Clara Pérez Barrios R1 Bioquímica Clínica Hospital Puerta de Hierro (Majadahonda)

Electroforesis capilar.

Electroforesis en solución libre dentro de un capilar con un diámetro inferior a 100 µm. Detección directa por absorbancia a 200 nm.

Inmunotipado

Electroforesis capilar.

Es una técnica en la que la separación de las proteínas depende de dos factores: • La resultante neta del flujo electroendosmótico hacia el cátodo. • La movilidad electroforética de las proteínas hacia el ánodo (tampón alcalino) cuando se aplica una diferencia de potencial a lo largo de un capilar.

Electroforesis: gel de agarosa (AGE) vs. capilar (EC)

AGE ! 10 !l muestra.

! Tiempo aprox. 1hora.

! Poco efecto

electroendoosmótico.

! Artefacto en el punto de

aplicación.

EC ! 1 – 50 nl de muestra.

! Tiempo aprox: 4 – 5 min.

! Mayor efecto

electroendoosmótico.

! Facilidad de automatización

(detección e identificación del

CM).

! Múltiples aplicaciones.

AGE (colorantes) !  Se unen específicamente a

proteínas. !  No se tiñen bien las proteínas

glicosiladas. !  Saturación lectura densitométrica. !  Mayor posibilidad de error.

EC (Lectura directa). !  Detección enlace peptídico a 200 –

214nm !  Valor real de proteínas. !  Mayor sensibilidad. !  Linealidad hasta 12 g/dL.

Comparación sistemas de detección

Interpretación:

Electroforesis en gel agarosa (AGE) Electroforesis capilar (CE)

EC vs. AGE: Diferencias en el espectro.

1.  Prealbúmina antes de albúmina.

2.  Detección de lipoproteínas. (Banda de albúmina).

3.  Fracción alfa 1 . E.Capilar> E. agarosa.

4.  Separación de proteínas en 6 fracciones (Beta 1 y Beta 2) mediante electroforesis de zona.

!  Análisis de proteínas del suero !  Isoenzimas !  Lipoproteínas !  Aminoácidos !  Fármacos !  Drogas de abuso !  Aniones inorgánicos !  Vitaminas !  Hemoglobina A1c

Aplicaciones de la Electroforesis Capilar.

Identificación del componente monoclonal.

!  Inmunofijación. !  Inmunotipado.

¿Ig M, Ig A, Ig G, cadenas Kappa!?

Inmunofijación.

Es una técnica cualitativa que permite la identificación de componentes proteicos a través de la formación de bandas de precipitación antígeno-anticuerpo en un corto tiempo de incubación (1 o 2 horas).

Dos etapas: 1)  Electroforesis en gel de agarosa con separación de las proteínas.

2)  Inmunoprecipitación. Aplicación de un anticuerpo monoespecífico del antígeno. Precipitación antígeno-anticuerpo.

Inmunofijación.

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Inmunofijación.

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Inmunofijación con muestras de suero

Proteinograma + anticuerpos: Anti-G. Anti-A. Anti-M. Anti-". Anti-#.

&IgG K

Inmunofijación con muestras de orina

Proteinograma+anticuerpos.

Anti IgG+IgA+IgM

Anti-" Anti-#. Anti-" libres Anti-# libres

Kappa+ Kappa libres

Inmunofijación.

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Gammapatía monoclonal

IgM K

Gammapatía monoclonal

Ig E "

Inmunotipado.

!  Técnica de identificación de la posible proteína monoclonal tras substracción con anticuerpos específicos.

Fases:

!  Electroforesis capilar (detección del CM).

!  Reacción inmunoquímica con el anticuerpo específico de cada tipo de inmunoglobulina (anti-IgG, anti-IgM, anti-IgA, y excepcionalmente anti-IgD o anti-IgE) y anti-kappa y anti-lambda.

!  Nueva electroforesis capilar y comparación con la primera para identificar la desaparición del componente monoclonal.

Inmunotipado.

IgA

IgA kappa

Componente monoclonal

Inmunotipado.

!  Ventajas.

!  Rapidez y automatización.

!  Inconvenientes.

!  Clasificación difícil de bandas débiles. Identificación menos concluyente que con IF (resultado negativo vs. resultado positivo).

12+3+4+

BJ lambda

GRACIAS POR SU ATENCIÓN