Accion de Agentes Fisicos y Quimicos ALIM

CONTROL DEL DESARROLLO

Agentes físicos TemperaturaDesecaciónOndas sonoras RadiacionesFiltración

DE LOS MICROORGANISMOS

Agentes químicos Desinfectantes AntisépticosQuimioterapeúticos

Agentes biológicosAntibióticos

Debido a su pequeño tamaño y a su estilo de vida individual, las células procarióticas sufren los cambios ambientales de un modo mucho más directo e inmediato que las células de los organismos pluricelulares

Los microorganismos que habitan medios que los humanos consideramos como “extremos” reciben el calificativo de extremófilos.

Modifican la velocidad de crecimiento, provocando cambios que pueden llegar a ocasionar la muerte de microorganismos.

Condicionan la distribución de los microorganismos en sus ecosistemas y hábitats naturales.

Permiten a los humanos controlar el crecimiento microbiano.

No todos los microorganismos toleran del mismo modo un determinado factor ambiental. Así, unas determinadas condiciones pueden ser nocivas para una especie bacteriana, y en cambio ser neutras o beneficiosas para otra.

Agentes físicos Agentes químicos

Temperatura Desinfectantes y antisépticos

Desecación Quimioterápicos de síntesis

Radiaciones Antibióticos

Ondas sonoras

Presión hidrostática

Presión osmótica pH

La temperatura es uno de los parámetros ambientales más importantes que condicionan el crecimiento y la supervivencia de los microorganismos.

Temperatura mínima: por debajo de ella no hay crecimiento;

Temperatura máxima: por encima de ella tampoco existe crecimiento;

Temperatura óptima: permite la máxima tasa de crecimiento

MICROORGANISMOS PSICRÓFILOS (-5 y 5°C)

MICROORGANISMOS MESÓFILOS (25-40ºC y máximas entre 35 y 47ºC).

MICROORGANISMOS TERMÓFILOS (óptimos a 50-75ºC y máximos entre 80 y 113ºC)

Tiempo térmico mortal: es el tiempo mínimo requerido para que mueran todas las bacterias de una determinada suspensión a una determinada temperatura.

tiempo de reducción decimal: es el tiempo requerido para reducir al 10% la densidad de la suspensión, a una determinada temperatura (también llamado valor D);

Punto térmico mortal: es la temperatura mínima que mata a todas las bacterias en un tiempo determinado (normalmente el tiempo de referencia empleado es de 10 min).

punto térmico mortal

Especies

55oC Escherichia coli

60oC Mycobacterium tuberculosis

120oC endosporas de especies muy resistentes de Bacillus.

Dependiendo de la temperatura y el tiempo a que sometamos un material a tratamiento térmico, lograremos inactivación parcial de la población microbiana (es decir, queda una fracción de células viables) o bien esterilización (=inactivación total).

Esterilización es todo tratamiento de un material con un agente físico (como el calor) o químico, que acarrea la eliminación de toda forma de vida en él. Una vez estéril, el material sigue estéril indefinidamente con tal de que esté encerrado en un compartimento sellado y libre del contacto con microorganismos del ambiente exterior.

La inactivación parcial o la esterilización se pueden lograr por calor húmedo o por calor seco.

Microorganismo condiciones

La mayoría de células vegetativas, de bacterias, levaduras y hongos

80oC , 5-10 min

Bacilo tuberculoso 58oC , 30 min



Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis

60oC , 60 min

La mayoría de esporas de bacterias patógenas

100oC , pocos min

esporas del patógeno Clostridium botulinum 100oC , 5,5 horas

esporas de Clostridium y Bacillus saprofitos 100oC , muchas horas

esporas de Clostridium y Bacillus saprofitos 120oC , 15 minutos

Autoclave: Es un aparato que permite calentar muestras por calor húmedo a temperaturas superiores a las de ebullición del agua. Los parámetros de esterilización suelen ser: temperatura 121ºC y 10-15 min.

Tindalización: Es un método de esterilización fraccionada para materiales que se inactivan o estropean a más de 100ºC. Consiste en someter el material a varios ciclos (normalmente 3 ó 4) de dos fases sucesivas cada uno:

a) En la primera fase el material se calienta a una temperatura entre 50 y 100ºC, durante 1 ó 2 horas.

b) En la segunda fase el material se incuba en una estufa, a 30-37ºC durante 24 horas.

La esterilización por calor seco necesita recurrir a mayores temperaturas que la efectuada por el calor húmedo, Aplicaciones del calor seco:

El horno de Pasteur, mediante calentamiento a 160-170ºC durante 2-3 horas permite esterilizar materiales inertes de laboratorio resistentes al calor: material de vidrio y metálico, aceites.

Flameado a la llama (hasta el rojo) de asas metálicas de siembra, con las que se inoculan las bacterias.

Incineración de materiales de desecho.

Las bajas temperaturas (por debajo de la temperatura mínima) no son útiles para la esterilización, ya que, aunque existen algunas bacterias que mueren por congelación (p. ej., especies patógenas de Neisseria), el efecto de este tratamiento sobre otras muchas es, sobre todo, bacteriostático.

Cuando una bacteria se enfría rápidamente a -35ºC se producen cristales de hielo que provocan daños cuando la muestra se descongela.

La descongelación lenta es más letal que la rápida, ya que aumenta el volumen de cristales de hielo.

Durante las fases de tipo a) mueren todas las células vegetativas de la muestra, pero permanecen viables las esporas. Durante las fases de tipo b) se produce la germinación de las esporas activadas.

Esterilización por filtración: Consiste de hacer pasar una solución a través de una membrana o filtro de un tipo de material (normalmente nitrato de celulosa) que presenta poros de un tamaño inferior al de cualquier célula bacteriana (diámetro de poro =0,22 m).

En la práctica cotidiana del laboratorio de microbiología, en la esterilización de medios de cultivo y soluciones.

En la esterilización de material quirúrgico. En la esterilización o inactivación parcial,

en las industrias alimentarias (conservas, leche y derivados).

En la industria láctea se emplean como métodos de esterilización la llamada uperización. La uperización consiste en un tratamiento de calor húmedo donde se emplean temperaturas muy altas durante unos pocos segundos (p. ej.: 135-150ºC durante 1-2 seg).

La pasteurización (en honor a Pasteur, que la introdujo en los años 1860) consiste en tratar la leche a 63oC durante 30 min, tras los cuales se enfría y envasa rápidamente.

La pasteurización instantánea se logra calentando a 72ºC durante sólo 15 segundos, tras de lo cual la muestra se enfría rápidamente. Esta técnica es la más usada actualmente, ya que: mata más rápidamente; mata mejor organismos más resistentes altera menos el sabor; actúa en flujos continuos (y permite procesar grandes volúmenes de leche).

Tratamiento Temperatura Efectividad

Ebullición 100o 30 minutes de ebullición mata patógenos y formas vegetativas, pero no esporas

Ebullición intermitente

100o 3 intervalos 30-minutos efectivo contra esporas





Tindalización 100º Efectivo contra esporas

Autoclave (vapor a presión))

121o/15 minutos a presión 1,5 Atmosf

Elimina toda forma de vida incluyendo esporas.









Pasteurización 63o/30 minutosMata la mayoría de las células vegetativas incluyendo patógenos como Streptococcus, Staphylococcus y Mycobacterium tuberculosis

Pasteurización rápida

72o/15 segundosSimilar al anterior. En leche, a nivel industrial, es preferible por la calidad láctea.












Calor seco 160o/2 hrsPara materiales que deben permanecer secos y los cuales no se destruyen a TºC entre 121o y 170o . Vidrios y metales. No plásticos y goma.

Calor seco 170o/1 hIgual que el anterior. Al aumentar 20ºC el tiempo de esterilizacion se acorta en 50%.












Calor seco 160o/2 hrsPara materiales que deben permanecer secos y los cuales no se destruyen a TºC entre 121o y 170o . Vidrios y metales. No plásticos y goma.

Calor seco 170o/1 hIgual que el anterior. Al aumentar 20ºC el tiempo de esterilizacion se acorta en 50%.

Incineración >500o

Vaporiza material orgánico en superficies no-inflamables (destrucción de varios materiales y sustancias)

AGENTES ESTERILIZANTES QUÍMICOS

1. Oxido de etileno2. Glutaraldehído3. Formaldehído

DESINFECTANTES y ANTISÉPTICOS

Lister (1867)A. INORGÁNICOS 1. Metales 2. Ácidos y Álcalis 3. Comp inorgánicos oxidantes 4. Halógenos (Cloro, Yodo)

B. ORGÁNICOS 1. Alcoholes 2. Fenol y derivados

C. PRESERVANTES

Según su acción

Coagulación de las proteinas:Fenol, Formalina, Alcoholes, en general

Desnaturalización proteica:Ácidos orgánicos no disociables, Cloro, Yodo, Ácidos y alcalis fuertes

Lesión pared celular o membrana citoplasmática:1) Detergentes: catiónicos, aniónicos, no iónicos. Compuestos de Amonio cuaternario2)Compuesto fenólicos: fenol, cresoles, difenilos halogenados, alquilésteres del para-hidroxibenzoico, aceites esenciales de plantas3)Alcoholes:etanol, isopropanol

Inhibición de enzimas:1) Metales pesados:mercuriales, compuestos de plata, compuestos de cobre

2) Agentes oxidantes: halógenos, cloro, yodo, agua oxigenada, permanganato potásico, ácido peracético, 3) Colorantes: derivados de la anilina, derivados de la acridina (flavinas)4) Agentes alquilantes: formaldehido, glutaraldehido, óxido de etileno, ß-propionil-lactona

Químico Acción Usos

Etanol (50-70%)Denaturaliza proteinas y solubiliza lípidos

Antiseptico usado en piel

Isopropanol (50-70%)Denaturaliza proteinas y solubiliza lipidos







Formaldehido (8%)Reacciona con grupos NH2, SH

y COOHDesinfectante, mata endosporas

Tintura de Iodina (2% I2 en 70% alcohol)

Inactiva proteinas Antiseptico usado en piel

Clorina (Cl2) gas Forma ác.hipocloroso (HClO), fuerte agente oxidante

Desinfectante general












Nitrato de Plata (AgNO3) Precipitata proteinas Antiseptico general

Cloruro de mercurioInactiva proteinas por reacción con grupos sulfitos

Desinfectante y a veces antiséptico usado en piel















Detergentes (comp. de amonio cuaternario)

Destruye membrana celular Antiseptico piel y desinfectante















Detergentes (comp. de amonio cuaternario)

Destruye membrana celular Antiseptico piel y desinfectante

Componentes Fenolicos (ác.carboloico, lisol, hexilresorcinol, hexaclorofeno)

Denaturaliza proteinas y rompe membrana celular

Antiseptico a baja concentración Desinfectante a alta concentración

Oxido Etileno gas Agente alquilante Desinfectante de plásticos y goma

Existen ciertas sustancias químicas que influyen negativamente sobre las bacterias, pudiendo ejercer dos tipos de efectos diferentes:

bacteriostáticos: cuando impiden el crecimiento bacteriano;

bactericidas: cuando destruyen (matan) las bacterias.

Agentes esterilizantes son aquellos que producen la inactivación total de todas las formas de vida microbiana.

Agentes desinfectantes (o germicidas) son agentes (sobre todo químicos) antimicrobianos capaces de matar los microorganismos patógenos (infecciosos) de un material. Pueden presentar efectos tóxicos sobre tejidos vivos, por lo que se suelen emplear sólo sobre materiales inertes.

Agentes antisépticos son sustancias químicas antimicrobianas que se oponen a la putrefacción de materiales vivos. Se trata de desinfectantes con baja actividad tóxica hacia los tejidos vivos donde se aplican.

Quimioterápicos son compuestos químicos con actividad microbicida, con una toxicidad suficientemente baja como para permitir su administración a un organismo superior, en cuyos fluidos corporales y tejidos permanece estable un cierto tiempo a concentraciones tales que los hace eficaces como antimicrobianos dentro del organismo.

Todos los días usamos agentes químicos para controlar el crecimiento microbiano: detergentes y jabones para el cuerpo y la ropa, cloración de las aguas potables, antisépticos para la piel y el tratamiento de heridas, desinfectantes para tratar superficies en la industria y en los laboratorios, quimioterápicos y antibióticos para tratar enfermedades bacterianas.

Concentración del agente y tiempo de actuación .

pH Temperatura Naturaleza del microorganismo y

otros factores asociados a la población microbiana

Presencia de materiales organicos

FACTORES QUE AFECTAN LA POTENCIA DE UN DESINFECTANTE

Tanto en los laboratorios como en industrias alimentarias es necesario a menudo tratar superficies inertes (mesas, suelos, paredes, maquinaria) con desinfectantes, a ser posible con efecto microbicida.

Los materiales termosensibles que no se pueden esterilizar por calor se pueden esterilizar en frío mediante ciertos agentes:

- En los hospitales, para esterilizar termómetros, catéteres, instrumentos, se suele recurrir a un tipo de autoclave que usa el gas óxido de etileno o formaldehido gaseoso (ambos son agentes alquilantes).

- Pequeños objetos se pueden esterilizar en peróxido de hidrógeno (agente oxidante).

- El yodo es un magnífico antiséptico de la piel (el mejor que se conoce).

- El cloro se presenta como cloro gaseoso (Cl2), hipocloritos y cloraminas. El efecto desinfectante se debe a la liberación de cloro libre (Cl2); a su vez, el Cl2 reacciona con el agua para dar ácido hipocloroso (ClOH), que a pH ácido o neutro es un oxidante fuerte.

Los quimioterápicos son sustancias con actividad antimicrobiana (microbicida o microbiostática) con toxicidad suficientemente baja como para poder ser administrados a un organismo por la vía adecuada, hasta alcanzar y mantener concentraciones eficaces en los tejidos.

Que tenga toxicidad selectiva, es decir, actuar según el principio de “bala mágica” que daña al microorganismo respetando al hospedador.

Que sea microbicida, es decir, que mate o inactive irreversiblemente el microorganismo, provocando la pérdida total de viabilidad.

Los microorganismos susceptibles no deberían desarrollar resistencias al quimioterápico.

Que el quimioterápico sea efectivo contra un amplio espectro de microorganismos.

Que no sea alergénico, y que no tenga efectos secundarios.

Que permanezca de forma activa en plasma, tejidos, etc. durante el tiempo necesario. A ser posible, que sea soluble en agua y que alcance pronto la concentración terapéutica en los tejidos

ANTIMICROBIANOSANTIMICROBIANOS Son agentes quimioterapéuticos que se Son agentes quimioterapéuticos que se

utilizan para el tratamiento de las utilizan para el tratamiento de las enfermedades infecciosas producidas por enfermedades infecciosas producidas por bacterias y hongos. bacterias y hongos.

Interfieren con el desarrollo de los Interfieren con el desarrollo de los microorganismos, pero se diferencian de microorganismos, pero se diferencian de desinfectantes y antisépticos porque desinfectantes y antisépticos porque actúan dentro del huésped sin producir actúan dentro del huésped sin producir efectos nocivos sobre éste.efectos nocivos sobre éste.

AntibióticosAntibióticos Antibióticos semi sintéticosAntibióticos semi sintéticos AntimicrobianosAntimicrobianos Anti fúngicosAnti fúngicos

ANTIMICROBIANOSANTIMICROBIANOS

ANTIBIOTICOS ANTIBIOTICOS

Sustancias químicas Sustancias químicas producidas por producidas por organismos vivosorganismos vivos (bacterias, hongos (bacterias, hongos o vegetales)o vegetales)

Tienen el poder de inhibir el Tienen el poder de inhibir el desarrollo o destruir desarrollo o destruir microorganismosmicroorganismos

PenicilinaPenicilina

ANTIBIOTICOS ANTIBIOTICOS SEMISINTETICOSSEMISINTETICOS

Sintetizados artificialmenteSintetizados artificialmente una vez una vez conocida su fórmula estructuralconocida su fórmula estructural

Cloramfenicol Cloramfenicol Meticilina Meticilina OxacilinaOxacilina CloxacilinaCloxacilina Ampicilina Ampicilina

ANTIMICROBIANOSANTIMICROBIANOS

Productos Productos completamente sintéticoscompletamente sintéticos SulfonamidasSulfonamidas AmoxicilinaAmoxicilina Cefalosporinas de 2da y 3ra Cefalosporinas de 2da y 3ra

generación (generación (Cefalotina, Cefradina, Cefalotina, Cefradina,

Cefazolina, CefoxitinaCefazolina, Cefoxitina))

Drogas que presentan actividad Drogas que presentan actividad biológica biológica contra hongoscontra hongos

ANTIFUNGICOSANTIFUNGICOS

Beta – lactámicosBeta – lactámicos: Penicilinas, : Penicilinas, Cefalosporinas, etc.Cefalosporinas, etc.

GlicopéptidosGlicopéptidos: Vancomicina /Gram(+): Vancomicina /Gram(+) AminoglicósidosAminoglicósidos: Gentamicina /Gram (-) : Gentamicina /Gram (-)

aeróbicosaeróbicos MacrólidosMacrólidos: Azitromicina /Gram(+) y (-): Azitromicina /Gram(+) y (-) TetraciclinasTetraciclinas: Gram(+) y (-): Gram(+) y (-) QuinolonasQuinolonas: Ciprofloxacino /Gram(+) y (-): Ciprofloxacino /Gram(+) y (-) Sulfonamidas y TrimetoprimSulfonamidas y Trimetoprim: Septrín: Septrín SimplesSimples: Cloramfenicol: Cloramfenicol

CLASESCLASES DE “ANTIBIÓTICOS” DE “ANTIBIÓTICOS”

MECANISMOS DE ACCIONMECANISMOS DE ACCION DE LOS “ANTIBIOTICOS”DE LOS “ANTIBIOTICOS”

Inhibición de la síntesis de la pared Inhibición de la síntesis de la pared celularcelular

Alteración de la permeabilidad de la Alteración de la permeabilidad de la membrana celularmembrana celular

Inhibición de síntesis de proteínasInhibición de síntesis de proteínas Inhibición de síntesis de ácidos Inhibición de síntesis de ácidos

nucléicosnucléicos

ACTIVIDAD ACTIVIDAD DE LOS “ANTIBIOTICOS”DE LOS “ANTIBIOTICOS”

BactericidasBactericidas o Fungicidas: son o Fungicidas: son capaces de producir la muerte de los capaces de producir la muerte de los microorganismos en forma rápidamicroorganismos en forma rápida

BacteriostáticosBacteriostáticos o Fungistáticos: o Fungistáticos: solamente impiden el crecimiento de solamente impiden el crecimiento de los microorganismoslos microorganismos

RESPUESTA RESPUESTA DE LOS MICROORGANISMOSDE LOS MICROORGANISMOS

SusceptiblesSusceptibles: presentan receptores : presentan receptores específicos para el antibiótico, específicos para el antibiótico, pudiendo éste ejercer su acción.pudiendo éste ejercer su acción.

ResistentesResistentes: pueden crecer y : pueden crecer y multiplicarse en presencia del multiplicarse en presencia del antibióticoantibiótico

DefinicionesDefiniciones

Espectro antimicrobiano:Espectro antimicrobiano: Capacidad que tiene un antibiótico Capacidad que tiene un antibiótico

de actuar sobre determinada cepa de actuar sobre determinada cepa bacterianabacteriana

Amplio espectro: actúan sobre Amplio espectro: actúan sobre bacterias Gram (+) y Gram (-)bacterias Gram (+) y Gram (-)

Reducido espectro: actúan sobre Reducido espectro: actúan sobre Gram(+)Gram(+)

DefinicionesDefiniciones

Resistencia:Resistencia: Capacidad que poseen ciertas Capacidad que poseen ciertas

bacterias de crecer y multiplicarse bacterias de crecer y multiplicarse en presencia de un antibióticoen presencia de un antibiótico

Susceptibilidad:Susceptibilidad: Incapacidad de crecer y Incapacidad de crecer y

multiplicarse en presencia del multiplicarse en presencia del antibióticoantibiótico

Antibiograma:Antibiograma:

Estudio “in vitro” de la sensibilidad o Estudio “in vitro” de la sensibilidad o susceptibilidad del microorganismo susceptibilidad del microorganismo causante de la enfermedad, frente a causante de la enfermedad, frente a diversos antibióticosdiversos antibióticos

Antibiograma Antibiograma

Utilización:Utilización: Bacterias de rápido crecimiento Bacterias de rápido crecimiento Bacterias fastidiosas patógenas Bacterias fastidiosas patógenas

(algunas)(algunas)

La tendencia cada vez mayor de muchas La tendencia cada vez mayor de muchas bacterias a hacerse resistentes a los bacterias a hacerse resistentes a los antibióticos, indica que el antibióticos, indica que el uso inadecuadouso inadecuado de de los antimicrobianos puede conducir a graves los antimicrobianos puede conducir a graves consecuenciasconsecuencias

ImportanteImportante: elegir el antibiótico adecuado : elegir el antibiótico adecuado para tratar una determinada bacteria, con la para tratar una determinada bacteria, con la ayuda del antibiogramaayuda del antibiograma

Los antibióticos son sustancias producidas por seres vivos (antibióticos naturales) o modificadas artificialmente a partir de ellas (antibióticos semisintéticos), que a pequeñas concentraciones tienen efectos antimicrobianos (bactericidas o bacterióstaticos), tras ser administrados por vía adecuada a un organismo receptor.

Se conocen unos 5.000 antibióticos distintos, y cada año se descubre unos 300 nuevos, pero en clínica solo se usa un 1% de los descubiertos.

La mayoría de los antibióticos son moléculas relativamente pequeñas pero La mayoría de los antibióticos son moléculas relativamente pequeñas pero complejas, con regiones hidrofóbicas que facilitan el transporte al interior complejas, con regiones hidrofóbicas que facilitan el transporte al interior celular. Muchos poseen varios anillos, algunos de los cuales mejoran la celular. Muchos poseen varios anillos, algunos de los cuales mejoran la interacción de la molécula con su diana macromolecular. interacción de la molécula con su diana macromolecular.

Para estudiarlos es más útil agrupar a los antibióticos no por clases según su naturaleza química, sino en función de las “dianas” sobre las que actúan y con las que interfieren:

Antibióticos que interfieren con la biosíntesis de la pared celular.

Antibióticos que actúan sobre la membrana celular.

Antibióticos que inhiben la síntesis de proteínas. Antibióticos que actúan sobre la síntesis de ácidos

nucleicos.

Inhibidores de la síntesis de ácidos nucleícos

Antibiograma:Antibiograma:

Estudio “Estudio “in vitroin vitro” de la sensibilidad o ” de la sensibilidad o susceptibilidad del microorganismo susceptibilidad del microorganismo causante de la enfermedad, frente a causante de la enfermedad, frente a diversos antibióticosdiversos antibióticos

Antibiograma Antibiograma

Utilización:Utilización: Bacterias de rápido crecimiento Bacterias de rápido crecimiento Bacterias fastidiosas patógenas Bacterias fastidiosas patógenas

(algunas)(algunas)

La tendencia cada vez mayor de muchas La tendencia cada vez mayor de muchas bacterias a hacerse resistentes a los antibióticos, bacterias a hacerse resistentes a los antibióticos, indica que el indica que el uso inadecuadouso inadecuado de los de los antimicrobianos puede conducir a graves antimicrobianos puede conducir a graves consecuenciasconsecuencias

ImportanteImportante: elegir el antibiótico adecuado para : elegir el antibiótico adecuado para tratar una determinada bacteria, con la ayuda tratar una determinada bacteria, con la ayuda del antibiogramadel antibiograma

MétodosMétodos para realizar para realizar AntibiogramasAntibiogramas

Dilución en serieDilución en serie del antibiótico del antibiótico Difusión en agarDifusión en agar del antibiótico del antibiótico

METODO DE METODO DE DILUCION EN SERIEDILUCION EN SERIE

Método cuantitativo que se realiza en medios líquidos

El antibiótico se distribuye diluyéndolo en una serie de tubos con caldo, sembrándose la bacteria cuya sensibilidad se quiera estudiar

Se incuban los tubos a 37°C por 24 horas y se busca el último tubo en que hay ausencia de desarrollo

La concentración del antibiótico de ese tubo indica la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) del antibiótico

Método caro, lento y engorroso, pero con un mayor rango de seguridad que el método de difusión

Concentración mínima inhibitoria (CMI): mínima concentración capaz de producir inhibición de la bacteria (efecto bacteriostático).

Concentración mínima bactericida (CMB): concentración mínima para producir muerte bacteriana.

Concentración Mínima Inhibitoria (CMI)

se utiliza una cantidad estandarizada de inóculo: 5x105 ufc/ml

100 50 25 12.5 6.25 3.12 1.6 0.8 0.4 0

Concentración Mínima Bactericida (CMB)

100 50 25 12.5 6.25 3.12 1.6 0.8 0.4 0

CMICMI

METODO DE METODO DE DIFUSION EN DIFUSION EN AGARAGAR (METODO DEL DISCO) (METODO DEL DISCO)

Método cualitativo: mide la capacidad de un antibiótico de difundir a través de un agar, para inhibir el crecimiento de las bacterias.

Usa discos de papel impregnados con cantidades conocidas de antibióticos

Existe una correlación directa entre los diámetros de inhibición y las CMI obtenidas por la prueba de dilución en tubo.

Método rápido, sencillo y muy reproducible. Utiliza una modificación de la técnica de

Kirby Bauer estandarizada por el NCCLS ( National Committe for Clinical Laboratory Standars )

Preparación del inoculoPreparación del inoculo(método directo de suspensión de (método directo de suspensión de

colonias)colonias)

Con un asa estéril recoger 4 a 5 colonias Con un asa estéril recoger 4 a 5 colonias desde un cultivo completamente puro y desde un cultivo completamente puro y aislado de la cepa a investigaraislado de la cepa a investigar

Transferir las colonias a 5 ml de Caldo Transferir las colonias a 5 ml de Caldo Nutritivo y realizar una emulsiónNutritivo y realizar una emulsión

Comparar la turbidez de la emulsión con el Comparar la turbidez de la emulsión con el estándar de turbidez Mc Farland 0.5estándar de turbidez Mc Farland 0.5

Si la emulsión queda más turbia que el Si la emulsión queda más turbia que el estándar, se debe diluir con el mismo caldo estándar, se debe diluir con el mismo caldo utilizadoutilizado

Si la emulsión tiene menor turbidez, se Si la emulsión tiene menor turbidez, se debe agregar mayor cantidad de coloniasdebe agregar mayor cantidad de colonias

Estándar de turbidez que equivale a Estándar de turbidez que equivale a una concentración de 108 una concentración de 108 bacterias/ml bacterias/ml

Estándar Mc Farland 0,5Estándar Mc Farland 0,5

Inoculación de las placasInoculación de las placas

Introducir una tórula de algodón estéril Introducir una tórula de algodón estéril en el caldo en el caldo

Elevar la tórula sobre la superficie del Elevar la tórula sobre la superficie del caldo y presionarla contra las paredes caldo y presionarla contra las paredes interiores del tubo para eliminar el interiores del tubo para eliminar el exceso de inoculoexceso de inoculo

Frotar la superficie del agar con la Frotar la superficie del agar con la tórula en forma densa, en 3 direcciones ( tórula en forma densa, en 3 direcciones ( horizontal, vertical y diagonal ) y horizontal, vertical y diagonal ) y cubriendo toda la superficie de la placacubriendo toda la superficie de la placa

Dejar secar la placa por 5 – 10 minutosDejar secar la placa por 5 – 10 minutos

Colocación de los “sensidiscos”Colocación de los “sensidiscos”

Elegir los antibióticos a utilizar de acuerdo a Elegir los antibióticos a utilizar de acuerdo a la identificación de la cepa la identificación de la cepa

Colocar los discos de sensibilidad con pinza Colocar los discos de sensibilidad con pinza esterilizada a la llama y previamente enfriadaesterilizada a la llama y previamente enfriada

Presionar suavemente los discos para Presionar suavemente los discos para asegurar su implantación a la superficie del asegurar su implantación a la superficie del agaragar

Colocar los discos suficientemente Colocar los discos suficientemente separados. No más de 6 a 8 por placaseparados. No más de 6 a 8 por placa

Una vez colocado un disco, nunca se debe Una vez colocado un disco, nunca se debe mover, ya que el antibiótico comienza a mover, ya que el antibiótico comienza a difundir casi instantáneamentedifundir casi instantáneamente

Incubar la placa a 37°C por 18 – 24 horasIncubar la placa a 37°C por 18 – 24 horas

Dispensador de Dispensador de sensidiscossensidiscos

Medición de los halosMedición de los halos

Las zonas de inhibición se miden Las zonas de inhibición se miden con una regla y se expresan en con una regla y se expresan en milímetros.milímetros.

El diámetro de los halos se El diámetro de los halos se compara con una tabla compara con una tabla estandarizada que fija los límites estandarizada que fija los límites entre sensibilidad, sensibilidad entre sensibilidad, sensibilidad intermedia y resistencia.intermedia y resistencia.

Accion de Agentes Fisicos y Quimicos ALIM

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