CATÁLOGO DE CITOGENÉTICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR · Estudio básico de aneuploidias en líquido...

MANUAL PNT/01

Catalogo de Citogenetica y Biología molecular

Ed.5

HOSPITAL UNIVERSITARIO “RIO HORTEGA” 15/01/2018

LABORATORIO DE CITOGENÉTICA Página 1 de 22

Elaborado por:

Dra. Lobo Valentín

Autoriza la emisión:

Dra. Ruiz Martin

CATÁLOGO DE CITOGENÉTICA

Y BIOLOGÍA MOLECULAR

MANUAL PNT/01


Ed.5



Elaborado por:

Dra. Lobo Valentín


Dra. Ruiz Martin

INDICE

Cariotipo en sangre periférica

Cariotipo en líquido amniótico

Cariotipo en restos abortivos

Cariotipo en biópsia corial

Cariotipo en piel post-natal

Estudio básico de aneuploidias en sangre periférica

Estudio básico de aneuploidias en líquido amniótico

Estudio básico de aneuploidias en restos abortivos

Estudio básico de aneuploidias en saliva o mucosa geniana

Estudio basico de aneuploidias en piel post-natal

Estudio ampliado de aneuploidias

Estudio de microdeleciones del cromosoma Y

Estudio de aneuploidias en ADN fetal circulante

Consentimiento informado

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Dra. Ruiz Martin

CARIOTIPO EN SANGRE PERIFERICA

Muestra: mínimo 2.5 mL de sangre en un tubo de heparina de litio (tapón verde)

Criterios de rechazo que impiden el procesamiento de la muestra: muestra de sangre sin

identificar o ilegible, muestra en tubo incorrecto, muestras y petición con datos no coincidentes,

muestras estropeadas (tubo roto o derramado)

Criterios que originan una anotación u observación en el informe de resultado: muestra con

poco volumen, muestra hemolizada, muestra ictérica, muestra coagulada.

Conservación: refrigerada.

Tiempo de respuesta: 40 dias en caso de muestras rutinarias

10 días en caso de muestras urgentes

Método analítico:

Cultivo celular de la muestra. Análisis microscópico de metafases obtenidas.

Significado clínico:

Prueba encaminada a detectar anomalías numéricas de todos los cromosomas y anomalías

estructurales que superen un tamaño de 10 MB.

Tipo de informe:

Numero de metafases estudiadas

Cariotipo informado

Estudio citogenetico

Facultativo responsable

Fotografia representativa del caso

Informe provisional:

En caso de demora en el resultado o ampliación del estudio por parte de Genética se emitirá un

informe provisional para el conocimiento del facultativo peticionario.

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Envio del informe definitivo:

Peticiones procedentes del Área Oeste: Al facultativo peticionario en el Hospital o en los Centros de

Salud.

Peticiones procedentes de otros Hospitales de la CCAA de Castilla y León: a través de la web interna

de Sacyl a la persona encargada por el Jefe de Servicio de Análisis Clínicos de cada Hospital.

El resultado citogenetico se conserva en el programa de información del laboratorio recogido junto

con el dia de emisión del informe definitivo.

Modificacion de informes:

Se abrirá la petición en el sistema de información del laboratorio en caso que estuviera cerrada, se

desvalidara el informe haciendo click sobre el circulo de color morado situado en la parte superior

izquierda del informe, se harán las modificaciones pertinentes validando el informe en el circulo color

verde claro.

Se notificara telefónicamente a los facultativos implicados, clínicos y licenciados especialistas del

Servicio de Análisis Clínicos.

Limitaciones de la técnica:

“El resultado citogenético en muestras procedentes de líquido amniótico, sangre periférica, vellosidad

corial y restos abortivos, no excluye la presencia de anomalías no detectables debido a limitaciones

inherentes a la propia técnica, tales como: contaminación por células de origen materno, crecimiento

selectivo de células aberrantes, mosaicismos de baja frecuencia, anomalías estructurales de pequeño

tamaño (microdeleciones, microduplicaciones, inserciones o translocaciones), selección de células de

tejidos de distinto origen, mala calidad metafásica y mosaicismos confinados a placenta”.

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CARIOTIPO EN LIQUIDO AMNIOTICO

Muestra: 20 mL en 2 tubos de 10 mL. El estudio se realizara independientemente de la cantidad de

liquido remitida.

Criterios de rechazo que impiden el procesamiento de la muestra: muestra de líquido sin





Conservación: temperatura ambiente (no refrigerar nunca).

Tiempo de respuesta: el tiempo de respuesta recomendado por la Sociedad Española de

Ginecología y Obstetrica debe ser inferior a 21 días en un cariotipo que no precise de estudios

adicionales.

Método analítico:




estructurales que superen 10 MB.

Tipo de informe:


Numero de cultivos independientes analizados

Cariotipo informado

Estudio citogenético



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verde claro.










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CARIOTIPO EN RESTOS ABORTIVOS

Muestra: Tejido

Muestras adicionales que podrían ser requeridas: muestra de sangre materna 2.5 mL de sangre

en un tubo EDTA-K3 (tubo tapón morado)

Criterios de rechazo que impiden el procesamiento de la muestra: muestra sin identificar o

ilegible, muestra en tubo incorrecto, muestras y petición con datos no coincidentes, muestras

estropeadas (tubo roto o derramado), características morfológicas de la muestra procedentes de

muestra materna

Criterios que originan una anotación u observación en el informe de resultado: muestra

escasa.

Conservación: temperatura ambiente

Tiempo de respuesta: un mes siempre que se produzca crecimiento celular

Método analítico:





Tipo de informe:



Cariotipo informado




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verde claro.

Se notificará telefónicamente a los facultativos implicados, clínicos y licenciados especialistas del









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CARIOTIPO EN VELLOSIDAD CORIAL

Muestra: Vellosidad corial en medio de transporte específico

Criterios de rechazo: no existen ya que la vellosidad corial se realiza en consulta de ginecología con

presencia de personal cualificado en la técnica de la Unidad de Citogenetica,


Tubo o contenedor adicional: tubo de polipropileno con EDTA-K3 (tapón morado, tubo

hemograma) de 3.5 mL. Muestra mínima de 1 mL de sangre materna para comprobar trazabilidad y

que la muestra de biopsia no coincide al 100% con muestra materna.

Tiempo de respuesta: un mes siempre que se produzca crecimiento celular. En ocasiones no se

produce crecimiento celular, posible contaminación con material de origen materno.

Método analítico:





Tipo de informe:



Cariotipo informado







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CARIOTIPO EN PIEL POST-NATAL

Muestra: 1 cm2 de piel en suero fisiológico esteril

Criterios de rechazo: conservación en formol


Tubo o contenedor adicional: no se precisa tubo EDTA-K3 ya que no hay dudas respecto al origen

fetal o post-natal de la muestra

Tiempo de respuesta: un mes siempre que se produzca crecimiento celular. En ocasiones no se

produce crecimiento celular.

Método analítico:





Tipo de informe:



Cariotipo informado







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ESTUDIO BASICO DE ANEUPLOIDIAS

Muestra: Liquido amniótico (no es necesario tubos adicionales a los requeridos para el cariotipo),

conservación a temperatura ambiente.

Muestra: Sangre periférica (tubo de 3.5 mL en EDTA-K3, tubo tapon morado), conservación

refrigerado.

Muestra: Restos abortivos (tubo/frasco esteril) en suero fisiológico o medio si esta disponible y en

cantidad suficiente, conservación a temperatura ambiente.

Muestra: Vellosidad corial (tubo/frasco esteril) con medio de transporte especifico proporcionado por

Genética, conservación a temperatura ambiente. Imprescindible que la muestra llegue en el dia de la

extracción al Hospital Universitario Río Hortega y aviso telefónico previo a la Unidad. La muestra no se

debe extraer sin el conocimiento previo por parte de Genetica y la naturaleza de las pruebas que se

deben realizar.

Muestra: Líquidos biológicos, saliva o mucosa geniana (envase esteril o torunda seca), conservar en

el refrigerador.

Muestra: piel, conservación a temperatura ambiente.

Criterios de rechazo: muestra de restos abortivos y piel conservados en formol, muestras sin

identificar.

Criterios de rechazo que impiden el procesamiento de las muestras: muestra de sangre sin





Extracción de ADN: realizado en la unidad a partir de las muestras anteriormente mencionadas

Tiempo de respuesta: 48-72 horas en caso urgente y aviso previo, en caso contrario, 5 dias

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Método analítico:

Hibridación molecular con amplificación cuantitativa fluorescente (QF-PCR).


Prueba encaminada a la detección de las aneuploidias mas comunes autosomicas y sexuales,

adicionalmente contiene dos marcadores para la detección verdadera del síndrome de Turner. El

ensayo incluye 6 marcadores para el cromosoma 21, 5 marcadores para el 18, 5 marcadores para el

13 y 10 marcadores para X/Y.

Tipo de informe:

Numero de copias para cada cromosoma estudiado

Interpretación







Salud.









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Solo se estudian los cromosomas mencionados, los mosaicos no son detectados por debajo del 40%,

contaminación de la muestra por células maternas (líquido amniótico), muestra procedente de la

madre (caso de restos abortivos y vellosidad corial).

Muestras adicionales requeridas:

En caso de encontrar un hallazgo cromosómico susceptible de una IVE por causa cromosomica se

solicitara muestra de sangre materna (EDTA-K3) para realizar estudio de trazabilidad y comprobar que

al menos uno de los alelos estudiados para cada cromosoma es de origen materno.

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ESTUDIO AMPLIADO DE ANEUPLOIDIAS

Muestra: Liquido amniótico (no es necesario tubos adicionales a los requeridos para el cariotipo),

conservación a temperatura ambiente.


refrigerado.

Muestra: Restos abortivos (tubo/frasco esteril) en suero fisiológico o medio si esta disponible y en

cantidad suficiente, conservación a temperatura ambiente.

Muestra: Vellosidad corial (tubo/frasco esteril) con medio de transporte especifico proporcionado por

Genética, conservación a temperatura ambiente. Imprescindible que la muestra llegue en el dia de la

extracción al Hospital Universitario Río Hortega y aviso previo telefónico a la Unidad. La muestra no se

debe extraer sin el conocimiento previo por parte de Genetica y la naturaleza de las pruebas que se

deben realizar.

Muestra: Líquidos biológicos, saliva o mucosa geniana (envase esteril o torunda seca), conservar en

el refrigerador.

Muestra: Piel, 1 cm2, conservación a temperatura ambiente.

Criterios de rechazo: los mismos que para el estudio básico de aneuploidias.


Tiempo de respuesta: 24-48 horas en caso urgente, en caso contrario, 5 dias

Método analítico:

Hibridación molecular con amplificación cuantitativa fluorescente (QF-PCR) para los cromosomas 15,

16 y 22.


Los estudios citogeneticos de abortos involuntarios son muy recomendables, incluso en el caso del

aborto espontaneo en primer lugar. Las anomalías cromosómicas mas frecuentemente observadas

implican los cromosomas 13, 15, 16, 18, 21, 22 y X.

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Tipo de informe:

Numero de copias para cada cromosoma estudiado

Interpretación







Salud.









verde claro.




Solo se estudian los cromosomas mencionados, los mosaicos no son detectados por debajo del 40%,

contaminación de la muestra por células maternas (líquido amniótico), muestra procedente de la

madre (caso de restos abortivos y vellosidad corial).

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ESTUDIO DE MICRODELECIONES DEL CROMOSOMA Y


refrigerado.





poco volumen, muestra coagulada.

Tiempo de respuesta: 1 semana


Método analítico:

Hibridación molecular con amplificación cuantitativa fluorescente (QF-PCR).


El análisis del cromosoma Y en hombre con azoospermia o oligozoospermia severa ha identificado tres

regiones en la zona de eucromatina en el brazo largo del cromosoma Y que están delecionados

frecuentemente en falos espermatogenicos inexplicados.

Tipo de informe:

Interpretación




Salud.





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ESTUDIO DE ANEUPLOIDIAS EN ADN FETAL CIRCULANTE

Muestra: Sangre periférica en tubo streck (tubo de 10 mL, tubo cristal tapon camuflaje),

conservación refrigerado.

Muestra alternativa: sangre periférica en tubo morado (tubo de 10 mL tapon morado),

conservación refrigerado





poco volumen, muestra coagulada, muestra hemolizada.

Tiempo de respuesta: 15 días

Método analítico:

Extracción de plasma, aislamiento de ADN fetal circulante, preparación de la librería, cuantificación,

desnaturalización, preparación del pool de librerías y carrera en el secuenciador


Se trata de un cribado avanzado de aneuploidias con altos valores de sensibilidad y especificidad, su

confirmación requiere una muestra invasiva.

Tipo de informe:

Interpretación



Peticiones procedentes del Área Oeste: Al facultativo peticionario en el Hospital, Citogenetica Prenatal.



El resultado se conserva en el programa de información del laboratorio.

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CONSENTIMIENTO INFORMADO

Se recuerda la necesidad de disponer de consentimiento informado por parte del

facultativo peticionario para la realizacion de los estudiós geneticos contenidos en el

presente catálogo. Este consentimiento se puede remitir junto con la muestra o ser

custodiado por el facultativo peticionario.

En caso de envio a la Unidad de Citogenetica del HURH este serà escaneado junto con el

resguardo de peticion y se accederá a el prèvia peticion a esta Unidad en caso que fuera

necesario.

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