Raúl Gil OrtsR2 Análisis Clínicos

INTRODUCCIÓN

PrincipiosCitometría de flujo

- ¿Qué podemos analizar?- ¿Qué parámetros?- ¿Cómo funciona?

UF-1000i

Análisis de las células de orina

Interpretación de los resultados

PRINCIPIOS

- Emplea la citometría de flujo para analizar los elementos contenidos en la orina

- Discrimina y clasifica en función del grado de fluorescencia y dispersión de la luz

CITOMETRIA DE FLUJO

Es un método analítico por el que se mide la emisión de múltiples fluorescencias y la dispersión de luz de células o partículas microscópicas, alineadas secuencialmente mediante una corriente líquida laminar, cuando son presentadas de una en una y a gran velocidad frente a un haz de luz láser de longitud de onda adecuada

Nivel molecularProteínas extracelularesSecuenciasde ADN o ARN libresComplejos inmunes circulantes

Nivel SubcelularViriones individualesLiposomasCromosomas aisladosOrgánulos aisladosNúcleos aislados

Nivel CelularBacteriasHongos unicelularesCélulas humanas y animalesProtoplastos vegetales

Nivel supracelularHibridomas y fusiones celularesEsferoidesOrganismos pluricelulares

Parámetros nucleares

Parámetros citoplasmáticos: Proteínas Enzimas

Parámetros de superficie: Moléculas de superficie Pared celular

Parámetros extracelulares: Proteínas secretadas

Fluido células en suspensiónReactivo envolvente Reactivo envolvente

Señal óptica: Luz dispersa Luz Fluorescente

Análisis

DIAGRAMASDISPERSIÓN HISTOGRAMA

S

-Unidad principal

- Muestreador

-Unidad de proceso de la información

SISTEMADE LUZDISPERSAFRONTAL

SISTEMA DE LUZ DISPERSA LATERAL

SISTEMA DE LUZ FLUORESCENTE LATERAL

SE INTRODUCIE UN FLUIDO ENVOLVENTE PRESURIZADO - FORMA UN TÚNEL LÍQUIDO

PERMITE LA ENTRADA DE LAS CÉLULAS - DE UNA EN UNA - EVITA LA FORMACIÓN DE COÁGULOS

ESTOS 2 FLUIDOS NO SE MEZCLAN-MEJORA LA PRECISIÓN Y LA REPRODUCIBILIDAD DEL RECUENTO

- IMPIDE LA CONTAMINACIÓN DE LA CÉLULA DE FLUJO

Evitar

UNIDAD PRINCIPAL

UNIDAD DE PROCESAMIENTO

LUZ DISPERSA FRONTALLUZ DISPERSA LATERALLUZ FLUORESCENTE

DIAGRAMA DE DISPERSIÓN

LUZ DISPERSA FRONTALLUZ FLUORESCENTE

HISTOGRAMA ERITROCITOS LEUCOCITOS

célula

Formas de onda

Análisis -altura - amplitud - inclusiones - otros factores

Información - tamaños celulares-Estado superficie-características tinción

Clasificacion de las células

Principios del análisis

SEÑAL DE LA LUZ DISPERSALATERAL

La señal de la luz refleja el estado de la superficie de las células

SEÑAL DE LALUZ FLUORESCENTE

La señal de la luz dispersa frontal refleja la información sobre el tamaño de las partículas

SEÑAL DE LA LUZ DISPERSA FRONTAL

Refleja la intensidad y la longitud de la tinción del núcleo citoplasma membranas bacterias

Parámetros de análisis (Elementos formados) RBC: Eritrocito WBC: Leucocito EC: Célula epitelial CAST: Cilindro BACT: Bacteria

Parámetros de aviso y estudio (elementos cuantitativos) X´TAL: Cristal YLC: Célula levaduriforme SRC: Célula redonda pequeña Path. CAST: Cilindro patológico MUCUS: Mucosidad SPERM: Espermatozoides Cond.: Conductividad

La intensidad de la luz dispersa frontal y de la luz fluorescente se combinan con el número de células de la orina clasificadas

RBC-Generalmente no se requiere comprobar el recuento con microscopia manual-En caso de discrepancia con la tira: verificar si densidad o la conductividad son bajas. Posible lisis- Interferencias de X´TAL contados como RBC: verificar diagrama dispersión.

Comprobar si UF ha mostrado alarma de baja fiabilidad RBC/X´TAL- Interferencias de YLC clasificadas como RBC: verificar diagrama dispersión. Comprobar si UF ha mostrado alarma de baja fiabilidad RBC/YLC- Cut-off: 25 RBC/microL

WBC:-Generalmente no se requiere comprobar el recuento con microscopia manual-En caso de discrepancia con la tira: verificar si densidad o la conductividad son bajas. Posible lisis-En recuentos elevados se pueden presentar fragmentos de WBC por lisis parcial que pueden clasificarse como BACT o YLC-Cut-off: 40 WBC/microL

EC/SRC-Recuento elevado de SRC: proceder a microscopía manual.-EC sin alarma de SRC, no provee valor diagnóstico y puede indicar baja calidad de la muestra, por ejemplo por contaminación. Da información sobre poca fiabilidad del recuento de BACT.

CAST/Path CAST

-En caso de PRO elevadas en la tira sin alarma de CAST en el UF: revisar al microscopio-Los CAST hialinos pueden verse interferidos por el MUCUS

BACT

-Recuentos son específicos del canal de BACT, sin embargo se pueden encontrar otras partículas que pueden ser fuente de interferencia: verificar el diagrama de dispersión -Comprobar si UF ha mostrado alarma de baja fiabilidad RBC/BACT.

YLC-Si se observan recuentos elevados en comparación con la microscopía: verificar en el diagrama de dispersión la existencia de solapamiento con el área de RBC; verificar la excesiva extensión del área OTHERS.

X´TAL

-En caso de posible interferencia con RBC, verificar el diagrama de dispersión.

GRACIAS