*Equipo de Laboratorio: Centrifugas, Refrigeracion, Incubadoras, Baos MariaTcnicas Bsicas e InstrumentalesBrenda Ardon M.Q.C.

*CentrifugasInstrumentos que someten a las muestras a intensas fuerzas que producen en poco tiempo, la sedimentacion de las particulas de densidad mayor que la del medio que las rodea.

*Termino para describir la fuerza aplicada durante la centrifugacin=

Fuerza centrifuga relativa (FCR):

1.118 x 10-5 x r x rpm2

1.118 x 10-5 : factor empricor: radio en cms del centro de rotacin al fondo del tubo (cm)rpm:velocidad de la rotacin del rotor en revoluciones por min.UNIDADES= gEj. 500 X g

NORMOGRAMA

*Tipos: En funcin de los mrgenes de aceleracin

centrfugas: de pocas g a aprox. 3000 xgDe pocas g a ~ 3,000 gsuper-centrfugas o centrfugas de alta velocidad2,000 20,000 gUltracentrfugasSe controla la temperatura de la cmara para evitar sobrecalentamiento de las muestras debido a la friccin.15,000 600,000 g

*Versiones especialesMicrocentrifuga: hasta 12,000 g Rotor fijo, se detiene en minutos, para HematocritoCentrifugas refrigeradas: fraccionamiento de unidades de sangre, refrigeradas 2-8CSerofuge: de velocidad fija (3,400 rpm), cronometradas en segundos, desarrollan velocidad en segundos.

*Centrifuga para MicrohematocritoMicrocentrifugamicrocentrifugasCentrifuga Serologica

*Centrifuga Refrigerada

*Ultracentrfugas.Velocidad: a partir de 50,000 rpm.Presentan sistemas auxiliares: sistemas de refrigeracin, sistemas de alto vaco.2 tipos:Analticas: obtencin de datos precisos de propiedades de sedimentacin (s, PM).Preparativas: aislamiento de partculas de bajo S (microsomas, virus, macromolculas).

*Componentes de una centrifugaEje o rbol centralRotor: fijo al rbol y provisto de cubetas para sostener los tubos de centrifugacinCubetas o camisasMotorAccesorios:Botn de encendidoTimerControl de velocidadTacmetro (algunos)Freno (brake) Alarmas audibles

*Tipos de rotores.Existen tres tipos de rotores en las centrfugas:

- Rotores flotantes.- Rotores de ngulo fijo o angulares.- Rotores verticales.

* Rotores flotantes.En este tipo de rotor, los tubos que se utilizan para centrifugar estn unidos al brazo del rotor por su parte superior.Horizontales : moviles, forman angulo de 90 durante la centrifugacion.

Forman Angulo de 90 durante la centrifugacion

*Durante la centrifugacin, debido a la fuerza centrfuga, los tubos pierden la verticalidad y se sitan perpendiculares al eje de rotacin.

*Rotores de ngulo fijo o angulares.En este tipo de rotores la centrifugacin se lleva a cabo siempre en un ngulo fijo respecto al eje de rotacin.

Angulares: fijos Forman Angulo de 45

*Parmetros a considerar en la centrifugacin:Volumen a centrifugar: tipo de tubos y rotores a emplear.Naturaleza qumica de la solucin: naturaleza del tubo a emplearDiferencial de densidad entre la partcula a sedimentar y la densidad del medio en el que se encuentra. A mayor diferencia: menor tiempo y menor fuerza de aceleracin

*Operacin de centrifugasCuando se centrifuga una solucin, se rompe la homogeneidad y se produce la separacin del soluto y del disolvente.

Las primeras partculas en sedimentar son las de mayor masa.

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*AplicacionesRemover elementos celulares sanguneos para obtener suero o plasmaa. Muestras sanguneasb. Unidades de sangre donada

*Derivados sanguneos..

*Aplicaciones2. Concentrar elementos celulares y otros componentes provenientes de lquidos biolgicos para su evaluacin microscpica o anlisis qumico.Ej.: examen del sedimento urinario

*Aplicaciones3. Separacin de proteinas a travs de anticuerpos para su posterior cuantificacin.4. Separar componentes lipidicos (grasas) de otros componentes del suero o plasma y separar lipoprotenas.

*Aplicaciones:

5. Extracciones de DNA a partir de celulas para su posterior anlisis.6. Separacin de organelas subcelulares a traves de ultracentrifugacion

*MantenimientoVelocidad: chequear c/3 meses, no debe diferir >5% de la esperada.

Timer: chequear semanal con timer de referencia, no mas de 10% de error

Temperatura: chequear mensual, variaciones no mayores de 2C de la temperatura esperada

Motor: cada 3 meses

*REFRIGERACION

* Efecto de la temperatura: Curva de tres temperaturas cardinales Temperatura mnima: debajo de ella no hay crecimiento; Temperatura mxima: encima de ella tampoco existe crecimiento; Temperatura ptima: permite la mxima tasa de crecimiento

* REFRIGERACIONESENCIAL PARA EL MANTENIMIENTO DE: MUESTRAS: SANGRE, SUEROS, ORINA ETC... REACTIVOS QUIMICOS. REACTIVOS INFLAMABLES. MEDIOS DE CULTIVO PREPARADOS. SOLUCIONES AMORTIGUADORAS.

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* Ciclo de refrigeracin:4 elementos

Elementos: Evaporador, Compresor, condensador y vlvula de expansin.Evaporador: el refrigerante se evapora y absorbe calor del espacio que est enfriando y de su contenido.El vapor pasa al Compresor movido por un motor que incrementa su presin, lo que aumenta su temperatura.El gas sobrecalentado a alta presin se transforma posteriormente en lquido en un Condensador refrigerado por aire o agua.Despus del condensador, el lquido pasa por una Vlvula de expansin, donde su presin y temperatura se reducen hasta alcanzar las condiciones que existen en el evaporador. REFRIGERANTE: AMONIACO LIQUIDO1234

*Diferentes tipos:Rangos variados de Temp.;

Los mas comunes: 1-8C

Temperaturas extremas: -86C

Freezers criognicos de 140 C a 150C, estables, temperaturas uniformes y a expensas de gas de nitrgeno liquido (LN).Ideal para periodos prolongados.

Freezers para banco de sangre: Plasma fresco congelado -20C Clulas rojas empacadas

Aplicacin en vida ciencia, farmacutica, clnica y industrial LAB.

*Cadena de frioConservacin de insumos de lab que requieren temperaturas de refrigeracin o congelacin para mantenerse viables y garantizar resultados confiables en el lab.

Para reactivos, fluidos biologicos.

Unidades de sangre y sus derivados

Indicador de auditorias de calidad

*VERIFICACION DE LA TEMPERATURA: refrigeradoresTermmetro dentro del refrigerador en posicin vertical.Las lecturas se hacen rpidamente para evitar la entrada de aire caliente que modifique la temperatura.El mtodo mas acertado es poner el termmetro dentro de un vaso con agua, ya que su capacidad de calor evita las fluctuaciones muy rpidaTermometro digital: sensor maxima y minima tempertaturaALARMA de seguridad audible, 1CEvaporador por efecto difuso del interior del gabinete lo que permite una uniformidad en la temperatura interior del equipo. Sistematizacin electrnica: equipos conectados a un sistema central y monitoreados por computadora; informes impresos y alarmas audibles.

*VERIFICACION DE TEMPERATURA: Congeladores o freezers: Termmetro de alcohol.-20 a -30CDiferentes presentaciones segn capacidad, rango de temperatura, tipo de refrigerante, requerimientos elctricos, presentacin de exterior e interior, dimensiones, peso neto etc...

*USOS Y CUIDADOSVENTILACION ADECUADA ATRS DEL REFRIGERADOR Y NO CUBRIR.NO ALIMENTOS.NO ABRIR CONTINUAMENTE.NO DESCONGELAR CON INSTRUMENTOS.VIGILAR LA TEMPERATURA.

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*Incubadoras

*TiposTIPOS:INCUBADORA DE AIREINCUBADORA DE AGUA RECIRCULANTEINCUBADORA DE BLOQUES

*Incubadora de CO2Necesaria para el crecimiento de microorganismos que requieren de CO2, por ejemplo:N. gonorrhoeae

* INCUBADORASAIRE:Temperatura uniforme 0.5C

Mas comunes 30,35,y37C

Control con termostato

Resistencias de baja potencia.

Poca humedad, nocivo para bacterias, usar toalla hmeda en un vaso de agua

AGUA RECIRCULANTE:Control de temperatura preciso 0.2C

41.5- 44.5Cutilizadas en el aislamiento de coliformes fecales en analisis de agua potable.

Usa recirculacion del agua mediante una bomba centrifuga.

Ej: coliformes fecales.

*INCUBADORA DE BLOQUESELEMENTO CALEFACTOR CALIENTA UN BLOQUE DE ALUMINIO O METAL CON BUENA CONDUCCION TERMICA QUE CONTIENE ESPACIOS PARA PONER TUBOS O PLACAS.

CONTROL PRECISO DE Temp.

AMPLIO RANGO DE TEMPERATURA

*SEGURIDAD DE LAS INCUBADORASTENER CONECCION A TIERRA.

TENER LOS CUIDADOS PERTINENTES A TODO EQUIPO ELECTRICO.

PROVEER DE UNA CUBIERTA A TODAS LAS INCUBADORAS DE AGUA RECIRCULANTE.

*OPERACIONENCIENDA ON .

PERIODO DE CALENTAMIENTO HASTA QUE ALCANCE LA TEMPERATURA DESEADA.

VERIFIQUE LA TEMPERATURA CON EL TERMOMETRO DE CONTROL.

*FALLAS COMUNES:NO ENCIENDE: MEDIR VOLTAJE, REEMPLAZAR RESISTENCIA, CALIBRAR.

TEMPERATURA INESTABLE: REVISAR TERMOSTATO, RESISTENCIA, CIRCUITO CONTROL.

NO LLEGA LA TEMP. DESEADA: REVISAR RESISTENCIA, REVISAR TERMOSTATO.

NO CONTROLA TEMPERATURA: REVISAR CIRCUITO CONTROL.

*Baos MariaBAOS DE AGUA

*BAO MARIA:

EQUIPO DE LABORATORIO QUE SIRVE PARA MANTENER UNA TEMPERATURA CONSTANTEMEDIANTE EL CALENTAMIENTO INTERMITENTEDE AGUA.

*Baos MariaCaja metalica, acero inoxidable, variable volumen.Usualmente para ensayos de laboratorio a 37C.Hasta 100CUsados para conferir temperatura uniforme a una sustancia lquida o slida o para calentarla lentamente: calentamiento indirectoConduccin termicaResistenciaTimer, Temperatura, ON-OFF

*Esquema del bao de agua

*OBJETIVOAsegurar que los baos maria se emplean en la incubacin de las pruebas, se mantengan en las condiciones adecuadas y permanezcan capaces de controlar la temperatura requerida.

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*CALIFICACION DEL EQUIPO

PARA LA CALIFICACION SE TOMA EN CUENTAEL ESTADO FISICO DEL EQUIPO:

LIMPIEZA DEL EQUIPOCONECTOR ELECTRICOSELECTOR DE TEMPERATURACARATULA INDICADORAAPARIENCIA EN GENERAL.VERIFICACION: SE LLEVA A CABO COMPARANDO LATEMPERATURA DEL EQUIPO CON UNTERMOMETRO DE REFERENCIA.

*Operacin del equipoAntes de encenderlo, cuidar que tenga agua destilada a la altura marcada por el fabricante, o que est cubriendo la resistencia.

Ajustar la temperatura deseada, con el regulador termosttico.

*Cuidados del equipoAl encenderlo, tener cuidado que el agua cubra la resistencia en forma completa, especialmente en los baos que utilizan bombas de circulacin.

b) Utilizar siempre agua destilada, el agua comn forma dentro de los baos y sobre las resistencias capas de carbonato, que con el tiempo sirven de aislante, dando como resultado inestabilidad en la temperatura.

c) El agua del bao de Mara, debe cambiarse semanalmente

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*PREGUNTAS?Sabidura ante todo; adquiere Sabidura; y sobre todas tus posesiones adquiere inteligencia, engrandcela, y ella te engrandecer. Proverbios 4:7-8. La Sabidura es la nica necesidad real que siempre tendrs.

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