art parvovirus

Tratamiento de la enteritis parvovricacanina con interfern omega en un ensayo

sobre el terreno controlado con placebo

VIRGINIE MARTIN, WOJCIECH NAJBAR, SYLVIE GUEGUEN, DOMINIQUE GROUSSON, HYONE-MYONG EUN*, BERNARD

LEBREUX, ANDR AUBERT

Departamento I+D, VIRBAC SA, B.P.27, 06511 Carros Cedex, Francia

Dr. H.M. Thomas EunTel: 33 4 92 08 72 09

Fax: 33 4 92 08 71 99Email:[email protected]

Aceptado para la publicacin en

THE VETERINARY RECORD

libro17 29/4/03 21:43 Pgina 1

Resumen

No slo la enteritis parvovrica canina sigue causando una morbilidad y mortalidad significativa

en perros de todo el mundo, sino que existe una carencia de tratamientos antivricos eficaces.

El objetivo del presente ensayo era evaluar la eficacia teraputica de un preparado de interfe-

rn recombinante felino (tipo omega) en el tratamiento de la enteritis parvovrica del perro.

Se efectu un ensayo de exposicin a doble ciego, controlado con placebo, en cachorros bea-

gle (de ocho a nueve semanas de edad); se monitorizaron los signos clnicos, el peso corpo-

ral, las variables hematolgicas y la mortalidad durante un periodo de 14 das tras la exposi-

cin. Se inocul a 14 animales con parvovirus canino virulento; en la fase de tratamiento se

incluy a 10 animales que presentaron signos clnicos y cumplan, en consecuencia, con los

criterios de inclusin. Dichos animales se subdividieron en dos grupos seleccionados aleato-

riamente (placebo e IFN) de tamao idntico. El grupo IFN recibi inyecciones intravenosas

diarias de IFNrFe- (2,5 MU/kg) durante tres das consecutivos. El grupo placebo recibi

inyecciones diarias de solucin salina fisiolgica sin IFN. Ambos grupos de animales recibieron

tratamiento de apoyo individual consistente en dieta ajustada y solucin electroltica.

Los cinco perros del grupo placebo sufrieron enteritis fulminante con signos clnicos caracters-

ticos y murieron en el curso de 10 das tras la inoculacin (o seis das despus del tratamiento).

En el grupo tratado con IFN, un animal muri el da 2 tras el inicio del tratamiento, mientras que

los cuatro restantes sobrevivieron a la exposicin y se recuperaron gradualmente.

Nuestros datos confirman que el IFNrFe- puede producir un efecto teraputico significativo

en perros con enteritis parvovrica, consistente en una mejora de los signos clnicos y una

reduccin de la mortalidad.

Palabras claveParvovirus canino, enteritis, interfern felino, interfern omega, tratamiento con interfern.

Introduccin

La enteritis infecciosa en perros, especialmente en cachorros jvenes, es la enfermedad ms

frecuente, sumamente contagiosa y a menudo mortal, causada principalmente por parvovirus.

Desde la primera identificacin en 1978 del patgeno denominado parvovirus canino (PVC tipo

2) (Parrish, 1990), ha recibido los nombres de virus mortfero, enteritis infecciosa, gripe intes-

tinal, virus del corazn del cachorro y Parvo. Todos estos trminos se refieren a la infeccin por

PVC que se convierte rpidamente en una enfermedad global. Actualmente, predominan dos

tipos antignicos de PVC (PVC-2a y PVC-2b), en proporciones variables segn el pas, corres-

pondiendo ms del 80% de los aislados a PVC-2b y

En el perro, los sntomas caractersticos de la enteritis parvovrica aparecen en el curso de 5 a

7 das despus de la infeccin y entre ellos destacan los siguientes: diarrea hemorrgica, vmi-

to, anorexia, depresin, deshidratacin masiva, colapso sbito y muerte. La progresin de la

enteritis se acompaa de la excrecin del virus en las deposiciones. Los cachorros jvenes,

los perros viejos y los perros sometidos a estrs son mas vulnerables a la infeccin por PVC y

presentan los signos ms extremos.

La proteccin en cachorros muy jvenes se establece principalmente por transferencia

pasiva de anticuerpos maternos a las cras. No obstante, los cachorros adquieren una

enorme vulnerabilidad a la infeccin a medida que declinan los anticuerpos maternos, para

no mencionar los casos en que se producen o se suministran desde el principio niveles

insuficientes de anticuerpos maternos. La vulnerabilidad a la infeccin por parvovirus coin-

cide a menudo con la poca en que los cachorros son separados de la madre, lo que incre-

menta significativamente su riesgo de exposicin (Pollock y Carmichael, 1982). Las medi-

das ms eficaces y actualmente recomendadas para conferir proteccin a los cachorros

jvenes consisten, en primer lugar, en vacunar a la madre y luego a los cachorros jvenes

a partir de seis semanas de edad. El tratamiento de la infeccin por PVC es, en la mayora

de los casos, difcil. Los tratamientos de apoyo existentes solo pueden aliviar la deshidra-

tacin (por medio de lquidos y electrolitos intravenosos), aliviar el vmito y el dolor asocia-

do a espasmos intestinales (a travs de medicacin) o evitar infecciones bacterianas

secundarias (administrando antibiticos). Sin duda existe una necesidad de tratamiento efi-

caz de la enteritis parvovrica en el perro, y el interfern (IFN) es evidentemente un candi-

dato atractivo como agente teraputico.

Los IFN de tipo 1, que comprenden el IFN-, el IFN- y caracterizado ms tarde el IFN-,

(Adolf, 1995), poseen actividades antivricas, antiproliferativas e inmunomoduladoras. Tambin

se ha estudiado el uso en medicina veterinaria de los interferones humanos (IFNHu), as como

los IFN veterinarios, recombinantes o naturales (Campos et al., 1992; Cocker et al., 1987;

Cummins et al., 1988; Fulton y Burge, 1985; Jameson y Essex, 1983; Weiss 1989; Weiss et

al., 1990; Yamamoto et al., 1986; Zeidner et al., 1990).

Recientemente se ha elaborado un IFN recombinante felino (IFNrFe) en larvas de gusanos de

seda (Bombyx mori) mediante el uso de un vector baculovirus (Ueda et al., 1993). El IFNrFe ha

sido caracterizado como IFN de tipo 1 basndose en la identidad de sus aminocidos del 60%

con IFNHu-1 o IFNHu- IFNHu-1, si bien se ha clasificado como tipo teniendo en cuenta

la pauta de elaboracin de la secuenica N terminal (Ueda et al, 1993; Adolf et al, 1990).

Se observ in vitro que el IFNrFe- purificado posea actividades antivricas que no slo

dependan de la dosis sino tambin del tipo de virus y la estirpe de clulas hospedantes

(Mochizuki et al., 1994). Por ejemplo, en clulas fefc (feto entero de Felis catus) o RFCR (rin

del felino de Crandell), tratadas constantemente con hasta 10.000 unidades de IFNrFe, las

reproducciones de calicivirus felino (CVF) y herpesvirus felino (HVF) se redujeron 5.000 y 500

veces, respectivamente, mientras que la reproduccin del PVF, que est estrechamente empa-

rentado con el PVC, apenas se redujo cuatro veces. Cabe destacar que no pudieron obser-

varse actividades antivricas en clulas caninas, por ejemplo, RCMD (rin canino de Madin-

Darby), que fueron tratadas anlogamente con IFNrFe.

En el presente estudio, evaluamos el potencial teraputico del IFNrFe- en perros con enteri-

tis parvovrica inducida por exposicin. Nuestros datos demuestran que el IFNrFe- posee unTrat

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potente efecto teraputico en perros, con la consecuencia de una mejora significativa de los

signos clnicos y una reduccin de la mortalidad asociada a la enteritis por parvovirus.

En la parvovirosis canina sobre el terreno tambin se ha demostrado que el IFNrFe- produ-

ce efectos teraputicos significativos consistentes en una mejora de los signos clnicos y una

reduccin de la tasa de mortalidad en 4,4 veces (De Mari et al, 2002).

Materiales y mtodos

Reactivos y productosInmediatamente antes del uso se disolvi interfern, un producto liofilizado (Virbagen Omega,

Virbac, S.A., Carros, Francia), en el diluyente (solucin salina fisiolgica), hasta una concentra-

cin final de 10 millones de unidades (MU)/ml. El principio activo es un IFNrFe- purificado que

se produce en el gusano de seda mediante un sistema de expresin de baculovirus recombi-

nante (Ueda et al., 1993). El placebo es un producto liofilizado similar, pero sin IFNrFe-. Todos

los reactivos se conservaron a 4C hasta el momento del uso.

AnimalesSe estabularon en jaulas individuales 14 cachorros beagle SPF (sin patgenos especficos), de

ocho a nueve semanas de edad, siete hembras y siete machos, de Harlan Sprague Dawley,

Madison, EE.UU.) en grupos de cuatro por corral. Los animales fueron alimentados una vez al

da con una comida comercial (150 g de Imperial Dog Junior, Virbac Nutrition, Vauvert,

Francia) y libre acceso al agua. Los animales fueron aclimatados a las condiciones imperantes

(18 3C, 55 10 % de humedad relativa) en una instalacin de estabulacin de animales

de nivel P3 durante nueve das antes de la exposicin (d0) a PVC-2b.

Diseo experimentalTras la anestesia por inyeccin intramuscular de Zoletil (Zoletil(r) 50, Virbac S.A., Carros, Francia), a

la dosis de 0,2 ml/kg, los perros fueron inoculados por va oronasal con una cepa virulenta de PVC-

2b (1 ml de PVC 39; 1,23x106 DICT50/ml): 0,25 ml en cada orificio nasal y 0,5 ml en la faringe.

Tras la aparicin de la infeccin, un animal era declarado apto para el tratamiento si cumpla

con los criterios de inclusin siguientes: (i) diarrea durante un da; (ii) presencia cuando menos

de otros dos sntomas de parvovirosis, como deshidratacin ( 5%), replecin gstrica

(50%), vmito y agotamiento; (iii) excrecin de virus en las deposiciones. En consecuencia,

10 animales (seis el d4 y cuatro el d5), que satisfacan los criterios de inclusin, fueron admiti-

dos en la fase de tratamiento, recibiendo cinco de ellos IFN y los otros cinco, placebo. En este

ensayo a doble ciego, controlado con placebo, los animales fueron distribuidos aleatoriamen-

te. La pauta del tratamiento consisti en inyecciones intravenosas (iv) de 0,25 ml/kg (2,5

MU/kg de IFN o placebo) una vez diaria durante tres das consecutivos.

Los animales moribundos, as como los que sobrevivieron al final del estudio, fueron sacrifica-

dos por el veterinario asistente.

Tratamientos de apoyoCuando los perros presentaban diarrea y dolor abdominal se suprimieron las comidas regula-

res por lo menos durante 24 horas. A continuacin, los perros eran realimentados progresiva-

mente con una dieta muy digerible (2 veces 60 g/perro/da; Consult Hyperdigestible, Virbac

Nutrition, Vauvert, Francia). Trat

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A los perros con signos de deshidratacin grave ( 8%) se les priv de agua y se les admi-

nistr fluidoterapia subcutnea (Ringer lactato, Baxter, Illinois). El volumen de la inyeccin

era la suma del volumen de mantenimiento diario (50 ml/kg/24h) y el volumen deficitario,

calculado basndose en el grado de deshidratacin (medido por la prueba del pliegue

cutneo), multiplicado por el peso corporal. La cantidad se administraba diariamente en

una o dos porciones despus de cada exploracin clnica, hasta corregir el grave nivel de

deshidratacin.

Observacin de los signos clnicosSe hizo un seguimiento de los animales durante un periodo de hasta 14 das despus de la

exposicin para controlar la presencia de signos clnicos como apetito, diarrea, vmito,

depresin, deshidratacin, agotamiento, muerte y aspecto fsico de las deposiciones. Los

animales fueron examinados una vez al da del d0 al d2, dos veces al da del d3 al d7 y una

o dos veces al da del d8 al d14. Cada sntoma se puntu de 0 a 3 o 4, siendo la puntuacin

mxima de 20 en caso de muerte (Tabla 1). Los pesos corporales se registraban antes del

comienzo del estudio (d8) y, a continuacin, los das 0, 3 a 7, 11, 13 y 14. Las temperaturas

rectales se midieron diariamente en cada exploracin. Una puntuacin clnica (PC) diaria era

la suma de las puntuaciones asignadas a signos clnicos y estandarizadas en dos observa-

ciones diarias.

Aislamiento de virusSe obtuvieron muestras fecales de cada uno de los animales a diario desde el d0 hasta el

da de inclusin en la fase de tratamiento. Las muestras, absorbidas en torundas de algo-

dn, se impregnaban de 1 ml de solucin salina fisiolgica con tampn fosfato (PBS, pH

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Esquema de asignacion de puntos a los signos clnicos de los perros

Sntomas Asignacin de puntos

Muerte 20

Temperatura rectal

39,5C 137,1C37,4C 237,0C 3

Condiciones generales

Agotamiento (despierto, activo) 1

Depresin (despierto, inactivo) 3

Coma (inconsciente) 4

Deshidratacin

5% (leve: comienzo de pliegues cutneos) 1

8% (moderada: persistencia de pliegues cutneos) 3

12% (grave: sndrome de shock) 4

Consistencia de las deposiciones

Lquida (diarrea) 2

Diarrea hemorrgica 4

Dolor abdominal

Leve 1

Grave 2

Vmito 3

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7,0), se congelaban a -80C durante cuatro horas y, finalmente, se descongelaban a 37C.

El lquido era trasferido a un tubo de vidrio y el virus (PVC-2b) era detectado por anlisis

de hemaglutinacin (AH) basado en eritrocitos porcinos. Abreviadamente, se distribuyeron

por duplicado alcuotas de 25 l de solucin diluida seriadamente (al 1:2) en placas de

microttulo de 96 pocillos y se aadan 25l de tampn fosfato (P) 15 mM con 0,1% de

seroalbmina bovina (BSA), seguido de 50 l de eritrocitos al 1% en el mismo tampn P.

Las placas se incubaron durante una hora a 4C y a continuacin se procedi a su lectu-

ra. El ttulo AH se define como la inversa de la dilucin resultante en el 50% de la agluti-

nacin de eritrocitos.

Variables hematolgicasPara los anlisis de las variables hematolgicas (recuento de leucocitos, recuento de eritroci-

tos y hematcrito) se extrajeron muestras de sangre en tubos EDTA (vidrio, 1 ml) los das d-3,

d0, diariamente de d3 a d7 y, por ltimo, d11. Cuando el estado de salud de los animales

entraba en una fase crtica se extraan muestras de sangre adicionales.

Los leucocitos se recontaron con UNOPETTE test 5856 (Beckton Dickinson, New Jersey,

EE.UU.) tras dilucin al 1:20 y los eritrocitos con UNOPETTE test 5851 (Beckton Dickinson,

New Jersey, EE.UU.) tras dilucin al 1:200 de la muestra.

Para obtener los hematcritos, las muestras de sangre se llenaron en arcilla para moldear y se

centrifugaron durante 1,5 min a 25C en la centrfuga Hematocrit 24 (Hettich Zentrifugen,

Tuttlingen, Alemania).

[Hematcrito] = (1)/(L) x 100 donde (L) es la longitud recorrida por los eritrocitos y el plasma y

(l), la longitud recorrida por los eritrocitos sin el anillo de leucocitos.

Anlisis estadsticoLos anlisis estadsticos se efectuaron por medio del software NCSS 97:

(i) test t de Student para evaluar la poblacin el d0; (ii) ANOVA de dos factores para la evalua-

cin de puntuaciones clnicas; (iii) distribucin de la supervivencia producto lmite de Kaplan-

Meier y test de rangos logartmicos para la evaluacin de la supervivencia / mortalidad. Se

aceptaron como significativos valores P < 0,05.

Resultados

Exposicin al virus e induccin de enteritisLa exposicin de 14 cachorros al PVC-2b dio lugar a la seleccin de 10 cachorros que pre-

sentaban, el d4 o d5 tras la exposicin, signos positivos de enteritis que cumplan con los cri-

terios de inclusin para el tratamiento, es decir, presencia de virus en las heces, ttulo AH > 64

y signos clnicos 6 (Tabla 2 ). En consecuencia, seis perros (n 45, 49, 59, 62, 64 y 66) reci-

bieron el primer tratamiento (t0) el d4 y los cuatro perros restantes (nmero 53, 56, 57, y 58),

el d5. Los 10 perros mostraron tambin una reduccin uniforme del peso corporal durante el

periodo pretratamiento, mientras que sus temperaturas corporales (rectales) permanecan

dentro del intervalo normal (37,5C 39,4C).

Evolucin de los signos clnicosEl primer da de tratamiento (t0), ambos grupos de animales mostraron signos clnicos esta-

dsticamente indistinguibles: puntuaciones medias ( DE) de 9,2 ( 2,6) y 9,8 ( 1,8) en los Trat

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grupos IFN y placebo, respectivamente (p = 0,49). Al poco tiempo, las puntuaciones clni-

cas de los dos grupos se diferenciaron de un modo estadsticamente significativo (p =

0,012). Los animales del grupo placebo progresaron a enteritis fulminante, con la degrada-

cin caracterstica de los signos clnicos y las condiciones fsicas (Figura 1a). En cambio, los

animales tratados con IFN (Figura 1b), excepto uno de los perros (n 53) que muri el d2,

mostraban una pauta significativamente diferente de signos clnicos, caracterizada por

mejora general de las condiciones clnicas y fsicas (desaparicin de la diarrea, el vmito, la

anorexia y el agotamiento). Las puntuaciones clnicas mximas diarias registradas en los ani-

males hasta el ltimo da observable fueron de 28,0 ( 4,3) y 14,4 ( 7,8) en los grupos pla-

cebo e IFN, respectivamente, evidenciando una diferencia significativa (p = 0,0093). En con-

junto, en los animales tratados con IFN se logr controlar la enteritis a partir del 3er. da

postratamiento.

Ningn animal present signos locales o sistmicos de reacciones adversas atribuibles al IFNrFe-Trat

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Evolucin de los signos clnicos tras la inoculacin de PVC-2b

Perro Grupo Das Deshi- Anorexia Diarrea Agota- Dolor PC Estadodratacin miento final

45 d3

Placebo d4* 10 d7

49 d3

Placebo d4* 12 d10

53 d3

d4

IFN d5* 13 d7

56 d3

d4

Placebo d5* 8 d7

57 d3

d4

IFN d5* 6 S

58 d3

d4

Placebo d5* 11 d9

59 d3

IFN d4* 8 S

62 d3

IFN d4* 9 S

64 d3

IFN d4* 10 S

66 d3

Placebo d4* 10 d8

* Das despus de la exposicin, correspondientes al primer da de tratamiento (t0).PC: Puntuaciones clnicas el da de la inclusion (primer tratamiento). Una puntuacin diaria es la suma de las puntuacionesatribuidas a signos clnicos observados diariamente y estandarizados para dos observaciones diarias. Estado final: Muerte del animal a partir del da de la exposicin al virus o la supervivencia (S) del animal el da 14.

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Temperatura corporalLos animales del grupo placebo mostraron, en general, fuertes descensos de la temperatura

en correlacin con la degradacin del estado de salud o la aparicin de un sndrome comato-

so. En le grupo tratado con IFN, uno de los perros (n 59) present una hipotermia de grado

3 (36,2C) el d3, si bien recuper temperaturas normales a partir de d4; otro perro (n 64) pre-

sent temperaturas ligeramente por debajo del lmite inferior de las temperaturas normales

entre d1 y d6 y, por ltimo, se recuper mientras que otros, excepto el que muri (n 53) el d2,

presentaban temperaturas normales durante todo el periodo de observacin.

Peso corporalEl d0, los pesos corporales (media DE) eran indistinguibles entre ambos grupos: 2,36 0,37

kg y 2,45 0,34 kg en los grupos IFN y placebo, respectivamente (p = 0,88). A continuacin, Trat

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FIG

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A

Evolucin de los signos clnicos diarios de los perros del grupo placebo (n = 5).Se registraron los signos clnicos en cada perro con arreglo al esquema de puntuacin (ver Tabla 1).

Por lo tanto, a los animales muertos se les asign una puntuacin clnica diaria de 40.

FIG

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B

Evolucin de los signos clnicos diarios en perros tratados con IFN (n = 5).Se registraron los signos clnicos en cada perro con arreglo al esquema de puntuacin (ver Tabla 1).

Por lo tanto, a los animales muertos se les asign una puntuacin clnica diaria de 40.

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Das despus del tratamiento

Punt

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lnic

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C)

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53

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Punt

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lnic

a (P

C)

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empezaron a diferenciarse, puesto que los animales del grupo placebo perdan peso rpida-

mente hasta que todos ellos (5 de 5) murieron (Figura 2a). Por el contrario, los perros tratados

con IFN, excepto el que muri el d2, perdieron ms o menos peso hasta d3 y, a continuacin,

recuperaron gradualmente sus pesos corporales (Figura 2b), en consonancia con la recupera-

cin de su estado de salud.

Tasa de supervivenciaEn el grupo tratado con IFN, todos los perros excepto uno sobrevivieron a la exposicin al virus

(Figura 3). El caso excepcional (n 53) se hall muerto el d2 a pesar de los tratamientos de

apoyo que se le administraron el d0 y d1. En contraste y de manera estadsticamente signifi-

cativa (p = 0,01) los cinco perros del grupo placebo murieron tras la exposicin al virus (ver

tambin Tabla 2).Trat

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0 2 4 6 8

3

3,5

Pesos corporales de los perros del grupo placebo (n = 5).El tiempo 0 (t0) corresponde al da de inclusin para el tratamiento.

FIG

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A

Pesos corporales de perros tratados con IFN (n = 5).El tiempo 0 (t0) corresponde al da de inclusin para el tratamiento

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Peso

(kg

)

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Peso

(kg

)

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Variables hematolgicasLeucocitos. Los recuentos de leucocitos aumentaron en general hasta un mximo el d3 o d4

despus de la exposicin y, a continuacin, disminuyeron en consonancia con el estado de

salud de los animales (Tabla 3). La pauta global de los recuentos de leucocitos era estadsti-

camente indistinguible entre ambos grupos. No obstante, la cohorte de perros que muri tras

la exposicin al virus present de forma caracterstica el d4 una leucocitosis con recuentos

2,14 ( 0,39) veces superiores al basal (~14 x103 clulas/l), que se segua normalmente de

una leucopenia inapelable en cuestin de dos das. Por el contrario, y de manera estadstica-

mente significativa (p = 0,049), los recuentos de leucocitos de los cuatro perros supervivien- Trat

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FIG

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A3

Tasa de supervivencia en el curso de los tratamientos.La figura ilustra los recuentos diarios del nmero total de perros vivos en los grupos tratados con IFN ( ; n = 5)

y placebo (; n = 5) a partir del primer da de tratamiento.


Nm

ero

de p

erro

s vi

vos

TA

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A3

Evolucin de los recuentos de leucpcitos (x 103/l) tras la inoculacin de PVC-2b

Grupo Perro Basal d3 d4 d5 d6- d11 MAX*(d3d0)/2 /Basal

45 11,0 12,0 27,0* 19,3 1,7 NA 2,47

49 16,1 11,1 26,1* 21,4 16,4 NA 1,62

Placebo 56 18,4 19,3 36,7* 25,3 12,0 NA 2,01

58 12,3 16,6 22,4 23,1* 0,8 NA 1,87

66 13,5 13,8 29,7* 17,5 2,0 NA 2,20

Media 14,3 2,03

DE 3,0 0,33

53 11,8 13,3 31,6* 20,0 2,2 NA 2,67

57 15,5 20,7* 11,9 11,8 11,2 16,5 1,34

IFN 59 10,7 17,4* 11,3 12,8 11,4 19,8 1,63

62 13,1 18,2 26,1* 18,3 12,1 10,5 2,01

64 16,9 20,3 24,4* 19,4 18,4 15,0 1,44

Media 13,6 1,82

DE 2,6 0,55

* Recuentos de leucocitos mximos (MAX).NA: Datos no disponibles el d11 debido a la muerte prematura del animal.

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tes, tratados con IFN, revelaron una leucocitosis moderada (aumento de 1,60 0,29 veces)

el d3 o d4, para regresar seguidamente al intervalo normal.

Eritrocitos y hematocrito. Mientras que los recuentos de eritrocitos de los animales tra-

tados con IFN no mostraron trastornos significativos, los del grupo placebo evidenciaron

en conjunto un incremento del 30% (p = 0,23) en el momento de su muerte. Los valores

del hematcrito mostraron un comportamiento similar al de los recuentos de eritrocitos y

as, los animales del grupo placebo mostraron en conjunto un incremento del 24% (p =

0,15) en el momento de su muerte.

Discusin

El potencial teraputico del IFN en medicina veterinaria se ha investigado predominantemente

con el IFN- y, en algunos casos, con el IFN- y el IFN- para la prevencin y el tratamiento de

infecciones vricas y bacterianas (Adolf, 1995; Moore, 1996). Dado que se considera en gene-

ral que la actividad del IFN es muy especfica de especies, se clonaron y expresaron varias

especies de genes IFN para aplicaciones veterinarias. Respecto a especies caninas en particu-

lar se emprendi la produccin de un IFN inducido por virus a partir de cultivos de clulas lin-

foblastoides caninas (Tsai y Appel, 1983). Tambin se clon y expres un gen IFN- canino en

E. coli, comprobndose que el IFN- recombinante posea una actividad antivrica (Himmler et

al, 1987). Sin embargo, no se dispone hoy da de productos de IFN canino para pruebas clni-

cas. Por el contrario, en Japn se ha fabricado a escala industrial un IFN recombinante felino

(IFNrFe-) ( Yanai et al, 1991), que permite la realizacin de pruebas clnicas y la validacin de

su capacidad para tratar infecciones vricas en especies felinas. En relacin con un producto, el

IFN, conocido por sus mltiples actividades biolgicas, debe establecerse una indicacin tera-

putica primordial contando con una base cientfica dependiente de estudios in vivo.

Adems, un IFN puede generar respuestas biolgicas diferentes en funcin de la sensibilidad

de la especie hospedante, los tipos o subtipos de IFN, la pauta teraputica (por ejemplo, poso-

loga, frecuencia, va de administracin) y otras condiciones teraputicas complementarias.

Los caninos y las clulas caninas tienden a ser relativamente insensibles al IFN de especies

heterlogas. Por ejemplo, no se observaron efectos inhibidores con IFNrFe- sobre la repro-

duccin de algunos virus en clulas caninas (RCMD) (Mochizuki et al., 1994), mientras se

comprobaba que el IFN humano (IFNHu-(f) posea actividades antivricas en algunos animales

domsticos y estirpes de clulas animales en el orden decreciente siguiente: clulas bovinas,

ovinas, porcinas, felinas, equinas y, por ltimo, caninas (Bridgman et al., 1988). Sin embargo,

recientemente se han obtenido datos ms alentadores:

(i) El IFNrFe- revel actividades inhibidoras del crecimiento en cuatro estirpes diferentes de

clulas tumurales caninas de una forma dependiente de la dosis y del tipo celular (Tateyama

et al., 1995); (ii) la administracin in vivo del IFNrFe- en perros increment la produccin de

la 2,5-oligoadenilato sintetasa (Ishiwata et al., 1998), una de las protenas conocidas por des-

empear un papel en el bloqueo de la sntesis de las protenas vricas (Kalvakolanu y Borden,

1996; Le Page et al., 1997).

Con respecto a las actividades antivricas del IFNrFe-, concretamente en perros, en un tra-

bajo recin publicado se registr un efecto teraputico moderado aunque prometedor

(Ishiwata et al., 1998). En este estudio, realizado en 24 perros beagle de tres series experi-Trat

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mentales distintas, (i) los perros (de edades comprendidas entre 3 y 4 meses) presentaron sig-

nos clnicos de leves a graves tras la inoculacin oral del PVC-2a (107 DICT50); (ii) los perros

tratados a partir del da 4 con IFNrFe- (1 MU/kg/da, i.v, durante 3 das) presentaron una

forma menos grave de enteritis (4 de 12 tratados frente a 7 de 17 controles); (iii) slo uno de

los perros de control muri por enteritis el da seis. An siendo alentadores, estos resultados

preliminares del efecto teraputico del IFNrFe- tienen que ser validados y posiblemente

ampliados en una serie experimental diferente, ms rigurosa.

Por lo tanto, se dise el presente estudio para incorporar, (a) una infeccin experimental que

causaba signos clnicos ms graves y, en consecuencia, ms realistas, y mortalidad en cacho-

rros jvenes; (b) aplicacin de criterios de inclusin rigurosos para el tratamiento; (c) aplicacin

de tratamientos de apoyo ticamente aceptables; (d) el tratamiento con IFN en otra dosis

(superior). En estas condiciones experimentales, 10 de 14 cachorros (de 8 a 9 semanas de

edad), inoculados por va oronasal con PVC-2b, presentaron signos clnicos positivos que

satisficieron los criterios de inclusin para el tratamiento.

Todos los animales del grupo placebo (5 de 5) murieron en el curso de 10 das de la infeccin

experimental, en particular en el contexto de tratamientos de apoyo intensivos. No obstante,

en el grupo tratado con IFNrFe- 4 de 5 animales sobrevivieron a la exposicin al virus, con el

subsiguiente control de la progresin de la enfermedad y recuperacin de la enteritis.

Conclusin

Los resultados obtenidos de este ensayo de exposicin, a doble ciego, controlado con place-

bo, demuestran claramente que el IFNrFe- a una dosis de 2,5 MU/kg puede producir efec-

tos teraputicos y salvar vidas de forma significativa en cachorros afectos de enteritis parvov-

rica. Nuestros datos confirman de este modo y amplan adicionalmente resultados preliminares

sobre la eficacia teraputica del IFNrFe- en perros.

Agradecimientos: Los autores agradecen a A. Sanquer por su ayuda con los anlisis esta-dsticos.

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