Bacilos Gram Negativos No Ferment Adores
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BACILOS GRAM NEGATIVOS NO FERMENTADORES QFB. Esperanza Olivares González QFB. Esperanza Olivares González Responsable del Depto. de Bacteriología del HGR Responsable del Depto. de Bacteriología del HGR no. 110. no. 110. Guadalajara, Jalisco Guadalajara, Jalisco Curso Parasitología Diagnóstica Curso Parasitología Diagnóstica Colegio de Químicos Clínicos del Estado de Colegio de Químicos Clínicos del Estado de Tlaxcala, A.C. Tlaxcala, A.C.
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BACILOS GRAM NEGATIVOS NO FERMENTADORES
QFB. Esperanza Olivares GonzálezQFB. Esperanza Olivares González
Responsable del Depto. de Bacteriología Responsable del Depto. de Bacteriología del HGR no. 110.del HGR no. 110.
Guadalajara, JaliscoGuadalajara, Jalisco
Curso Parasitología DiagnósticaCurso Parasitología Diagnóstica
Colegio de Químicos Clínicos del Estado Colegio de Químicos Clínicos del Estado de Tlaxcala, A.C.de Tlaxcala, A.C.
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Intenta no volverte un hombre de Intenta no volverte un hombre de éxito, sino volverte un hombre de éxito, sino volverte un hombre de
valor.valor.
Albert EinsteinAlbert Einstein
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Los bacilos gram negativos no fermentadores son un grupo de microorganismos aerobios, no esporulados, no utilizan hidratos de carbono como fuente de energía o los degradan a través de vías metabólicas diferentes de la fermentación.
El término bacilo gram negativo no fermentador se utiliza para designar a todos los bacilos gram negativos que muestran abundante desarrollo en 24 horas en la superficie de agar hierro de Kligler (KIA) o agar triple azúcar-hierro (TSI), pero que no se desarrollan ni acidifican la profundidad de estos medios.
INTRODUCCIÓN
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METABOLISMO DE LOS NO FERMENTADORES
La mayoría de las bacterias que se encuentran en la clínica obtienen la energía de la utilización de hidratos de carbono, por medio de una o de varias vías metabólicas.
Para identificar las especies bacterianas que pueden ser causantes de enfermedades infecciosas, es necesaria la detección y medición de los diferentes productos metabólicos.
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METABOLISMO DE LOS NO FERMENTADORES
Las vías metabólicas utilizadas por los no fermentadores son aerobios, anaerobios, fermentación y oxidación.
Estos procesos metabólicos no sólo definen la ubicación taxonómica de las bacterias, sino que determinan las pruebas y procedimientos utilizados en la identificación de laboratorios de los microorganismos.
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METABOLISMO DE LOS NO FERMENTADORES
La vía aerobia necesita oxígeno para que haya glucólisis.
Glucólisis es la vía metabólica encargada de oxidar la glucosa con la finalidad de obtener energía para la célula.
Oxidación es una reacción química muy poderosa donde un compuesto cede electrones, y por lo tanto aumenta su estado de oxidación.
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METABOLISMO DE LOS NO FERMENTADORES
Las bacterias oxidativas transfieren los iones hidrógeno, disponibles del ácido pirúvico al ciclo de Krebs, donde finalmente se unen a oxígeno elemental para formar agua.
Esta forma define al metabolismo oxidativo como las reacciones productoras de energía que requieren oxígeno molecular.
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METABOLISMO DE LOS NO FERMENTADORES
La vía anaerobia es donde no requiere el oxígeno para su metabolismo.
Acepta electrones de otra sustancia diferente del oxígeno.
La fermentación es un proceso catabólico de oxidación incompleta, totalmente anaeróbico, siendo el producto final un compuesto orgánico. Estos productos finales son los que caracterizan los diversos tipos de fermentaciones.
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SEÑALES DE QUE UN AISLAMIENTO DESCONOCIDO ES UN NO FERMENTADOR
El microbiólogo puede sospechar que un bacilo gram negativo desconocido es del grupo de no fermentadores si observa las siguientes características:
Falta de evidencia de fermentación de la glucosa.
Un microorganismo desconocido no fermentador es la falta de producción de ácido en medio KIA o TSI, se manifiesta como un pico de flauta alcalino (rojo) y siembra en profundidad alcalina.
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SEÑALES DE QUE UN AISLAMIENTO DESCONOCIDO ES UN NO FERMENTADOR
El tubo KIA a la derecha muestra una reacción alcalina, el pico de la flauta alcalina y el fondo del tubo característico de un microorganismo no fermentador.
El tubo de la izquierda muestra una reacción ácida en la profundidad y alcalina en el pico de flauta, indicando fermentación de glucosa y lactosa negativa, característica de muchas especies de enterobacterias.
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Las grandes obras son hechas no Las grandes obras son hechas no con la fuerza, sino con la con la fuerza, sino con la
perseverancia.perseverancia.
Samuel JohnsonSamuel Johnson
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REACCIÓN POSITIVA DE CITOCROMO OXIDASA
Reacción positiva de citocromo oxidasa.
Toda colonia de un bacilo gramnegativo que se desarrolla en agar sangre u otro medio primario de aislamiento que sea citocromo oxidasa positivo pertenece al grupo de no fermentadores.
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REACCIÓN POSITIVA DE CITOCROMO OXIDASA
Sin embargo no todos los bacilos gramnegativos oxidasa positivos son no fermentadores.
Es necesario determinar la forma de utilización de la glucosa (que demuestra la importancia de sembrar un tubo de TSI o KIA).
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REACCIÓN POSITIVA DE CITOCROMO OXIDASA
El procedimiento para la reacción de citocromo oxidasa de los no fermentadores es utilizar una solución acuosa al 0.5% de clorhidrato de tetrametil – p – fenilendiamina.
Esta solución tiene una duración de 1 semana si se almacena en botella oscura entre 4°C y 10°C.
El desarrollo de color azul en el término de unos pocos segundos indica una reacción positiva.
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PRUEBA DE LA CITOCROMO OXIDASA
La formación de color azul dentro de los 10 segundos posteriores a la realización de un extendido de una colonia sobre un papel filtro saturado con el reactivo de la oxidasa (dihidrocloruro de tetrametil-p-femilendiamina). Citocromo Oxidasa Positiva, una característica útil para la identificación de muchas especies de no fermentadores.
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SEÑALES DE QUE UN AISLAMIENTO DESCONOCIDO ES UN NO FERMENTADOR
Falta de desarrollo en agar de MacConkey.
Un bacilo gram negativo que se desarrolla en agar sangre pero poco o nada en agar de MacConkey y pertenece al grupo de no fermentadores.
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FALTA DE DESARROLLO EN AGAR MACCONKEY
Debido a que muchos de los bacilos gramnegativos con requerimientos especiales de cultivo tampoco se desarrollan en agar de MacConkey.
La capacidad de las bacterias para crecer en este agar se determina por inspección con luz refleja de la superficie de las placas sembradas e incubadas durante 24 a 48 horas.
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FALTA DE DESARROLLO EN AGAR MACCONKEY
Los microorganismos que se desarrollan bien producen colonias de 3 mm o más de diámetro, fácilmente visibles.
Las cepas de poco desarrollo producen colonias dispersas, pequeñas, en punta de alfiler.
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PRUEBAS UTILIZADAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE NO FERMENTADORES
Inhibición del crecimiento en agar MacConkey es una muestra que indica que un bacilo gram negativo puede ser no fermentador. A pesar de que muchas especies de no fermentadores son capaces de crecer en agar MacConkey como se muestra en la parte izquierda de la imagen.
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Hay que ser buenos no para los Hay que ser buenos no para los demás, sino para estar en paz con demás, sino para estar en paz con
nosotros mismos.nosotros mismos.
Achile TournierAchile Tournier
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IDENTIFICACIÓN DE LAS ESPECIES MÁS FRECUENTES
Género Pseudomona.
Género Acinetobacter.
Género Stenotrophomonas.
Género Burkholderia
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GÉNERO PSEUDOMONAS
Bacilos gram negativos rectos.
Ligeramente curvos.
Aerobios estrictos.
Cepas móviles por medio de uno o más flagelos.
Citocromo oxidasa positiva.
Utiliza la glucosa y otros hidratos de carbono.
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Pseudomonas aeruginosa
Es el seudomondal que con mayor frecuencia se recupera de las muestras clínicas.
Pueden identificarse si se observan las siguientes características fundamentales:
Colonias grandes con aroma a uvas.
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Pseudomonas aeruginosa
Se desarrolla en todos los medios de cultivo.
Temperatura: 10°C a 42°C.
Pigmento: Piocianina, verde, azul.
Pioverdina, fluorescente, entre blanco y azul verdoso.
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Pseudomonas aeruginosa
Cepa mucoide de Pseudomonas aeruginosa en agar MacConkey. Apariencia típica que se aisla de
expectoración de paciente con fibrosisquística.
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IMAGEN
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IMAGEN
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Pseudomonas aeruginosa
Se recupera con mayor frecuencia de las muestras clínicas.
La infección prevalente entre pacientes con quemaduras, fibrosis quística, leucemia aguda, trasplantes de órganos.
Las infecciones se observan habitualmente en los sitios en los que tiende a acumularse humedad: traqueostomías, catéteres permanentes, oído externo y heridas cutáneas exudativas.
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Pseudomonas aeruginosa
La exudación de pus azulado, con olor a uvas producido por la piocianina, es característica de P. aeruginosa.
También produce infecciones del tracto urinario y del tracto respiratorio inferior.
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GÉNERO ACINETOBACTER
Son cocobacilos inmóviles.
Citocromo Oxidasa Negativos.
Se distinguen 12 grupos diferentes.
El más frecuente A. baumannii.
A. baumannii acidifica la mayor parte de los hidratos de carbono en un medio oxidativo fermentativo.
La identificación definitiva se hace demostrando la producción rápida de ácido a partir de la lactosa.
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Acinetobacter baumannii
A. baumannii es el no fermentador encontrado en segundo orden de frecuencia en los laboratorios clínicos.
Identificación presuntiva:
o Cocos o cocobacilos en la tinción al Gram.
o Buen desarrollo en agar de MacConkey (las colonias pueden tener un color ligeramente rosado, característica de utilidad cuando no está presente).
oCitocromo Oxidasa Negativa.
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Acinetobacter baumannii
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Acinetobacter baumannii
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Acinetobacter baumannii
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Acinetobacter baumannii
oMuestran una utilización rápida de la glucosa, con producción de ácido.
oMuestran una utilización rápida de la lactosa al 10% con producción de ácido.
oSon inmóviles.
oSe desarrollan bien en todos los medios de cultivo.
oSon multiresistentes a los antimicrobianos.
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Acinetobacter baumannii
Infecciones nosocomiales:
Bacteremia.
Neumonía.
Otras infecciones respiratorias.
Meningitis post quirúrgica.
Infección urinaria.
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GÉNERO STENOTROPHOMONAS
Es un género que consta solo de una especie, S. maltophilia, anteriormente Xantomonas maltophilia y Pseudomonas maltophilia.
S. maltophilia es el tercer no fermentador en orden de frecuencia aislado en los laboratorios clínicos.
Pueden identificarse si se observan las siguientes características fundamentales:
Buen desarrollo en agar sangre y de MacConkey.
Citocromo Oxidasa Negativa.
.
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Stenotrophomonas maltophilia
Lisina descarboxilasa positiva.
Algunas cepas producen pigmento amarillo.
Producen ácido en OF con maltosa pero puede ser negativa en OF con glucosa.
Tiene amplia distribución y puede recuperarse de cualquier localización.
Produce infecciones oportunistas y está surgiendo como un importante patógeno adquirido en el ámbito nosocomial
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Stenotrophomonas maltophilia
La localización más frecuente de la que se recupera S. maltophilia es el tracto respiratorio, aunque en la mayoría de los pacientes estos aislamientos no parecen tener importancia clínica.
S. maltophilia produce una amplia gama de enfermedades, ente las que se incluyen neumonía, bacteremia, endocarditis, colangitis, infecciones del tracto urinario, meningitis e infecciones graves de heridas.
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GÉNERO STENOTROPHOMONAS
S. maltophilia es intrínsecamente resistente a la mayoría de los antibióticos utilizados habitualmente, incluídos aminoglucósidos.
Puede ser sensible al sulfametoxazol trimetropim.
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Placa de agar sangre que ilustra el crecimiento de Strenotrophomona maltophilia. El pigmento amarillo opaco es distintivo de esta especie pero a veces puede ser difícil de visualizar.
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GÉNERO BURKHOLDERIA
Antes pertenecían al género Pseudomona cepácea.
Distribuida en agua y suelo.
Pueden sobrevivir prolongados periodos en ambientes húmedos.
Patógeno nosocomial.
Patógeno aislado en infecciones respiratorias en pacientes con enfermedad fibroquística.
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GÉNERO BURKHOLDERIA
Los individuos infectados deben tratarse en áreas separadas de aquellos pacientes no infectados para limitar la dispersión.
Son naturalmente resistentes a muchos antibióticos comunes, como los aminoglicósidos.
El tratamiento incluye múltiples antibióticos, incluyendo ceftazidima, doxiciclina, piperacilina, cloramfenicol, co-tromoxazol.
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GÉNERO BURKHOLDERIA
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Otros Bacilos Gram Negativos No Fermentadores
Género Moraxella.
Género Alcalígenes.
Género Flavobacterium.
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