales estuvieron por debajo de lo que establece la Norma Oficial

Mexicana (NOM-127-SSA1-1994), cuyo valor máximo recomendado es de 25

µg/L, y por encima de la norma establecida por la US-EPA que sitúa el nivel

máximo permitido de arsénico en 10 µg/L Los niveles más altos se encuentran en

el norte de la ciudad (Fig. 13), lo cual concuerda con lo encontrado por Wyatt et al.

(1998), quienes muestrearon varias localidades de Sonora y para Hermosillo

reportaron que los niveles más altos se encontraron en la zona norte.

Se eligió como zona de baja concentración de Arsénico la colonia “Los

Olivos” (zona1) abastecida por el tanque Palo Verde, que presentó una

concentración de arsénico en agua potable de 4.53 µg/L. La zona de alta

concentración de arsénico fue la de Bachoco (Zona 2) que presentó una

concentración de arsénico de 37.51 µg/L (Fig. 14). Se seleccionaron al azar 50

hogares de cada zona y fueron elegibles para participar todas las personas

mayores de edad que hubieran vivido en el hogar seleccionado por al menos un

año. De los hogares seleccionados, 110 personas accedieron a participar en el

estudio; sin embargo, 15 de ellas fueron eliminadas del mismo debido a que no fue

posible obtener de ellas una muestra de sangre. Finalmente se contó con 49

sujetos para la zona de “Los Olivos” y 46 para la zona de “Bachoco” y se

obtuvieron de ellos muestras de sangre y orina previo consentimiento firmado.

Figura 13. Mapa de distribución de arsénico en Hermosillo (Ríos, 2007).

Concentraciones (µg/L)

0 a 10

10 a 25

25 a 50

Tabla 4. Concentraciones de arsénico (µg/L) obtenidas a partir del muestreo de agua realizado en Hermosillo.

Sitio de Muestreo Arsénico Total (µg/L) Sitio de Muestreo Arsénico

Total (µg/L) 5 de Febrero 12.02 Sahuaro Final 25.06 Penitenciaria 7.59 San Francisco 13.09 Puebla I y Puebla II 11.22 Fracc. Plaza Real 24.88 Campana 10.27 La Victoria 33.5 kino 22.67 Fracc. Sahuaro 26.2 Olivos 24.24 Valle Dorado 24.19 Bachoco I y II 37.51 La Manga 9.387 Perifericos I, II y III 28.27 El Llano 9.958 Café Combate 36.6 Colonia de los maestros 13.1 Palo Verde 4.525 Capistrano Residencial 10.26 Cementera 12.14 Las Granjas 10.67 Piedra Bola 8.242 Santa Fe 12.12 Constitución 7.947 Las Quintas 10.64 Akiwikis 6.967 Fuentes del Mezquital 10.93 San Luis 26.9 Y Griega 5.338 Potabilizadoras I y II 7.896 Primero Hermosillo 30.71 Caja Repartidora 33.99 Norberto Ortega 31.99 San Pedro 9.772 Solidaridad 5.733 Ranchito 10.22 La Marqueza 7.761 Rebombeo aguas negras 33.19 Cuahutemoc 7.719 Pueblitos

4.948

Zona de Baja

Zona de Alta

5.2 Distribución de Arsénico en Agua y Orina

Los niveles de arsénico total en agua potable fueron significativamente más

altos para la zona dos (Tabla 5, Fig. 15), ésto concuerda con lo encontrado en el

muestreo previo realizado en los tanques de la ciudad. Los datos encontrados

mostraron además que las proporciones de las especies de arsénico urinario

excretadas por los individuos de ambas zonas, no mostraron diferencias

significativas de una zona a la otra (Tabla 6). La razón probable de esto es que los

habitantes de la zona de concentración moderadamente alta de arsénico (Zona 2

“Bachoco”) consumen principalmente agua purificada, lo que disminuye de forma

importante sus niveles de exposición a grandes cantidades de arsénico en agua.

En la tabla 6 se presenta un resumen de la distribución de especies de

arsénico encontrada en los sujetos estudiados de las zonas 1 y 2. Se pudo

observar que para los individuos de ambas zonas la mayoría del arsénico urinario

es excretado en forma de DMA el cual representa del 51 al 52% de las especies

encontradas, seguido por AsIII y MMA. Esta mayor excreción de DMA es

consistente con los datos de Meza et al. (2004), quienes muestrearon cuatro

poblaciones en el valle del Yaqui en Sonora, México y encontraron que la fracción

más importante de arsénico en orina (47-56%) estaba representada por DMA;

Brima et al. (2006) también reportaron porcentajes altos de DMA en una población

de Africanos somalíes de color (50.5%), cuando se compararon con individuos

asiáticos (16.1%) y caucásicos (21.9%). Lo anterior sugiere que el factor étnico

pudiera afectar el metabolismo del arsénico, cuyas diferencias potenciales podrían

tener entonces una base genética (Loffredo et al., 2002). Chung et al

Tabla 5. Arsénico Total en Agua (µg/L) para las Zonas

Estudiadas (media e intervalo de confianza al 95%)

n As Total

Zona 1 (Los Olivos) 49 8.77

(8.72, 8.81)

Zona 2 (Bachoco) 46 26.44

(26.39, 26.49)

p < 0.001

Figura 15. As total en Agua en las Zonas Estudiadas.

1 2Zona

0

10

20

30

40

AsT

otal

Zona 1“Los Olivos”

Zona 2“Bachoco”

As Total (μg/L)

40

35

30

25

20

15

10

5

0

Maximos y Minimos

Rango intercuartil

Mediana

Tabla 6. Distribución de Especies de Arsénico Urinario (µg/L) para las Zonas

Estudiadas (media e intervalo de confianza al 95%)

n %AsIII %DMA %MMA %AsV

Zona 1 (Los Olivos)

49 36.51 (29.35, 43.67)

52.73(46.60, 58.85)

9.13(7.59, 10.65)

1.63 (0.916, 2.35)

Zona 2 (Bachoco)

46 38.91 (31.23, 46.59)

50.99(44.62-57.36)

8.41(6.90-9.92)

1.68 (1.09, 2.27)

p 0.6459 0.6928 0.5072 0.9154

Valores de p > 0.05 se consideraron no significativos.

(2002), encontraron que los perfiles de metilación de arsénico eran muy similares

en individuos genéticamente relacionados comparados con aquellos que no

compartían ningún parentesco. El efecto genético sobre el metabolismo diferencial

del arsénico ha sido también demostrado en otros estudios. Así, Meza et al.

(2005) encontraron una fuerte asociación entre los polimorfismos del gen CYT19 y

la proporción de DMA/MMA excretado en orina, mientras que Li et al. (2005)

demostraron que mutaciones en el gen de la arsénico 3-metiltransferasa (ASTM3)

-el cual se sabe que cataliza la conversión de arsénico a metabolitos metilados-

pueden también afectar los procesos de metilación.

5.3 Efecto de Género y Zona sobre las Especies de Arsénico Urinario

AsV fue excretado en mayor proporción en mujeres que en hombres con un

nivel de significancia p=0.0319 (Tabla 7, Fig.16). Ésta diferencia de género para

AsV no se detectó para el caso de MMA y DMA, como se reporta en trabajos

previos donde las especies metiladas de arsénico si presentan diferencias de

género (Gamble et al., 2005).

Se demostró también que los niveles de arsénico total urinario fueron

significativamente diferentes en ambas zonas (Tabla 7 Fig.16). Fueron los sujetos

de la zona de baja concentración de arsénico en agua potable (Zona 1 “Olivos”)

quienes presentaron los niveles más altos de arsénico urinario. Por su parte los

sujetos de la zona de alta concentración de arsénico en agua (Zona 2, “Bachoco”)

presentaron los niveles más bajos. Esto es contrario a lo que se esperaba, pero

este hecho podría explicarse tomando en cuenta factores socioeconómicos en

ambas zonas; como se mencionó anteriormente los habitantes de la zona dos

consumen mayormente agua purificada, mientras que en la zona uno se consume

principalmente agua de la llave. También debe tomarse en consideración que

muchos residentes de la zona 1 pueden presentar exposición a arsénico

relacionada con sus ocupaciones, las cuales muchas veces incluyen la fabricación

de pinturas, insecticidas y otros productos; ésto aunado a la posible exposición a

arsénico a través del polvo en la zona 2 ayudaría a explicar estos resultados.

Tabla 7. Efecto de Género y Zona sobre las Especies de As urinario.

Género Zona

AsIII *0.0126 (p=0.9107) 0.1385 (p=0.7106)

DMA 0.1628 (p=0.6875) 0.1494 (p=0.7000)

MMA 0.3848 (p=0.5365) 0.4363 (p=0.5105)

AsV 4.7455 (p=0.0319) 0.0190 (p=0.8905)

AsTotal 0.0661 (p=0.7976) 7.9619 (p=0.0058) *Valor de F ( p= probabilidad)

(b)

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

0 8

1.3

1.8

2.3

2.8

AsTo

tallog

As Total

(a)

1 2Genero

0.0

5.0

10.0

15.0

20.0

2.5

7.5

12.5

17.5

22.5

AsVArcoseno

AsV

Hombres Mujeres Maximos y Minimos

Rango intercuartil

Mediana

5.4 Análisis de Correlación de las Especies de Arsénico en Agua y Orina En la tabla 8 se muestran los valores de los coeficientes de correlación de

Spearman para el arsénico en agua y orina. Se consideraron los valores

cercanos a -1 y 1 como indicativos de una correlación fuerte, negativa y positiva,

respectivamente, entre las especies de arsénico. Así, tenemos que AsIII mostró

una correlación negativa con MMA (-0.6678) y DMA (-0.9584) en orina. Es decir,

que a mayor concentración de AsIII encontramos concentraciones menores tanto

de MMA como de DMA en orina, ésto podría ocurrir como resultado de alguna

interferencia en los procesos de metilación que convierten la especies inorgánicas

de As (en este caso AsIII) a metabolitos orgánicos.

Las correlaciones de As total en agua con respecto al As total en orina (-

0.2959), AsIII-As total en orina (0.5701), AsIII-AsV (-0.3623), As total-AsV (-

0.2954), AsV-DMA (0.2647) y AsV-MMA (0.4113) mostraron coeficientes de

Spearman lejanos de -1 y 1, por lo que la asociación entre estas especies se

consideró débil. Para todas las correlaciones mencionadas los valores de p fueron

menores de 0.05 por lo que se consideraron estadísticamente significativas.

Tabla 8. Análisis de correlación de Spearman para las especies de arsénico en agua y orina.

As Total Agua AsIII As Total

Orina AsV DMA MMA

As Total Agua

1.00000

-0.0704

-0.2959

0.1100

0.0480

0.0773 (0.4950) (0.0041) (0.2863) (0.6417) (0.4538)

AsIII 1.00000 0.5701 -0.3623 -0.9584 -0.6678 (0.0000) (0.0004) (0.0000) (0.0000)

As Total Orina

1.00000 -0.2954 -0.5569 -0.5045 (0.0042) (0.0000) (0.0000)

AsV 1.00000 0.2647 0.4113 (0.0103) (0.0001)

DMA 1.00000 0.5185 (0.0000)

MMA 1.00000 Coeficiente de correlación de Spearman (Valor p)

5.5 Amplificación de ADN y Análisis de RFLP Se obtuvieron por PCR fragmentos del tamaño esperado según lo reportado

por Deitz et al. (1997) de 1158 pb para NAT1 y 1092 pb para NAT2. Por medio de

dos reacciones de PCR anidada en las que se utilizó el producto de 1158 pb del

gen NAT1 como patrón (“template”), se generaron fragmentos de 96 y 132 pb que

se utilizaron para detectar las sustituciones T1088A y C1095A características del alelo

NAT1*10 de acuerdo a lo reportado por Deitz et al. (1997).

5.5.1 Análisis de RFLP para NAT1

La sustitución de una timina (T) por una adenina (A) en la posición 1088 del

gen NAT1 resultó en la pérdida del sitio de restricción para la enzima AseI, lo que

generó un producto de 96 pb en vez de dos fragmentos de 64 y 32 pb. En la figura

17a, el carril 5 representa una muestra homocigota para esta sustitución, los

carriles 3, 4, 6 y 7 son muestras heterocigotas y el carril 2 representa una muestra

donde T1088A estuvo ausente.

La presencia de la sustitución de una cistosina (C) por una adenina (A) en

la posición 1092 resultó en la pérdida del sitio de reconocimiento para la enzima

BsmAI, generando solamente un fragmento de 132 pb en vez de dos fragmentos

de 107 y 25 pb. En el gel de agarosa de la figura 17b se observa que las

muestras de los carriles 1, 4 y 5 resultaron homocigotos para C1095A; la muestra

en el carril 7 fue heterocigota y en los carriles 2, 3 y 6 no se encontró la

sustitución C1095A. A diferencia de otros trabajos (Deitz et al., 1997, Krajinovic et

al., 2000)Los fragmentos de 32 pb (T1088A) y 25 pb (C1095A) no se detectaron

en los geles de agarosa, debido a que por su tamaño salieron de el. Sin embargo

estas bandas no fueron necesarias para determinar los genotipos en las muestras.

Figura 17. Geles de agarosa al 1.2% para las sustituciones (a) T1088A

y (b) C1095A del gen NAT1. Para ambos geles el carril M representa el marcador

de peso molecular.

ba

96 pb64 pb

M 3 4 51 6 72

50pb

100 pb

10,000 pb

1,000 pb

132 pb107 pb

M 3 4 51 6 72

50pb

100 pb

10,000 pb

1,000 pb

Carril 5: homocigoto para T1088A. Carriles 3, 4, 6 y 7 muestras heterocigotas Carril 2 T1088A está ausente

Carriles 1,4 y 5: homocigoto para C1095A. Carril 7: muestra heterocigota Carril 2, 3, 6: C1095A está ausente

5.5.2 Análisis de RFLP para NAT2

Para NAT2 la enzima KpnI cortó el producto de 1092 pb en fragmentos de

610 y 482 pb. Cuando la sustitución C481T se encontraba presente, la secuencia

de reconocimiento para la enzima de restricción se perdió y se obtuvo el

fragmento original de 1092 pb. En la figura 18a se muestra en el carril 2 una

muestra homocigota para C481T, mientras que las muestras de los carriles 1, 3 y 4

fueron homocigotas y en las muestras de los carriles 5 y 7 la sustitución C481T

estuvo ausente.

NAT2 posee tres sitios de reconocimiento para la enzima TaqI por lo cual

ésta es capaz de generar cuatro fragmentos de 380, 316, 226 y 170 pb. El cambio

de una guanina (G) por una adenina (A) en la posición 590 causó la pérdida del

segundo sitio de restricción generando fragmentos de 396, 380, y 316 pb. En el

gel de agarosa de la figura 18b se muestran los resultados de la digestión con

TaqI. La muestra en el carril 2 fue homocigota para G590A, en el carril 4 se observó

una muestra heterocigota mientras que en las muestras de los carriles 1 y 3 no se

encontró la sustitución G590A.

La presencia de la sustitución G857A resultó también en la pérdida del sitio

de restricción de la enzima BamHI lo que produjo un fragmento de 1092 pb en vez

de dos fragmentos de 810 y 282 pb. En la figura 18c los carriles 3 y 7 fueron

muestras homocigotas para G857A, los carriles 2, 4 y 5 representan muestras

heterocigotas y en las muestras de los carriles 1 y 6 G857A estuvo ausente. Estos

resultados concuerdan con lo obtenido en otros trabajos para el gen NAT2

(Lammer, et al., 2004,; Tanira et al., 2003).

Carril 2: homocigoto para C481T. Carriles 1, 3, 4: muestras heterocigotas Carril 5 y 7: C481T ausente

Carril 3 y 7: homocigoto para G857A. Carriles 2, 4, 5: muestras heterocigotas Carril 1 y 6: G857A ausente

Carril 2: homocigoto para G590A. Carriles 4: muestra heterocigota Carril 1 y 3: G590A ausente

1092 pb

482 pb610 pb

1092 pb

500 pb

2,000pb

100 pb

12,000 pb

M 3 4 51 6 72

810pb1092 pb

282pb

500 pb

2,000pb

100 pb

12,000 pb

200 pb300 pb

1080 pb

M 3 4 51 6 72

226 pb

170 pb

316 pb380 pb396 pb

500 pb

2,000pb

200 pb

12,000 pb

400 pb

300 pb

M 3 4 51 2

ba

Figura 18 Geles de agarosa al 1.2% para las sustituciones C481T (a) y

G590A (b) y G857A (c) del gen NAT2. Para ambos geles el carril M

representa el marcador de peso molecular.

c

5.6 Distribución de los Genotipos de NAT1 y NAT2

La tabla 9 muestra la distribución de cada Polimorfismo de nucleótido simple

(SNP por sus siglas en ingles) analizado en los individuos participantes de cada

zona. Para la mayoría de ellos no se encontraron diferencias importantes en la

distribución de los genotipos en ambas zonas.

Sin embargo la proporción de las sustituciones C481T y G857A del gen NAT2

mostraron diferencias entre los participantes de ambas zonas, al igual que en

otros estudios realizados en otras poblaciones (Delfino et al., 2000). Esto podría

indicar que existen diferencias étnicas entre los sujetos de la zona 1 y 2, por lo

cual es recomendable realizar estudios de ancestría en ambas poblaciones para

conocer su origen étnico y determinar si esta es la razón de las diferencias

encontradas.

Los alelos para NAT1 y NAT2 fueron asignados de acuerdo a lo establecido

por el “Arylamine N-acetyltransferase Gene Nomenclature Comité”

(http://louisville.edu/medschool/pharmacology/NAT.html). Para NAT1, los

individuos que no presentaron las sustituciones T1088A y C1095A fueron clasificados

como portadores del alelo NAT1*4 que es un alelo silvestre; a aquellos individuos

que presentaron ambas sustituciones (T1088A, C1095A) se les asignó el alelo

NAT1*10 (acetilador rápido).

Se utilizó el mismo criterio para definir los alelos de NAT2: los individuos

que no presentaron ninguna de las tres sustituciones analizadas (C481T, G590A,

G857A) fueron clasificados como NAT2*4 (alelo silvestre). Los alelos NAT2*6 y

NAT2*7 (ambos acetiladores lentos) fueron asignados a los sujetos que

presentaron las sustituciones G590A y G857A respectivamente. Los alelos que no

pudieron identificarse por este método fueron clasificados como NAT1*otro y

NAT2*otro.

Tabla 9. Distribución de SNP’s para NAT1 y NAT2 en las Zonas 1 y 2. Zona 1

n (%) Zona2n (%)

Total (Zona 1+Zona 2)

n (%)

NAT1 T1088A TT 21 (42.86) 20 (43.48) 41 (43.16)

TA 22 (44.89) 19 (41.30) 41 (43.16)

AA 6 (12.24) 7 (15.22) 13 (13.68)

NAT1 C1095A CC 22 (44.89) 20 (43.48) 42 (44.21)

CA 21 (42.85) 20 (43.48) 41 (43.16)

AA 6 (12.24) 6 (13.04) 12 (17.63)

NAT2 C481T CC 25 (51.02) 15 (32.60) 40 (42.10)

CT 15 (30.61) 23 (50) 38 (40)

TT 9 (18.37) 8 (17.39) 17 (17.84)

NAT1 G590A GG 32 (65.30) 28 (60.87) 60 (63.16)

GA 17 (34.69) 17 (36.96) 34 (35.79)

AA 0 (0) 1 (2.17) 1 (1.05)

NAT1 G857A GG 23 (46.94) 34 (73.91) 57 (60)

GA 25 (51.02) 11 (23.91) 36 (37.89)

AA 1 (2.04) 1 (2.17) 2 (2.10)

TOTAL 49 (100) 46 (100) 95 (100)

Las frecuencias encontradas para los alelos de NAT1 fueron:

NAT1*4/NAT1*4 > NAT1*4/NAT1*10 > NAT1*4/NAT1*otro > NAT1*10/NAT1*10 >

NAT1*10/NAT1*otro. Para NAT2 encontramos: NAT2*4/NAT2*otro >

NAT2*4/NAT2*4 > NAT2*4/NAT2*7 > NAT2*6/NAT2*7 > NAT2*7NAT2*7 (Tabla

10).

NAT1*4 y NAT2*4 fueron los alelos más comunes en la población de

Hermosillo, tal y como ha sido reportado para muchas otras poblaciones (Mahid et

al., 2007; Johnson et al., 2004; Zhang et al., 2005). Aún así, la distribución de los

alelos de NAT1 y NAT2 encontrada en nuestra población fue diferente de la

encontrada en otros grupos étnicos. La frecuencia del alelo NAT1*4 y NAT2*4 en

nuestra población fue de 33.68% y 15.7% respectivamente, mientras que en un

estudio realizado en poblaciones del norte de China, las proporciones son de

28.7% para NAT1*4 y de 57.8% para NAT2*4 (Zhang et al., 2005). Para el caso de

poblaciones caucásicas los porcentajes se encuentran alrededor de 58% para

NAT1*4 y de 6 a 7% para NAT2*4 (Johnson et al., 2004). NAT1*10 fue el alelo

encontrado con menor frecuencia (10%) (aunque fue más frecuente en nuestra

población que en las mencionadas anteriormente) a pesar de que ha sido

reportado como un alelo frecuente en la población mexicana (Ishibe et al., 1998),

NAT2*6 y NAT2*7 (entre el 2 y el 7%) se encontraron también con muy poca

frecuencia en la población estudiada (tabla 10). Al igual que para los SNP’s en

NAT2 reportados anteriormente (Tabla 9) se encontraron diferencias en la

frecuencia de algunos alelos entre ambas zonas, estos podría deberse también a

las diferencias étnicas mencionadas anteriormente.

5.7 Efecto de NAT1 y NAT2 sobre las Especies de Arsénico Urinario Se realizó análisis de varianza con la finalidad de observar si las

mutaciones puntuales estudiadas en este trabajo tuvieron algún efecto sobre las

especies de arsénico detectadas en los sujetos.

Tabla 10. Distribución de alelos para NAT1 y NAT2 NAT1

Zona 1 n (%)

Zona 2n (%)

Total (Zona 1, Zona 2) n (%)

NAT1*4/NAT1*4 17 (34.69) 15 (32.60) 32 (33.68) NAT1*10/NAT1*4 16 (32.65) 13 (28.26) 29 (30.53) NAT1*10/NATI*10 5 (10.20) 5 (10.87) 10 (10.53)

NAT1* 4/NAT1*otro 9 (18.37) 10 (21.74) 19 (20) NAT1*10/NAT1*otro 2 (4.08) 3 (6.52) 5 (5.26)

TOTAL 49 (100) 46 (100) 95 (100)

NAT2

Zona 1 n (%)

Zona 2n (%)

Total (Zona 1, Zona 2) n (%)

NAT2*4/NAT2*4 7 (14.28) 8 (17.39) 15 (15.79) NAT2*4/NAT2*7 7 (14.28) 2 (4.35) 9 (9.47) NAT2*6/NAT2*7 3 (6.12) 4 (8.69) 7 (7.37) NAT2*7/NAT2*7 1 (2.04) 1 (2.17) 2 (2.10)

NAT2*Otro 9 (18.37) 15 (32.60) 24 (25.27) NAT2*4/NAT2*Otro 7 (14.28) 12 (26.08) 19 (20) NAT2*6/NAT2*Otro 2 (4.08) 1 (2.17) 3 (3.16)9 NAT2*7/NAT2*Otro 13 (26.53) 3 (6.52) 16 (16.84)

TOTAL 49 (100) 46 (100) 95 (100)

Los resultados muestran un efecto de la sustitución G857A (tabla 11) sobre

los niveles de AsIII (p= 0.041) (Fig. 19a), MMA (0.0244) (Fig. 19b) y DMA

(p=0.0192) (Fig. 19c). También se encontró un efecto del alelo NAT2*7 (tabla 12)

sobre los niveles de AsIII (p=0.041) (Fig. 20a) y DMA (0.0192) (Fig. 20b). La falta

de un efecto visible sobre MMA puede deberse al tamaño de muestra analizado,

sería recomendable muestrear poblaciones más grandes para observar con mayor

claridad los efectos de este alelo.

Para estas especies se observó que los portadores homocigotos de la

sustitución G857A y del alelo NAT2*7 excretaron AsIII en menores cantidades,

mientras que DMA fue el metabolito mayormente excretado. Esto es consistente

con los resultados observados con las correlaciones de Spearman (Tabla 8,

sección 5.4) lo cual sugiere que probablemente los polimorfismos presentes en el

gen NAT2 sean uno de los factores que influyan en los procesos de metilación del

arsénico en el organismo, tal vez potenciando y acelerando el proceso de

metilación de AsIII y MMA y generando una mayor cantidad de DMA, el cual es

fácilmente expulsado del organismo por medio de la orina. Sería conveniente

realizar estudios futuros encaminados a descifrar la existencia y funcionamiento de

este posible mecanismo.

Tabla 11. Efecto de los SNP’s de NAT1 y NAT2 sobre las Especies de Arsénico Urinario

NAT1 NAT2 C1095A T1088A C481T G590A G857A

AsIII 1.0380

(p=0.3592)

0.6998 (p=0.5000)

0.0832 (p=0.9202)

0.0994

(p=0.9055)3.330

(p=0.0401)

DMA 1.3117

(p=0.2757)

0.5083 (p=0.6036)

0.2408 (p=0.7868)

0.0455 (p=0.9555)

4.1285

(p=0.0192)

MMA 0.8142

(p=0.4470)

0.0394 (p=0.9614)

0.1676 (p=0.8461)

0.0341 (p=0.9665)

3.8668

(p=0.0244)

AsV 0.9224

(p=0.4022)

0.0378 (p=0.9629)

0.2549 (p=0.7759)

0.8525 (p=0.4321)

0.2397

(p=0.7876) As

Total 0.2214

(p=0.8019) 0.5414

(p=0.5843)0.3417

(p=0.7121)1.4854

(p=0.2356)0.8885

(p=0.4173)*F (valor de p)

*

Maximos y Minimos

Rango intercuartil

Mediana

(a)

(b) 1 2 3

G857A

0.0

0.2

0.4

0.6

0.8

AsI

II% AsIII

G857A

0.20

0.25

0.2

Figura 19. Efecto de la sustitución G857A del gen NAT2 sobre (a) AsIII, (b) MMA y (c) DMA.

Tabla 12. Efecto de los alelos de NAT1 y NAT2 sobre las especies de As urinario.

NAT1 NAT2 NAT1*4 NAT1*10 NAT2*4 NAT2*6 NAT2*7

AsIII **0.0521 (p=0.8199)

0.2702 (p= 0.6044)

1.3039 (p= 0.2564)

0.1217 (p= 0.7280)

5.2921 (p=0.0236)

DMA 0.0081 (p=0.9286)

0.4815 (p=0.4894)

1.2559 (p= 0.2653)

0.5645 (p= 0.4544)

5.8524 (p=0.0175)

MMA 1.6395 (p=0.2036)

1.1946 (p=0.2772)

1.3753 (p= 0.2439)

0.4311 (p=0.5131)

1.3193 (p= 0.2537)

AsV 1.3989 (p=0.2399)

0.3511 (p=0.5549)

2.2438 (p= 0.1375)

0.0018 (p=0.9663)

0.00021 (p= 0.9883)

As

Total 0.0118

(p=0.9137) 0.0623

(p= 0.8034)0.4359

(p=0.5107)0.0116

(p=0.9145)0.00089

(p=0.9762)**F (valor de p= probabilidad)

1 2 3NAT27

0.0

0.2

0.4

0.6

0.8

AsI

II

1: Homocigotos para NAT2*7

2: Heterocigotos para NAT2*7

3: NAT2*7 ausente

%AsIII

NAT2*7

Nuestra revisión bibliográfica no reveló que se haya realizado hasta la fecha

ningún estudio que explique lo observado en esta investigación con respecto a los

efectos de las mutaciones en el gen NAT2 sobre la excreción de Arsénico; Su et

al. (1998) estudiaron una población Taiwanesa expuesta a niveles altos y otra

expuesta a niveles bajos de arsénico. En ambas poblaciones los sujetos de

estudio padecían cáncer de vejiga, Sus resultados mostraron que en la población

expuesta a niveles bajos de arsénico aquellos individuos que poseían alelos de

acetiladores lentos (NAT2*5 y NAT2*7) tuvieron mayor incidencia de cáncer de

vejiga (p=0.04). Esta influencia de los genotipos de acetilador lento en la

predisposición a padecer cáncer de vejiga ha sido reportada anteriormente (Gu et

al., 2005; Lopez-Abente et al., 2006). Genes como los de la N-acetiltransferasa 2

(NAT2) podrían estar involucrados en la generación de este tipo de cáncer en

personas expuestas a niveles bajos o moderadamente altos de arsénico debido a

que, como se ha demostrado aquí, algunas mutaciones presentes en dicho gen

afectan los niveles de algunos de sus metabolitos.

Minchin et al. (1995), demostraron que NAT1 está involucrada en el

metabolismo del ácido fólico por N-acetilación, ya que actúa como enzima

específica del p-aminobenzoilglutamato, el cual es un catabolito importante del

folato. Por otro lado, Stanisławska et al. (2006), demostraron que la sustitución

C1095A está relacionada con altos niveles de homocisteina, que es la molécula

precursora de S-adenosilmetionina (SAM), la cual actúa como donador de grupos

metilo durante el metabolismo del arsénico. Sin embargo nuestros datos no

mostraron ningún efecto de las sustituciones (T1088A, C1095A) ni de los alelos de

NAT1 estudiados sobre las especies de arsénico.