AUTOMATIZACION

TM PATRICIA TOLEDO RODRIGUEZ

OBTENCION DE LAS MUESTRAS

FIJACION

CONDICIONES IDEALES

• Actuar con rapidez

• Poder de penetración

• Insolubilizar componentes

celulares

• Conservar detalles

estructurales .

• Consistencia.

• Impedir la formación de

estructuras artificiales

• Permitir y facilitar la

aplicación de

procedimientos posteriores.

• Ser económico, estable,

fácil manejo y baja

toxicidad.

FORMALDEHIDO

• Concentración 4%

• Tamponada

• Penetración

• Fijación

DESHIDRATANTE

• eliminación completa del agua de la

muestra para que se pueda embeber

adecuadamente en los medios de

inclusión no hidrosolubles

posteriores

DESHIDRATACION

CONDICIONES IDEALES

1. No debe alterar las

estructuras tisulares

2. Debe poder mezclarse con

el reactivo intermediario o

agente aclarante.

3. Rápido

4. Producir un

endurecimiento aceptable

1. Lo mínimo de peligrosidad

intrínsica (vapores)

2. Mínimo riesgo de

incendio/explosión

DESALCOHOLIZAR

• Se trata de un proceso por el cual se

consigue la sustitución del agente

deshidratante por una sustancia miscible

con el medio de inclusión que va a

utilizarse.

1. Rapidez para eliminar el deshidratante

2. Acciones nocivas sobre los tejidos y células

3. Adecuación del aclarante sobre el

deshidratante

4. Adecuación del aclarante sobre el medio de

inclusión

5. Toxicidad /Peligrosidad

6. costo

IMPREGNACION

• Es el proceso de tiene por objeto rellenar

o infiltrar completamente la muestra con

el medio que se va a utilizar para la

imbibición del tejido. El fundamento del

proceso radica en la ocupación completa

con el medio de los espacios intra y

extraceculares inicialmente llenos con

agua

PARAFINAS

mezcla de hidrocarburos saturados de cadena

larga que se obtiene como un subproducto

incoloro e inodoro de la industria

petroquímica. A temperatura ambiente es

sólida. Existen diferentes tipos de parafina,

variando en punto de fisión (40 a 70°c).

PUNTO DE PLASTICIDAD

PROCESAMIENTO DE MUESTRAS

PROCESAMIENTO DE MUESTRAS

INCLUSION

INCLUIR

CORTAR

Microtomo minot criostato

SECADO DE LAMINAS

LEICA AUTOSTAINER XL

LEICA AUTOSTAINER XL

LEICA AUTOSTAINER XL

MEDIOS ADHESIVOS

TM PATRICIA TOLEDO RODRIGUEZ

MEDIOS ADHESIVOS

• Se utilizan entre el corte histológico y el

portaobjetos, tiene como finalidad

asegurar la permanencia e integridad del

corte histológico obtenido, permitir

realizar los procedimientos posteriores

sin producir el desprendimiento de la

muestra.

1. Albumina de Mayer

2. Albumina seca

3. Gelatina Cromoalumbre

4. Gelatina formalina

5. Film de celoidina

6. Colafría

7. Silanizados

8. Limpios

PUENTE CALICANTO

ALBUMINA DE MAYER

Clara de huevo (ml/grs)

Glicerina

Timol

La mezcla filtrada se extiende sobre los

portaobjetos limpios .

La albúmina coagula con el calor al secar los

cortes, de manera que logra adhesión al

portaobjetos.

ALBUMINA DE MAYER

V: barata, la mezcla es de larga duración.

D: engorroso su filtrado, requiere timol, si la

aplicación es excesiva se tiñe con eosina

ALBUMINA SECA

• Albúmina en polvo 5g.

Cloruro de sodio 0,5g

Agua destilada 100 ml

• Filtrar a través de un embudo Buchener al

vacío o a través de gasa doble. A 50 ml de

filtrado agregar 50 ml de glicerina.

• Adicionar a la mezcla final un grano de timol.

Exceso de albúmina

GELATINA CROMOALUMBRE

• SOLUCION A:

• Gelatina molida 4,5grs

• Agua destilada 1000ml

• Calentar progresivamente hasta 75° en agitación continua,

una vez completa la disolución bajar temperatura a 50°

• SOLUCION B

• Alumbre de cromo al 4% 38,5 ml

• Ftalato de dibutilo 1 ml

• Merthiolate 0,1 g

• Mezclar ambas soluciones.

GELATINA CROMOALUMBRE

Existe una variante a esta preparación:

• Gelatina en polvo 5g

• Cromoalumbre 0,5g

• Agua destilada 1000ml

Agregar timol para preservar la solución.

Guardar refrigerada. Filtrar antes de usar.

GELATINA CROMOALUMBRE

PROCEDIMIENTO:

• Sumergir los portaobjetos en la solución con

el fin de que se forme una delgada película.

Dejar escurrir. Colocar a secar en la estufa a

37°c.

GELATINA FORMALINA

• La formalina endurece la proteína contenida

en la gelatina y en la albúmina del huevo

asegurando una unión más forme entre el

corte y el portaobjetos.

• Aplicar a los portaobjetos la gelatina o la

albúmina de mayer.

GELATINA FORMALINA

• Montar los cortes y secarlos durante 30 a 60

segundos

• Colocar los portaobjetos en un borrel que contenga

aproximadamente 5 ml de formalina concentrada,

de modo tal que la solución no esté en contacto con

los cortes de tejido. Los bórreles herméticamente

cerrados se colocan en la estufa a 60° por 1 hora.

• Secar los cortes del borrel y secar en la forma

convencional.

•

COLAFRIA

• Solución al 1% de colafría en agua destilada.

Sumergir los portaobjetos limpios, y dejar

secar toda la noche.

V: no se tiñe, barata, fácil de preparar, no se

descompone.

D:requiere preparar los portaobjetos

PORTAOBJETOS LIMPIOS

V: la más barata de todas, fácil, no requiere

preparación.

D: no sirve para todas las tinciones posteriores,

requiere secado a 60° x 25 minutos

SILANIZADO

• 1.- Limpiar uno a uno los portaobjetos con

Alcohol de 70, cuidar de no dejar pelusas en

los portaobjetos.

• 2.- Sumergir el canasto en una solución de

acetona PA con Silano al 1%. Dejar 5 minutos.

• 3.- Lavar en dos baños sucesivos de acetona

nueva PA por 2 minutos cada uno.

• 4.- Dejar secar por 18 horas a 60°

SILANIZADO

V: soporta recuperaciones en temperatura y pH

extremos. (100° pH alcalinos)

D: tóxico, irritante e inflamable. No permite

reubicar el corte. No usar material de vidrio

PORTAOBJETOS

IDENTIFICACION DE

PORTAOBJETOS

• LAPIZ DIAMANTE

• LAPIZ GRAFITO

• LAPIZ PERMANENTE

IDENTIFICACION DE

PORTAOBJETOS

Lápiz permanente Lápiz diamante

PORTAOBJETOS CON LAPIZ

DIAMANTE

OTROS PROCEDIMIENTOS

• Posterior a la obtención del corte,

identificación, secar,

desparafinación, hidratación y

anterior al proceso de tinción,

existen procedimientos derivados de

fijador utilizado.

ELIMINACION PIG. FORMOLADO

• Desparafinar y llevar los cortes hasta agua

destilada

• Colocar los cortes en un borrel con una

solución de acido pícrico al 6. - 8% en alcohol

absoluto durante 10 minutos a 2 horas

• Lavar en abundante agua corriente

• Continuar con la técnica.

Pigmento Formolado

ELIMINACION PIG. BICLORURO

MERCURIO

• Utiliza una Solución de Lugol o de Alcohol

yodado

• Colocar las muestras en lugol o alcohol

yodado durante 10 minutos

• Lavar en agua destilada

• Pasar por sulfito de sodio al 0,25% hasta que

los cortes pierdan el color amarillo del yodo

• Lavar en abundante agua destilada

ELIMINACION DEL ACIDO PICRICO

• Se busca eliminar el color amarillo

característico de este reactivo, se realiza

colocando las láminas en una solución de

carbonato de litio al 0,2% por 10 a 20

minutos.

MEDIOS DE MONTAJE

TM PATRICIA TOLEDO RODRIGUEZ

• Es un medio que se coloca entre

el portaobjetos con el tejido y el

cubreobjetos

IMAGEN PORTA Y CUBRE

OBJETIVOS

• Permitir hacer más duraderas las

preparaciones.

• Facilitar su manipulación

• No interferir con la observación microscópica

INDICE DE REFRACCION

• Es una medida que determina la reducción de

la velocidad de la luz al propagarse desde un

medio homogéneo. Se busca medios de

montaje con un IR cercano a 1, el que es el IR

del aire.

• IR AIRE : 1.00029

• IR AGUA : 1.333

• IR VIDRIO : 1.52

INDICE DE REFRACCION

• MEDIO ORIGEN IR SOLUCION IR SOLIDO

BALSAMO DE

CANADA

NATURAL 1.523 1.544

EUPARAL MIXTO 1.477 1.517

PERMOUNT SINTETICO 1.514 1.528

• HIDROFILOS: HIDRO= AGUA

FILOS =AMIGO

•HIDROFOBOS

HIDROFILOS

1.Gelatina de Kaiser

2.Gelatina

3.Jarabe de Von Apathy

4.Jarabe de Lillie y Ashburn

HIDROFOBOS

1. Resinas Naturales: Balsamo de canadá

2. Resinas Mixtas:Euparal

3. Resinas sintéticas: Flotex, Eukilt

GELATINA DE KAISER

Agua

Gelatina

Glicerina

Fenol

Hidratar la gelatina, agregar glicerina, calentar

10 min. A menos de 75°c. Mantener

refrigerada. Calentar antes de usar.

GELATINA DE KAISER

• V: excelente medio hidrófilo.

• D: tiende a formar burbujas, cuidado con la

temperatura (metagelatina), requiere calentar

antes de usar.

BALSAMO DE CANADA

Se encuentra en el comercio.

V: esta preparado, se usa directo.

D: secado lento (días), en preparaciones

antiguas el bálsamo se seca y resquebraja

bajo el cubreobjetos.

Fuera de uso

RESINAS SINTETICAS

Se venden con diferentes nombre comerciales y

fórmulas secretas.

Flotex, Entellan, etc.

V: se compra listo para usar, seca rápido,

preparaciones de larga duración.

D: Fórmula desconocida, contienen xilol.

MEDIOS DE MONTAJE

BALSAMO DE CANADA EUKITT

CUBREOBJETOS

PINZA PATO

MONTAJE MANUAL

MONTAJE MANUAL

MONTAJE MANUAL

MONTAJE AUTOMATICO