Capacitación NChISO 9308 Filtración

7/26/2019 Capacitacin NChISO 9308 Filtracin

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FILTRACION POR MEMBRANA

CALIDAD DEL AGUAENUMERACIN DEESCHERICHIA COLI Y BACTERIAS

COLIFORMES- PARTE 1: MTODO DEFILTRACION POR MEMBRANA PARA AGUAS

CON FLORA BACTERIANA BAJA.

NCh ISO 9308/1


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NORMA QUE SE APLICA AL AGUA CON UNBAJO NUMERO DE BACTERIAS.

ESPECIAL PARA AGUAS CON MENOS DE 100COLONIAS TOTALES EN EL AGARCROMOGNICO PARA COLIFORMES (CCA).
http://www.yarethquimicos.uuuq.com/FOTOS%20DE%20EQUIPOS/EQUIPO%20DE%20FILTRACION%20DESECHABLE%20NALGENE%20MF75%20MEMBRANA%20EN%20PES-POLIETERSULFONA.jpghttp://2.bp.blogspot.com/_1o2f9bOfYR4/S1gHAEXrq9I/AAAAAAAAGao/IueDlfT6_lw/s400/PRL+OBLIGACION+agua+potable.jpghttp://radio.rpp.com.pe/saludenrpp/files/2010/07/AGUA-POTABLE.jpg


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ESPECIAL PARA AGUAS CON MENOS DE 100COLONIAS TOTALES EN EL AGARCROMOGNICO PARA COLIFORMES (CCA).

LAS AGUAS PUEDEN SER AGUAS POTABLES,AGUA DE PISCINA DESINFECTADA, O AGUATRATADA PROVENIENTES DE PLANTAS DE

TRATAMIENTO DE AGUA POTABLE.


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PRINCIPIO: SE BASA EN LA FILTRACIN DEUNA PORCIN DE LA MUESTRA A TRAVSDE UN FILTRO DE MEMBRANA, LA CUAL

RETIENE LOS ORGANISMOS, Y UBICACINDEL FILTRO DE MEMBRANA SOBRE UNAPLACA DE AGAR CROMOGNICO PARACOLIFORMES. INCUBACIN DEL FILTRO DE

MEMBRANA A 36 2C DURANTE 21 3 H.


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RECUENTO DE COLONIAS -D-GALACTOSIDASA POSITIVAS ( de color rosadoa rojo) como bacterias coliformes presuntivas

que no son E.coli. Para evitar resultados falsospositivos, causados por bacterias oxidasapositivas, como por ejemplo, Aeromonas spp,

las cuales deben ser confirmadas por unareaccin oxidasa negativa.


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Recuento de las colonias -D-galactosidasa y-D- glucuronidasa positivas (de color azuloscuraa violeta.) como E.coli.

Las bacterias coliformes totales son la sumade las colonias oxidasa negativas con un colorrosado a rojo y todas las colonias de color azul

oscuroa violeta.


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REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO AGUA DESTILADA

AGUA TAMPONADA PARA DILUCIN:

SOLUCIN STOCK DE FOSFATO MONOPOTSICO: 34 gKH2PO4 en 500 ml de agua destilada, ajustar pH a 7.2 +/- 0.5con NaOH 1N y diluir a 1 l.

SOLUCIN STOCK DE SULFATO DE MAGNESIO: 50 g MgSO4 en1 l de agua destilada.

SOLUCIN STOCK DE CLORURO DE MAGNESIO: 38 g MgCl2en 1 l de agua destilada.

Se agrega 1.25 ml de solucin stock de fosfato mono potsicoy 5 ml de sulfato de magnesio o solucin stock de cloruro demagnesio a 1 l de agua destilada. Esterilizar en autoclave a121c por 15 min.


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REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO

AGAR CROMOGENICO PARA COLIFORMES(CCA):

SUSPENDER EL MEDIO EN AGUA PORCALENTAMIENTO CON AGITACIN FRECUENTEHASTA QUE SE DISUELVA POR COMPLETO (35MIN). NO AUTOCLAVAR.

DISPENSAR EN PLACAS A UNA PROFUNDIDAD

DE AL MENOS 4 mm.


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LAS PLACAS SE PUEDEN ALMACENAR A

5 3C EN LA OSCURIDAD, DURANTE 1 MES.

(ISO/TS11133-1:2000 NCh3162/1.Of2008 4.4.4.) ANTES DEL USO DE LAS PLACAS NO DEBE

HABER HUMEDAD VISIBLE.


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REACTIVO OXIDASA.

AGAR TRIPTONA SOYA (TSA). LAS PLACAS SEPUEDEN ALMACENAR A 5 3C EN LAOSCURIDAD Y PROTEGER DE LA EVAPORACINDURANTE AL MENOS OCHO SEMANAS.

(ISO/TS11133-1:2000 NCh3162/1.Of20084.4.4.)


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APARATOS PIPETAS PASTEUR

AUTOCLAVE BOMBA PARA HACER VACO EQUIPO DE FILTRACIN POR MEMBRANA, ESTRIL, DE

VIDRIO, PLSTICO ESTERILIZABLE O ACERO INOXIDABLE.

PEACHMETRO ESTUFA DE CULTIVO ESTERILIZADOR FILTROS DE MEMBRANAS DE STERES DE CELULOSA

POLIMERIZADOS, CUADRICULADAS, ESTRILES, DE 47 mm

DE DIMETRO Y DE 0.45 un DE POROSIDAD. PINZAS DE BORDES LISOS PLACAS DE PETRI DE 50 mm DE DIMETRO POR 12 ml DE

PROFUNDIDAD.
http://img86.imageshack.us/img86/1425/pinzasanatomicayquirurgicacopy.gifhttp://beltec.com.pe/beltec/images/bomba%20vacio.jpg


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PROCEDIMIENTO

FILTRACION:

Armar el equipo de filtracin. Revisar que seencuentre esterilizado.
http://www.teknokroma.es/Usr/Productos/Img/662-1.jpg


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PROCEDIMIENTO

Con ayuda de una pinza esterilizada porflameo, tomar una membrana y colocarlasobre el portafiltro con la parte cuadriculadahacia arriba.

Colocar cuidadosamente sobre el portafiltro elembudo y cerrar.
http://www.labotienda.com/es/catalogo/separacion-filtracion_filtracion_papel-de-filtro_Membranas-cuadriculadas-25-mm-poro-0.45-c-100.aspx


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PROCEDIMIENTO

Agregar agua tamponada para dilucin(MADILHL) a la membrana para humedecerla,filtrndola bajo vaco parcial.
http://www.google.cl/imgres?imgurl=http://www.auxilab.es/imagenes/fotos/filtracion/15002310.jpg&imgrefurl=http://www.auxilab.es/es/catalogo/separacion-filtracion_filtracion.aspx&usg=__2BhSmHM1pyZ-GfeqDbIfzrXtQ_s=&h=567&w=400&sz=63&hl=es&start=122&zoom=1&um=1&itbs=1&tbnid=4xh2vblkivqnOM:&tbnh=134&tbnw=95&prev=/images?q=filtracion&start=120&um=1&hl=es&sa=N&rlz=1T4RNSN_esCL394CL394&ndsp=20&tbs=isch:1http://www.aguanorsur.com.ar/agua-potable.jpg


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PROCEDIMIENTO

Agitar vigorosamente durante algunos

segundos el frasco que contiene la muestra,destaparlo y flamear la boca del frasco.
http://cidbimena.desastres.hn/docum/ops/publicaciones/who91s/p037e.jpghttp://www.madrimasd.org/madridporlaciencia/Feria_VIII/gestion/files/img/actividades/67_1.jpg


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PROCEDIMIENTO

En una probeta estril medir 100 ml de

muestra a filtrar y vaciarla dentro del embudo.
http://www.labotienda.com/imagenes/fotos/filtracion/18002301.jpghttp://www.google.cl/imgres?imgurl=http://es.unsbiz.com/MOUNT/ES/upload/supply/2009/02/18/1D4B3C69FD9DD52A9EEEEFBA6C9D88FD_1234928073246827.jpg&imgrefurl=http://es.unsbiz.com/companySite/findGoods.do?method=detail&id=213953&flag=0&usg=__tzZ_9Iw2IY9r6mt0de6XSS6_wok=&h=829&w=400&sz=51&hl=es&start=8&zoom=1&um=1&itbs=1&tbnid=LC5GcqIZWJaR0M:&tbnh=144&tbnw=69&prev=/images?q=probetas&um=1&hl=es&rlz=1T4RNSN_esCL394CL394&tbs=isch:1http://www.motordehidrogeno.net/sites/motordehidrogeno.net/files/imagenes/agua.jpg


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PROCEDIMIENTO

Filtrar la muestra bajo vaco parcial.


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PROCEDIMIENTO

LAVAR EL EMBUDO CON ELFILTRO DE MEMBRANA, CONTRES PORCIONES DE 20 A 30 ml

DE AGUA DE DILUCIN ESTRIL,APLICANDO VACO.


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20 A 30 ml LAVAR 3 VECES.
http://www.kalipedia.com/kalipediamedia/cienciasnaturales/media/200709/24/fisicayquimica/20070924klpcnafyq_16.Ges.SCO.pnghttp://img137.imageshack.us/img137/2706/71074450.jpghttp://www.kalipedia.com/kalipediamedia/cienciasnaturales/media/200709/24/fisicayquimica/20070924klpcnafyq_16.Ges.SCO.png


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PROCEDIMIENTO

Sacar el embudo y en forma inmediata tomarel filtro con la ayuda de las pinzas estriles ycolocarlo con la parte cuadriculada haciaarriba sobre una placa de petri con AGAR

CROMOGNICO PARA COLIFORMES (CCA).


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PROCEDIMIENTO INCUBACIN: Colocar el filtro de membrana

sobre AGAR CCA mediante movimientorotatorio sobre la superficie del medio paraevitar atrapamiento de aire.

Incubar las placas en posicin invertida, a

36c 2C por 21 3 h. (Equipo 79)


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CONTAR TODAS LAS COLONIAS QUEPROPORCIONES UNA REACCIN -D-GALACTOSIDASA Y -D-GLUCURONIDASA

POSITIVA (DE COLOR AZUL OSCURO AVIOLETA) COMO E.COLI.


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UNA VEZ CONTADAS ANOTAR EN HOJA DERESULTADOS RM 21.4 EN LA FILA QUE DICE:

NMERO DE COLONIAS DE COLOR AZUL

OSCURO A VIOLETA (E.COLI).

Y LUEGO EN LA FILA QUE DICE:

RESULTADOS DE E.COLI NMERO/100 ml

EXPRESION DE RESULTADOS


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EXPRESION DE RESULTADOS

Ejemplo:

Al sacar las placas de MACCA, se contaron 74colonias de color azul oscuro a violeta.

Por lo tanto:

RESULTADO DE E.COLI NMERO/100 ml= 74


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EXAMINAR LOS FILTROS DE MEMBRANA YCONTAR TODAS LAS COLONIAS QUEPROPORCIONEN UNA REACCIN -D-

GALACTOSIDASA POSITIVA (DE ROSADOAROJO) COMO BACTERIAS COLIFORMESPRESUNTIVAS QUE NO SON E.COLI.


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Preparar subcultivo:

Si muchas colonias han crecido en el filtro demembrana.

O si la colonias presuntivas est ubicada juntoa otras colonias.

O si las colonias presuntivas son muypequeas para un desempeo confiable delensayo de oxidasa.


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Realizar aislacin en el agar TSA 36C 2Cpor 21 3 h.


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Para confirmar las bacterias coliformespresuntivas que no son E.coli, se debe realizarun ensayo de oxidasa.

Testear todas o al menos 10 colonias de colorrosadoa rojo.


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REALIZAR EL TEST DE OXIDASA A LASCOLONIAS PRESUNTIVAS O AL MENOS A 10.

SE MUESTRA UNA REACCIN POSITIVA POR LAAPARICIN DE UN COLOR AZUL OSCURODENTRO DE 30 s.

ESTO NO SE DEBE OBSERVAR PARA LAS

BACTERIAS COLIFORMES YA QUE SONOXIDASA NEGATIVA.


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SI SE OBTIENE EN EL CONTEO 60 COLONIAS,60 DE COLOR ROSADO A ROJO PRESUNTIVASPARA COLIFORMES.

SE DEBEN PASAR DE LAS 60 COLONIAS, 10COLONIAS A CONFIRMACION.

EN LA HOJA DE RESULTADO RM21.4 SE ANOTA

EL CONTEO DE LAS COLONIAS 60 COLONIASEN LA FILA DONDE SE ENCUENTRA EL MEDIOMACCA.


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DE LAS 60 COLONIAS DE COLIFORMES SETRASPASAN 10 COLONIAS A CONFIRMACION. Y SEANOTAN 10 EN LA FILA NMERO DE COLONIASDE COLOR ROSADO A ROJO.

DE LAS COLONIAS TRASPASADAS SE REALIZA TESTDE OXIDASA Y SI DA EN TODAS LAS COLONIASOXIDASA NEGATIVA SIGNIFICA QUE SE

CONFIRMAN LAS 10 COLONIAS , POR LO TANTOEL TOTAL DE COLONIAS, ES DECIR LAS 60COLONIAS.


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EXPRESIN DE RESULTADOS

EN EL CASO EN QUE EL MTODO USADOREQUIERA UNA IDENTIFICACIN, INOCULARUN NMERO DETERMINADO,A,

(generalmente 10 colonias) DE COLONIAS DELA PLACA SELECCIONADA PARA EL RECUENTODE COLONIAS.

DESPUS DE IDENTIFICAR, CALCULAR PARACADA PLACA, EL NMERO DE M.O.IDENTIFICADOS, a, USANDO:


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=

xC donde: A= nmero de colonias inoculadas

B= nmero de colonias que cumple con los criterios deidentificacin

C= nmero total de colonias contadas


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Ejemplo:

Se cuentan en placas de agar MACCA, 60colonias de color rosado a rojo, y se pasan a

confirmacin 10 colonias.

De las 10 colonias sometidas a test de oxidasa,7 dan oxidasa (-) y 3 oxidasa (+).

Calcular el resultado de colonias decoliformes, para este caso.


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A= colonias inoculadas, 10 colonias

b= nmero de colonias que cumple con elcriterio de identificacin, 7 colonias.

C= nmero total de colonias contadas, 60colonias.

Aplico:

A= _7_ x 60 A= 42 colonias

10


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42 COLONIAS CONFIRMADAS PARA COLIFORMES. LAS CUALES SE DEBEN ANOTAR EN LA FILA QUE

DICE:NMERO DE COLONIAS DE COLOR ROSADO

A ROJO CONFIRMADAS Y EN LA FILA QUE DICE.

RESULTADOS DE COLIFORMES: ES LA SUMA DELAS COLONIAS CONFIRMADAS DE COLIFORMES +

LAS COLONIAS DE E.COLI. 42+74= 116 COLONIAS DE COLIFORMES.


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La cantidad de bacterias coliformes es la sumade todas las colonias oxidasa negativas decolor rosadoa rojoms todas las colonias de

color azul oscuro a violeta.


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De las cantidades de colonias confirmadascontadas en el filtro de membranas calcular lacantidad de E.coli y bacterias coliformes

presentes en 100 ml de la muestra.


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La cantidad de E.coli corresponde a todas lascolonias de color azul oscuro a violeta.


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CONTROL DEL MTODO

CONTROLES POSITIVOS:

E.COLI Y E. AEROGENES

CONTROL NEGATIVO: E.FAECALIS


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CONTROL DE CALIDAD

CONTROL DE MADIL L

FILTRO MADIL

BLANCO CCA

PLACA ABIERTA

PLACA CERRADA


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EJERCICIOS

En un conteo en medio MACCA se encontr losiguiente:

16 colonias rosadas a roja y 7 colonias azules

oscura a violeta. De las 16 colonias dieron 8colonias oxidasa negativa.


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16 colonias presuntivas de coliformes.

a= _8_ x 16 = 12,8 = 13 colonias

10

13 colonias de coliformes + 7 colonias de e.coli

Total de coliformes: 20 nmero/100 ml E.coli: 7 nmero/100 ml


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EJERCICIOS

Se encuentran en una placa de MACCA 7colonias rojas y oxidasa negativa y 12 azules.Calcular resultado de e.coli y coliformes.


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EJERCICIOS

Resultado de coliformes nmero/ml= 19

Resultado de e.coli nmero /ml= 12


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EJERCICIOS

En una placa de agar MACCA se encuentran 43colonias azules y 53 colonias rosadas, de lascuales se confirmaron 9 colonias.


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43 nmero/ml de e.coli.

= _9_ x 53 = 47,7 = 48 nmero/ml de coliformes

10

48 + 43 = 91 nmero / ml de colonias de

coliformes.
http://3.bp.blogspot.com/_WKM9uuEHCu0/ScOaESPcORI/AAAAAAAAAgk/yRMnmuIwl1I/s400/agua+potable+3.jpg


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http://3.bp.blogspot.com/_WKM9uuEHCu0/ScOaESPcORI/AAAAAAAAAgk/yRMnmuIwl1I/s400/agua+potable+3.jpghttp://asercal.net/probeta.jpghttp://www.plantasdetratamientos.cl/wp-content/agua_potable.jpghttp://3.bp.blogspot.com/_WKM9uuEHCu0/ScOaESPcORI/AAAAAAAAAgk/yRMnmuIwl1I/s400/agua+potable+3.jpg

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