Pruebas BioqumicasLaboratorio de Microbiologa

Con frecuencia,la identidad de una especie requiere que se conozca de manera detallada su actividad bioqumica, porque otras caractersticas no son suficientemente distintivas o diferenciales.Introduccin

Agar Hierro KliglerMedio de cultivo frecuentemente usado en microbiologa de alimentos para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa y lactosa, y a la produccin de cido sulfhdrico.

Fundamento

En el medio de cultivo, la peptona de carne y latriptena,aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano.La lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables.El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico,el citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+, los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro.Elrojodefenoleselindicadordeph,yelclorurodesodiomantieneelbalanceosmtico.Elagareselagentesolidificante.Porfermentacindeazcares,seproducencidos,quesedetectanpormediodelindicadorrojodefenol,elcualviraalcoloramarilloenmediocido.Eltiosulfatodesodiosereduceasulfurodehidrgenoelquereaccionaluegoconunasaldehierroproporcionandoeltpicosulfurodehierrodecolornro.

Resultados1-Picoalcalino/fondocido(picorojo/fondoamarillo):elmicroorganismosolamentefermentalaglucosa.2-Picocido/fondocido(picoamarillo/fondoamarillo):elmicroorganismofermentaglucosa,ylactosa.3-Picoalcalino/fondoalcalino(picorojo/fondorojo):elmicroorganismoesnofermentadordeazcares.4-Lapresenciadeburbujas,orupturadelmediodecultivo,indicaqueelmicroorganismoproducegas.5-Elennegrecimientodelmedioindicaqueelmicroorganismoproducecidosulfhdrico.

Caractersticas del medioMedio preparado: rojo

TSI Agar

Medio universalmente empleado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a la produccin de cido sulfhdrico

Extracto de carne3.0Pluripeptona20.0Cloruro de sodio5.0Lactosa10.0Sacarosa10.0Glucosa1.0Sulfato de hierro y amonio0.2Tiosulfato de sodio0.2Rojo de fenol0.025Agar13.0pH final: 7.3 0.2

FundamentoEnelmediodecultivo,elextractodecarneylapluripeptona,aportanlosnutrientesadecuadosparaeldesarrollobacteriano.Lalactosa,sacarosayglucosasonloshidratosdecarbonofermentables.Eltiosulfatodesodioeselsustratonecesarioparalaproduccindecidosulfhdrico,elsulfatodehierroyamonio,eslafuentedeionesFe3+,loscualessecombinanconelcidosulfhdricoyproducensulfurodehierro,decolornegro.ElrojodefenoleselindicadordepH,yelclorurodesodiomantieneelbalanceosmtico.Porfermentacindeazcares,seproducencidos,quesedetectanpormediodelindicadorrojodefenol,elcualviraalcoloramarilloenmediocido.Eltiosulfatodesodiosereduceasulfurodehidrgenoelquereaccionaluegoconunasaldehierroproporcionandoeltpicosulfurodehierrodecolornro.

LisinaHierroAgar

Mediodecultivoutilizadoparadiferenciarmicroorganismos,especialmenteSalmonellaspp.,basadoenladecarboxilacin/desaminacindelalisinayenlaproduccindecidosulfhdrico.

Peptona de gelatina5.0Extracto de levadura3.0Glucosa1.0Lisina10.0Citrato de hierro y amonio0.5Tiosulfato de sodio0.04Prpura de bromocresol0.02Agar15.0pH final: 6.7 0.2

FundamentoEnelmediodecultivo,lapeptonayelextractodelevaduraaportanlosnutrientesparaeldesarrollobacteriano.Laglucosaeselhidratodecarbonofermentable,ylalisinaeselsustratoutilizadoparadetectarlapresenciadelasenzimasdecarboxilasaydeaminasa.Elcitratodehierroyamonio,yeltiosulfatodesodio,sonlosindicadoresdelaproduccindecidosulfhdrico.Elpurpuradebromocresol,eselindicadordepH,elcualesdecoloramarilloapHigualomenora5.2,ydecolorvioletaapHigualomayora6.8.Pordecarboxilacindelalisina,seproducelaaminacadaverina,quealcalinizaelmedioyestoproduceelvirajedelindicadoralcolorvioleta.Ladecarboxilacindelalisina,tienelugarenmediocido,m

Losmicroorganismosquenoproducenlisinadecarboxilasa,peroquesonfermentadoresdelaglucosa,producenunvirajedelatotalidaddelmediodecultivoalamarillo,peroalas24hsdeincubacinseobservaelpicodecolorvioletadebidoalconsumodelaspeptonas,yelfondoamarillo.Laproduccindesulfurodehidrgeno,sevisualizaporelennegrecimientodelmediodebidoalaformacindesulfurodehierro.LascepasdelosgnerosProteus,ProvidenciayalgunascepasdeMorganella,desaminanlalisina,estoproduceuncidoalfa-ceto-carbnico,elcual,conlasaldehierroybajolainfluenciadeloxgenoformauncolorrojizoenlasuperficiedelmedio.

Resultados1-Decarboxilacindelalisina:-PruebaPositiva:Picovioleta/fondovioleta.-PruebaNegativa:Picovioleta/fondoamarillo.2-Desaminacindelalisina:Picorojizo/fondoamarillo.EstosucedeconcepasdelgneroProteus,ProvidenciayalgunacepasdeMorganellaspp.3-Produccindecidosulfhdrico:-Pruebapositiva:Ennegrecimientodelmedio(especialmenteenellmitedelpicoyfondo)

MIO Medio

MediousadoparalaidentificacindeEnterobacteriaceaeenbaseasumovilidad,actividaddeornitinadecarboxilasayproduccindeindol.Dextrosa1.0.Extracto de levadura3.0Peptona10.0Triptena10.0Clorhidrato de L-ornitina5.0Agar2.0Prpura de bromocresol0.02pH final: 6.5 0.2

FundamentoMediodecultivosemislido,altamentenutritivodebidoalapresenciadeextractodelevadura,peptonaytriptena.Adems,latriptenaaportagrandescantidadesdetriptofano,sustratodelaenzimatriptofanasa,paralarealizacindelapruebadelindol.Ladextrosaeselhidratodecarbonofermentable,laornitinaeselsustratoparaladeteccindelaenzimaornitinadecarboxilasa,elprpuradebromocresoleselindicadordepH,queenmedioalcalinoesdecolorprpurayenmediocidoesamarillo.Porsucomposicin,esposibledetectar3reaccionesenunmismotubo:movilidad,presenciadeornitinadecarboxilasaeindol.

Lamovilidadsedemuestraporunenturbiamientodelmediooporcrecimientoquedifundemasalldelalneadeinoculacin.Lareaccinpositivaalaornitinaestdadaporuncolorprpuradelmedio.DebidoalafermentacindelaglucosasereduceelpHproduciendounacondicincidayoriginandoqueelindicadordepHprpuradebromocresolvirealarillo.Lapresenciadeacidez,otorgacondicionesptimasparalaactividaddelaenzimaornitinadecarboxilasa,lacualdecarboxilalaornitinapresente.Pordecarboxilacin,sealcalinizaelmedio,conelconsecuentevirajedelindicadorhaciaelcolorprpura.Elindol,esproducidoapartirdeltriptofanoporlosmicroorganismosquecontienenlaenzimatriptofanasa.EldesarrollodeuncolorrojoluegodeagregarunasgotasdereactivodeKovacsodeErlich,indicaunresultadopositivo.

Resultados1-Movilidad:-Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas all de la lnea de siembra.-Resultado negativo: crecimiento solamente en la lnea de siembra.2-Ornitina decarboxilasa:-Resultado positivo: color prpura.-Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color violceo en la superficie del medio.3-Prueba del indol: La prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la prueba de ornitina. -Resultado positivo: color rojo al agregar el reactivo revelador.-Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento.Caractersticas del medioMedio preparado: prpura transparente a ligeramente opalescente.

SIMMedio

Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad,produccin de indol y de sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo.Es til para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.

Triptena20.0Peptona6.1Sulfato de hierro y amonio0.2Tiosulfato de sodio0.2Agar3.5pH final: 7.3 0.2

FundamentoEltriptfanoesunaminocidoconstituyentedemuchaspeptonas,yparticularmentedelatriptena,quepuedeseroxidadoporalgunasbacteriasparaformarindol.Enelprocesointervieneunconjuntodeenzimasllamadastriptofanasa.ElindolproducidosecombinaconelaldehidodelreactivodeKovacsodeErlich,paraoriginaruncompuestodecolorrojo.Lascepasmvilespuedenapreciarseenestemedio,porlaturbidezqueproducenalrededordelapuncindesiembra,mientrasqueaquellascepasproductorasdesulfhdricosedistinguenporlaformacindeunprecipitadonegrodesulfurodehierroapartirdeltiosulatosiemprequeelmediosemantengaaunpHmayora7.2.

ResultadosCepasmviles:producenturbidezdelmedio,queseextiendemasalldelalneadesiembra.Cepasinmviles:elcrecimientoseobservasolamenteenlalneadesiembra.CepasSH2positivas:ennegrecimientoalolargodelalneadesiembraoentodoelmedio.CepasSH2negativas:elmediopermanecesincambiodecolor.Cepasindolpositivas:desarrollodecolorrojoluegodeagregarelreactivodeKovacsodeErlich.Cepasindolnegativas:sincambiodecolor.

Urea

Medioutilizadoparalaidentificacindemicroorganismos,enbasealaactividaduresica.EsparticularmentetilparadiferenciarProteusspp.deotrosmiembrosdelafamiliaEnterobacteriaceae.

Urea20.0Fosfato monopotsico9.1Fosfato disdico9.5Extracto de levadura0.1Rojo fenol0.01pH final: 6.8 0.2

FundamentoEstemediodecultivo,formuladoporRustigianyStuart,presentabajocontenidodenutrientesyaltacapacidadbuffer.Elextractodelevaduraeslanicafuentedecarbono,nitrgeno,vitaminasycofactores,yaportalosnutrientesesencialesparaeldesarrollobacteriano.Lassalesdefosfatosconstituyenelsistemabuffer,elrojodefenoleselindicadordepHylaureaeselsustratodelaenzimaureasa.Aquellasbacteriasqueposeenlaenzimaureasa,puedenutilizarelnitrogenoprovenientedelaurea,lahidrolizan,liberandoamonacoydixidodecarbono.Estosproductosmetablicosalcalinizanelmedio,haciendovirarelindicadorrojofenoldelamarilloalrojo.Suuso,serecomiendaparadiferenciarProteusspp.deotrosgneros

Caractersticas del medioMedio preparado: anaranjado.

Urea-1 Uninoculated Control,2 Proteus Vulgaris, 3 E. coli

SimmonsCitratoAgar

Medioutilizadoparaladiferenciacindeenterobacterias,enbasealacapacidaddeusarcitratocomonicafuentedecarbonoyenerga. Citrato de sodio2.0Cloruro de sodio5.0Fosfato dipotsico1.0Fosfato monoamnico1.0Sulfato de magnesio0.2Azul de bromotimol0.08Agar15.0pH final: 6.9 0.2

FundamentoEnelmediodecultivo,elfosfatomonoamnicoeslanicafuentedenitrgenoyelcitratodesodioeslanicafuentedecarbono.Amboscomponentessonnecesariosparaeldesarrollobacteriano.Lassalesdefosfatoformanunsistemabuffer,elmagnesioescofactorenzimtico.Elclorurodesodiomantieneelbalanceosmtico,yelazuldebromotimoleselindicadordepH,queviraalcolorazulenmedioalcalino.Elmediodecultivoesdiferencialenbaseaquelosmicroorganismoscapacesdeutilizarcitratocomonicafuentedecarbono,usansalesdeamoniocomonicafuentedenitrgeno,conlaconsiguienteproduccindealcalinidad

Elmetabolismodelcitratoserealiza,enaquellasbacteriasposeedorasdecitratopermeasa,atravsdelciclodelcidotricarboxlico.Eldesdoblamientodelcitratodaprogresivamente,oxalacetatoypiruvato.Esteltimo,enpresenciadeunmedioalcalino,daorigenacidosorgnicosque,alserutilizadoscomofuentedecarbono,producencarbonatosybicarbonatosalcalinos.Elmedioentoncesviraalazulyestoesindicativodelaproduccindecitratopermeasa.Resultados-Positivo:crecimientoycolorazulenelpico,alcalinidad.-Negativo:elmediopermanecedecolorverdedebidoaquenohaydesarrollobacterianoynohaycambiodecolor

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