BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE … · la curva de calibración del Sulfatiazol Sódico, para...

BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO

ÁREA ESPECÍFICA DE: FARMACIA

NOMBRE DE LA ASIGNATURA: FARMACOLOGÍA I CÓDIGO: FAR 436L FECHA DE ELABORACIÓN: OCTUBRE 2001 NIVEL EN EL MAPA CURRICULAR: FORMATIVO TIPO DE ASIGNATURA: CIENCIA DISCIPLINARIA PROFESORES QUE PARTICIPARON EN SU ELABORACIÓN:

DC. ISABEL MARTINEZ GARCIA MC. DANIEL ILHUICAMINA LIMON PEREZ DE LEON MC. FELIX LUNA MORALES

HORAS DE TEORÍA: HORAS PRÁCTICA: 2 CRÉDITOS:

Fac. Cs. Qs. Dpto. De FARMACIA LABORATORIO DE FARMACOLOGÍA I

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I N D I C E PRACTICA PÁGINA 1. Influencia de las propiedades Fisicoquímicas en el efecto

Farmacológico....................................................................................3

2. Influencia de la vía de Administración en la concentración Plasmática de un fármaco............................................................. 6 3. Distribución ..................................................................................... 11 4. Metabolismo (Inducción Enzimática) .............................................. 16 5. Cuantificación de la eliminación renal del ácido acetilsalicilico en humanos ............................................... 20 6. Curva Dosis- Respuesta Gradual.................................................. 25 7. Curva Dosis – Respuesta Cuantal.................................................. 30

8. Apéndice de preguntas................................................................... 34

9. Apéndice II interpretación de la Farmacología …………………. 38


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PRACTICA No.1

“INFLUENCIA DE LAS PROPIEDADES FISICO-QUIMICAS EN EL EFECTO FARMACOLÓGICO”

I. OBJETIVO

Predecir la velocidad de absorción( lenta o rápida) de un fármaco en función de sus propiedades fisico-químicas valorando su efecto.

II. INTRODUCCION

De las consideraciones acerca de los principios que rigen el paso a través de membranas celulares se desprende que el agua, las moléculas pequeñas, los no electrolitos liposolubles pueden atravesar el epitelio por difusión pasiva. Las propiedades fisico-químicas que afectan la absorción de los fármacos son el coeficiente de partición (Cp), lípidos/ agua y el tamaño molecular. El Cp es la relación que existe entre la liposolubilidad y la hidrosolubilidad de un principio activo. Dada las características lipídicas de las membranas biológicas, el paso de los fármacos a través de membranas biológicas, dependerá de la afinidad por los lípidos, es decir las moléculas más liposolubles (Cp alto) cruzan las barreras biológicas a mayor velocidad y a la inversa, las moléculas hidrosolubles cruzan las membranas más lentamente. Por lo tanto el Cp es un factor que influye en la absorción de los fármacos y como consecuencia la aparición del efecto terapéutico. CONOCIMIENTOS PREVIOS: Conocer la técnica de administración de sustancias por vía oral e intraperitoneal para roedores. Conocer los diferentes efectos que producen los barbitúricos. III. DESARROLLO DE LA PRACTICA Material: 5 ratones de 30-35 g de peso Balanza para roedores Soluciones: Tiopental sódico 500 mg / 20 ml

Fenobarbital sódico 5 mg/ ml Solución fisiológica.


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PROCEDIMIENTO

1.- Cada equipo utilizará 5 ratones a los cuales hay que pesar y marcar. 2.- Los fármacos se administrarán por vía intraperitoneal (IP) a una dosis de 35

mg/kg de peso. Al ratón control se les administrará solución fisiológica a una dosis de 0.1 ml/10 g de peso, que será el primer ratón en administrar.

3.- El efecto que se registrará será la incoordinación motora o perdida del reflejo de

enderezamiento. 4.- Después de la administración se observará a cada animal durante 45 minutos IV. RESULTADOS

TABLA No.1

No. F Peso (gr)

Dosis (mg/kg)

LatenciaHipnosis

(seg)

Duración(min)

Promedio Latencia

PromedioDuración

F= Tipo de Barbitúrico ocupado V.- CUESTIONARIO 1.- Determina si existe diferencia significativa (p< 0.05) entre la latencia y duración de :

A) Tiopental contra fenobarbital B) Trace el histograma correspondiente con los resultados por sección y por grupo


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2.- Investigar las fórmulas químicas así como las propiedades fisico-químicas de

cada uno de los barbitúricos y marcar el núcleo entre ellos. 3.- Investigue y explique los factores (fisico-químicos y biológicos), que afectan la

absorción de los fármacos: a) Por vía oral b) Por vía intraperitoneal c) Por vía rectal

4.- ¿Cómo encontrarías el Cp de un fármaco? 6.- Como influye el pH y el Cp en el paso de fármacos a través de membranas. 7.- se trata de saber la relacion de la fracción ionizada de la no ionid}zada de un ácido débil con una pk de 4 en un pH de 1, y de 7.4. 8.- Como demostrarías que el tamaño de partícula modifica el paso de sustancia a torrente sanguíneo.


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PRACTICA No. 2

"INFLUENCIA DE LA VÍA DE ADMINISTRACIÓN EN LA CONCENTRACIÓN PLASMATICA DE UN FÁRMACO"

I.- OBJETIVO 1.- Determinar la cantidad de sulfatiazol sódico plasmática en la rata a los

diferentes intervalos de tiempo. 2.- Comparar las cinéticas de absorción del sulfatiazol sódico utilizando la vía oral y

la vía intraperitoneal. II.- INTRODUCCIÓN

Para que un fármaco cause un efecto característico, debe trasladarse desde el lugar donde se administra hacia los tejidos o células donde va a actuar. Se denomina vías de administración a los lugares del organismo donde son aplicados o introducidos los medicamentos, ya sea para ejercer una acción local o bien una acción sistémica o en general. El sistema circulatorio es la vía común para la transferencia, o disposición del fármaco desde que este se encuentra en circulación hasta cualquier órgano o tejido. El paso del fármaco desde el sitio de administración a torrente circulatorio a través de membranas se le conoce como absorción.

Los fármacos se absorben generalmente en estado de solución y en estado gaseoso, los mecanismos que rigen este pasaje son de tipo pasivo y activo.

La vascularización del sitio de administración, el área de la superficie absorbente y la concentración del fármaco en la fase acuosa influyen de manera importante en la velocidad de absorción.

En el hombre como en otros mamíferos, los pulmones, el tubo gastrointestinal y la piel constituyen las zonas más importantes de absorción, de tal manera que desde el punto de vista anatómico las vías de administración se clasifican en entérales y parenterales. En las primeras, el fármaco es colocado directamente en cualquier parte del tubo gastrointestinal, ya sea para su deglución (vía oral) o para su absorción directa en la mucosa de la cavidad bucal (vía sublingual). En las vías parenterales se evita el conducto gastrointestinal, por lo que la administración del fármaco se realiza mediante una inyección, aplicación local sobre la piel o inhalación por los pulmones, entre otras. CONOCIMIENTOS PREVIOS: Conocimientos del manejo y cuidado de los animales del Laboratorio. Conocimiento de la administración de sustancias a los animales del Laboratorio Conocimiento de la toma de fluidos como el caso de sangre a través de punción cardíaca


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III.- DESARROLLO DE LA PRÁCTICA Cada equipo trabajará con una rata de 150 a 200 gr de peso, las cuales fueron mantenidas en condiciones ambientales similares y con acceso libre de agua y alimento. 1.- Pesar y marcar cada una de las ratas. 2.- Administrar a la rata, 200 mg/kg de sulfatiazol sódico por vía oral. 3.- Otra sección administrará el mismo fármaco a la misma dosis pero por vía intraperitoneal. 4.- El Equipo No.1, dejará transcurrir 15 minutos después de la administración del fármaco y anestesiará a los animales con éter (o dislocara ). Una vez anestesiado el animal se procederá a realizar una punción cardíaca para extraer 1 ml de sangre de cada una de las ratas. 5.-El equipo No. 2 tomará muestras de sangre a los 30 y en el caso el equipo No.3 a los 35 y así sucesivamente. 6.-Procesar las muestras sanguíneas como se indica en la tabla No.1 7.- Recopilar los resultados de toda la sección. 8.-Utilizando la curva de calibración del sulfatiazol sódico, determine la concentración plasmática de la sulfa en mg/5 ml y en mg/ ml. 9.- Grafique la concentración plasmática de la sulfa contra el tiempo para cada una de las vías de administración utilizadas.


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TABLA No.1 TÉCNICA MODIFICADA DE BRATTON- MARSHALL

MUESTRA TÉCNICA DE EXTRACCIÓN Y ACIDIFICACIÓN

FACTOR DE

DILUCION

TÉCNICA PARA DESARROLLAR COLOR.

S A N G R E

1.-Llevar 1 ml de sangre a un tubo que contenga 9 ml de agua destilada y agitar. 2.- A un ml de sangre diluida adicionar 15 ml de agua destilada y agitar. 3.-Agregar 4ml de ácido tricloroacético al 15 % y agitar. 4.- Filtrar 5.- Tomar 5 ml de filtrado para desarrollar color

40 1.- Agregar a 5 ml del filtrado 1 ml de nitrito de sodio al 0.1% agite en el vortex y deje reposar 3 min. 2.- Agregar 1 ml de sulfamato de amonio al 0.5 % y dejar reposar 3 min. 3.- Agregar 1 ml de N-naftiletilendiamina 4.-Leer a 545 nm

FUNDAMENTO DE LA TÉCNICA DE BRATTON- MARSHALL En el medio ácido los compuestos que tienen un grupo amino libre unido a un anillo aromático forman con el nitrito un compuesto azoado. El sulfamato de amonio neutraliza el nitrito que no reacciona con la arilamina. El compuesto azoado al conjugarse con la N-naftietilendiamina, forma un colorante hidrosoluble que muestra absorbancia máxima a 545 nm. NOTA:Para encontrar la concentración de sulfatiazol de cada una de las muestras, trace la curva de calibración del Sulfatiazol Sódico, para un fotocolorímetro Spectronic 20, Baush and Lomb ( Campos A.E., 1985)

Concentración (µg / 5 ml) Absorbancia 1.25 0.032 2.50 0.063 5.0 0.121 10.0 0.240 20.0 0.476 40.0 0.921


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TABLA No.2

CONCENTRACIÓN DE SULFATIAZOL A DIFERENTES TIEMPOS Vía de Administración Oral

TIEMPO MINUTOS

ABSORBANCIA mg/5ml FACTOR DE DILUCION

mg/ 1 ml

5

20

25

30

35

60 TABLA No.3 CONCENTRACIÓN DE SULFATIAZOL A DIFERENTES TIEMPOS Vía de Administración Intraperitoneal

TIEMPO MINUTOS

ABSORBANCIA mg/ 5 ml FACTOR DE DILUCION

mg/ ml

5

20

25

30

35

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IV. CUESTIONARIO

1.-¿ Cuál es el objetivo de que se empleen dos vías de administración en la práctica? 2.-¿Concuerdan los resultados obtenidos con lo esperado teóricamente ?. 3.-¿Cuál es la causa por la que se eligió tomar la muestra de sangre por punción cardiaca? 4.-¿ Que objetivo tiene adicionar el ácido tricloroacético al 15%? 5.-Investigue como se determina el factor de dilución para el método analítico. 6.-Explica ampliamente las ventajas y las desventajas de la vía de administración intravenosa y oral. 7.-Investiga los gráficos de concentración contra tiempo de dos fármacos que se hallan administrados por diferentes vías.


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PRACTICA No.3

"DISTRIBUCIÓN" I.- OBJETIVO. Determinar la concentración de sulfatiazol sódico en diferentes órganos de la rata,

por medio de una técnica colorimétrica. II.- INTRODUCCIÓN La distribución es un efecto farmacocinético (sistema ADBE), y es un proceso por medio del cual el fármaco que ya se encuentra en la sangre pasa a todos los órganos y líquidos del organismo. Los perfiles de distribución de los fármacos reflejan ciertos factores fisiológicos y propiedades fisicoquímicas de los agentes. Así puede distinguirse que la distribución esta determinada por el gasto cardíaco y el flujo sanguíneo regional de cada órgano (cantidad de sangre que llega a circulación). Órganos como hígado, riñón, corazón y encéfalo, tendrían mayor cantidad de fármaco, que otros menos perfundidos como músculo esquelético y la piel. Conjuntamente con la forma de distribución del flujo sanguíneo, existen factores que determinan que determinan la velocidad de difusión de los fármacos en los tejidos. La unión del fármaco a proteínas del plasma como la albúmina, favorece la formación de complejos fármaco-albúmina que por su tamaño molecular no se distribuyen fácilmente y la velocidad de paso a los diferentes órganos será lenta. Otro factor, importante es el coeficiente de partición; si un fármaco tiene un coeficiente de partición alto, puede quedar "atrapado" en el tejido adiposo y así disminuir su concentración en otros órganos y en la sangre. Un parámetro valioso para estudiar la distribución es el dato hipotético que se conoce como "el volumen de distribución aparente", el cuál se refiere como el volumen de líquido que se requeriría para contener todo el fármaco presente en el organismo con la misma concentración que en sangre o en plasma:

Vd =

Cantidad de fármaco en el organismo

Concentración Plasmática


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y para el caso de la administración intravascular CONOCIMIENTOS PREVIOS: Conocer la técnica de la administración por vía oral e intraperitoneal para roedores. Conocer las diferentes técnicas de Eutanasia. Conocer el manejo de órganos aislados de los animales de Laboratorio III.- DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

Cada equipo empleará una rata de 200-250 gr de peso, mantenidas en iguales condiciones ambientales, con acceso libre de agua y alimento.

1.- Pesar y marcar cada uno de los animales. 2.- Administrar 200 mg/Kg de sulfatiazol sódico a cada una de las ratas, una por vía oral y

otra por vía intraperitoneal. 3.-Los tiempos que se tomarán serán, apartir de la administración de la sulfa en 15 min,

20, 25, 30, y 35 min. 4.- Transcurrido el tiempo correspondiente a cada equipo, se sacrifica al animal y se obtiene 1 gr. de cada uno de los órganos que se te indica, hígado, riñón cerebro y corazón. 5.- Colocar cada una de las muestras en un portaobjetos limpio y seco, desmenuzar con ayuda de un bisturí y procesar la muestra como se te indica en la tabla No. 1

Vd = DOSISConcentración Plasmatica


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TABLA No.1 TÉCNICA MODIFICADA DE BRATTON Y MARSHALL.

MUESTRA

TÉCNICA DE EXTRACCIÓN Y ACIDIFICACIÓN

FACTOR DE

DILUCIÓN

TÉCNICA PARA DESARROLLAR

COLOR

CORAZÓN CEREBRO HÍGADO RIÑÓN

1.-Desmenuce un gramo de la muestra. 2.-Agregue 10 ml de NaOH. 3.-Homogenizar 4.-Déjelo reposar 15 min. 5.- Tome 2 ml del sobrenadante 6.-Agregue 2 ml de ácidotricloroacético y 6 ml de H2O destilada y agitar 7.- Tomar 5 ml del filtrado para procesar el color.

10 1.-Agregar 5 ml del filtrado 1 ml de nitrito de sodio 0.1% agitar y deje reposar 3 min. 2.-Agregar 1 ml de sulfamato de amonio 0.5% agitar y deje reposar 3 min. 3.-Agregar 1 ml de n-naftiletilendiamina 0.1 % 4.-Leer a 545 nm

TABLA No.2 CONCENTRACIÓN DE SALFATIAZOL A LOS MIN. ADMINISTRACIÓN: Vía………..

MUESTRA PESO DE LA MUESTRA

D. OPT. mg/5ML FACTOR DE

DILUCIÓN

mg/ml

HÍGADO

RIÑÓN

CEREBRO

CORAZÓN


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Nota: Para encontrar la concentración de sulfatiazol de cada una de las muestras, trace la Curva de Calibración del Sulfatiazol Sódico, para un fotocolorímetro Spectronic 20, Baush and Lomb, utilizando en la práctica de Farmacocinética (Campos A. E., 1985) Concentración µg/ 5 ml Absorbancia* 1.25 0.032 2.50 0.063 5.0 0.121 10.0 0.240 20.0 0.476 40.0 0.921 * Promedio de puntos por triplicado.


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TABLA No.3 CONCENTRACIÓN DE SULFATIAZOL EN TEJIDOS DE RATA A DIFERENTES TIEMPOS (mg/ml)

MINUTOS 15 20 25 30 35 15 20 25 30 35

MUESTRA

Hígado

Riñón

Cerebro

Corazón

CUESTIONARIO 1.-a) Gráficar la concentración de fármaco contra tiempo para cada uno de los órganos con los resultados de toda la sección. b) Interpretar cada una de estas gráficas. 2.- ¿Cuál fue la influencia de la vía de administración sobre la distribución tisular de la sulfa? 3.- ¿Cuál es la causa por la que se eligieron estos órganos en esta práctica? 4.- De acuerdo con las propiedades fisicoquímicas del sufatiazol. Indica si los resultados obtenidos concuerdan con los datos de la bibliografía. 5.- Si un fármaco tiene un Vd aparente de 5.5 lt y otro 12 lt. ¿ En que compartimiento preferentemente se encontraría distribuido cada uno de estos fármacos? 6.- Si por vía endovenosa 500 µg de un fármaco y cuantificamos la concentración plasmática de 0.7 pg/ml ¿Cuál sería su Vd?. ¿Se trata de un fármaco hidrofobo? ¿A que tipos de tejido se distribuye preferentemente? 7.- Investigue el volumen de distribución aparente, la unión a proteínas plasmáticas, la biodisponibilidad y la depuración urinaria de una benzodiacepina, un analgésico y un anticonceptivo y explica cada uno de estos resultados.


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PRACTICA No.4 METABOLISMO

(INDUCCIÓN ENZIMATICA) I. OBJETIVO 1.- Determinar el efecto de inducción enzimática sobre la Hipnosis 2.- Comparar la magnitud de la inducción enzimática entre dos fármacos sobre el efecto de Hipnosis. 3.- Analizar la importancia del efecto de inducción enzimática sobre la terapéutica. II. INTRODUCCIÓN En el organismo los fármacos sufren cambios estructurales producto de reacciones enzimáticas, estos suelen causar disminución o perdida de la actividad farmacológica. Sin embargo, no es la única posibilidad ya que a través de estas reacciones se puede formar un metabolito farmacológicamente activo a partir de un precursor inactivo y también el metabolito puede tener una acción totalmente diferente al precursor. El órgano más relacionado con el metabolismo es el Hígado y muchas sustancias son sustratos para las enzimas microsómicas, y la mayor parte de esas enzimas se encuentran localizadas en el sistema retículo endoplásmatico liso de los hepatocitos. En general el metabolismo del fármaco disminuye su liposolubilidad, haciéndolo más polar y así facilitando su excreción. Actualmente se pueden modificar la capacidad del hígado para biotransformar los medicamentos. En el caso de aumentar la biotransformación de un fármaco por parte de las enzimas micrósomicas con administraciones previas de este o de otro (s) fármacos se le conoce como Inducción Enzimática. Eso es que el pre-tratamiento con diversos agentes exógenos es capaz de acelerar la biotransformación de fármacos y también el metabolismo de sustancias endógenas a base de aumentar la cantidad total de enzimas micrósomicas. Las enzimas micrósomicas, por carecer de especificidad pueden metabolizar sustancias de diversa estructura química, pero solo catabolizan reacciones de compuestos liposolubles. Experimentalmente se puede fragmentar el retículo endoplasmático rompiendo los hepatocitos es posible separar estos fragmentos de otras partes de la célula mediante centrifugación diferencial. El sedimento obtenido contiene fragmentos de retículo de superficie lisa y enzimas asociadas, es decir las enzimas microsómicas.


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CONOCIMIENTOS PREVIOS. Conocer la técnica de manejo y administración de sustancias a roedores pequeños. Conocer los factores que modifican el metabolismo de fármacos. III. DESARROLLO DE LA PRACTICA. 1.- Cada equipo trabajará con seis ratones (20-30 gr). 2.- Asignar una dosis de 40 mg/kg de pentobarbital a dos ratones. La concentración inicial del pentobarbital es de 63 mg/ml. 3.-Asignar una dosis de 100 mg/kg de fenobarbital a una concentración de 20 mg/ml (dos ratones). 4.- A otros dos ratones se le administrará solución salina estéril a razón de 0.1 ml/10 gr. 5.- Las administraciones serán por vía intraperitoneal, por 5 días en un horario similar al de tu práctica. 6- El sexto día (DÍA DE PRUEBA), se administrarán los fármacos en las mismas condiciones por vía intraperitoneal a cada uno de los ratones. Se registrará el tiempo de latencia a la sedación (disminución de la conducta motora y ataxia) y el tiempo de latencia a la hipnosis (pérdida del reflejo de enderezamiento). Además de que se anotará el tiempo que duren los efectos en cada uno de los ratones. 7. - Se reportará en forma de gráficos de barras: a.- El tiempo de latencia de la sedación e hipnosis para cada drogas

b.- El porcentaje de respuesta de la latencia y la hipnosis para cada droga 8.- Determinar la cantidad de proteínas microsomales por el Método de Lowry a.- Sacrificar a los ratones por una sobredosis de Pentobarbital b.- Se perfunde el hígado in sitú a través de la vena porta hepática haciendo un pequeño corte de la vena cava inferior con solución salina isotónica fría hasta la completa remoción de la hemoglobina. c.- Posteriormente se desmenuza lo mas rápido posible y se le agregan 10 ml de Buffer Tris-HCl 66 mM , Sacarosa 0.2 M con un pH=7.4 y hacer una suspensión uniforme con un homogenizador de tejidos. d.- Se centrifuga la suspensión a 10.000 rpm por 20 min, transferir el sobrenadante y centifugar nuevamente a 17.500 r.p.m. por 1 hora, hasta obtener la pastilla microsomal.


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e.- la suspensión microsomal debe ser tratada adecuadamente como se indica en la tabla No. 1 y se lee en el espectrofotómetro a 700 nm.

Para encontrar la concentración de proteínas microsomales de cada muestra trace la curva de calibración de proteínas totales para un espectrofotómetro Beckman DU 60.

Concentración (µg/ ml)

Absorbancia

5 0.02 15 0.06 20 0.08 40 0.17 50 0.19

TABLA No. 1

MUESTRA (µl)

AGUA (µl)

REACTIVO (µl)

REACTIVO DE FOLIN (µl)

150

150

1.5

150


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IV. RESULTADOS

TABLA No. 2

MUESTRA

ABSORBANCIA

CONTENIDO DE PROTEINA

MICROSOMAL (µg / ml)

CONTENIDO DE PROTEINA

MICROSOMAL (mg / ml)

1 2 3 4 5 6

V. CUESTIONARIO 1.- Explica si tus resultados indican una inducción enzimático o no y da una explicación 2.- Explica los efectos que provocan el pentobarbital y el fenobarbital a dosis múltiples 3.- Cuales son los factores que modifican el metabolismo de fármacos, explica al menos tres de estos factores. 4.- Cual es el mecanismo propuesto para las reacciones oxidativas de los fármacos. 5.- En que lugares del organismo se llevan a cabo la biotransformación de los fármacos. 6.- Cual es la importancia y función del hígado desde el punto de vista farmacológico. 7.- A que nivel celular ocurren los procesos de oxido-reducción de los fármacos en el hígado. 8.- Explica las fases por las cuales se lleva acabo los procesos de biotransformación. 9.- La Glucoronil transferasa que efectos causa sobre el metabolismo de fármacos. -


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PRACTICA No. 5 "CUANTIFICACIÓN DE LA ELIMINACIÓN RENAL DEL ÁCIDO ACETILSALICILICO EN HUMANOS" I. OBJETIVOS 1.- Cuantificar la eliminación del ácido acetilsalicílico (AAS) empleando la orina de sujetos voluntarios. 2.- Determinar si las características de dos diferentes formulaciones influyen sobre la eliminación del analgésico. II. INTRODUCCIÓN Una vez que el fármaco ha sido absorbido, es transportado por la sangre a los tejidos entre los cuales es distribuido, metabolizado y/o eliminado, lo que puede ocurrir simultáneamente con los otros procesos. El riñón es el órgano de eliminación más importante para fármacos y/o sus metabolitos. Los tres procesos más importantes tanto para la eliminación de fármacos como para la formación de orina son: filtración glomerular, secreción y reabsorción tubular. Las modificaciones del pH de la orina alteran la excreción de ácidos y bases débiles. La modificación que favorece la formación de moléculas, no ionizadas aumenta la reabsorción tubular y disminuye la excreción. Además los fármacos se pueden eliminar por: heces, sudor, lágrimas, aire exhalado, y en algunos casos a través de la leche. CONOCIMIENTOS PREVIOS: Conocer los lineamientos generales para la experimentación en humanos. Conocer en que consiste el proceso farmacocinética III. DESARROLLO DE LA PRACTICA 1.- Para esta práctica se requiere de la participación de voluntarios que no hayan recibido ninguna medicación por lo menos 48 horas antes del ensayo, que no tengan antecedentes de hipersensibles al AAS, que no tengan problemas de sangrado gastrointestinal y que no se encuentren en período menstrual. 2.- Por cada equipo participarán 3 voluntarios, a los cuales se les tomará su biotipo (talla, sexo, peso) antes de iniciar el experimento. 3.- Cada voluntario colectará, en un recipiente limpio, una muestra de orina, antes de ingerir el AAS que corresponde a la muestra basal.


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4.- El voluntario "1" tomará 1000 mg de AAS con 500 ml de agua. Si durante el curso del experimento podran ingerir mas agua o Te. El voluntario "2" tomará 1000 mg de AAS con 250 ml de agua y 1 g de bicarbonato

de sodio con 250 ml de agua. El voluntario "3" tomará 1000 mg de AAS o más . Se hiede que ingieran una

presentación comercial de AAS que contenga amortiguador. Para todos los casos, anotar la hora de ingestión del fármaco y el tipo de forma farmacéutica ingerida. El tiempo de toma muestra se considerar a partir de la ingesta de AAS: 5.- Colectar muestras de orina a los 20, 40, 80 y 160 min posteriores a la administración del fármaco (ASS), y determine la concentración de AAS en cada una de las muestras con el siguiente procedimiento: a) Para cada muestra mida el pH y el volumen llenando la Tabla No. 1. b) Tomar una alícuota de 2 ml de orina y adicione 8 ml de HCl 0.1 N. c) Agite y filtre d) Tomar 5 ml de filtrado y adicionar 1 ml de reactivo de Trinder. Este reactivo es

tóxico, por lo que hay que manejarlo con mucha precaución. e) Calibrar el espectrofotómetro con la muestra procesada de la orina basal,

ajustando a 0 de absorbancia f) Lea a 540 nm. Anotar los resultados en la Tabla No. 2. 6.- Efectúe las correcciones para las diluciones realizadas y exprese los resultados del contenido de salicilato en mg/ml de orina para encontrar la concentración de salicilatos, trace la curva de calibración para el AAS obtenida en el fotocolorímetro Spectronic 20. Interpole en la curva de calibración las lecturas obtenidas para cada muestra.


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Concentración Absorbancia µg/ml 12.4 --------------------- 0.123 25.0 --------------------- 0.210 50.0 --------------------- 0.413 100.0 --------------------- 0.820

V- RESULTADOS

TABLA No.1

COLECCIÓN DE ORINA (min) 0 20 40 80 160 180 210

V

F

pH Vol pH Vol pH Vol pH Vol pH Vol pH Vol pH Vol

V= Voluntario F= Tipo de formulación que se ingirió


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TABLA No.2

V F COLECCIÓN DE ORINA (min) 0 20 40 80 160 180 210 A B C A B C A B C A B C A B C A B C A B C D V: Voluntarios por equipo F: Formulación de Ácido acetil salicílico ingerida A: Lectura de las Muestras (absorbancia) B: Concentración de AAS obtenido por interpolación de la lectura en la curva de calibración. C: Cantidad de AAS parcialmente eliminada en cada tiempo. D: Cantidad Total eliminada durante los 160 min del periodo experimental. IV. CUESTIONARIO 1. Grafique concentración en µg/ml de AAS contra tiempo, para cada voluntario. 2. De acuerdo con los resultados que obtuvo relacione el pH Urinario con la concentración del fármaco en orina. 3.- Los datos obtenidos le dan la información suficiente para determinar el volumen de Distribución aparente, constante de eliminación (K) y la vida media biológica del AAS. 4.- a) ¿Cuál fue la cantidad total eliminada en el periodo de experimentación para cada Voluntario? b) Investigue si dicha concentración se encuentra dentro del umbral terapéutico. 5.- ¿Qué importancia tiene la depuración renal y qué relación tendrá con la dosificación?. 6.- Cual es tu comentario sobre la eliminación de renal de aspirina cuando se administra en forma de trociscos sublinguales. 7.- Esquematiza como sería el efecto úricosúrico de la aspirina. 8. Cuales son las consecuencias en la concentración plasmática de este fármaco cuando se une la aspirina con la s proteínas del túbulo proximal. 9.- Como influye la aspirina sobre la reabsorción tubular de fármacos.


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UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS. DEPARTAMENTO DE FARMACIA. Laboratorio de Farmacología ACTA DE CONSENTIMIENTO El (La) que suscribe ______________________________________de años de edad, en pleno uso de mis facultades físicas y mentales, declaro haber sido invitado a participar como sujeto experimental en la sesión práctica No.5, llamada " Cuantificación de la eliminación renal del Ácido acetil salicílico en humanos. Para este fin, he sido informado (a) en forma amplia y clara de que recibiré 500 mg de ácido acetil salicílico en cualquiera de sus presentaciones (Tableta, tableta efervescente ó Tableta más 1 gr. de Bicarbonato de Sodio). Todo ello es con el propósito de realizar la presente práctica y, que el único es el académico. Además que los riesgos de esta administración pueden consistir en un mínimo malestar gastrointestinal. Por lo anterior, expreso libremente y sin ningún tipo de coerción, mi buena y sana voluntad de cooperación para el desarrollo de la presente sesión. Por último es conveniente mencionar, que puede retirarme en cualquier momento, si así lo considero prudente, sin que se vea afectada mi calidad de estudiante. H. Puebla de Z. a de del 200

-------------------- --------------------- Firma del Alumno Firma del Profesor

-------------------- --------------------- Testigo del Testigo Firma del Testigo


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PRACTICA No.6 "CURVA DOSIS RESPUESTA-GRADUAL" I. OBJETIVO Encontrar la relación de la respuesta gradual del íleon de rata a diferentes concentraciones molares de acetilcolina. II. INTRODUCCIÓN La relación gráfica entre la magnitud de la respuesta y la dosis que produce (curva dosis-respuesta) es un elemento importante para cuantificar la actividad farmacológica, y permite estudiar las características de la interacción fármaco-receptor. Si se aplican concentraciones crecientes del fármaco y, después de cada aplicación, se determina la respuesta que se califica como gradual, porque está constituida por respuestas de magnitud variable y cada vez mayor. En el punto en que la respuesta máxima ya no aumenta, se conoce como efecto máximo (Emáx). Este tipo de curvas puede tener su explicación teórica en la "Teoría de Ocupación" o, también llamada, "Teoría de Clark". Creo las bases para el estudio de los aspectos cuantitativos de las interacciones entre el fármaco y el receptor y, con fundamento en sus estudios, se asume que la magnitud de la respuesta es directamente proporcional al numero de receptores ocupados por las moléculas del fármaco, y la respuesta máxima se produce cuando todos los receptores están ocupados. De ello se derivan conceptos útiles para la interpretación de las curvas dosis-respuesta gradual: a.-La afinidad: Que es la capacidad de un fármaco de unirse a un receptor. b.- Eficacia o actividad intrínseca: capacidad de un fármaco para generar efecto

biológico. El efecto resultante es proporcional al número de receptores ocupados y se

emplea la siguiente expresión:

Fármaco (D)+ Receptor K1 / K2 DR EFECTO ....... Ec 1


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La relación entre el efecto y la concentración del fármaco libre puede ser descrita, por la siguiente ecuación:

“ Para la mayor parte de los farmacólogos modernos el receptor es como una mujer muy bella, pero remota. El hombre le ha escrito varias cartas y ella frecuentemente le ha contestado. A partir de esas contestaciones el farmacólogo se ha creado una imagen de la bella dama. Sin embargo, no puede pretender ni haberla visto, aunque quizá algún día ello pueda ocurrir”.

D.K. Jongh 1964 CONOCIMIENTOS PREVIOS: Conocer la técnica de manejar tejido aislado. Conocer el manejo del quimógrafo. Conocer el efecto de los fármacos mediado por receptores. III. DESARROLLO DE LA PRACTICA 1.- Se utilizará una rata para todos los equipos de la sección. Practique una dislocación cervical, corte la piel que recubre el abdomen y extraiga el íleon terminal; colóquelo en una caja Petri que contenga solución Tyrode. Quite el contenido fecal pasando solución Tyrode por la luz intestinal con una jeringa. Corte segmentos de 3-4 cm y suture con hilo de algodón en los extremos, en forma equidistante, procurando no cerrar la luz del intestino. 2.- Coloque el segmento de intestino en la cámara para tenerlo aislado, fijando uno de los extremos en el alambre del tapón de hule, y el otro extremo a la pajilla del quimógrafo, llene la cámara con solución Tyrode hasta un nivel donde cubra todo el músculo, señale el nivel, drene el baño, mida el volumen y vuelva a llenar hasta el mismo nivel. Evite dañar el tejido. 3.- Deje correr el quimógrafo 30 seg previamente para hacer el registro de la actividad basal. 4.- Agregue 0.1 ml de acetilcolina por cada 10 ml de solución Tyrode.

Efecto = Efecto Maximo [D]K + [D]

.... Ec 2d

_


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5.- Detenga el quimógrafo y drene el baño con solución Tyrode. 6.- Continúe con la siguiente dosis de acetilcolina y registre el efecto. 7.- Una vez obtenido el registro, proceda a enlacar el papel y séquelo al aire. 8.- Mida sus respuestas contráctiles obtenidas en mm y vacíe sus resultados en la tabla No. 1. 9.- Reúna los resultados de toda la sección y obtenga el promedio. 10.- Calcule los promedios y anótelos en la la tabla No. 2. Para calcular los porcentajes de la respuesta tome como 100 % la respuesta máxima obtenida con la acetilcolina. 11.- Grafique con el promedio de datos de toda la sección en el eje de las abscisas la dosis y en el eje de las ordenadas el porcentaje de la respuesta máxima para cada dosis de acetilcolina.


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IV.- RESULTADOS T A B L A No. 1

Concentración Mg/ml

log Concentración. RESPUESTA DE LA ACETILCOLINA ( mm )

2

4

8

16

32 TABLA No.2

Concentración mg/ml

log Concentración

Promedio de Respuesta de Acetilcolina.

(mm)

Porcentaje de Respuesta Máxima

(%)

% RM - Porcentaje de respuesta máxima con respecto a la acelilcolina.


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V.- CUESTIONARIO 1. Grafique la curva dosis-respuesta gradual y de sus resultados. 2. ¿Cuál es la composición química de la solución Tyrode?. 3. ¿A que es proporcional la concentración del íleon?. 4. ¿A que se llama concentración umbral? 5. Menciona 3 razones por las cuales el íleon de rata no responde a la acetilcolina.


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PRACTICA No. 7 "CURVA DOSIS-RESPUESTA CUANTAL" I. OBJETIVOS 1. Identificar los efectos sedante e hipnótico, así como muerte producida por el pentobarbital en ratones. 2. Determinar el valor de dosis efectiva (DE50) para sedación e hipnosis y dosis letal (DL50) 3.Determinar el margen de seguridad para los efectos farmacológicos. II. INTRODUCCIÓN La curva cuantal nos permite conocer la dosis mínima necesaria para producir un efecto determinado en una población. En el análisis, la mediana de la curva es la dosis con la cual el 50% de la población manifiesta un efecto específico, y el otro 50% no presenta el efecto; por lo tanto, la dosis efectiva 50 (DE50) se emplea para expresar la cantidad de fármaco mínima necesaria para producir un determinado efecto farmacológico en un 50% de la población, y la dosis letal 50 (DL50) es la cantidad de fármaco con la cual muere el 50% de la población. Un índice terapéutico nos informa de la seguridad del fármaco y de su peligrosidad, y se obtiene experimentalmente al determinar y comparar las dosis que inducen un efecto farmacológico útil (sedación, analgesia, hipotensión, etc.), con las que se producen efectos letales o tóxicos (diarrea, vómito, incoordinación motora o la muerte). A nivel clínico la seguridad de un fármaco depende del grado de separación entre la dosis que produce efectos tóxicos y la dosis que produce el efecto terapéutico. La curva dosis-respuesta cuantal permite una estimación precisa de otras variables como son: DE50, DL50, DE99, DL5 y DE95 entre otras.

IT = DL50 / DE50

IT = INDICE TERAPEUTICO


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CONOCIMIENTOS PREVIOS: Conocer la técnica del manejo y administración a roedores pequeños. Conocer los efectos de los barbitúricos. III. DESARROLLO DE LA PRACTICA. 1. Cada equipo trabajará con 7 ratones 2. Asigne una dosis a cada ratón en forma aleatoria. Las dosis en (mg/kg) son: 3.3, 8.0, 20.0, 50.0, 125 y 312.5. 3. El ratón No. 7 será utilizado como control y recibirá solución salina isotónica (0.85%) en una dosis de 0.1 ml/10 g de peso. 4. A partir de la solución de pentobarbital sódico (63 mg/ml), preparar las soluciones en las concentraciones adecuadas a las dosis que se indican. 5. Administrar las dosis correspondientes por vía intraperitoneal a cada uno de los ratones con intervalos de 5 min entre cada administración. 6. Dentro de los primeros 45 min después de la administración, anote como (+) a sedación si el animal presenta incoordinación motora, y (+) a hipnosis si el animal ya no responde a estímulos externos y parece dormido. Anote estos resultados en la tabla No.1 7. Con los resultados de todos los equipos de la sección, llene la tabla No. 2.


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TABLA No. 1

No. Ratón

Peso (gr)

Dosis mg/Kg

Efectos Observados

S H M

TABLA No. 2

PENTOBARBITAL DOSIS mg/Kg

LOGARITMO DE LA DOSIS

% DE EFECTO

S H M

3.1

8.0

20.0

50.0

125.0

312.5


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IV. CUESTIONARIO 1. Con los datos de toda su grupo, elabore la curva dosis-respuesta para sedación, hipnosis, muerte. 2. ¿Cuál es la DE50 para sedación e hipnosis y DL50? 3. ¿Cuál es el índice terapéutico para cada efecto? 4. ¿Que diferencia existe entre con los valores que se obtuvieron experimentalmente para la sedación e hipnosis y los valores que se ocupan en la clínica. 5.- Cual es la importancia del margen de Seguridad.? 6.-Se administraron diversas dosis de fenobarbital a grupos de 20 ratones. Los resultados obtenidos fueron los siguientes: Animales Dormidos Dosis Animales muertos Dosis % mg/g % mg/g 5 80 5 200 20 90 15 220 60 103 40 240 85 110 50 260 100 120 90 280 90 300 a.- Grafique la curva log Dosis-Respuesta. b.- Calcule la DE50. c.- Calcule la DL50 d.- Calcule el índice terapéutico. e.- Explique si se considera un fármaco seguridad.


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APÉNDICE I PREGUNTAS

1.- ¿Que es una forma farmacéutica y un medicamento?

2.- Define la absorción de fármacos e indica como se modifica.

3.- Mencione y explique los factores que modifique la absorción enteral.

4.- Mencione y explique los factores que modifiquen la absorción parenteral.

5.- ¿Que es el coeficiente de partición de los fármacos y como se obtiene?. Investiga el

Cp del diacepam, Tiopental, morfina, ibuprofeno y AAS

6.- ¿Que entiendes por distribución de fármacos?

7.- En un mismo gráfico indica y explica el comportamiento de la concentración

plasmática en función del tiempo por una administración intravenosa y una oral.

8.- ¿Que entiendes y cual es la importancia de saber el volumen de distribución.?

9.- ¿Que entiendes por tiempo de latencia?

10.-¿Cual es la vía de administración adecuada para una superficie de absorción grande.

11.- Indica en orden decreciente cual (s) son los órganos mas irrigados. Anota sus valor

de gasto cardiaco e irrgigacion.

12.- Define ¿que es la farmacocinética? e indica cual es su importancia.

13.- ¿Que entiendes por eliminación de fármacos?

14.- ¿Como favoreces la eliminación renal de un fármaco ácido?

15.- Menciona cuatro factores que modifiquen la eliminación de fármacos.

16.- Si tenemos dos fármacos uno con un coeficiente de partición de 500 y otro de 100

Cual de ellos tendrá mayor tiempo de latencia.?

17.- ¿Que entiendes por la depuración de un fármaco?

18.- ¿Cuanto mayor es 1 mg de 1ng, 1ng de 0.01ng y 1 µg de 0.00001µg

19.- ¿Que entiendes por sedación e hipnosis?

20.- Explica en un grafico si un fármaco se absorbe mas rápido de lo que se elimina .

21.- ¿De que muere un animal que se le administro dosis grandes de pentobarbital?


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22.- ¿Explica los factores que modifican la distribución de fármacos?

23.- ¿Que es la eutanasia, carcionogenesis por fármacos, mutagénesis y teratogénesis.

24.- ¿Que son las reacciones del primer paso? Como modificaría la concentración

plasmática.

25.- ¿Como influye la unión covalente de un fármaco a la albúmina en su distribución?

26.- ¿Si un fármaco tiene un coeficiente de partición de 1000 posiblemente donde

estará?

27.- ¿Que es la farmacodinamia? Explica los nivels de accion de los farmacos

28.- ¿Que entiendes por una curva dosis respuesta gradual?

29.- ¿Que entiendes por una curva dosis respuesta cuantal ?

30.- ¿Que es el índice terapéutico?

31.- Si un fármaco tiene un índice terapéutico de 1.90 ¿se tratara de un fármaco seguro?

32.- ¿Que es un receptor? Explica la teoría de ocupación de los receptores

33.- ¿Cuales son las propiedades de los receptores?

34.- ¿Que es el antagonismo químico? y menciona un ejemplo.

35.- Que es el antagonismo fisiológico y menciona un ejemplo.

36.- Que es el antagonismo farmacológico y menciona un ejemplo

37.- Como actúa la acetil colina.

38.- Como actúa la atropina.

39.- Como actúa un fármaco anticolinesterasico

40.- En que consiste la farmacodependencia.

41.- La aspirina produce farmacodependencia si, no y porque.

42.- Que es el síndrome de abstinencia.

43.- Menciona que conducta tomarías ahora para la utilización de los animales

del laboratorio

44.- Explica porque se ocupan en los experimentos farmacológicos mas a los roedores

que a otras especies


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45.- Explica el porque no se puede variar la vía de administración de una forma

farmacéutica

46.- Que entiendes por vida media de una fármaco.

47.- Cual es la formula del volumen de distribución para una administración endovenosa

48.- Que es un experimento in vivo y que uno in-vitro

49.- Que entiendes por el umbral terapéutico

50.- Menciona tres características farmacológicas por las que el íleon del cobayo no

tuvo respuesta al agregar acetil colina.

51.- Menciona 5 características por las que las formas farmacéuticas son mas comunes.

52.- Como se clasifican las vías de administración.

53.- Que produce el ácido tricloroacético.

54.- Menciona las ventajas y desventajas de la vía endovenosa.

55.- Cual es la diferencia entre farmacología clínica y farmacología experimental.

56.- Ejercicio:

| Se quiere administrar una dosis de 100 mg/kg a una animal que peso 100 g ¿cuándo

administrar en mg? y si la concentración es de 1 mg/ml, ¿que volumen administrarías

en ml? (tiempo de respuesta 3-4 min.)

57.- Cuales son las gráficas ideales para un antagonismo competitivo

58.- Que es el antagonismo competitivo.

59.- Cuantas veces es menor un picogramo de un nanogramo. (respuesta de 2-3 min).

60.- Explica los mecanismos de acción de los fármacos a niveles de membrana celular.

61.- Explica los mecanismo de acción de los fármacos por medio de receptores de

membrana e intracelular. Explica al menos con dos ejemplos de cada uno de

ellos.

62.- Explica el mecanismo de acción de fármacos sobre proteínas G inhibitorias y

estimulatorias.

63.- Explica el mecanismo de acción de Fármacos sobre el IP3 y su receptor.

64,. La estimulación de fármacos de diacilglicerol o tromboxanos que efectos le produce

a la célula.

65.- Que consecuencias tendría para una célula si un fármaco activa la formación de

AMPc.


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66.- Los pépticos como ejercen su acción.

67.- Indica y explica las consecuencias de que un fármaco actué sobre receptores

presinapticos.

68.- Explica las consecuencias de que un fármacos actué sobre factores de transcripción.

69.- Explica las consecuencias de que un fármaco actué sobre proteínas antioxidantes.

70.- Actualmente se están estudiado fármacos que activen proteínas antiapoptoticas.

Explica estos estudios.

72.- Que explicación darías a los estudios de fármacos que activen proteincinasas.

73.- Se trata de fármacos estimulantes de la exocitosis presinaptica. Que importancia

tendría hacer estos estudios de Farmacología molecular. Da un ejemplo.

74.- Se trata de una fármaco que ejerce su acción sobre la liberación de calcio

intracelular. Como harías una curva dosis respuesta.

75.- Si la morfina actúa sobre receptores µ en el cerebro. Explica como bloquea los

estímulos dolorosos. Investiga la kd de la morfina y del fentanil y explica su

importancia clínica de cada uno de ellos.


Q.F.B

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APÉNDICE II

INTERPRETACION DE LA FARMACOLOGIA.

A) Deberás dar un comentario sobre La Farmacología y en relación al

perfil de tu carrera.

B) Deberás escribir tu comentario al inicio del Curso y otro al finalizar el

Curso. Este comentario se basa en la forma en que Interpretas la

Farmacología al Inicio del tu curso y al Final.


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C) Deberás de explicar cuales de los libros de Farmacología son mas útiles para entender la Farmacología.

D) Deberás investigar y dar un comentario sobre las actividades de

Investigación en Farmacología a nivel de:

D1) Investigación Clínica D2) Investigación Básica.


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E) Investigar que tipo de Investigación se realiza en cualquier area de la Farmacología en nuestra Universidad.

F) Investigar en que Institutos, Universidades se puede realizar un postgrado en cualquier área de la Farmacología. En cual y porque elegirías uno de ellos.


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BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE … · la curva de calibración del Sulfatiazol Sódico, para...

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