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CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN
Novedades en el cribado de residuos de antibióticos en alimentos
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• Situación actual: • Europa – Encuesta 2014 LRUE
• España – Aplicación PNIR 2014
• Tendencias futuras
CRIBADO DE RESIDUOS DE ANTIBIÓTICOS EN ALIMENTOS
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INTRODUCCIÓN
• DEFINICIÓN:
D 2002/657/UE: “métodos utilizados para detectar la presencia de una sustancia, o tipo de sustancias, al nivel de interés. Estos métodos permiten tratar un elevado número de muestras y se utilizan para cribar grandes cantidades de muestras en busca de posibles resultados no conformes”
• Elevado número de muestras • Variedad de matrices y especies • Unos 60 antibióticos en diferentes matrices
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CLASIFICACIÓN
1. Métodos no específicos: microbiológicos • métodos de inhibición en placa: 4-5 placas, STAR (Screening Test of
Antibiotic Residues)
• métodos de inhibición en tubo: Premitest, Eclipse, Delvotest
2. Métodos semiespecíficos: inmunológicos • ELISA • Biosensor: Evidence Investigator (Randox)
1. Métodos específicos: químicos • HPLC • LC-MS/MS
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EUROPA - UERL
El Laboratorio de Referencia de la Unión Europea para el control de residuos de sustancias antibacterianas es ANSES (French agency for food, environmental and occupational health safety) 2013 – Reunión de Laboratorios Nacionales de Referencia sobre residuos de antibióticos en alimentos
2014 – Questionnaire: Información detallada sobre los métodos microbiológicos de screening para la detección de residuos de antibióticos en carne en los LNR europeos
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EUROPA - ENCUESTA 2014 ANSES
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INMUNO X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X
OTROS X X X X X X X X X X X X X X X X
LABORATO RIOS
17% (5) 30% (9) 3% 27% (8) 13% (4) 10% (3)
77% (23) 23% (7)
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EUROPA - ENCUESTA 2014 ANSES
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EUROPA - ENCUESTA 2014 ANSES
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EUROPA – AGENDA 2014 ANSES
- Updated Survey on Microbiological Inhibitory
Methods and their Performance for Screening Antimicrobials in Foodstuffs
- Evaluation of new rapid biomethods and kits
for screening antimicrobials in food products
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ESPAÑA – SITUACIÓN ACTUAL
APLICACIÓN INFORMÁTICA PNIR 2014 26 laboratorios aplican técnicas de cribado para residuos del grupo B1
•23 declaran únicamente métodos microbiológicos •2 declaran únicamente métodos químicos •1 (CNA) declara ambos tipos de métodos
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ESPAÑA – TENDENCIAS FUTURAS
1. Métodos no específicos: microbiológicos • métodos de inhibición en placa: 4-5 placas, STAR (Screening Test of Antibiotic
Residues) • métodos de inhibición en tubo: Premitest, Eclipse, Delvotest
4 PLACAS + EXPLORER
2. Métodos semiespecíficos: inmunológicos • ELISA • Biosensor: Evidence Investigator (Randox)
3. Métodos específicos: químicos • HPLC • LC-MS/MS
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ESPAÑA – TENDENCIAS FUTURAS
1. Métodos no específicos: microbiológicos • métodos de inhibición en placa: 4-5 placas, STAR (Screening Test of Antibiotic
Residues) • métodos de inhibición en tubo: Premitest, Eclipse, Delvotest
4 PLACAS + EXPLORER
2. Métodos semiespecíficos: inmunológicos • ELISA • Biosensor: Evidence Investigator (Randox)
3. Métodos específicos: químicos • HPLC • LC-MS/MS
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ESPAÑA – TENDENCIAS FUTURAS
EXPLORER 2.0:
• Prueba cualitativa • Rápido y sencillo • Se basa en comprobar la inhibición del crecimiento microbiano provocada por la presencia de residuos de antibióticos y sulfamidas.
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ESPAÑA – TENDENCIAS FUTURAS
EXPLORER 2.0: PROCEDIMIENTO
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ESPAÑA – TENDENCIAS FUTURAS
EXPLORER 2.0: PROCEDIMIENTO
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ESPAÑA – TENDENCIAS FUTURAS
1. Métodos no específicos: microbiológicos • métodos de inhibición en placa: 4-5 placas, STAR (Screening Test of Antibiotic
Residues) • métodos de inhibición en tubo: Premitest, Eclipse, Delvotest
4 PLACAS + EXPLORER
2. Métodos semiespecíficos: inmunológicos • ELISA • Biosensor: Evidence Investigator (Randox)
3. Métodos específicos: químicos • HPLC • LC-MS/MS
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EVIDENCE INVESTIGATOR
•LRUE – miel y músculo (pescado) •ELISA múltiple
Cada biochip es una plataforma sólida (1 cm2) dividida en 25 regiones (5 x 5) en las cuales podemos inmovilizar anticuerpos, con lo cual conseguimos analizar a la vez, varios residuos a partir de una sola muestra
1 Kit (“matriz”)= 54 biochips (9 para curvas de calibrado y 45 para muestras)
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EVIDENCE INVESTIGATOR: “matrices”
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PREPARACIÓN MUESTRA
EVIDENCE INVESTIGATOR
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EQUIPO LECTOR
EVIDENCE INVESTIGATOR
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MIEL
EVIDENCE INVESTIGATOR
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CONCLUSIONES EN MIEL: - Buenos LD para los 6 antibióticos estudiados - 6,7% falsos + en quinolonas = el fabricante debe mejorar este aspecto - Aplicabilidad: consideran que el método se puede aplicar sobre
diferentes tipos de miel
EVIDENCE INVESTIGATOR
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MÚSCULO Y PRODUCTOS ACUICULTURA
EVIDENCE INVESTIGATOR
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CONCLUSIONES EN MÚSCULO: - LD superiores a los anunciados por el fabricante, pero < LMR - No se obtuvieron falsos + después de analizar 30 muestras blanco - Validan el Microarray II para 6 familias (quinolonas, tetraciclinas, aminoglucósidos, macrólidos,
cefalosporinas y fenicoles)
EVIDENCE INVESTIGATOR
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CONCLUSIONES EN PROD.ACUICULTURA: - Evalúan los LD obtenidos en músculo (+/-). - Únicamente determinan LD para 3 antibióticos (enrofloxacino, tilosina y OTC), el resto de
los evaluados tienen un LD > al obtenido en músculo pero parece ser < LMR (por determinar)
- No se obtuvieron falsos + después de analizar 20 blancos de diferentes especies
EVIDENCE INVESTIGATOR
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EVIDENCE INVESTIGATOR
COSTE (MIEL)
ELISA/OTROS EVIDENCE INVESTIGATOR
5 PLACAS EXPLORER
2.0
EQUIPO 5000/6000 e 50000 e No especial Baño /
E-reader(1350 e)
KIT
Kit tilosina Microarray I
Kit STR/dihidroSTR Microarray II
Tetrasensor
(TIL,STR,TCs) (TIL,STR,TC,QUI,TIANF,CEFT, SULF,TMP)
TOTAL = 52 euros /muestra
TOTAL = 36 euros/muestra
Kit betalactámicos Microarray IV 50 test (175)
Kit quinolonas Betalactam array
TOTAL = 70 euros/muestra
TOTAL = 72 euros/muestra
TOTAL = 2 euros/muestra
TOTAL= 4 euros/muestra
TIEMPO DE
ANÁLISIS 7h 20 min
5 h 30 min
24 h 3 horas 10 h
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Carretera de Pozuelo a Majadahonda, km 5,100 E-28.220 MAJADAHONDA (Madrid)
http://www.aecosan.msssi.es Telef. 91 338 05 84
Correo-E: [email protected]
MUCHAS GRACIAS