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FLOURESCENCIA FOSFORECENCIA

La fluorescencia es la propiedad de una

sustancia para emitir luz cuando son expuestas a

radiaciones del tipo ultravioleta, rayos catdicos

o rayos X

El proceso de fluorescencia tarda slo unas

milsimas de segundo emitiendo luz.

En el proceso, una molcula absorbe un fotn de

alta energa, el cual es emitido como un fotn de

baja energa mayor longitud de onda!. La

diferencia de energa entre la absorcin y la

emisin, es disipada como calor vibraciones

moleculares!. "odo el proceso es muy cortomillonsimas de segundo! y este tiempo es la

principal diferencia con otro conocido fenmeno

luminoso,

#on materiales semiconductores $ue producen

luz visible como resultado de su activacin con

luz %&. El efecto cesa tan pronto como

desaparece la fuente de excitacin. Los

pigmentos fluorescentes a la luz del da son

blancos o de color claro mientras $ue cuandoest'n expuestos a radiacin %& irradian un

intenso color fluorescente

La (osforescencia es el fenmeno en el cual

ciertas sustancias tienen la propiedad de

absorber energa y almacenarla, para

emitirla posteriormente en forma de luz.

.%n material fosforescente puede durar

emitiendo luz durante varios minutos.

El mecanismo fsico $ue rige este

comportamiento es el mismo $ue para la

fluorescencia, no obstante la principal

diferencia con sta es $ue )ay un retraso

temporal entre la absorcin y la reemisinde los fotones de energa.

*ateriales semiconductores $ue convierten

la energa absorbida en luz emitida slo

detectable en la oscuridad, despus de $ue

la fuente de excitacin )a sido eliminada.

Esta emisin de luz puede durar desde

minutos )asta )oras. La fuente de excitacinm's efectiva es la radiacin %&.

ALGUNOS MATERIALES FLUORESCENTES

*inerales+ fluorita algunas variedades!, calcita algunas variedades!, uranio, etc

*ateriales de uso diario+ papel blanco, azulete, camisetas blancas, octavillas de

anuncios, etc.

*todos de clasificacin+ rayas en sobres, etc.

illetes de banco

*ateriales org'nicos+ )ongos en la piel, clorofila, fluoresceina, etc.

ebidas+ "nica $uinina!, etc.

ALGUNOS MATERIALES FOSFORESCENTES

*inerales+ calcita y aragonito algunas variedades!, etc.

-nstrumentos de sealizacin nocturna+ bandas, pintura, etc.

*ateriales de regalo+ pegatinas, estrellas, etc.

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ANLISIS DE PPTIDOS

RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR:

La /esonancia magntica nuclear /*0! constituye una tcnica de vital importancia en

la investigacin cientfica. La /*0 es, junto con la difraccin de rayos X, la 1nica

metodologa $ue puede usarse para determinar la estructura molecular de

macromolculas con alta resolucin. (rente a la difraccin de rayos X, no obstante, la

/*0 presenta varias ventajas+

2ermite determinar la estructura molecular en solucin.

La /*0 permite, adem's, estudiar de manera eficaz y sencilla las interacciones

entre biomolculas. "ambin es la 1nica metodologa $ue permite el estudio de la din'mica de

macromolculas con resolucin atmica en varias escalas de tiempos.

La produccin de cada protena es distinta, y cada una re$uiere la seleccin de los

distintos sistemas de expresin vectores! y de las distintas tcnicas de purificacin

intercambio inico, cromatografa de afinidad, etc.!

PREPARACIN DE MUESTRAS:

%na vez $ue se consigue la produccin y la purificacin de la muestra, es necesario

evaluar las condiciones en las cuales se llevar'n a cabo los experimentos

amortiguadores!. Es preciso seleccionar condiciones $ue preserven la estructura

correcta y la estabilidad de la muestra por el mayor tiempo posible y $ue permitan, al

mismo tiempo, obtener la mayor seal posible. 3lgunas protenas re$uieren elevadas

concentraciones de iones para mantenerse estables en altas concentraciones. #in

embargo, el uso de estas altas concentraciones de sal y amortiguadores con alta

conductividad degrada la relacin seal4ruido en la /*0.

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Estructura de las

prte!"as:

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9omo dijimos antes, no )ay conexin entre los distintos 33s+ 0o podemos determinar

cu'l es cual. 2ara poder determinar la estructura de una protena por /*0 necesitamos

saber la estructura primaria de la protena.

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#$ ANLISIS % SECUENCIACIN DE PPTIDOS MEDIANTEESPECTROMETR&A DE MASAS

#e utilizar' un espectrmetro de masas de 1ltima generacin cuadrupolo de trampa

inica!, cuyas principales caractersticas son las de poder realizar espectros de masas enun rango pe$ueo a muy alta resolucin modo :oomscan! y fragmentacin sucesiva de

especies inicas determinadas presentes en mezclas complejas modo *# n !. La sonda

electrospray )a sido modificada en nuestro laboratorio para permitir realizar

nanoelectrospray, $ue permite un an'lisis muy ex)austivo de cantidades muy pe$ueas

de muestra 7 ul! durante tiempos muy largos el flujo es de ;min!.

El procedimiento a seguir es el siguiente+

Escoger las fracciones de 82L9 $ue se $uieran analizar ?al contrario $ue para la

microsecuenciacin autom'tica, en este caso conviene escoger fracciones $ue sugieran

la presencia de especies m1ltiples, con objeto de obtener m's informacin de una misma

muestra@. #ecar totalmente las fracciones elegidas en la centrfuga de vaco.

/esuspender la fraccin $ue se vaya a analizar en A ul de medio *8( metanol>agua

Av! con

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isotpica del in seleccionado. -dentificar el primer pico de la serie el de menor masa!,

y tomar nota de su masa m!. 9alcular la diferencia de masa existente entre los picos de

la serie+ la inversa de este n1mero es la carga del in z!

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