Anticuerpos monoclonales
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OBTENCION DE OBTENCION DE
ANTICUERPOS ANTICUERPOS
MONOCLONALESMONOCLONALES
Esmeralda MurciaEsmeralda Murcia
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TOPICOSTOPICOS
1. Antecedentes1. Antecedentes
2. Aspectos técnicos2. Aspectos técnicos
3. Aplicaciones3. Aplicaciones
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TEORIA DE LA SELECCION TEORIA DE LA SELECCION CLONALCLONAL
El Ag activa un clon específico preexistente de El Ag activa un clon específico preexistente de linfocitos B induciendo proliferación linfocitos B induciendo proliferación
Cada linfocito B sintetiza unicamente una clase Cada linfocito B sintetiza unicamente una clase de inmunoglobulina específicica para el antígenode inmunoglobulina específicica para el antígeno
Burnet, F.M. Australian Journal of Science 20:67-69, 1957.Burnet, F.M. Australian Journal of Science 20:67-69, 1957.
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SE BUSCASE BUSCA
Fuente contínua de Ac
Especificidad pre-definida
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ANTECEDENTESANTECEDENTES
1962 Fusión por el virus Sendai1962 Fusión por el virus Sendai OkadaOkada
1962 Inducción de plasmacitomas1962 Inducción de plasmacitomas Potter y BoycePotter y Boyce
1964 Medios selectivos HAT1964 Medios selectivos HAT LittlefieldLittlefield
1970 Cultivo continuo de plasmacitomas1970 Cultivo continuo de plasmacitomas Horibata y HarrisHoribata y Harris
1973 Fusión de células de mieloma1973 Fusión de células de mieloma Cotton y MilsteinCotton y Milstein
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INMORTALIZACION DE INMORTALIZACION DE CELULAS BCELULAS B
Cultivo continuo de células fusionadas Cultivo continuo de células fusionadas secretoras de anticuerpos con secretoras de anticuerpos con especificidad predefinida especificidad predefinida
Köhler, G. Milstein,C. Nature 256 :1 495-7. 1975
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TOPICOSTOPICOS
1. Antecedentes1. Antecedentes
2. Aspectos técnicos2. Aspectos técnicos
3. Aplicaciones3. Aplicaciones
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ASPECTOS TECNICOSASPECTOS TECNICOS
InmunizaciónInmunización FusiónFusión
TamizajeTamizaje
ClonaciónClonación
CaracterizaciónCaracterización
PurificaciónPurificación
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INMUNIZACIONINMUNIZACION
Inmunización primariaInmunización primaria Inmunización secundariaInmunización secundaria Inmunización in vitroInmunización in vitro
Ag
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FUSIONFUSION
Biológica: Biológica: Virus SendaiVirus Sendai
Química:Química: PolietilenglicolPolietilenglicol
Física:Física: ElectrofusiónElectrofusión
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CELULASCELULAS
LINFOCITO BLINFOCITO B
BALB/cBALB/c Crecimiento limitadoCrecimiento limitado AnticuerposAnticuerpos HGPRTHGPRT++
ESPECIFICIDADESPECIFICIDAD
P3 X63 Ag8.653P3 X63 Ag8.653
Tumoral plasmáticaTumoral plasmática Crecen in vitro Crecen in vitro c-mycc-myc HGPRTHGPRT--
INMORTALIDADINMORTALIDAD
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SINTESIS DE NOVO
5- aminoimidazol 4-carboxinucleótido UMP
DHFR DHFR
Acidos Acidos
GMP IMP AMP TMP
Nucleicos Nucleicos
HGPRT HGPRT APRT TK
G H A T
VIA DE SALVAMENTO
A A
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TAMIZAJETAMIZAJE
ELISAELISA
RIARIA
InmunofluorescenciaInmunofluorescencia
InmunoblotInmunoblot
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CLONAJECLONAJE
Agar semi sólidoAgar semi sólido
Dilución límiteDilución límite
Sorter (Citómetro Sorter (Citómetro de flujo) de flujo)
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EXPANSIONEXPANSION
IN VITROIN VITRO
Cultivo celularCultivo celular
Larga escalaLarga escala
Mayor costoMayor costo
AdaptaciónAdaptación
10-6010-60g/ml g/ml
IN VIVOIN VIVO
AscitisAscitis
ManipulaciónManipulación
Menor costoMenor costo
PurificaciónPurificación
1-10 mg/ml1-10 mg/ml
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CARACTERIZACIONCARACTERIZACION
OuchterlonyOuchterlony
ELISA isotypingELISA isotyping
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PURIFICACIONPURIFICACION
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APLICACIONESAPLICACIONES
MOLECULAS ASOCIADAS A SUPERFICIEMOLECULAS ASOCIADAS A SUPERFICIE
Diagnostico de infecciones.Diagnostico de infecciones. Diagnóstico e inmunolocalización de tumores.Diagnóstico e inmunolocalización de tumores. Determinación de tipos celulares.Determinación de tipos celulares.
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APLICACIONESAPLICACIONES
MOLECULAS SOLUBLESMOLECULAS SOLUBLES
Determinación y/o cuantificación de proteínas, Determinación y/o cuantificación de proteínas, hormonas, enzimas medicamentos y drogas hormonas, enzimas medicamentos y drogas entre otros.entre otros.
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CONJUGACIONCONJUGACION
![Page 24: Anticuerpos monoclonales](https://reader036.fdocuments.es/reader036/viewer/2022062319/556e53fad8b42a2c658b4f4a/html5/thumbnails/24.jpg)
![Page 25: Anticuerpos monoclonales](https://reader036.fdocuments.es/reader036/viewer/2022062319/556e53fad8b42a2c658b4f4a/html5/thumbnails/25.jpg)
AcMo anti - AcMo anti - tubulina tubulina
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AcMo anti-FNTAcMo anti-FNT