UNIVERSIDAD “LOS ANGELES DE CHIMBOTE”

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

INFORME DE PRACTICAS PRE – PROFESIONALES TIPO “B”

PARA OPTAR EL GRADO DE BACHILLER EN LA ESPECIALIDAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

“ANÁLISIS BROMATOLOGICO DE HARINA DE PESCADO EN LA EMPRESA SIPESA - CHIMBOTE DURANTE LOS

MESES DE JUNIO Y JULIO DE 2005”

AUTOR:

AVILES ZAPATA CARLOS STALIN

CHIMBOTE - PERU

I.- INTRODUCCIÓN

La industria Pesquera logra sobreponerse gracias a que pudo elaborar harina y aceite de pescado a partir de 1975, primero

con desperdicios de conservería y luego procesando pescado entero, compitiendo con la estatal Pesca Perú hasta la fecha (9).

La harina de pescado es una fuente proteica muy importante. Con un 70% a 80% del producto en forma de proteína y

grasa digerible (6).

La harina de pescado tiene un contenido relativamente alto de minerales como el fósforo, en forma disponible para el

animal. Las vitaminas también están presentes en niveles relativamente altos (6).

El Grupo SIPESA cuenta en la actualidad con la mayor capacidad instalada de procesamiento de harina de pescado y la

mayor flota pesquera del Perú, lo que le permite tener la mayor participación productiva en el país (2).

Produciendo dos tipos de Harina de Pescado:

• La Harina Standard o F.A.Q (Food Aliment Quality)., con una proteína base de 64% - 65%, un nivel de grasa y

humedad máximo del 12% y 10%, respectivamente.(2)

• La Harina Prime (Steam Dried), que es de calidad superior, con una proteína de 69% - 70% y un nivel de grasa y

humedad de 10% como máximo.(2)

El proceso de elaboración de la Harina de Pescado involucra el reconocimiento de una serie de operaciones unitarias que

se llevan a cabo en ella, tales como: Cocción, extrusión, secado, evaporación, centrifugación, molienda, combustión, intercambio

iónico, entre otros (3).

El adecuado control en los equipos del proceso productivo así como los análisis y controles periódicos de la materia

prima, productos intermedios y finales, tienen particular importancia porque de estos factores dependerá la obtención de una Harina

de Pescado de calidad superior (3).

OBJETIVOS:

OBJETIVO GENERAL:

Determinación de la Calidad de Harina de PESCADO en la empresa SIPESA- CHIMBOTE durante los meses de

Junio y Julio de 2005.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

Determinar el porcentaje de Nitrógeno Amoniacal en Harina de Pescado durante los meses de Junio y Julio de

2005.

Determinación del porcentaje de proteína bruta en harina de pescado durante los meses de Junio y Julio de 2005

Determinar el porcentaje de ácidos grasos libres en harina de pescado durante los meses de Junio y Julio de 2005.

Determinar el porcentaje de grasa en harina de pescado durante los meses de Junio y Julio de 2005.

Determinar el porcentaje de Humedad en harina de pescado durante los meses de Junio y Julio de 2005.

Determinar el porcentaje de cenizas en harina de pescado durante los meses de Junio y Julio de 2005.

Determinar el porcentaje de contenido de cloruros en harina de pescado durante los meses de Junio y Julio de

2005.

II.- MATERIAL Y METODO

1.- MATERIAL :

Los propios Análisis Químicos del área de Aseguramiento de la Calidad del grupo SIPESA - CHIMBOTE para Harina de

Pescado durante los meses de Junio y Julio de 2005.

1.1.- MATERIAL DE LABORATORIO:

Material de vidrio:

Balón de 800 ml de capacidad

Balones Kjeldahl de 800 ml

Balones de 250 ml o vasos Buchi

Bureta de 50 ml para Soda.

Bureta de 100 ml para Ácido

Erlenmeyer, de 500 ml. De capacidad

Erlenmeyer de 250 ml de capacidad

Pipetas de 50 ml de capacidad

Plancha u hornilla eléctrica

Probeta de 50 ml.

Microbureta de 10 ml.

Crisoles de porcelana.

Material biológico:

Reactivos:

Magnesia Calcinada (oxido de magnesio)

Acido Sulfúrico, solución 0.1 N.

Hidróxido de Sodio, solución 0.1 N.

Reactivo indicador Rojo de metilo 0.1 %.

Acido Sulfúrico concentrado (QP) d = 1.84

Sulfato de Potasio Anhidro (QP)

Sulfato de Cobre Pentahidratado (QP)

Etanol al 95% (v/v).

Solución Hidróxido de Sodio 0.10 N (valorada).

Solución de Hidróxido de Sodio al 33%.

Acetanilida (QP) como patrón primario.

Sacarosa libre de Nitrógeno.

Solución de Fenolftaleina al 1% en alcohol al 95%

Hexano Bidestilado

Acido Nítrico d= 1.38 g / cm3

Solución de Nitrato de Plata (AgNO3) 0.1 N

Solución de Tiocianato de Amonio (NH4 SCN) 0.1 N

Solución saturada de Sulfato Férrico de Amonio (NH4 Fe (SO4) 2 12 H2O).

Equipos:

Equipo Kjeldahl de digestión y destilación.

Equipo de extracción de grasa Soxhlet o Buchi.

Balanza analítica, de sensibilidad de 0.001 gr.

Dispensador automático para Ácido.

Desecador de Silica gel con indicador.

Horno de mufla eléctrico a 600° C.

Hornilla de plancha o quemador de gas.

Estufa de secado, con regulador de temperatura automático

Calentador eléctrico con termostato

Pinza de metal

1.2.- METODOS:

1.2.1.- METODO PARA LA DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE NITRÓGENO AMONIACAL

El nitrógeno amoniacal extraído por destilación en presencia de oxido de magnesio es recibido en un exceso

de Ácido Sulfúrico y se determina por titulación con hidróxido de sodio (5)(4) (Ver anexo).

1.2.2.- METODO PARA LA DETERMINACIÓN DE PROTEINA BRUTA

Se basa en la conversión de Nitrógeno orgánico a Nitrógeno inorgánico, el Sulfato de Amonio así formado es

diluido y alcalinizado con Hidróxido de Sodio liberándose Amoniaco. El Amoniaco es destilado y recibido en un

volumen conocido de Ácido Sulfúrico y determinado por titulación. Utilizando el Equipo Kjeldahl (5)(1)(Ver anexo).

1.2.3.- METODO PARA LA DETERMINACION DE ACIDOS GRASOS

LIBRES

Se basa en la neutralización de los ácidos grasos libres de la grasa de la harina con una solución de

Hidróxido de Sodio por el Método Volumétrico(5) (Ver anexo).

1.2.4.- METODO PARA LA DETERMINACIÓN DE GRASAS

La grasa se extrae con un solvente (Hexano) y el extracto obtenido se pesa después de la evaporación del

solvente, la extracción se realiza continuamente con un Equipo Tipo Soxhlet (5) (Ver anexo).

1.2.5.- METODO PARA LA DETERMINACIÓN DE HUMEDAD

Se basa en la perdida del peso del producto bajo ciertas condiciones de secado(5)(7) (Ver anexo).

1.2.6.- METODO PARA LA DETERMINACION DE CENIZAS

Se realiza por Calcinación de la Harina de Pescado a 600º C, el contenido de cenizas es el residuo

que queda después de realizar esta operación (5)(8) (Ver anexo).

1.2.7.- METODO PARA LA DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE CLORUROS

Se hace hervir la muestra con una solución de Nitrato de Plata en presencia de Acido Nítrico los

Cloruros son precipitados en forma de Cloruros de Plata.

El exceso de Nitrato de Plata se titula con una solución de Tiocianato de Amonio según el Método Volhard

(5) (Ver anexo).

ANALISIS ESTADÍSTICOS:

La muestra es tomada al azar de acuerdo al muestreo estadístico propios de la empresa teniendo como

resultado datos promedios y porcentuales(5) (Ver anexo).

III.- RESULTADOS:

TABLA N° 01: REGISTRO DE DETERMINACION DEL CONTENIDO DE NITRÓGENO AMONIACAL Y DE PROTEINAS EN LA EMPRESA SIPESA - CHIMBOTE DURANTE LOS MESES DE JUNIO Y JULIO DE 2005

FUENTE ARCHIVO DE REGISTROS DEL CONTENIDO DE NITRÓGENO AMONIACAL Y DE PROTEINAS DE LA EMPRESA SIPESA – CHIMBOTE MES DE JUNIO Y JULIO DE 2005.

NITROGENO AMONIACAL %MUESTRA (TVN) PROTEINA

mg/100g 275 147,00 65,17276 163,80 64,48277 130,20 65,369034 138,60 64,31

PROMEDIO 144.90 65.05PARÁMETROS REALES 150 Max. 65.00 Min.

GRAFICO N° 01: REGISTRO DE DETERMINACION DEL CONTENIDO DE NITRÓGENO AMONIACAL Y DE PROTEINAS EN LA EMPRESA SIPESA - CHIMBOTE DURANTE LOS MESES DE JUNIO Y JULIO DE 2005.

TABLA Nº 02: REGISTRO DE DETERMINACION DE ACIDOS GRASOS LIBRES, GRASAS Y HUMEDAD EN LA EMPRESA SIPESA - CHIMBOTE DURANTE LOS MESES DE JUNIO Y JULIO DE 2005

0

20

40

60

80

100

120

140

160

PROMEDIO 144.9 65.05

PARÁMETROS REALES 150 65

NITROGENO AMONIACAL

mg/100g  % PROTEINA

FUENTE: ARCHIVO DE REGISTROS DEL CONTENIDO DE NITRÓGENO AMONIACAL YDE PROTEINAS EN LA EMPRESA SIPESA - CHIMBOTE MES DE JUNIO Y JULIO DE 2005.

Max. Min.

FUENTE ARCHIVO DE REGISTROS DE DETERMINACIÓN DE ACIDOS GRASOS LIBRES, GRASAS Y HUMEDAD DE LA EMPRESA SIPESA – CHIMBOTE MES DE JUNIO Y JULIO DE 2005.

% ACIDOS GRASOS % %MUESTRA LIBRES GRASAS HUMEDAD

(FFA) 275 6,41 11.78 9.98276 6,43 11.97 9.86277 6,28 11.56 9.549034 6,47 11.75 9.52

PROMEDIO 6.36 11.80 9.80PARÁMETROS REALES 11 Max. 12 Max. 10 Max.

GRAFICO N° 02: REGISTRO DE DETERMINACION DE ACIDOS GRASOS LIBRES, GRASAS Y HUMEDAD EN LA EMPRESA SIPESA - CHIMBOTE DURANTE LOS MESES DE JUNIO Y JULIO DE 2005.

TABLA N°3:REGISTRO DE DETERMINACION DE CENIZAS Y CLORUROS EN LA EMPRESA SIPESA – CHIMBOTE DURANTE LOS MESES DE JUNIO Y JULIO DE 2005

0

2

4

6

8

10

12

PROMEDIO 6.36 11.8 9.8PARÁMETROS REALES 11 12 10

% ACIDOS GRASOS LIBRES (FFA) GRASAS % HUMEDAD %

FUENTE ARCHIVO DE REGISTROS DE DETERMINACIÓN DE ACIDOS GRASOS LIBRES, GRASAS Y HUMEDAD DE LA EMPRESA SIPESA – CHIMBOTE MES DE JUNIO Y JULIO DE 2005.

Max.Max. Max.

FUENTE: ARCHIVO DE REGISTROS DEL CONTENIDO DE CINEZAS DE LA EMPRESA SIPESA - CHIMBOTE MES DE JUNIO Y JULI O DE 2005.

% %MUESTRA CENIZA CLORUROS

275 18,71 4.69276 18,59 5.02277 18,67 5.169034 19,47 5.27

PROMEDIO 18,63 5.04 PARAMETROS REALES 17 Max. 5 Max.

0

5

10

15

20

PROMEDIO 18.63 5.04PARAMETROS REALES 17 5

CENIZA CLORUROS

GRAFICO N° 03:REGISTRO DE DETERMINACION DE CENIZAS Y CLORUROS EN LA EMPRESA SIPESA – CHIMBOTE DURANTE LOS MESES DE JUNIO Y JULIO DE 2005

FUENTE: ARCHIVO DE REGISTROS DEL CONTENIDO DE CINEZAS DE LA EMPRESA SIPESA - CHIMBOTE MES DE JUNIO Y JULI O DE 2005.

Max Max.

IV.- DISCUSION:

De acuerdo al grafico de registros de determinación del contenido de Nitrógeno Amoniacal (TVN- Nitrógeno Volátil Total),

encontramos que el promedio de cuatro rumas de Harina de Pescado es de 144.9 mg/100g , sabiendo que el requisito indispensable para una

harina de buena calidad de exportación es de 150 mg/100g , de TVN como máximo, estando entonces este lote de Harina de Pescado apto

para su comercialización.

Utilizamos el Oxido de Magnesio que es un oxidante débil que permite la liberación rápida del Amoniaco de la proteína que se esta

destruyendo, el Amoniaco que se libera es captado en un Erlenmeyer que contiene Acido Sulfúrico que recibe el Amoniaco formando el

Sulfato de Amonio que luego es valorado con el NaOH, para titular el Acido Sulfúrico que se encuentra en exceso, siendo todo una reacción

de neutralización al final del Acido Sulfúrico, por lo tanto indirectamente la cantidad de Acido Sulfúrico neutralizado por el NaOH nos da la

cantidad de Amoniaco que se a liberado, dándonos a conocer el grado de desnaturalización de proteínas que tiene esta Harina de Pescado

analizada.

En el grafico de registro de determinación de proteína bruta, encontramos que el contenido promedio del porcentaje de proteínas es de 65.5

%, teniendo referencia que una Harina de Pescado FAQ Estándar con calidad para ser exportada es de 65% como mínimo de proteínas,

encontrándose esta Harina de Pescado analizada en el porcentaje aceptado para su comercialización.

La muestra (Harina de Pescado) contiene proteínas y las proteínas contienen grupos prostéticos que son grupos amídicos, por lo tanto es una

secuencia de aminoácidos que conforman las proteínas, entonces esta proteína es la que va a reaccionar con los reactivos (Sulfato de Potasio,

Sulfato de Cobre y Acido Sulfúrico).

Sabiendo que el Sulfato de Cobre es un oxidante, el Acido Sulfúrico es hidrolizante y al mismo tiempo es oxidante y que el Sulfato de

Potasio favorece la formación de Acido Sulfúrico para que forme las sales que le da un carácter básico a la muestra.

Entonces los reactivos utilizados actúan de dos formas como oxidantes y como hidrolizantes – oxidantes, entonces el Acido Sulfúrico al

calentarse va a producir la hidrolización de la proteína, es decir, hidroliza todos los grupos prostéticos liberando los aminoácidos, pero los

aminoácidos mas pequeños sufren la oxidación del Sulfato de Cobre, generando liberación de amoniaco y este es recibido en Acido Sulfúrico

que es un medio acido, esto significa que el amoniaco forma una sal como Sulfato de Amonio , pero este Sulfato de Amonio no se libera,

queda en el balón, terminada la destrucción total por calentamiento se le agrega agua destilada mas NaOH y luego se comienza a calentar

para que el NaOH cambie totalmente el medio, empezándose a alcalinizar, de tal manera que el Sulfato de Amonio se rompe y libera

Amoniaco que luego es recibido en un Erlenmeyer que contiene Acido Sulfúrico formando Sulfato de Amonio, pero este Erlenmeyer

contiene exceso de Acido Sulfúrico, por lo tanto una parte del Amoniaco forma Sulfato de Amonio y otra parte de Acido Sulfúrico no

reacciona.

Al final se titula el Acido Sulfúrico que no reacciona con NaOH que es una reacción ACIDO – BASE , para formar el Sulfato de Sodio mas

agua.

En el gráfico de registro de determinación de ácidos grasos libres se encontró que la cantidad de estos ácidos fue de 6.36%, sabiendo que el

porcentaje requerido para su comercialización es de 11% como máximo, por lo tanto encontramos la Harina de Pescado analizada en el

porcentaje aceptable de Ácidos Grasos Libres para su comercialización.

Los ácidos grasos libres son todos aquellos que no están conformando el aceite o la grasa, es decir, ácidos grasos que contienen el grupo

COOH libre, estos grupos COOH son los que se van a valorar en esta determinación por el método de extracción Soxhlet con Hexano, con la

diferencia que se le adiciona Alcohol neutralizado y una solución de Fenolftaleina como indicador para los ácidos grasos libres siendo este

un medio acido la fenolftaleina es incolora, procediéndose a titular con NaOH reaccionando con los grupos COOH, por lo tanto va a ir

neutralizando estos COOH, siendo este una titilación de Neutralización formando el COONa (Sal del acido graso) y que al irse poniendo mas

básico la muestra por el NaOH se va a colorear rosado, lo cual nos indica que ya se neutralizo totalmente todos los grupos COOH libres, en

consecuencia la cantidad de NaOH gastado me da por calculo cuanto de porcentaje de ácidos grasos libres tenemos.

En el presente gráfico vemos que el promedio de registros de determinación de grasas es de 11.80%, teniéndose en cuenta que el requisito

necesario para la exportación de Harina de Pescado Estándar el porcentaje máximo de grasas permitido es de 12%, por lo tanto encontramos

la Harina de Pescado analizada en el porcentaje aceptable de grasas para su comercialización.

Para la determinación de grasa se hace por extracción con un solvente que es el Hexano; el Hexano es un Hidrocarburo que tiene

baja polaridad (no polar) produciendo la extracción de sustancias no polares o de baja polaridad, es decir, de sustancias que tengan gran

cantidad de Carbono y quienes lo tiene en gran cantidad son las grasas mas un grupo COO, por lo tanto tiene cadenas 15 a 20 Carbonos

teniendo afinidad por el Hexano y de esta forma se puede extraer, por lo tanto el fundamento se basa netamente en una extracción, no

existiendo reacción química; siendo el método Soxhlet el empleado que es de extracción continua donde el Hexano va en contacto con la

Harina de Pescado de donde se va a extraer la grasa, coloreándose el Hexano que se encuentra en el balón reciclando de a 6 veces por hora.

Luego se apaga el equipo y se lleva a evaporar hasta que quede un aceite, dándonos este aceite directamente el peso o la cantidad según

estipula la norma.

Como resultado de determinación de humedad el promedio de está es de 9.8%, teniendo conocimiento que para la exportación o

comercialización de la Harina Estándar debe tener como requisito un porcentaje máximo de humedad del 10%, estando esta Harina apto o

dentro de los limites internacionales para su exportación.

Esta determinación nos permite ver la cantidad de agua que puede tener la muestra de Harina de Pescado, porque la mayor o menor cantidad

de agua nos da una idea del grado de conservación de Harina de Pescado, a mayor porcentaje de humedad que pueda tener la muestra va a

significar menor tiempo de almacenamiento o mayor facilidad de descomposición de Harina de Pescado; sabiendo el porcentaje de humedad

se tiene el conocimiento del tiempo de proliferación de bacterias o de hidrólisis de la misma Harina de Pescado; por lo tanto la diferencia de

peso determina el porcentaje de Humedad que tiene la muestra.

En el promedio de registro de determinación de cenizas es de 18.63%, sabiendo que el requisito necesario para la exportación de Harina de

Pescado Estándar el porcentaje máximo de cenizas permitido es de 17%, estando este porcentaje alto para su comercialización, pero se

evalúan varios criterios en conjunto por parte del comprador a la hora de su licitación y compra, puesto que este resultado no dificulta los

demás análisis ya que el porcentaje de cenizas si esta elevado nos indica presencia de otros componentes de la Harina como: Minerales,

Potasio, Sodio.

Con este método se lleva a la destrucción total de la muestra de Harina de Pescado, realizándose este proceso a temperaturas muy elevadas

(500-600ºC) dependiendo de la mufla a utilizar, este método de destrucción es directamente físico y por calor como ya se ha mencionado,

perdiendo humedad la muestra, oxidando totalmente las sustancias y los carboniza, permitiendo la formación de cenizas siendo esto el

resultado la calcinación total de la muestra llevándolo solamente a carbonos, minerales y sales que pueda tener, que no son destruidos por el

calor, esto se realiza para determinar la cantidad de residuos o cenizas como Carbono, Potasio, Sodio o de sales que pueda contener la

muestra, entonces el peso que nos queda según formula es el porcentaje de cenizas.

En la determinación del porcentaje de cloruros encontramos que el promedio de las rumas es de 5.04%, teniendo en cuenta que para su

exportación de esta Harina de Pescado Estándar debe tener como requisito un porcentaje máximo de 5% de cloruros, encontrándose en un

rango aceptable para su comercialización.

Este método nos permite determinar la cantidad de cloruros que puede tener la muestra de Harina de Pescado, esta es una reacción que se

produce con la captación de Cloro que puede tener la Harina de Pescado a través de Nitrato de Plata y Acido Nítrico que son oxidantes, el

Nitrato de Plata va a permitir la captación de Cloruros, porque los Cloruros tienen mucha afinidad por la Plata formando Cloruro de Plata y

de esa manera va a permitir captar el Cloruro y luego titularlo. Por lo tanto a la muestra se le agrega directamente el Acido Nítrico y el

Nitrato de Plata, luego se lleva a calentamiento haciendo una destrucción de la materia para que libere el cloruro, todos los cloruros que

fueron captados por la Harina de Pescado reaccionan con el Nitrato de Plata para formar el Cloruro de Plata estando toda esta reacción en

medio acido por tener la presencia del Acido Nítrico; por consiguiente el exceso de Nitrato de Plata que no reacciono pero que se encuentra

en medio acido es el que se va a titular, no el Cloruro de Plata, siendo esta una titulación indirecta; se titula el Nitrato de Plata con el

Tiocianato de Amonio, donde va a ver una reacción directa para formar el Tiocianato de Plata mas Nitrato de Amonio, la cantidad de

Tiocianato de Amonio que se necesita para reaccionar con el Nitrato de Plata nos va a dar la diferencia directa del gasto siendo la relación 1 a

1; se le coloca como indicador el Sulfato Férrico de Amonio, que en medio acido no tiene color pero conforme va agregándose el Tiocianato

de Amonio va alcalinizando la muestra formándose un color marrón rojizo que significa el momento en que neutraliza totalmente al Nitrato

de Plata , de esta neutralización sacamos por formula la cantidad de porcentaje de Cloruros que tiene la muestra.

V.- CONCLUSIONES:

Luego de haber analizado los resultados a través de fundamentos físicos y químicos puedo concluir de que la Harina de Pescado

motivo de análisis se encuentra apto para su comercialización, ya que los resultados se encuentran dentro de parámetros de calidad

requeridos, según detallamos a continuación :

• Que los resultados obtenidos de TVN fueron de 144.9 mg/100g encontrándose dentro de los limites y requisitos permitidos,

siendo como máximo el de de 150 mg/100g de aceptación para su uso o comercialización.

• En el análisis de proteína bruta se obtuvo un resultado de 65.05%, el cual esta dentro de los parámetros óptimos el cual sirve

como referencia para su control de calidad aceptable y su exportación, sabiendo que como limite mínimo permitido es del 65%.

• El resultado del análisis obtenido de los ácidos grasos libres fue de 6.36% , teniendo como referencia máxima un 11% de ácidos

grasos libres en cual nos indica que esta dentro de los limites permitidos para su consumo del mercado internacional.

• Como requisito máximo de grasas permitido en Harina de Pescado es del 12%, el resultado del análisis fue de un 11.80% en mis

prácticas de determinación de grasas, estando esta muestra en condiciones aceptables para su consumo.

• En el análisis realizado de determinación de humedad en Harina de Pescado Estándar se encontró con un porcentaje de 9.8% ,

teniendo como parámetro máximo el porcentaje de 10% , esto nos indica que se encuentra dentro de los límites permitidos para su

almacenamiento.

• Que en el análisis de determinación de cenizas nos dio un resultado de 18.63%, esto no significa que la Harina no este en

condiciones de ser consumido si no que sirve para darnos referencia de otros componentes o residuos como minerales y sales que

pueda tener la muestra, sabiendo que el parámetro máximo es del 17% de cenizas.

• En el análisis de determinación de cloruros en Harina de Pescado Estándar se obtuvo un resultado de 5.04%, sabiendo que el

porcentaje permitido es de 5% como máximo, esto quiere decir que se encuentra en condiciones adecuadas para su consumo.

VI.- RECOMENDACIONES:

• Se debe capacitar técnicamente al personal de planta para que estos ayuden a llevar un buen control de proceso en las operaciones

de obtención de productos a partir del pescado.

VII.- REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS: