A B O R A T O R I O D E D I A G N O S T I C O V I R O L Ó G I C O D E L C I E N I

“Evolución de las pruebas para el diagnóstico de la infección por VIH”

Q. C Ramón Hernández JuanCentro de Investigación de Enfermedades Infecciosas

Laboratorio de Diagnóstico VirológicoINER.

Hospital GeneralMéxico, CDMX 3 de Junio de 2017.

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Historia

Inve

stig

ació

n

• 1985 HTLV III.• Mayo de 1986,

clasificado como Human InmunodeficiencyVirus HIV-1.

Des

arro

llo • 2 de marzo 1985 FDA, ensayo de diagnóstico para VIH.

• ABBOTT, como monitoreo a donadores.

• Algoritmo de diagnóstico.

Labo

rato

rio

• Ensayos de 1, 2,3 , 4, 5 …….. generación.

• Pruebas rápidas• Ensayos de

Ácidos nucleicos

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Historia natural

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Primera Generación: 1985

ELISA INDIRECTO HTLVIII - VIH-1

IgG VIH-1

HTLV III

Uso Falsos Positivos Prueba confirmatoria

TamizajeDonadores de Sangre

Individuos bajo riesgo

IFA (HTLVII

Periodo de ventana de 8-10 semanas

Embarazo Western Blot

Anti-IgG VIH-1

Señal D.O

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Algoritmo

Confirmación

Western blot IFA (HTLV III)

Resultado

Positivo Positivo

Prueba

ELISA IgG VIH-1 ELISA IgG VIH-1

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Segunda generación

ELISA INDIRECTO VIH-1, 2

IgG VIH-1 IgG VIH-2

Proteínas Virales VIH-1 y Grupo O

Anti-IgG VIH-2Anti-IgG VIH-1

Proteínas Virales VIH-2

Usos Falsos Positivos

Prueba Confirmator

Donadores de sangre

Embarazo Wester Blot

Diagnóstico Otras infecciones: autoinmunes

ReducciónVentana 4-6 semanas.

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Algoritmo

ELISA VIH-1/VIH-2

• Positivo en duplicado• Western blot

ELISA VIH-1/VIH-2

• Positivo/Negativo• Indeterminado

ELISA VIH-2

• Positivo en duplicado• Pruebas HIV-2, WB

Reportar como VIH +

Ensayo VIH-2

Seguimiento

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Tercera generación

ELISA sándwich VIH-1, 2 IgG e IgM

Antígenos recombinantes

Proteínas Virales 1, grupo O

Proteínas Virales

Ac´s IgMAc´s IgG

Usos Falsos Positivos Pruebaconfirmatoria

DiagnósticoIndividuos bajo riesgo.Enfermedadesautoinmunes

Western Blot.

Periodo de ventana 3 semanas Embarazo

HIV PCR:< 18 meses.Alto costo.Poco accesibles.

señal

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Algoritmo

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Cuarta generación: finales de los 90´s

ELISA sándwich VIH-1, 2 IgG e IgM + Antígeno p24

p24

Ac´s IgG

Ac´s IgM

señalseñal

2010 FDA Sensibilidad vs Especificidad.

Pruebas Confirma

BIORAD HIV-1COMBO Ac-Ag

Especificidad 100 %Sensibilidad 99.9-100 %

Ventana 11-14 díasWestern Blot.

ARCHITEC ABBOTT, COMBO (QUIMIOLUMINISCENCIA)

Especificidad 99.94 %Sensibilidad 99.5 %

Ventana de 11-14 días.

Ensayos de Ácidos nuNAT´s.

HIV-1 RNA qualitativeassay

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Algoritmo

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Quinta generación: 2015

ELISA sándwich VIH-1, 2 IgG e IgM + Antígeno p24

p24

señalseñal

señal

IgG

IgM

Aprobación FDA 2015 Sensibilidad vs Especificidad.

Pruebas Confirmato

BIO-RAD Bioplex 2200 HIV Ag/Ab.

Detecta Antígeno y Anticuerpos de VIH-1 por separado.

100 % sensibilidad y 99.5 % especificidad.

Ventana: 11 días

Westren Blot

NAT´s

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Pruebas rápidas

Sala de urgencias, salas de unidad de cuidados intensivos, UTI.Diseño aplicado en tarjetas de fase solida.Sangre completa, suero y fluidos oralesAprobado FDA.

3 generación

4.5 generación

4 generación

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Algoritmos con pruebas rápidas

Stevinson et al. / Journal of Virology 52S (2011)

S33

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Continuación …….

Diagnóstico de HIV-1 y HIV-2.Recomendado en los algoritmos de CDC, para diagnóstico diferencial de infección por VIH-1 o VIH-2.

Sensibilidad del 100 %.Especificidad del 96 %

Journal of Clinical Virology 52S (2011) S41– S44

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Ensayos de ácidos nucleicos. NAT

En países desarrollados a principios de 2000´s.– 33 países para HIV-1.– 27 países para HBV.

– Altamente sensible y especifico para ácidos nucleicos virales.• RNA• DNA

• Reduce el periodo de ventana:– HBV 10.34 días.– HCV 1.34 días.– HIV 2.93 días.

» Resolver FALSOS POSITIVOS (donadores)

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NAT continuación

Tecnología especializada y costosa.Infraestructura especializada y en condiciones controladas.Personal calificado.

• Evaluación de la incidencia y prevalencia en la población donadora.

• Mejores resultados cuando se suma a la pruebas de serología.

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Resumen

Año 1985 1987 1991 1997 2015

generación 1st 2nd 3rd 4th 5th

Ventana (semanas)

10-12 4-6 2-3 2 2

Prueba confirmatoria

Western blot, IFA

HIV-1 WB, HIV-2 ELISA y

WB

HIV-1 WB, HIV-2 ELISA y

WB

HIV 1-2 diferencias, HIV-1 RNA

qPCR

NAT´s

IgG, lisado virales HTLV II IgG HIV-1/HIV-2

IgG/IgM, HIV-2, Grupo O

IgG/IgM/Grupo O, Ag p24

IgG/IgM/Grupo O/Ag p24

E=95 %S=99 %

E = >99.5%S = >99.5 %

E= 99.5 %S= 100%

E=> 99 %S=> 99.5 %

E= 99.5%S= > 99.8 %

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Centro de Investigación en Enfermedades Infecciosas:

•Catalogo de pruebas Laboratorio de Diagnóstico Virológico:

1. SEROLOGIA: VIH, HBV, HCV, TOXO, CM2. PCR EN TIEMPO REAL: VIH, CMV, EBV,

JC/BK, B19, HHV8.3. GENOTIPO: VIH, HCV y HBV, VPH.4. PCR PUNTO FINAL: HERPES FAMILY

VIRUS5. CITOMETRIA DE FLUJO:

CD4/CD3/CD8/CD45.6. GENEXPERT: MTB/RIF, MRSA, INFLUEN

(A,HINI2009,B).

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NOM-010 Prevención y control de la infección por el VIH.

.1. Pruebas de tamizaje: presencia de anticuerpos contra el VIH en el suero o plasma, demostradalguno de los siguientes métodos:.1.1. Ensayo Inmunoenzimático (ELISA)..1.2. Aglutinación pasiva..2. Pruebas suplementarias: presencia de anticuerpos contra el VIH en el suero o plasma

demostrada por alguna de las pruebas siguientes:.2.1. Inmunoelectrotransferencia (Prueba de Western blot)..2.2. Inmunofluorescencia, o.2.3. Radioinmunoprecipitación (RIPA), o.3. Pruebas específicas: determinan la presencia del virus o algún componente del mismo, como son.3.1. Cultivo de virus..3.2. Determinación de antígeno viral..3.3. Reacción en cadena de la polimerasa, para determinar el ARN viral o ADN proviral.

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Cinco principios: OMS

Consentimiento informado.Confidencialidad.Facilitación de orientación (o asesoramiento).Garantía de que los resultados de la prueba son correctos.Vinculación con la asistencia, el tratamiento y otros servicios.

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LABORATORIO DE SEROLOGÍA

SEROLOGÍA EVOLIS BIO-RAD: LI21,LI28,LI29,LI35 SEROLOGÍA VIDAS BIOMERIEUX:

LI34,LI37,LI17,L28,LI49,LI50,LI34

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•DISEÑADO PARA SU USO EN TODO EL MUNDO.•VIH-1 GRUPO M(A,B,C,D,E,F,G,H)•GRUPO O.•GRUPO N.•VIH-2

Cuarta generación combo Ac-Ag

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Cuarta generación combo Ac-Ag

• Determinación combinada de aHIV-1 (groups M and O) y anti-2 + Antígeno p24 de VIH-1.

• Lectura o señal de Ag y Ab.• Alta sensibilida para Ag p24.• Fácil de usar.

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WESTERN BLOT

LI35,LI52,LI12

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CIENI, Laboratorio de Diagnóstico Virológico.

Prueba confirmatoria:Western blot

2 plataformas diferentes

ELISA4 generación

VIH- 1 combo Ac-Ag

VIDAS -EVOLIS -

NEGATIVO

NOTIFICACIÓN PACIENTE

VIDAS +EVOLIS +

POSITIVO 2 ENV + 2 GAG

+ 2 POL

POSITIVO

SEGUIMIENTO CV-CD4.

TRATAMIENTO ARV.

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Algoritmo de seguimiento

VIH- 1 combo Ac-Ag

VIDAS PositivoEVOLIS Positivo

INDETERMINADO 1 GAG + 1 POL

PCR VIH-1 CUALITATIVO

POSITIVO

SEGUIMIENTO CV-CD4.TRATAMIENTO ARV

NEGATIVO

NOTIFICACION RESULTADO.SEGUIMIENTO ESTRECHO.

VIDAS Positivo o NegativoEVOLIS Positivo o Negativo

NEGATIVO

PCR VIH-1 CUALITATIVO

POSITIVO

SEGUIMIENTO CV-CD4.

TRATAMIENTO ARV

NEGATIVO

NOTIFICACION PACIENTE

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Gracias…..