Análisis toxicológico por LC/MS 65 compuestos ... · Introducción – Enfoque a un método...

Análisis toxicológico por LC/MS

65 compuestos farmacéuticos y drogas

de abuso en orina en una sola

inyección

Jaume C. Morales

MS Product Specialist

Agilent Technologies Spain

Octubre 2011

MAD/BCN

Introducción – Enfoque a un método estándar para LC/MS :

Exhaustivo conjunto de compuestos farmacéuticos y

drogas de abuso

Agenda:

• Optima metodología del análisis utilizando un sistema Agilent LC/MS QQQ

• Herramientas de control y Software diseñadas para facilitar el desarrollo del

método

•Personalización de conjuntos de compuestos y metabolitos de diferentes

clases (opiáceos/ estimulantes/ sedantes/ otros de abuso).

• Enfoques en la preparación de la muestra – Dilución e inyección versus

técnicas de extracción SPE.

•Típicos resultados del rendimiento del método analítico

Listado de Compuestos Target y Metabolitos

estudiados (en orden de elución cromatográfica)

Opitates/Opiods ISTDs Stimulants ISTDsnor-Codeine d-Amphetamine

Morphine morphine-d6 MDA mda-d5

Oxymorphone methamphetamine

Hydromorphone hydromorphone-d6 MDMA mdma-d5

dihydrocodeine MDEA

naloxone phentermine phentermine-d5

Codeine codeine-d6 Benzoylecgonine benzoylecgonine-d8

Oxycodone ritalininc acid

naltrexone zopiclone zopiclone-d4

Hydrocodone hydrocodone-d6 Cocaine cocaine-d3

6-monoacetyl morphine 6-acetylmorphine-d6 Methylphenidate methylphenidate-d9

m-hydroxybenzoylecgonine Cocaethylene cocaethylene-d8

o-desmethyltramadol meprobamate

nor-Fentanyl norfentanyl-d5 fenfluramine fenfluramine-d10

tramadol tramadol-13c-d3

Heroin heroin-d9

tapentadol tapentadol-d3

N-desmethyltramadol

Meperidine meperidine-d4

Normeperidine

norbuprenorphine

Fentanyl fentanyl-d5

Trazodone

EDDP eddp-d3

Propoxyphene propoxyphene-d5

norpropoxyphene

Methadone methadone-d9

Buprenorphine buprenorphine-d4

Tie

mp

o d

e R

ete

nció

n





dihydrocodeine MDEA











Heroin heroin-d9


N-desmethyltramadol


Normeperidine

norbuprenorphine


Trazodone

EDDP eddp-d3


norpropoxyphene



Sedatives/Hypnotics ISTDs Abused/Other ISTDs7-aminoflunitrazepam PCP pcp-d5

zolpidem zolpidem-d6 Verapamil

Flurazepam carisoprodol carisoprodol-d7

Clonazepam clonazepam-d4 11-nor-9-carboxy-delta9-thc 11-nor-9-carboxy-delta9-thc-d9

Nitrazepam nitrazepam-d5

alpha-Hydroxytriazolam

Flunitrazepam

alpha-Hydroxyalprazolam

lorazepam

oxazepam

2-OH-ethylflurazepam

alpha-Hydroxyethylflurazepam

Triazolam

NorFludiazepam

desalkylflurazepam

alpha-hydroxymidazolam

Alprazolam alprazolam-d5

Temazepam

Chlordiazepoxide chlordiazepoxide-d5

Midazolam midazolam-d4

Desmethyl diazepam

Nordiazepam

diazepam diazepam-d5







Flunitrazepam


lorazepam

oxazepam



Triazolam

NorFludiazepam

desalkylflurazepam



Temazepam



Desmethyl diazepam

Nordiazepam


>65x Iones

positivos

Isobáricos – La separación cromatográfica es de

gran ayuda. Iones de masa Isobárica – “Definidos como iones diferentes que tienen masa idéntica”

Morphine

(C17H20NO3)

[M+H]+ = 286 m/z

Hydromorphone

(C17H20NO3)

[M+H]+ = 286 m/z

Codeine

(C18H22NO3)

[M+H]+ = 300 m/z

Hydrocodone

(C18H22NO3)

[M+H]+ = 300 m/z

Methamhetamine

(C10H16N)

[M+H]+ = 150 m/z

Phentermine

(C10H16N)

[M+H]+ = 150 m/z

Cromatografía –

Es la Base del Método Analítico

mo

rph

ine

hyd

rom

orp

ho

ne

co

dein

e

hyd

roco

do

ne

methamphetamine

ph

en

term

ine

Column: Zorbax Poroshell 120 SB C18 (2.1 x 100 mm 2.7µm)

Injection volume: 5 µL

Column Temp: 55°C (Analytical column)

Needle Wash: MeOH (100%)

Mobile Phase: Pump A = H2O & 5mM NH4 Formate & 0.01% Formic acid

Pump B = Methanol & 0.01% Formic acid

Flow rate : 0.5 ml/min

Stop time: 6.0 min

Equilibration time: 1.5 min

Gradient:

Time (min) %B

0.0 10

0.5 15

3.0 50

4.0 95

6.0 95

Agilent 1260 HPLC series Binary Pump, Well Plate Sampler, Thermostatic Column Compartment

Método HPLC Toxicológico – Screen/Quant

Exhaustivo en 6 min.

Columnas Poroshell 120 para HPLC y UHPLC:

Características de las Poroshell 120 :

• 80-90% eficacia de las sub 2um

• A ~40-50% menor presión

• 2X eficacia de 3.5um (totalmente porosa)

Sin el doble de presión de las 3.5um

• Frita de 2um para reducir obturaciones

• Límite de presión de 600 bar para el uso

en HPLC o UHPLC.

• La partícula porosa está formada por un

núcleo sólido de 1.7um diam. y una capa

porosa exterior con un grosor de difusión

de 0.5um.

Poroshell 120 es una opción de columna de alta eficacia y resolución

para mejorar la productividad en LC y LC/MS

1.7um

0.5um

0.5um

Poroshell 120 Resiste Obturaciones. Frita de 2 um

Vália para Plasma o Matrices similares

Columna: Poroshell 120 EC-C18, 3.0 x 50mm, 2.7um

LC: Agilent 1200 RRLC (SL)

Muestra: Plasma Precipitado

2 partes de Plasma

7 partes 20/80 Agua-ACN 0.1 % Ácido Fórmico

1 Parte Diflusinal 10 ug/ml en 50/50 Agua-ACN

Concentration final Diflusinal 1 ug/ml

Agitar y dejar reposar 10 minutos

SIN Centrifugado/ SIN Filtrado Volumen Inyección : 1ul

Canal A: Agua w/0.1 % TFA

Canal B: ACN 0.08 % TFA

Flujo 1 ml/min, Inyección1 ul

Tiempo % B

0 20

0.5 90

0.6 90

1.1 20

2.5 20

Test de ESFUERZO !!!

2500 Inyecciones consecutivas de Diflusinal en Plasma precipitado

¿Cómo evolucionan la PRESIÓN y la EFICACIA?

Poroshell 120 Resiste Obturaciones. Frita de 2 um

Vália para Plasma o Matrices similares

Diflusinal in Plasma

0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

200

220

240

260

280

300

320

340

360

380

400

1 501 1001 1501 2001 2501

Injections

Pre

ssu

re

0

20000

40000

60000

80000

100000

120000

140000

160000

180000

200000

Eff

icie

ncy (

N)

End Press

Plates

Columna: Poroshell 120 EC-C18, 3.0 x 50mm, 2.7um LC: Agilent 1200 RRLC (SL)

Muestra: Plasma Precipitado: 2 partes de Plasma: 7 partes 20/80 Agua-ACN 0.1 % Ácido Fórmico : 1 Parte Diflusinal

10 ug/ml en 50/50 Agua-ACN (Concentration final Diflusinal 1 ug/ml) Agitar y dejar reposar 10 minutos

SIN Centrifugado/ SIN Filtrado Volumen Inyección : 1ul

Canal A: Agua w/0.1 % TFA

Canal B: ACN 0.08 % TFA

Flujo 1 ml/min, Inyección1 ul

Tiempo % B

0 20

0.5 90

0.6 90

1.1 20

2.5 20

!Buena resistencia

con muestras de

Plasma!

Especificaciones de Fases Ligadas para Poroshell 120

Poroshell 120 EC-C18

Rango pH 2-9 Ideal para la

mayoría de fases móbiles LC/MS

Endcapped – mejor perfil de pico

Carga carbón – 8%

Superficie específica – 3.3 umol/m2

Poroshell 120 SB-C18

Rango pH 1-8 mayor resistencia a

muy bajo pH

Non-endcapped – para

selectividad mixta

Carga carbón – 7.5%

Superficie específica– 2.1 umol/m2

CHCH

CH

CH

CH

CH

O

SiO

O

O

O

Si

Si

Si

CHCH

CH

CHCH

CH

Si

3

3

3

3

3

3

3

3

3

3

3

3

Material Base: Tamaño de poro :120Å; Tamaño Particula : 2.7um; Superfície: 130 m2/g

O

R

R

Si

OH

Si

O

Si

R

R

R

O

OH

R

Endcapped Grupos Voluminosos

para mejor resistencia a

pH 1-2

Análisis Toxicológico Dirigido (Target) por QQQ

Observaciones :

El potencial de un conjunto tan abundante de compuestos (>65) podría mermar

las posibilidades de un instrumento QQQ, con limitaciones de dwell-time :

•Exhaustivo Barrido y Cuantificación en 6 min.

•Con Patrones Internos ( 20 )

•Curvas de Calibrado con Patrón Externo ( 65 )

•Con éstas condiciones, un método „normal‟ Multi Reaction Monitoring (MRM) de

MS/MS resultaría muy comprometido debido a la cantidad de analitos (2

transiciones x cada uno) además de los respectivos Patrones Internos

isotópicos.

• El número de MRMs en éste exhaustivo método asciende a >170 en éstas

condiciones.

•Es necesario enfocarlo a un análisis por Dynamic MRM

Dwell-time : tiempo que el QQQ dedica a cada transición en cada ciclo

¿Qué es MRM? (Multiple Reaction Monitoring)

170 210 250 290

210

222

268 280 165

Espectro con

iones de matriz

(fuente ESI)

Q1 deja pasar

solamente el

ión m/z 210

190 210

210

La Celda de

Colisión rompe

el ion m/z 210

en fragmentos

150 170 190 210

210 158

191

Q3 sólo deja pasar

los fragmentos

característicos del

ion mz/ 210 :

158 y 191 para

cuant y cual.

160

158

190

191

no hay ruido químico

Ions

Máximo

Dwell Time

Tiempo por ciclo

Determinado por Anchura de pico (>12 puntos por pico)

Número de MRMs

Concurrentes

El conflicto para las

condiciones perfectas de

adquisición

(*) 15 puntos por pico

MassHunter “Dynamic MRM”

Muchas aplicaciones requieren el barrido de 100 – 1000 compuestos en un método MRM

• Forensic analysis, Food and Environmental

• Subsequent quantitation of positives in dedicated methods

SIN Dynamic MRM

• Necesidad de programar manualmente múltiples segmentos para maximizar el dwell time

• Tarea tediosa y frágil para cromatogramas con desvíos de tiempos

CON Dynamic MRM

• Programación Automática de segmetos solapados sin intervención del usuario

• Menor número de MRMs por tiempo permite mayores dwell time/sensibilidad

• Inmune a desviaciones de Rt

Time (min) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25

Compounds (10/block)

Cycle Time (sec)

Max Coincident

Cycle Time (sec)

MRM

50 80

0.4 0.4 0.4 0.4

20 40 40

Dynamic MRM

0.5 0.8 1

30

Time Segment 1 Time Segment 2 Time Segment 3 Time Segment 4

0.7

100 70

Ciclos 2 x menores permiten manejar picos cromatográficos más estrechos,

más analitos y dwell times mayores por compuesto

Principios de funcionamiento de Dynamic MRM

Counts vs. Acquisition Time (min)

x105

1

2

3

4

5

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

Segmento 1 Segmento 2

Segmento 3

Segmento 4

Análisis por segmentos vs. MRM dinámico

MRM Dinámico: No hay segmentos de tiempo

La lista de MRM se confecciona de modo dinámico basándose en el RT de los compuestos de interés

Menor tiempo de ciclo/Mejor definición de pico

x3 x4 x4 x3 x4 x2 x1 Nº de Transiciones Concurrentes =

Rt

Selección de 24 transiciones de analitos Para ilustrar la eficacia de los Tiempos de Ciclo usando dynamic MRMs.

Tiempo de Ciclo

MRM dinámico

x3 x4 x4 x3 x4 x2 x1

Selección de 24 transiciones de analitos Para ilustrar la eficacia de los Tiempos de Ciclo usando dynamic MRMs.

Nº de Transiciones Concurrentes =

Tiempo de Ciclo

MRM dinámico

Time >>>

Abun

da

nce >

>>

Concurrent

Compounds

MRM dinámico - Simulación

Agilent 6420 QQQ MS

Fuente : Electrospray, ionización positiva

Condiciones de la fuente

Gas Temperature : 350°C

Gas Flow : 12 L/min

Nebulizer Pressure : 50 psi

Capillary : 2000 V

∆ EMV : 0 V

Dwell time : variable (en Dynamic MRM)

Condiciones del Método LC-MS/MS QQQ

Pain Management

Listado de algunas Drogas y Metabolitos y sus

condiciones de adquisición

(Dynamic MRM) Compound Name ISTD? Prec Ion MS1 Res Prod Ion MS2 Res Frag (V) CE (V) Ret Time

Ret Window Polarity

Oxymorphone 302.1 Unit 284 Unit 117 17 0.8 0.5 Positive Oxymorphone 302.1 Unit 227 Unit 117 29 0.8 0.5 Positive Morphine 286.2 Unit 165.1 Unit 158 41 0.85 0.7 Positive Morphine 286.2 Unit 152 Unit 158 60 0.85 0.7 Positive Hydromorphone 286.2 Unit 185 Unit 159 29 1.03505 0.7 Positive Hydromorphone 286.2 Unit 157 Unit 159 45 1.035667 0.7 Positive Codeine 300.2 Unit 165.1 Unit 158 45 1.76505 0.5 Positive Codeine 300.2 Unit 58.1 Unit 158 29 1.768633 0.5 Positive Naloxone 328.2 Unit 310 Unit 91 17 1.81 0.5 Positive Naloxone 328.2 Unit 211.9 Unit 91 41 1.81 0.5 Positive Oxycodone 316.2 Unit 298.1 Unit 143 17 1.911033 0.5 Positive Oxycodone 316.2 Unit 256.1 Unit 143 25 1.911033 0.5 Positive Naltrexone 342.2 Unit 324 Unit 117 21 1.99 0.5 Positive Naltrexone 342.2 Unit 55 Unit 117 41 1.99 0.5 Positive Hydrocodone 300.2 Unit 199 Unit 159 29 2.05 0.5 Positive Hydrocodone 300.2 Unit 128 Unit 159 65 2.05 0.5 Positive 6-monoacetyl morphine 328.2 Unit 165.1 Unit 158 41 2.072517 0.5 Positive 6-monoacetyl morphine 328.2 Unit 43.1 Unit 158 60 2.072517 0.5 Positive d-Amphetamine 136.1 Unit 119.1 Unit 66 5 2.177967 0.5 Positive d-Amphetamine 136.1 Unit 91 Unit 66 17 2.177967 0.5 Positive methamphetamine 150.1 Unit 119 Unit 92 5 2.2718 0.5 Positive methamphetamine 150.1 Unit 91 Unit 92 17 2.2718 0.5 Positive MDMA 194.1 Unit 163 Unit 97 9 2.284667 0.5 Positive MDMA 194.1 Unit 105 Unit 97 25 2.284667 0.5 Positive

Herramientas de control y Software diseñadas para

facilitar el desarrollo del método

MRM dinámico (DMRM)

Mejora de la sensibilidad basado en la

especificidad de la transición a su tiempo

tMRM Confirmación espectral de los target sin barrido

ni perdida de sensibilidad

Optimizer

Si no se dispone de Kits de Agilent permite

buscar los valores de adquisición óptimos

para la cuantificación

Fragmentor Voltage Collision Energy

QQQ Analyte Optimizer Máxima Sensibilidad

Optimización Automática de 2 Settings clave

Naloxone

220 V 200 V

180 V 160 V 100 V 80 V 60 V 40 V 140 V 120 V

Máximo a 130 V Optimización de Volatge de Fragmentor

25 eV

20 eV

35 eV

30 eV

40 eV

15 eV

10 eV

5 eV

Product Ion Spectra Overlaid;

(All Collision Energies)

Collision Energy = 20 eV

5 eV

15 eV

10 eV

25 eV

20 eV

FIA TIC – AFL B1

Optimización de la Energía de Colisión

Utilización del Optimizer

Resultado de la Optimización y Traslado al

Método

Fácil Desarrollo y Personalización del Método

Base de Datos que

contiene más de 200

compuestos.

Cada uno con

mútiples transiciones

MRM para asegurar

una rápida creación y

desarrollo del

método

Find By MRM (Cualitativo)

65 Analitos Toxicológicos /37 ISTDs (Ionización Positiva)

¿Que es Triggered MRM?

Threshold

Comp 3 supera el Umbral

Comp 3 dispara las Transiciones Adicionales

Ciclo Principal

Triggered cycle

Revisión de los espectros tMRM

Los espectros MRM pueden buscarse utilizando NIST LC/MS/MS o librerías própias

List of Analytes and ISTDs (a) (Listed in order of Elution)





dihydrocodeine MDEA











Heroin heroin-d9


N-desmethyltramadol


Normeperidine

norbuprenorphine


Trazodone

EDDP eddp-d3


norpropoxyphene



Incre

asin

g R

ete

nti

on

Tim

e

List of Analytes and ISTDs (b) (Listed in order of Elution)

Incre

asin

g R

ete

nti

on

Tim

e







Flunitrazepam


lorazepam

oxazepam



Triazolam

NorFludiazepam

desalkylflurazepam



Temazepam



Desmethyl diazepam

Nordiazepam


*NB – Not all ISTDs are shown in these slides

Matrices Comunes

• Orine

• Sangre

• Sangre directa

• Plasma

• Suero

Matrices Alternativas

• Fluido Oral

• Sudor

• Pelo

• Meconio

Matrices Típicas en el Análisi Toxicológico

Enfoques en la preparación de muestra (Orine)

•Diluir e inyectar

– Otras opciones incorporando:

• Inorganic acid hydrolysis

• Glucuronidase hydrolysis

– La más rápida preparación

– Puede sufrir de efecto matriz (supresión iónica) en muestras de alta carga.

– Menor sensibilidad

– Posibilidad de un alto numero de Falsos Negativos

•Extracción en Fase Sólida (SPE)

– Diferentes técnicas y fases dependiendo de la naturaleza ácida/básica del analito

– Un solo protocolo no es necesariamente bueno para todos los analitos en conjunto.

– Típicamente mayor tiempo de preparación de muestra

– Más caro

– Muestras más Limpias

– Mayor Sensibilidad

Preparación de muestra. SPE (Compuestos Básicos)

Paso 2: Plexa DAU (30 mg)

Sample 0.2 mL urine

Sample Pre-treatment Dilute 0.6 mL 100 mM KH2PO4

SPE-Conditioning 1/ 0.5mL MeOH

2/ 0.5 mL H2O

SPE-Washes 1/ 0.5mL 50% MeOH in H2O

2/ Dry for 5 minutes

Elution 0.5 mL 50:50:5

(EtAc:MeOH:NH3OH)

Las muestras se evaporaron hasta los ~200 μL y se añadieron

100 μL de HCl 0.2% en MeOH. Luego se evaporaron a sequedad y

se reconstituyeron en 100 μL de Ácido Fórmico 0.01%

Paso 1: 1ml orina + 100ul de β-glucuronidasa (requiere 6,200 units/ml de orina;

utilizando al menos 10,000 units/ml) 60°C durante 2 horas [β-glucuronidase usada (≥100,000 units/ml)]

Estudio de recuperación. SPE de Sedantes en

Orina (n=3) (Concentración – 100 ng/ml)

Group Compound RT Conc (ng/ml) Ave Conc (ng/ml) SD CV SPE % Recovery pre-SPE urine 7-aminoclonazepam 3.532 102.6 101.2 2315.0 7.8 83 post-SPE urine 7-aminoclonazepam 3.532 94.8 94.9 1263.3 3.5 pre-SPE urine 7-aminoflunitrazepam 3.963 91.3 93.5 4966.6 4.4 85 post-SPE urine 7-aminoflunitrazepam 3.972 87.1 86.3 3151.3 2.4 pre-SPE urine zolpidem 4.316 100.6 99.8 11946.8 3.8 89 post-SPE urine zolpidem 4.316 93.4 93.9 7135.0 2.0 pre-SPE urine Flurazepam 4.675 92.6 91.1 4637.8 2.6 91 post-SPE urine Flurazepam 4.675 91.6 88.9 5538.6 2.8 pre-SPE urine Nitrazepam 4.814 99.5 91.0 334.3 7.3 86 post-SPE urine Nitrazepam 4.814 84.8 86.1 121.0 2.3 pre-SPE urine Clonazepam 4.819 109.0 101.8 220.3 6.8 89 post-SPE urine Clonazepam 4.819 103.1 95.6 174.5 4.8 pre-SPE urine Flunitrazepam 4.870 99.8 99.6 24.8 0.2 91 post-SPE urine Flunitrazepam 4.879 101.3 96.9 231.9 1.7 pre-SPE urine alpha-Hydroxytriazolam 4.883 99.7 92.0 91.5 8.9 99 post-SPE urine alpha-Hydroxytriazolam 4.891 87.3 82.6 71.4 6.9 pre-SPE urine alpha-Hydroxyalprazolam 4.927 95.3 95.9 16.9 0.6 93 post-SPE urine alpha-Hydroxyalprazolam 4.936 91.0 90.6 136.9 4.9 pre-SPE urine oxazepam 4.964 101.0 93.6 227.6 7.0 72 post-SPE urine oxazepam 4.972 120.0 115.5 132.1 2.9 pre-SPE urine lorazepam 4.961 96.2 94.7 55.5 2.0 79 post-SPE urine lorazepam 4.969 109.4 106.4 345.7 9.7 pre-SPE urine 2-OH-ethylflurazepam 4.976 102.0 96.9 171.1 3.3 91 post-SPE urine 2-OH-ethylflurazepam 4.985 83.1 86.1 212.1 3.8 pre-SPE urine Triazolam 5.017 96.9 93.6 326.7 2.1 91 post-SPE urine Triazolam 5.034 82.0 83.7 523.4 3.1 pre-SPE urine desalkylflurazepam 5.031 104.2 102.2 99.2 1.7 92 post-SPE urine desalkylflurazepam 5.039 101.5 97.8 110.0 1.7

Estudio de recuperación. SPE de Sedantes en


(Continuación)

Group Compound RT Conc (ng/ml) Ave Conc (ng/ml) SD CV SPE % Recovery pre-SPE urine alpha-hydroxymidazolam 5.051 106.0 98.5 753.7 6.8 90 post-SPE urine alpha-hydroxymidazolam 5.051 89.3 88.8 56.2 0.5 pre-SPE urine Alprazolam 5.046 101.3 96.1 1628.1 5.2 92 post-SPE urine Alprazolam 5.046 98.6 92.9 274.5 0.8 pre-SPE urine Temazepam 5.055 111.6 105.8 1394.8 5.7 87 post-SPE urine Temazepam 5.055 110.4 107.9 841.6 3.0 pre-SPE urine Chlordiazepoxide 5.072 99.0 94.0 625.3 4.4 91 post-SPE urine Chlordiazepoxide 5.072 85.3 85.5 279.5 1.8 pre-SPE urine Midazolam 5.136 97.7 97.1 628.3 1.3 91 post-SPE urine Midazolam 5.144 90.1 89.6 313.2 0.6 pre-SPE urine Nordiazepam 5.115 101.4 98.7 475.9 5.6 79 post-SPE urine Nordiazepam 5.115 100.6 103.8 303.4 2.9 pre-SPE urine diazepam 5.190 96.2 96.6 1290.1 3.0 89 post-SPE urine diazepam 5.190 89.1 90.9 996.1 2.0

Sólo Oxazepam, Lorazepam y nordiazepam > 20% desviación respecto al 100%

Estudio de recuperación. SPE de Estimulantes en


Group Compound RT Conc (ng/ml) Ave Conc (ng/ml) SD CV SPE % Recovery pre-SPE urine d-Amphetamine 2.321 92.9 102.1 11315.7 18.0 119 post-SPE urine d-Amphetamine 2.321 96.4 96.4 26323.1 50.0 pre-SPE urine MDA 2.428 102.5 102.8 2568.7 4.0 79 post-SPE urine MDA 2.436 94.0 94.9 1458.5 1.8 pre-SPE urine methamphetamine 2.471 72.4 95.3 38330.9 29.0 187 post-SPE urine methamphetamine 2.471 81.1 37.3 73539.3 104.2 pre-SPE urine MDMA 2.526 97.7 97.6 13062.8 9.8 83 post-SPE urine MDMA 2.526 88.2 86.9 9206.6 5.8 pre-SPE urine m-hydroxybenzoylecgonine 2.522 113.0 102.7 4451.0 16.2 56 post-SPE urine m-hydroxybenzoylecgonine 2.522 123.0 127.8 3370.2 6.8 pre-SPE urine MDEA 2.869 93.7 98.6 26486.8 13.9 85 post-SPE urine MDEA 2.869 89.7 86.1 16577.3 7.4 pre-SPE urine phentermine 3.021 102.7 101.1 14665.2 21.2 145 post-SPE urine phentermine 3.021 93.4 93.9 28921.1 60.5 pre-SPE urine Benzoylecgonine 3.115 97.8 96.6 14245.2 8.9 74 post-SPE urine Benzoylecgonine 3.115 88.7 89.5 9569.7 4.4 pre-SPE urine zopiclone 3.504 99.8 98.0 5875.5 13.1 87 post-SPE urine zopiclone 3.496 88.4 90.5 1019.6 2.0 pre-SPE urine Cocaine 3.564 94.1 93.9 6839.4 2.3 89 post-SPE urine Cocaine 3.564 88.8 89.9 5901.3 1.8 pre-SPE urine Methylphenidate 3.618 95.1 94.3 43990.0 15.6 91 post-SPE urine Methylphenidate 3.626 90.0 89.9 32461.5 10.4 pre-SPE urine Cocaethylene 4.063 94.3 92.7 8144.6 2.6 90 post-SPE urine Cocaethylene 4.063 86.6 86.4 4341.2 1.3 pre-SPE urine meprobamate 4.111 96.4 106.9 198.5 10.4 12 post-SPE urine meprobamate 4.119 766.6 788.7 664.9 4.0 pre-SPE urine fenfluramine 4.169 103.5 112.6 107202.8 48.6 369 post-SPE urine fenfluramine 4.177 97.9 307.4 100109.1 167.5

MDA, m-hydroxyl y benzoylecgonine, fenfluramine & meprobamate > 20% desviación

respecto al 100%

Estudio de recuperación. SPE de Opiáceos en


Group Compound RT Conc (ng/ml) Ave Conc (ng/ml) SD CV SPE % Recovery pre-SPE urine Morphine 0.826 101.2 99.2 932.8 19.2 86 post-SPE urine Morphine 0.826 91.5 91.7 600.2 10.7 pre-SPE urine Oxymorphone 0.889 95.3 100.0 1062.3 13.0 84 post-SPE urine Oxymorphone 0.889 97.8 94.8 762.5 7.8 pre-SPE urine Hydromorphone 0.993 96.8 95.2 2125.1 12.0 88 post-SPE urine Hydromorphone 0.993 93.7 95.1 1662.7 8.2 pre-SPE urine dihydrocodeine 1.875 105.8 105.0 377.8 7.4 90 post-SPE urine dihydrocodeine 1.875 100.8 98.7 103.8 1.8 pre-SPE urine naloxone 1.904 108.0 105.7 3226.6 8.7 86 post-SPE urine naloxone 1.912 106.7 104.2 859.7 2.0 pre-SPE urine Oxycodone 2.090 100.8 103.2 2661.3 4.4 88 post-SPE urine Oxycodone 2.090 101.5 99.7 1378.7 2.0 pre-SPE urine naltrexone 2.221 108.9 106.5 4074.9 8.2 91 post-SPE urine naltrexone 2.221 102.5 98.9 1004.9 1.8 pre-SPE urine Codeine 1.885 106.3 108.1 432.3 5.3 91 post-SPE urine Codeine 1.885 100.5 100.3 312.1 3.5 pre-SPE urine Hydrocodone 2.275 96.8 95.7 2442.4 5.6 85 post-SPE urine Hydrocodone 2.275 91.3 92.0 1341.5 2.6 pre-SPE urine 6-monoacetyl morphine 2.331 93.8 93.4 5320.1 16.7 88 post-SPE urine 6-monoacetyl morphine 2.331 90.0 90.4 2244.3 6.2 pre-SPE urine o-desmethyltramadol 2.582 95.0 79.2 14312.1 6.2 90 post-SPE urine o-desmethyltramadol 2.582 67.4 71.5 4623.2 1.8 pre-SPE urine nor-Fentanyl 3.370 101.2 100.6 5409.1 6.0 90 post-SPE urine nor-Fentanyl 3.370 94.4 93.8 2520.9 2.5 pre-SPE urine Heroin 3.530 102.3 100.8 1092.6 6.4 86 post-SPE urine Heroin 3.530 96.4 95.0 171.0 0.9 pre-SPE urine tapentadol 3.653 95.3 94.9 8595.2 3.4 89 post-SPE urine tapentadol 3.661 88.0 87.9 3577.4 1.3 pre-SPE urine N-desmethyltramadol 3.733 105.1 92.0 107.5 3.1 88 post-SPE urine N-desmethyltramadol 3.739 82.1 84.5 244.8 6.2

Estudio de recuperación. SPE de Opiáceos en


(Continuación)

Group Compound RT Conc (ng/ml) Ave Conc (ng/ml) SD CV SPE % Recovery pre-SPE urine Meperidine 3.806 95.8 95.0 16106.6 18.7 99

post-SPE urine Meperidine 3.814 90.8 89.5 16999.1 19.7

pre-SPE urine Normeperidine 3.908 106.6 95.6 4350.0 4.2 87

post-SPE urine Normeperidine 3.908 86.6 89.5 1640.2 1.4

pre-SPE urine norbuprenorphine 4.353 108.7 103.3 264.6 5.0 89

post-SPE urine norbuprenorphine 4.353 99.0 100.6 173.6 2.9

pre-SPE urine Trazodone 4.478 106.9 104.8 6078.9 3.0 93

post-SPE urine Trazodone 4.478 94.4 96.9 10059.6 4.7

pre-SPE urine Fentanyl 4.480 96.3 95.1 5871.6 2.3 92

post-SPE urine Fentanyl 4.489 89.0 88.9 7241.8 2.7

pre-SPE urine EDDP 4.624 97.3 96.0 56239.5 29.0 98

post-SPE urine EDDP 4.624 88.7 88.3 47811.5 24.1

pre-SPE urine Propoxyphene 4.926 95.9 95.6 7883.8 10.7 90

post-SPE urine Propoxyphene 4.934 91.8 90.5 3998.0 4.9

pre-SPE urine norpropoxyphene 4.943 100.7 91.9 27.7 9.9 46

post-SPE urine norpropoxyphene 4.960 156.4 165.8 76.0 12.5

pre-SPE urine Methadone 4.979 94.3 94.0 5256.2 9.8 85

post-SPE urine Methadone 4.987 88.5 88.4 4579.0 7.3

pre-SPE urine Buprenorphine 5.116 95.9 92.0 392.1 3.2 87

post-SPE urine Buprenorphine 5.116 85.5 91.0 351.6 2.5

Norpropoxyphene > 50% desviación respecto al 100%

Estudio de recuperación. SPE de Otros en Orina

(n=3) (Concentración – 100 ng/ml)

Group Compound RT Conc (ng/ml)

Ave Conc (ng/ml)

Analyte Area Average SD CV

SPE % Recovery

pre-SPE urine ritalininc acid 3.094 90.5 67.4 28871.0 25225.0 3299.1 13.1 62 post-SPE urine ritalininc acid 3.094 78.2 91.0 38710.0 40514.3 1835.2 4.5 pre-SPE urine PCP 4.327 98.9 99.1 88003.0 149632.7 53840.7 36.0 163 post-SPE urine PCP 4.327 90.4 91.0 163315.0 91753.3 63149.9 68.8 pre-SPE urine Verapamil 4.824 92.9 86.2 33622.0 35222.7 1605.5 4.6 87 post-SPE urine Verapamil 4.824 81.5 83.7 40318.0 40451.0 1732.3 4.3 pre-SPE urine carisoprodol 4.949 92.5 91.3 18942.0 17446.7 1394.8 8.0 78 post-SPE urine carisoprodol 4.949 82.6 84.6 22199.0 22476.3 498.7 2.2

Ritalinic acid, PCP & carisoprodol > 20% desviación respecto al 100%

Preparación de Muestra – Diluir e Inyectar

Paso 2:

Sample Dilution in Water 1/10

Sample Pre-treatment 3K filtration @ 12,000 RPM

Centrifuge spin filter

Conditioning Decant Supernatant into

sampling well or vial.

Paso 1: 1ml orina + 100ul de β-glucuronidasa (requiere 6,200 units/ml de

orina;

utilizando al menos 10,000 units/ml) 60°C durante 2 horas [β-glucuronidase usada (≥100,000 units/ml)]

ó

1ml orine + 100ul de HCl 5M, 60°C durante 1 hora

Resultados de Sensibilidad 6420 QQQ Diluir/Inyectar (dil. 1/10) versus SPE

Compuesto

D/Shoot LLOQ

(ng/ml)

SPE LLOQ

(ng/ml) ULOQ

(ng/ml)

6-monoacetyl morphine 10 <1 1000

buprenorphine 10 1 1000

codeine 25 <1 1000

dihydrododeine 25 <1 1000

EDDP 10 <1 1000

fentanyl 1 <1 1000

heroin 10 <1 1000

hydrocodone 10 <1 1000

hydromorphone 5 <1 1000

meperidine 5 <1 1000

methadone 10 <1 1000

morphine 5 <1 1000

naloxone 5 <1 1000

naltrexone 10 <1 1000

N-desmethyltramadol 10 1 1000

norbuprenorphine 25 3 1000

norfentanyl 1 <1 1000

normeperidine 5 <1 1000

norpropoxyphene 5 <1 1000

o-desmethyltramadol 5 <1 1000

oxycodone 10 <1 1000

oxymorphone 5 <1 1000

propoxyphene 5 <1 1000

tapentadol 5 <1 1000

tramadol 1 <1 1000

trazodone 1 <1 1000

Compuesto

D/Shoot LLOQ

(ng/ml)

SPE LLOQ

(ng/ml) ULOQ

(ng/ml)

2-OH-ethylflurazepam 200 5 1000

7-aminoclonazepam 10 <1 1000

7-aminoflunitrazepam 5 <1 1000

alpha-OH-midazolam 10 <1 1000

alprazolam 10 <1 1000

a-OH-alprazolam 20 <1 1000

a-OH-triazolam 50 <1 1000

chlordiazepoxide 10 <1 1000

clonazepam 25 to 50 <1 1000

desalkylflurazepam 20 1 1000

diazepam 10 <1 1000

flunitrazepam 10 1 500

flurazepam 5 1 1000

lorazepam 50 20 1000

midazolam 10 <1 1000

nitrazepam 25 5 1000

nordiazepam 25 <1 1000

oxazepam 50 25 1000

temazepam 25 <1 1000

triazolam 5 <1 1000

zolpidem 5 <1 1000

Op

iác

eo

s

Sed

an

tes

Resultados de Sensibilidad 6420 QQQ

Diluir/Inyectar (dil. 1/10) versus SPE (continuación)

Estimulantes Otros

Compound

D/Shoot LLOQ

(ng/ml)

SPE LLOQ

(ng/ml) ULOQ

amphetamine 5 <1 1000

benzoylecgonine 5 <1 1000

cocaethylene 5 <1 1000

cocaine 5 <1 1000

fenfluramine 1 <1 1000

MDA 5 <1 1000

MDEA 1 <1 1000

MDMA 5 <1 1000

meprobamate 10 5 1000

methamphetamine 1 <1 1000

methylphenidate 5 <1 1000

m-hydroxybenzoylecgonine 10 <1 1000

phentermine 1 <1 1000

zopiclone 5 <1 1000

Compound

D/Shoot LLOQ

(ng/ml)

SPE LLOQ

(ng/ml) ULOQ

11-nor-9-carboxy-THC - 25 -

carisoprodol 5 1 1000

PCP 1 <1 1000

ritalinic acid 5 1 1000

verapamil 2 <1 1000

Rendimiento de la Poroshell 120

después de 3000 inyecciones (Dil e Iny)

Analito %RSD

(RT)

Analito

%RSD

(RT)

Analito %RSD

(RT)

Morphine 0.7 Meperidine 0.4 Triazolam 0

Codeine 0.4 zolpidem 0.3 Naltrexone 0.1

hydrocodone 0.4 Fentanyl 0.1 chlordiazepoxide 0.1

MDMA 0.3 EDDP 0.1 Desmethyl

diazepam

0.1

norFentanyl 0.2 Nitrazepam 0.1 Buprenorphine 0.3

Heroin 0.2 Propoxephine 0.1 Cocaethylene 0.2

Methyl

Phenidate

0.2 Buprenorphine 0.3 11-nor-9-carboxy-

delta9-thc

0

Muestra de algunos de los analitos en el análisis de 6 min.

Estado de la fuente Ortogonal ESI después de 3000

inyecciones (Dil e Iny) (3.5 semanas consecutivas)

Nebulizador

Spray Shield/Entrada MS/Capilar

Compounds at a Glance – Panel de revisión

mostrando 8ng/ml de cada analito en Orina.

Ejemplos de Calibración en Orina 0.5ng/ml1000ng/ml

Carisoprodol

Fenfluramine Propoxyphene

EDDP

R2=0.99602 R2=0.99934

R2=0.99852 R2=0.99651

Exhaustivo Estimulantes

Sedantes Otros

Opiáceos

Análisis ¿Exhaustivo o Personalizado?

Agilent ha desarrollado un

nuevo LC Triple Quad cada

año desde 2007

6460

Triple

Quad

6430

Triple

Quad

6420

Triple

Quad

6490

Triple

Quad

6460

Triple

Quad

Ren

dim

ien

to

La última tecnología en LC Triple Quads

6420

Easy Choice – Rango medio

Análisis de trazas en

rutina

6430

6460

Cuantificación Rutinaria

Tecnología

iFunnel

Análisis de Ultra-

trazas y alta

velocidad

6490

N U E V O 6 4 9 0 L C / M S T R I P L E C U A D R U P O L O

¡Sensibilidad a niveles de Zeptomol!

Prestaciones máximas en un tamaño más reducido

iFunnel Technology • Un nuevo paradigma en el muestreo de iones a presión atmosférica

• 10X sensitivity en ESI

• Mejora de la robustez de los ensayos y simplifica la

preparación de muestra

Celda de colisión curvada

• Transmisión muy eficiente; ruido minimizado

• Diseño compacto

Nuevas posibilidades en scan

• Aislamiento del ion precursor a 0.4 m/z precursor,

que reduce interferencias

• Dynamic MRM (DMRM)

• Triggered MRM (tMRM)

¿Qué es un Zeptomol?

Page

55

¿¿¿¿ Zepto ??? FACTOR POR EL QUE HAY QUE MULTIPLICAR

LA UNIDAD MULTIPLO PREFIJO

ABREVIATU

RA

0,1 mol 10-1 mol decimol dM

0,01 mol 10-2 mol centimol cM

0,0001 mol 10-3 mol milimol mM

0,0000001 mol 10-6 mol micromol μM

0,0000000001 mol 10-9 mol nanomol nM

0,0000000000001 mol 10-12 mol picomol pM

0,0000000000000001 mol 10-15 mol femtomol fM

0,0000000000000000001 mol 10-18 mol atomol aM

0,0000000000000000000001 mol 10-21 mol zeptomol zM

0,0000000000000000000000001 mol 10-24 mol yoctomol yM

602 moleculas

< 1molécula

C U A N T I F I C A C I Ó N - S E N S I B I L I D A D

“…sólamente somos capaces de detectar

1 de cada 103 a 105 iones

generados por electrospray (ESI) a presión

atmosférica con los diseños instrumentales

actuales.”

(Page, Smith, et al; JASMS, 2007, 18, 1582-1590)

iFunnel Technology Captura x10 veces más Iones

Página

57

Hexabore Capillary

• Capilar con 6 entradas.

• Muestrea x10 más gas

rico en iones de la fuente.

• Captura la mayor parte del

gas de la región de la

fuente.

Agilent Jet Stream

• Confinamiento térmico

de la pluma de ESI.

• Muy eficiente

desolvatación para crear

iones en fase gaseosa.

• Crea una zona rica en

iones.

Dual Ion Funnel

• Elimina el gas, pero

captura los iones

• Elimina el ruido de

neutros

• Prolonga la vida útil de

la bomba turbo

4-26m

Ion Funnel de 2 Etapas Desalineadas

1ª Etapa: 8-12 Torr 2ª Etapa: 1-3 Torr

• Elimina una elevada carga de gas

• Reduce neutros

• Mejora la robustez

• Transmite iones muy

eficientemente hacia óptica de Q1

2 etapas desalineadas -----: favorece la transmisión de sólo iones

Página

58

Innovaciones Instrumentales Triple Cuadrupolos

LC/MS: 6460 vs 6490

6460 LC/MS (Skimmer Configuration)

6490 LC/MS (iFunnel Configuration)

HB Cap Dual Ion Guía de Q1

Funnel Iones

por RF

Curved Collision cell

Q3

Ion Detector

Ion Detector

Cap Guía de Q1 Celda Q3

Iones Colisión

por RF

AJS

AJS

con

Aceleración

Lineal

Axial

con

Aceleración

Lineal

Axial

Skimmer

Página 59

6460 LC/MS (Skimmer Configuration)

6490 LC/MS (iFunnel Configuration)

HB Cap Dual Ion Guía de Q1

Funnel Iones

por RF

Curved Collision cell

Q3

Ion Detector

Ion Detector

Cap Guía de Q1 Celda Q3

Iones Colisión

por RF

AJS

AJS

con

Aceleración

Lineal

Axial

con

Aceleración

Lineal

Axial

Skimmer

Página 60

Innovaciones Instrumentales Triple Cuadrupolos

LC/MS: 6460 vs 6490

Nueva celda de colisión Curvada, Cerrada y

Convergente con Aceleración Lineal Axial Efficient Ion

Transmission over wide mass range. Reduces transmission of ionized generated noise

Mayor Apertura

(5 mm) de

Entrada Accepta más

Iones

Menor Apertura

(3.5mm) de

Salida Focaliza

mejor los Ionss dentro

de MS2

RF & DC

Voltages Set

Confinement and

Axial Acceleration:

SIN efecto “Cross Talk”

Página 61

Frecuencia Electrónica Cuadrupolo 6490: 1.4 MHz

• Una frecuencia más alta

produce más ciclos de

movimiento de iones en el

cuadrupolo

• Más ciclos de movimiento de

iones dan una mayor resolución

de masas – el 6490 se puede

sintonizar automáticamente

desde 0,4 m / z

• Una frecuencia más alta unidad

reduce rango de masas hasta

1400 m / z

Página 62

Análisis Cuantitativo de THC, 6-MAM, Morfina,

Fenobarbital, nor- y buprenorfina

Agilent 6490 QQQ LC/MS

acoplado a un 1290 Infinity

UHPLC

Objetivo

Demostrar el alto rendimiento del QQQ Agilent 6490 para el

análisis de varios compuestos de interesante desafío por su

baja respuesta.

(THC, 6-MAM, Morfina, Fenobarbital, Nor- y Buprenorfina)

Específicamente en lo referido a :

Sensibilidad MRM

Especificidad

Reproducibilidad

Analitos

buprenorfina

C29H41NO4

467.64

THC

C21H30O2

314.45

norbuprenorfina

C25H35NO4

413.55

6-acetyl morfina

C19H21NO4

327.374

morfina

C17H19NO3

285.34

http://en.wikipedia.org/wiki/Carbon

http://en.wikipedia.org/wiki/Hydrogen

http://en.wikipedia.org/wiki/Nitrogen

http://en.wikipedia.org/wiki/Oxygen












Información y preparación de muestra

• Se dispone de patrones nuevos para cada uno de los siguientes analitos

así como de sus respectivos patrones internos de marcaje isotópico :

• delta-9-tetrahidrocanabinol

• morfina

• 6-acetilmorfina

• buprenorfina

• norbuprenorfina

• Reconstitución :

• ISTDs preparados a una concentración fija de 50ng/ml

• Todos los patrones se diluyeron en saliva sintética e inyectados

directamente en columna.

Método: 1290 Infinity UHPLC (THC, 6-MAM, Morfina, Fenobarbital, Nor- y Buprenorfina)

UHPLC Agilent 1290 Infinity

Bomba Binaria, Automuestreador de pocillos, compartimento de columna

termostatizado, 1200 binary pump

Columna: Zorbax poroshell SB C18, 2.1x100 mm, 2.7 um

Temp. Columna: 55 ºC

Volumen Inyección : 10 L

Temp. Automuestr. : 5 ºC

Limpieza de aguja : flushport (MeOH:H2O 75:25), 5 seconds

Fae Mobil: A = Formiato Amónico 5mM, 0.1% Ácido Fórmico en Agua

B = Metanol

Flujo: 0.5 mL/min

Gradiente: Tiempo (min) %B

0.0 10

0.5 15

3.0 50

4.0 95

Stop time: 6.0 min

Post time: 2.0 min

Métod0: 6490 MS MS: Agilent 6490 triple cuadrupolo LC/MS/MS

QQQ MS Conditions

Fuente Jet Stream, positive

Source conditions:

Gas temperature 250 ºC

Drying gas (nitrogen) 14 L/min

Nebulizer gas (nitrogen) 45 psi

Sheath gas temperature 380 ºC

Sheath gas flow (nitrogen) 11 L/min

Capillary voltage 3000 V

Nozzle voltage 0 V

Fragmentor 380 V

MRM acquisition:

Delta EMV 000V

Frag (V) CE (V) Cell Acc (V) Polarity

380 45 5 Positive

380 41 7 Positive

380 40 5 Positive

380 41 7 Positive

380 24 5 Positive

380 41 7 Positive

380 20 5 Positive

380 20 5 Positive

380 24 5 Positive

380 41 7 Positive25Morphine No 286.2 Widest / Wide

(6490)

165.1 Wide / Unit (6490)

25

morphine d3 No 289.17 Widest / Wide

(6490)

201 Wide / Unit (6490) 25

delta9-THC No 315.23 Widest / Wide

(6490)

193.1 Wide / Unit (6490)

25

delta9-THC d3 No 318.2 Widest / Wide

(6490)

196.1 Wide / Unit (6490) 25

6-monoacetyl

morphine

No 328.2 Widest / Wide

(6490)

165.1 Wide / Unit (6490)

25

6-acetyl morphine

d6


(6490)

211.1 Wide / Unit (6490) 25

norbuprenorphine No 414.3 Widest / Wide

(6490)

101.1 Wide / Unit (6490)

25

nor-buprenorphine

d3


(6490)

101.1 Wide / Unit (6490) 25

Buprenorphine No 468.3 Widest / Wide

(6490)

396.2 Wide / Unit (6490)

MS2 Res Dwell

buprenorphine d4 No 472.34 Widest / Wide

(6490)

88 Wide / Unit (6490) 25

Cpd Name ISTD? Prec Ion MS1 Res Prod Ion

Cromatografía (5ng/ml en saliva)

6-MAM

norbuprenorphine

morphine buprenorphine

THC

LOQ Morfina – 50pg/ml (50 ppt)

Morfina. Recta de calibrado : 0.01-1000 ng/mL

(n=3)

R2>0.996

LOQ 6-acetilmorfina – 50pg/ml (50ppt)

6-acetilmorfina. Recta de calibrado : 0.01-1000 ng/mL

(n=3)

R2>0.998

LOQ Norbuprenorfina – 500pg/ml (500ppt)

Norbuprenorfina. Recta de calibrado : 0.5-1000 ng/mL

(n=3)

75 For Research Use

Only.

R2>0.989

LOQ Buprenorfina – 500pg/ml (500ppt)

Buprenorfina. Recta de calibrado : 0.5-1000 ng/mL (n=3)

R2>0.992

LOQ Delta9-THC – 500pg/ml (500 ppt)

Resumen de los LOQ con 6490 QQQ (Inyección directa de saliva sintética)

Analito LOQ

(S/N>10)

Linearidad %RSD

Promedio

Morfina 50pg/ml R2>0.996 6

6-MAM 50pg/ml R2>0.998 5

norbuprenorfina 500pg/ml R2>0.989 7

buprenorfina 500pg/ml R2>0.992 5

Delta9-THC 500pg/ml R2>0.916 24

Resumen y conclusiones

•El poder del método exhaustivo está basado en una buena separación cromatográfica.

•El rango lineal típico de los analitos viene a ser de 1 a 1000 ng/ml (0.01 a 1000 para 6490)

•La funcionalidad Dynamic MRM, la Optimización Automática, y la base de datos de transiciones MRM ayudan a un desarrollo del método más directo y rápido.

•Se han comparado las técnicas de preparación de muestra SPE y “Diluir e inyectar”

•La sensibilidad del método por técnicas de SPE es claramente superior a técnicas de “Diluir e inyectar”, PERO son más caras y toman más tiempo.

Agradecimientos

Kevin McCann & Peter Stone

LC/MS Application Champions

Agilent Technologies Inc,

Santa Clara, California.

C L E A R LY B E T T E R M S S O L U T I O N S

Mass Spectrometry

Technology

Products

Solutions

NUEVO

¿Preguntas?

Jaume C. Morales

Especialista de Producto MS

Agilent Technologies Spain

901.11.68.90

[email protected]

NUEVO

mailto:[email protected]

Análisis toxicológico por LC/MS 65 compuestos ... · Introducción – Enfoque a un método...

Documents

Transcript of Análisis toxicológico por LC/MS 65 compuestos ... · Introducción – Enfoque a un método...