UNIVERSIDAD RICARDO PALMA

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA Y NUTRICIÓN

Informe de Laboratorio Nº 5: Digestión enzimática del almidón

Alumno : Enciso Samamé, Álvaro Mauricio

Código : 201011004

Profesora : Dra. Nancy Jo Vargas

Grupo : 1-3

Período : 2012-I

Parte experimental :

En cada tubo de ensayo se colocaron las medidas correspondientes de sustancias como muestra el cuadro:

TUBO Nº 1 2 3 4ALMIDON 1%; ml 2.0 2.0 2.0 2.0BUFFER FOSFATO pH 6.8:ml 1.0 1.0 1.0 -HCL O,3N : ml - - - 3.4CLNa 0,9%: ml 3.0 2.4 - -Agua dest.:ml - - 2.4 -Baño María 37º x 5´Amilasa Salival: ml - 0.6 0.6 0.6

A. DETERMINACIÓN DEL SUSTRATO :

TUBOS Nº 5 6 7 8DIGERIDO DEL TUBO 1: ml 0.5 - - -DIGERIDO DEL TUBO 2: ml - 0.5 - -DIGERIDO DEL TUBO 3: ml - - 0.5 -DIGERIDO DEL TUBO 4: ml - - - 0.5HCL 0.05N : ml 5 5 5 5Sol. de Lugol: ml 0.5 0.5 0.5 0.5Dejar en reposo por 15 minutos. Leer al fotocolorímetro

con filtro rojo (660nm)5 6 7 8 BLANCO

Lectura inicial 0.015 0.016 0.261 0.829 1.757Calculando la actividad enzimática con la fórmula:

Actividad enzimática = Lectura del blanco – Lectura inicial

1) Tubo 5 :Ae= 1.757-0.015Ae=1.742

2) Tubo 6:Ae=1.757-0.016Ae=1.741

3) Tubo 7:Ae= 1.757-0.261Ae=1.496

4) Tubo 8:Ae=1.757-0.829 Ae=0.928

B.DETERMINACIÓN DEL PRODUCTO :

TUBOS 9 10 11 12 13

DIGERIDO DEL TUBO 1: ml 0.5 - - - -

DIGERIDO DEL TUBO 2: ml - 0.5 - - -

DIGERIDO DEL TUBO 3: ml - - 0.5 - -

DIGERIDO DEL TUBO 4: ml - - - 0.5

SOLUCION DE GLUCOSA 1%: ml

- - - - 0.5

SOLUCION BENEDICT : ml 2 2 2 2 2

Mezclar, Incubar en Baño María a 100°C x 5’ y enfriar en agua helada. Los resultados de la interpretación se encuentran en la parte de Cuestionario.

Cuestionario e interpretación de resultados :

1. Determinación del sustrato:

Tubo Nº1:El color que se puede apreciar en el tubo es azulado. Esto nos indica que no hubo hidrólisis, debido a que no hay presencia de la enzima amilasa. El color lo toma en base al lugol. Existe el sustrato (almidón), el pH adecuado (6.8), y el activador (HCl).

Tubo Nº2:El líquido queda incoloro, debido a que se dieron las condiciones óptimas, para que ocurra la reacción, por lo tanto la hidrólisis es total. En este caso sí se añadió la amilasa.

Tubo Nº3:Queda un color rosado pálido, esto demuestra que hubo hidrólisis, pero parcial, ya que no hubo NaCl. Es necesaria una cantidad de sales, por lo tanto, no actuó de manera optima.

Tubo Nº4:

Queda un color azul, con lo cual se demuestra que no hubo reacción, debido al medio ácido en el que se encontraba por la presencia de HCl. La coloración azul, se da por el contacto del almidón con el lugol.

3. Determinación del producto:

Tubo Nº9:Nos da un color celeste, demostrando que no hubo reacción con la solución de Benedict, ya que este solo reacciona con azúcares reductores, y tomamos muestra del tubo número uno en el cual no hubo hidrólisis; en dicha muestra solo hubo almidón, el cual no es un azúcar reductor.

Tubo Nº10:El color obtenido en este procedimiento, es celeste verdoso con precipitado rojo ladrillo, con lo cual demostramos hidrólisis, debido a que el producto no fueron en su totalidad azúcares reductores. Aún se aprecia el color base de la solución (azul), pero disminuido.

Tubo Nº11:El color obtenido es verdoso con precipitado rojo ladrillo, pero se obtiene menor cantidad de precipitado, lo cual indica que sí hubo hidrólisis, pero parcial.

Tubo Nº12:

El color obtenido es celeste, demostrando que con el sustrato trabajado en la reaccion de Benedict, no hubo hidrólisis previa, manteniendo el color del reactivo de Benedict.

Tubo Nº13:En este procedimiento, debido a que trabajamos con glucosa (azúcar reductor), se obtiene una solución roja, con precipitado rojo ladrillo, en mayor cantidad. El precipitado que se da es CuO2, formado al reaccionar los azúcares reductores con el reactivo de Benedict.

3. Grafique Actividad enzimática vs. Tubo de ensayo

(En papel milimetrado adjunto)

4. Explique cuáles son las condiciones óptimas para una hidrólisis enzimática del almidón soluble:

Fundamentalmente se necesita:

Presencia de un pH óptimo (6.8) Las concentraciones de sustratos y enzimas adecuadas. Temperatura óptima, alrededor de 37.5° C. Un buffer para estabilizar el pH. Concentración adecuada e iones (NaCl)

5. Interpretar la reacción de Benedict:

Consiste en la reacción de un azúcar reductor (p. ej. lactosa, glucosa, maltosa) en soluciones alcalinas; en este experimento usamos la glucosa, con el reactivo de Benedict, compuesto por:

Sulfato cúprico Citrato de sodio Carbonato anhídrido de sodio NaOH

Formando un precipitado rojo ladrillo. Pueden reducir el Cu+2, que tiene color azul, a Cu+, el cual, precipita de la solución alcalina como Cu2O.

Cu+2      Cu+