aislamiento y recuento de bacterias Anaerobias

Anaerobios Características generales

Son incapaces de desarrollar en contacto con el oxígeno

Son exigentes para crecer, necesitan vitaminas y cofactores.

Forman parte de la flora normal del hombre y de los animales.

Producen infecciones.

Incluyen a varios géneros de cocos y bacilos, grampositivos y

gramnegativos.

Anaerobios estrictos: requieren un 0% de oxígeno para crecer

Anaerobios aerotolerantes: sobreviven hasta con 0,5% de oxígeno

• Efecto tóxico directo

• Formación de anión peróxido y superóxido

• Oxidación de enzimas esenciales que contengan grupos SH-

• Inhibición del metabolismo de flavoproteínas y NADH oxidasa

• Imposibilidad para alcanzar potenciales redox bajos

• Déficit o ausencia de catalasa y/o superóxido dismutasa (presente en

aerotolerantes)

Bacterias Anaerobias Efecto tóxico del oxígeno

Género Veillonella

V. parvula

Cocos Gramnegativos Anaerobios

Género Peptostreptococcus

P. anaerobiusP. magnusP. micros

P. asaccharolyticus

Cocos Grampositivos Anaerobios

Género ActinomycesA. israeliiA. odontolyticusA. viscosus

Género EubacteriumE. lentumE. aerofaciens

Género LactobacillusL. casseiL. bulgaricusL. yoghurtii

Bacilos Grampositivos Anaerobios

Género BacteroidesB. fragilisB. thetaiotaomicron

Género PorphyromonasP. gingivalisP. endodontalis

Género PrevotellaP. melaninogenicaP. bivia

Género FusobacteriumF. nucleatumF. necrophorum

Bacilos Gramnegativos Anaerobios

Obtención de atmósfera anaerobiaObtención de atmósfera anaerobia

2H2 + O2 2H2O

CO2

H2

1.- Técnica en jarra anaerobiaCon catalizador: a-Evacuación-reemplazo

b-Método del sobre generador de gas descartable Sin catalizador: Fijación del O2 por limaduras de Fe 2.- Técnica de la cámara anaerobia de guante 3.- Tubos con película de agar con siembra por estrías en medios PRAS.

Sistemas anaerobios para el cultivo de bacterias anaerobias

Técnica en jarra anaerobia

 La jarra GasPak usa un catalizador en frío compuesto de bolitas de alúmina cubiertas de paladio, que no requieren calentamiento.

•El catalizador en frío es más conveniente para usar y no tiene riesgo de explosión.•El catalizador en frío de paladio puede ser inactivado en la jarra por la producción de SH2 u otros productos volátiles de las bacterias.•Se recomienda reemplazarlo por uno nuevo o uno reactivado cada vez que se utiliza la jarra.

1.- En la técnica de anaerobiosis por evacuación-reemplazo se extrae el aire de la jarra hasta 51-61 mm Hg, luego se lava con corriente de N2. Este procedimiento se repite dos veces. Por último se llena la jarra con una mezcla anaeróbica de N2:85%, CO2:5% e H2:10%.

2.- En la técnica del sobre generador de gases se emplean sobres conteniendo, por ejemplo, ácido cítrico o tartárico, bicarbonato de sodio y borohidruro de sodio.En el momento de utilizarse se corta el extremo del sobre y se hidrata con un volumen de agua, luego se cierra inmediatamente la jarra.

Cámara anaerobia de guante

 

Una cámara anaerobia de guante es un sistema anaerobio autoabastecido que permite procesar muestras y realizar la mayor parte de las técnicas bacteriológicas para aislamiento e identificación de bacterias anaerobias sin exposición al aire.

Pueden construirse de diferentes materiales, incluyendo acero, acrílico o fibra de vidrio.

Medios PRAS en tubos arrollados

 Esta técnica utiliza medios PRAS: medios previamente reducidos y anaeróbicamente esterilizados.

-El medio se envasa en tubos con tapón de caucho butílico bajo gas libre de O2 y se esterilizan y mantienen en ambiente anaeróbico

-Se enfrían en una máquina giratoria lo que resulta en una capa fina de agar en la superficie interna de los tubos

-El sistema requiere el agregado de un agente reductor, como L-cisteína en la fórmula del medio de cultivo.

- Permiten la inspección de las colonias en cualquier momento sin la exposición al O2. 

Identificación

Anaerobios Esporulados

Características generales

Son incapaces de desarrollar en contacto con el oxígeno

Resisten hasta 120ºC, la desecación y cambios de pH

Forman parte de la flora normal del hombre y de los animales.

Se los encuentra ampliamente distribuidos en el agua, el suelo

y las plantas

Producen infecciones oportunistas.

Su acción se manifiesta por la producción de potentes

exotoxinas.

Incluyen al género Clostridium con varias especies.

Anaerobios Esporulados

Clasificación

Neurotóxicos

Clostridium tetani

Clostridium botulinum

Histotóxicos

Clostridium perfringens

Clostridium septicum

Enterotóxicos

Clostridium difficile

Clostridium perfringens

Clostridium tetani

Clostridium tetani

Se encuentran en el suelo e intestino del hombre y animales.

Las esporas ingresan a través de heridas.

Al alcanzarse el potencial redox adecuado la espora germina.

La forma vegetativa produce una exotoxina (tetanoespasmina).

La toxina difunde por vía neural hasta las neuronas motoras.

En SNC bloquea la liberación de glicina y GABA. A nivel periférico

inhibe la liberación de acetilcolinesterasa dando como resultado la

estimulación incontrolada de los músculos esqueléticos.

El paciente muere por parálisis de los músculos respiratorios.

Clostridium tetani

RESULTADO

S

Características Colonia 1

Colonia 2 Clostridium Sp.

Medio de cultivo

TSN TSN Gelosa sangre

Forma Amiboide

Circular Irregular

Tamaño 5 mm 2 mm 4 mm Color Beige Amarillo BeigeBorde lobulado Entera Filsamentosa

Superficie Lisa Lisa Rugosa Elevación Convexa Convexa Plana

Luz trasmitida Opaca Opaca OpacaLuz reflejada Mate Mate Mate Aspecto Húmeda Húmeda SecoConsistencia Butirosa Butirosa DuraAcción sobre el medio

ninguna Ninguna Ninguna

Característica Colonia 1 Colonia 2 Clostridium Sp.

Forma Ovoide Coco BacilosAgrupación Aislado Racimo AisladosTinción de Gram

Negativo Positiva Positivo

Presencia de endoesporas

No 

No 

Si 

Dilución Número de tubos positivos

NMP/ml o g

10^-1 1 3.6

10^-2 0  

10^-3 0