Caso 1Hombre de 32 aos con HIV + sometido a biopsia de medula sea.

Cul es el diagnstico

Reaccin de PAS 100 XImpregnacin argntica de Grocott 40 X

TECNOLOGA MDICALaboratorio Clnico y de Anatoma PatolgicaHistoqumica:Biopsia de mdula seaProf. Eduardo Sedano Gelvet

Estructura de la Mdula seaClulas reticulares y fibras de reticulina, que forman una malla de soporte; Vasos sanguneos y nervios, que dan origen al sistema de sinusoides encargados de recibir las clulas sanguneas recin producidas y llevarlas a circulacin; Tejido hematopoytico maduro y precursores (mdula roja), donde se produce la hematopoyesis propiamente dicha y Grasa (mdula amarilla), que acta como soporte del tejido hematopoytico y como reserva frente a una necesidad de mayor hematopoyesis.

Es una biopsia por trepanacin y consiste en la obtencin de muestras de hueso para el estudio de enfermedades de la medula sea en los trastornos hematolgicos.Biopsia de mdula sea

Este proceso se realiza:Infecciones (bacterias, micobacterias, hongos).Anemias.Leucemias.Sndromes mielodisplsicos.Valorar la eficacia del tratamiento de leucemias y linfomas.Diagnosticar recidivas.

Toma de muestraAspirado(lquida)Porcin slida (hueso)FrotisFijacinColorantes hematolgicosHistoqumicaInmunohistoqumicaCitogenticaFijacinDescalcificacinInclusin en parafinaMicrotomaAspirado (coagulo))FijacinInclusin en parafinaMicrotoma

FrotisColoracin de Wright.Histoqumica enzimtica:PeroxidasaFosfatasa alcalinaFosfatasa cidaReaccin de PASReaccin de PerlsInmunohistoqumica

Coloracin de WrightReaccin de la peroxidasa

Porcin slidaHueso

FijacinLa mayor parte de las dificultades de interpretacin de las biopsias se deben a problemas de fijacin.Fijadores:Formol tamponadoB5Lquido de Bouin

Formol tamponadoVentajas:Aplicacin de reacciones histoqumicas.Aplicacin de reacciones inmunohistoqumicas.Desventajas:No se puede hacer una buena evaluacin morfolgica.

B5Ventajas:Buena evaluacin morfolgica.

Desventajas:Endurece demasiado el tejido.Dificulta la inmunohistoqumicaNo procedimientos moleculares para ADN.

Lquido de BouinVentajas:Fijacin rpida (2 a 4 horas)Aplicacin de reacciones histoqumicas.Aplicacin de reacciones inmunohistoqumicas.

Desventajas:No procedimientos moleculares para ADN.

Descalcificacin:Evitar el formol ntrico:Altera la morfologa.Dificulta la inmunohistoqumicaAlgunos usan el EDTA:Descalcificacin lenta.Usar formol-cido frmico:Despus de fijar con lquido de BouinBuenos resultados

Secciones de tejidos fijados en formol e incluidos por el mtodo de la parafinaColoracin de hematoxilina-eosina.Coloracin de Giemsa.Histoqumica.Inmunohistoqumica

Colorantes neutros o hematolgicos o de RomanovskySales neutras complejas que se obtienen mezclando un colorante de naturaleza cida (eosina) con otro de tipo bsico (azul de metileno). La oxidacin del azul de metileno produce los azures de metileno.

CaractersticasPropiedades colorantes van unidas a los componentes cido y bsico de la molcula.Poco solubles en el agua Deben disolverse en alcohol metlico o en glicerina para evitar la formacin de precipitados.

Disueltos en alcohol o en glicerina no actan como colorantes.El colorante disuelto en alcohol o en glicerina se disocia en agua destilada o en buffer fosfato pH=6.4-6.6Disociacin de la molcula en aniones y cationes, ambos portadores de color y con afinidad por elementos celulares de carga opuesta.

Despus de la disociacin de la molcula colorante, sobre el tejido se observa tres colores:Azul por el azul de metileno.Rosado por la eosina.Prpura por metacromasia de los azures y del azul de metileno.

GiemsaWrightLeishmanMay-Grnwald

The granules in eosinophils stain bright red with the giemsa stain in this case of acute esophagitis.The granules in eosinophils stain bright red with the giemsa stain in this case of acute esophagitis

Reacciones histoqumicas

Reaccin para demostrar actividad de peroxidasaLa enzima peroxidasa de las clulas mieloides acta sobre su substrato el perxido de hidrgeno produciendo oxigeno, este oxida la bencidina la cual se deposita en el citoplasma.

Clulas perxidasa positivoNeutrfilos.EosinfilosMielocitos.

Clulas perxidasa negativoLinfocitos.Clulas plasmticas.

Reaccin de FeulgenLa hidrlisis con HCl 1 N a 60C, permite la liberacin de las bases purnicas del ADN con la consiguiente formacin de grupos aldehdos (-CHO). Estos son reconocidos por el reactivo de Schiff produciendose un color rojo magenta que denota la presencia de ADN.

Reaccin de P.A.S.La oxidacin con cido perydico permite la ruptura y oxidacin de los grupos alfa glicol, con la consiguiente formacin de grupos aldehdos (-CHO). Estos son reconocidos por el reactivo de Schiff produciendose un color rojo magenta.

Leucemia aguda linfoblastica (LAL) es P.A.S. positiva.Leucemia aguda mieloblastica (LAM) es P.A.S. negativa.

Coloracin con verde de metilo pironina (Unna-pappenhein) Colorantes bsicos, cuando la mezcla de ambos se aplica a pH=4.8 se produce una coloracin selectiva, el verde de metilo (trifenil metano) colorea el ADN mientras que la pironina (xanteno) colorea el ARN.

Verde metil

Cristal violeta

Pironina

Cuerpos de inclusin de Dhle.Hemates policromatfilos.

Clulas plasmticas malignas

Reaccin de Perls (azul de Prusia o azul de Berlin)Hidrlisis con HCl, permite la liberacin del hierro, que esta almacenado en las clulas unido a las protenas del citoplasma. El hierro al enfrentarse al ferrocianuro de potasio forma in situ ferrocianuro frrico de color azul de Prusia.

El contenido de hierro medular se determina observando en 100X precursores eritroides:No se identifican grnulos intracelulares: 0Se identifican grnulos ocasionalmente: +Se considera como normal, cuando se observan grnulos en el 10% de las clulas observadas: ++Cuando estn moderadamente aumentados: +++Cuando es evidente el exceso de hierro tanto en los precursores celulares como extracelularmente: ++++

Reacciones inmunohistoqumicas

Nomenclatura unificada CDCD significa grupos de diferenciacin(del ingles cluster of differentiation), son molculas de protenas reconocidas por un grupo de anticuerpos monoclonales.

Estas protenas sirven como marcadores fentipicos de las diferentes poblaciones leucocitarias. Por ejemplo, la mayora de las clulas T colaboradoras expresan una protena de superficie llamada CD4

Identificacin de clulas en:Respuesta inflamatoria.Respuesta inmunitara.Linfomas.Leucemias

Marcador general

Antgeno comn leucocitario (CD 45)Este antgeno (protena) se encuentra localizado en la superficie de la membrana de las clulas linfoides y de los polimorfonucleares.

Marcadores especficos

UNIDAD DE ANATOMIA PATOLOGICA

Linfocito Th y Tc

UNIDAD DE ANATOMIA PATOLOGICA

Linfocito B

UNIDAD DE ANATOMIA PATOLOGICA

CLULA CITOLITICA NATURAL (NK)

CD 15

CD 30