LIC.T.M EFRAIN MONTES HIJAR

BACTERIOLOGIA MEDICAUNIVERSIDAD PERUANA LOS

ANDESCARRERA PROFESIONAL DE

TECNOLOGIA MEDICA

Géneros Streptococcus y Enterococcus

Flora normal del tracto respiratorio y digestivo Cocos gram positivos agrupados en cadenas de longitud

variable. Catalasa negativa Crecen bien en medios de cultivo habituales Aerobios / Anaerobios facultativos

Agrupación Staphylococcus Agrupación Streptococcus

Clasificación

Propiedades serológicas Grupos de Lancefield A-V

Patrones de hemólisis Incompleta (α) Completa (β) Nula (γ)

Propiedades bioquímicas

Género Streptococcus

Clasificación1.- Hemólisis en medios con sangre β-hemolíticos: hemólisis total (S.pyogenes, S. agalactiae) α-hemoliticos: hemólisis parcial (S.pneumoniae, S. viridans) No hemolíticos

Género Streptococcus

2.- Clasificación serológica

Antígeno polisacarido de la pared celular o

antígeno de grupo

Grupos serológicos de Lancefield Grupo A, B, C, D, F,……..V. Grupo A = S. pyogenes Grupo B = S. agalactiae

Género Streptococcus

3.- Diferenciación bioquímicaEstreptococos β - hemolíticos Sensibilidad a bacitracina

S. pyogenes = Sensible Otros estreptococos β-hemolíticos = Resistente

Estreptococos α - hemolíticos Sensibilidad a optoquina

S. pneumoniae = Sensible S. grupo viridans = Resistente

S. Pyogenes (Grupo A) Estructura antigénica

. Antígeno C Grupo específico. Antígeno M Tipo específico. Antigenos proteicos T, R.

S. Pyogenes (Grupo A) determinantes de patogenicidad

.Determinantes de patogenicidad: 1.- Estructurales 2.- Extracelulares

Clasificación de patógenosClasificación serológica

Microorganismo Patrones de hemólisis

A S. pyogenes β

B S. agalactiae β

C S. anginosus, S. equisimilis

β o no hemólisis

D S. bovis, Enterococcus spp.

α,γ, β

F, G S. anginosus β

-- S. pneumoniae α

Streptococcus

Cocos Gram positivos

Aerobios facultativos, algunos capnofílicos

Catalasa negativos

No móviles

No tienen esporas

Streptococcus

Agrupamiento en cadena en medios líquidos

Crecimiento y la hemólisis se favorecen con 10% de CO2 a 35ºC

Los cultivos “viejos” pueden ser Gram (-)

Manifestaciones Clínicas Streptococcus pyogenes: faringitis, amigdalitis,

escarlatina, impétigo, secuelas no supurativas: fiebre reumática y glomerulonefritis

Streptococcus agalactiae: meningitis en neonatos

Streptococcus pneumoniae: principal causa de neumonía, sinusitis, meningitis y otitis media.

EnterococcusCocos Gram positivos

Catalasa negativos

Aerobios facultativos

Crecen en CTS NaCl 6,5%

Algunos móviles

Enterococcus

Agrupamiento en pares o cadenas

Hidrolizan esculina en presencia de sales biliares

Capaces de crecer a pH 9,6

Temperatura oscila 10°C - 45ºC

Enterococcus

Enterococcus faecalis: 80 a 90% de aislamientos

Enterococccus faecium: mayor incidencia como agente nosocomial y se han detectado cepas multirresistentes a antimicrobianos de uso común contra G+

Manifestaciones clínicas Endocarditis

Infección de tracto urinario

Mediastinitis: infección de herida postoperatoria a nivel del mediastino

Escarlatina

Impétigo

Muestras clínicas

Hisopados faríngeos Aspirado pleural Sangre LCR Exudado bronquial Muestra de oído medio Lesiones de piel

S. pyogenes Diagnóstico

Obtención de muestras Tinción de Gram Cultivo

Tinción de Gram P.bioquímicas

Catalasa Hemólisis Sensibilidad a bacitracina

Identificación serológica Detección Ag de grupo

Pruebas de identificación Muestra Aislamiento y tinción de Gram Catalasa Hemólisis Resistencia a bacitracina Resistencia al optoquín Resistencia a SXT Factor CAMP Bilis esculina Crecimiento en CTS 6.5% NaCl

Tinción de Gram

Streptococcus

Enterococcus

Hemólisis En medios nutritivos

enriquecidos con sangre o suero.

Patrón de hemólisis

Alfa hemólisis (parcial) H2O2

Beta hemólisis (completa) Estreptolisinas O y S

Gamma hemólisis

Catalasa

Para diferenciar Streptococcus y Enterococcus de Staphylococcus y Micrococcus

Resistencia a antibióticos Se realiza en agar sangre

Bacitracina: cualquier halo permite considerar a la bacteria como Streptococcus pyogenes

Optoquín: halo de inhibición de 14mm o más es presuntivo de Streptococcus pneumoniae.

Trimetropín sulfa: Sensibles grupo C, F y G.

Prueba de CAMP

Streptoccocus β-hemolíticos

S. agalactiae (grupo B) Positiva

Prueba de Hidrólisis de Esculina Agar Bilis-Esculina

Identificación presuntiva de grupo D y Enterococcus

Hidrólisis de esculina: libera glucosa y esculetina

Esculetina en presencia de Fe3+

forma complejo coloración negra cuando la prueba es positiva

Crecimiento en 6.5% NaCl

Diferenciación de Streptococcus grupo D con respecto a Enterococcus:

Enterococcus (+) Streptococcus grupo D (-)

Cocos G+

+Staphylococcus

-StreptococcusEnterococcus

Hemólisis

Bacitracina

SGrupo A

(S. pyogenes)

RCAMP

+Grupo B

(S. agalactiae)

-Bilis esculina

+6.5%NaCl

-Streptococcus β

No A, B o D

+Enterococcus spp.

-Grupo D

β α γ

Optoquín

SS.pneumoniae

RBilis esculina

+6.5%NaCl

-Grupo Viridans

+Enterococcus spp.

-Grupo D

Bilis esculina

+6.5%NaCl

-StreptococcusNo hemolíticos

+Enterococcus spp.

-Grupo D

Esquema de clasificación

Catalasa

Paciente femenino 72 años Mieloma múltiple 14 años Varias neumonías 24/04/2011 Bolo de Dexametasona

04/05/2011 Ingresa

Síntomas y signos

Tos Sensación febrilExpectoración Adinamia38°CMurmullo vesicular asimétricoCrepitaciones : mayor en pulmón derechoSibilancias

Infiltrado

Paracardíaco

derecho

NEUMONÍA

Cefotaxima y Levofloxacina

HemogramaParámetro Resultado Valores

normales

Leucocitos 1500 cel/mm3 4.000 / 10.000

Neutrófilos 40% 40 – 70

Linfocitos 20% 20 – 40

Monocitos 4% 2 – 10

Plaquetas 69 000 cel/mm3 150.000 – 400.000

Hemoglobina 8.7 g/dL 14 – 18

Hematocrito 27% 41 – 51

Bandas 24% 5 – 15

QuímicaParámetro Resultado Valores normales

Creatinina 2,4 mg/dL 0,7 – 1,5

Nitrógeno ureico 53 mg/dL 20 – 40

Na 127 mEq/L 135 – 145

K 4.5 mEq/L 3,5 – 5,0

Cl 104 mEq/L 100 – 106

Ca 7.9 mg/dL 8,5 – 10,5

Parámetro Resultado Valores normales

pH 7.43 7.35 - 7.45

PO2 49 mmHg 75 - 100

PCO2 33 mmHg 35 - 45

Saturación O2 79% 94 - 100

Bicarbonato 21 mEq/litro 21 - 26

Gases

ANÁLISIS RESULTADO

Antibioterapia Sí recibe

Muestra clínica Sangre

Tipo examen Hemocultivo

Fecha recepción 04/05/09

Fecha finalización 06/05/09

Identificación

Identificación

Identificación VITEK 2 Y PSA

Antibiótico Resultado

Bencilpenicilina S

Cefotaxima (Meningitis) S

Cefotaxima (No Meningitis) S

Ceftriaxona (Meningitis) S

Ceftriaxona (No Meningitis) S

Cloranfenicol S

Eritromicina R

Levofloxacino S

Linezoid S

Moxifloxacino S

Ofloxacino S

Tetraciclina S

Trimetoprima/Sulfametoxazol R

Vancomicina S

Aislamiento: Streptococcus pneumoniae

Esputo o aspirado bronquial

Al obtener crecimiento colonial realizar pruebas como:

Catalasa

Pruebas especiales como:

Sensibilidad al Optoquín

Sensibilidad a la Bacitracina

Si no hacemos previamente un gram, debemos montar en los siguientes medios:

Agar Sangre

Agar Chocolate

Mac Conkey

Agar Manitol Sal***

***Importante correlacionar con la clínica e historia del paciente. (Staphylococcus aureus y algunos del grupo viridans)

Procedemos a montar la respectiva tarjeta para el VITEK

Descripción de la muestra. Celularidad >10 Leucos Diferencial.

Gram

Cultivo BacT-Alert 3D

Género Enterococcus

Incluye varias especies: E. faecalis y E. faecium Flora normal del tracto digestivo Escaso poder patógeno. Sinergia con otras

bacterias aerobias y anaerobias (E. coli y B. fragilis) que favorecen la capacidad invasiva.

Elevada resistencia antimicrobianos: Causa importante de infecciones hospitalarias (ITU, infecciones de heridas quirúrgicas)

Infecciones intraabdominales (polimicrobianas)

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Enterococcus faecalis

Contenido Página

Clasificación 2

Características Generales 3

Fisiología 4

Pruebas de Identificación 5

Medio de Cultivo 6

Hábitat 8

Patogenicidad 9

Mecanismos de Resistencia 10

Apéndice 11

Bibliografía 12

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1. Clasificación

• Taxonomía

• Familia: Enterococcaceae

• Género: Enterococcus

• Especie: faecalis

• Tinción de Gram: Positivo

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2. Características Generales Enterococcus faecalis es una bacteria comensal1, que habita el tracto gastrointestinal de

humanos y otros mamíferos, E. faecalis puede causar infecciones comprometidas en

humanos, especialmente en ambiente de hospital. La existencia de enterococos se potencia

porque ha tenido la habilidad de adquirir resistencia a los antibióticos en uso.

E. faecalis, no puede

sintetizar porfirinas y sólo

expresa una cadena respira-

toria funcional cuando se

le proporciona hematina

exógenos.

En ausencia de hematina, E. faecalis vuelve al metabolismo de la fermentación y produce

dismutasa extracelular que puede dañar el ADN de las células epiteliales. La respuesta

aguda de la mucosa del colon a hematina de E. faecalis fue identificado por la variedad de

genes.

Tinción de Gram en la que se observa E. faecalis

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3. Fisiología Enterococos que típicamente se disponen en parejas o en cadenas cortas, son anaerobios

facultativos y su temperatura óptima de crecimiento es de 35°C aunque pueden crecer en

un intervalo de 10°c y 45°C.

Requieren vitaminas B, bases de ácidos nucleicos y una fuente de carbono como glucosa.

Se observan colonias blanquecinas de gran tamaño tras un periodo de incubación de 24

hrs., las colonias pueden tener un aspecto no hemolítico o, rara vez, B-hemolítico.

Toleran la exposición a condiciones ambientales adversas (como la presencia de NaCl al

6.5% y sales biliares al 40%)

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4.Pruebas de Identificación

Prueba Resultado

Growth in 0.1% methylsene blue milk +

Ammonia from arginine +

Reduction of tetrazonlium +

Reduction of posassium tellurite +

Tyrosine decarboxylated +

Acid from L-arabinose —

Acid from arbutin —

Acid from melezitose +

Acid from melibiose —

Acid from sorbitol +

Acid from sorbose —

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5. Medio de Cultivo

Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones

  Pluripeptona 5

Suspender 60 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta homogeneizar. Calentar a ebullición durante 2 o 3 minutos. NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50°C y distribuir unos 20 ml por

placa. Secar la superficie del medio unos minutos en la estufa.

  Extracto de carne 5

  Lactosa 10

  Mezcla de sales biliares 8.5

  Citrato de sodio 8.5

  Tiosulfato de sodio 8.5

  Citrato férrico 1

  Agar 13.5

  Verde brillante 0.00033

  Rojo neutro 0.025

pH final: 7.0 ± 0.2

Agar S-S (Salmonella – Shigella)

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5. Medio de Cultivo

Siembra:

Sembrar por estriado la superficie del medio de cultivo.

Recomendaciones, se aconseja sembrar en forma conjunta una placa de

agar E.M.B. (B02-101-05) o de agar Mac Conkey (B02-114-05).

Incubación:

Durante24-48 horas a 35-37 °C, en aerobiosis.

Resultados

Características del medio

Medio preparado: rojo naranja.

Almacenamiento:

Medio deshidratado: a 10-35 ºC.

Presentación

x 100g :Código:  B02-138-05 X 500g :Código:  B02-138-06

Microorganismos Colonias

Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, de muy escaso crecimiento

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6. Hábitat

El hábitat normal de estos es el tubo digestivo de animales de

sangre caliente.

Son indicadores de contaminación fecal, por lo que su presencia

en los alimentos indica falta de higiene o defectuosas condiciones

de conservación, excepto en alimentos en los que interviene como

flora bacteriana natural de procesos fermentativos, como es el

caso de quesos, embutidos crudos e incluso productos cárnicos

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7. Patogenicidad

The ability of E. faecalis isolates to cause serious infections has been linked to

the intrinsic ruggedness of the bacterium, which allows the organism to persist in

the hospital environment and survive many host defenses, compounded by the

acquisition of a variety of variable virulence traits by horizontal transfer from

other organisms. Examples of variable traits that are known or suspected of

enhancing the virulence of the organism, include the cytolysin toxin, a

gelatinase, enterococcal surface protein Esp, aggregation substance, a

hyaluronidase, and a bile salt hydrolase. Enterococci employ mechanisms, such

as pheromone- induced plasmid exchange, and contact dependent plasmid and

transposon exchange, to disseminate these traits

E. faecalis puede causar endocarditis, infecciones de vejiga, próstata, epidídimo;

las infecciones de sistema nervioso son menos comunes.

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8. Mecanismos de Resistencia

E. faecalis resiste aminoglicósidos,

aztreonam, cefalosporina, clindamicina,

las penicilinas semisintéticas (nafcilina,

oxacilina, amoxicilina y

trimetoprim-sulfametoxazole).

La exposición a las cefalosporinas es un riesgo particularlmente importante en la

colonización e infección con enterococos.

Aztreonam

CefalosporinaClindamicina

Neisseria

Familia Neisseriaceae Gram – Diplococos Aerobios estrictos Saprófitas o patógenas de la

especie humana y animales. Oxidasa y catalasa positivos

Neisseria. Especies más importantes.

Neisseria meningitidis (meningococo) Producen meningitis

Neisseria gonorrhoeae (gonococo) Producen gonorrea.

Neisseria spp saprófitas. Habituales de rinofaringe y aparato genital, no patógenas.

----------------------------------------------- Las neiserias saprófitas son poco exigentes, fáciles de cultivar en

medios comunes y crecen entre 22 y 35 ºC. N. meningitidis y N. gonorrhoeae son muy exigentes, dificiles de

cultivar y solo crecen entre 35 y 37 ºC

Neisseria meningitidis: Acción patógena

Diplococos en granos de café Afecta a vías respiratorias superiores y causa

meningitis epidémica (sobre todo en niños con alta tasa de mortalidad).

Factores de virulencia: La cápsula que le confiere gran resistencia Proteínas de membrana con acción muy tóxica. Fimbrias para adherirse al epitelio que invade

La cápsula presenta un polisacárido con distintas propiedades antigénicas que permiten clasificar al menigococo en serogrupos (las cepas más patógenos pertenecen a los serogrupos A, B, y C).

Los serogrupos más frecuentes en España son el B y el C

Neisseria meningitidis: Cuadro clínico

Comienza con rinofaringitis leve que evoluciona a más severa y posible bronquitis.

Puede pasar a sangre y de allí a piel dando petequias, fiebres altas y artralgias.

Puede pasar a líquido cefalorraquídeo y meninges (meningitis): Fiebres muy altas, cefaléa, rigidez de nuca, vómitos, diarreas, etc. que pueden acabar en muerte si no se trata rápidamente.

El examen de líquido cefalorraquídeo es turbio, purulento y con abundantes meningococos.

Neisseria gonorrhoeae: Acción patógena

Diplococos con afinidad por las mucosas urogenitales.

Produce la Gonorrea de transmisión por contacto sexual.

Factores de virulencia: Proteínas de membrana con diferentes

características antigénicas. Fimbrias (adherencia y dificultad

para ser fagocitadas) Endotoxina que inactiva anticuerpos

próximos.

Neisseria gonorrhoeae: Acción patógena

Tras el contacto sexual: A las pocas horas los gonococos se

adhieren a las mucosas mediante las fimbrias

Penetran a tejidos subepiteliales, se multiplican y liberan endotoxinas con efecto sobre uretra, cuello uterino, ano, etc. con destrucción de células epiteliales, formación de procesos supurativos purulentos, dolor a la micción por uretritis, afectando también a cuello de útero y vaginitis en mujeres.

Sobre el 50% son asintomáticos cronificación (al no ser tratado).

Neisseria meningitidis. Aislamiento. Caracteres bioquímicos.

TOMA DE MUESTRAS: De LCR por punción lumbar Examinar rápidamente (sensible)

A la muestra de LCR turbio y purulento se le realiza: Examen directo: Se centrifuga:

Sedimento Frotis para tinciones (gram, tinta china, etc.)

Sobrenadante: Técnicas inmunológicas para detectar Polisacáridos capsulares y proteínas.

Siembra en Agar sangre, agar chocolate, etc. Puede realizarse también un hemocultivo.

Neisseria meningitidis. Aislamiento. Caracteres bioquímicos.

Pruebas bioquímicas: Catalasa (+) Oxidasa (+) O/F con glucosa y maltosa

(oxidativo) Reducción de NO3 a NO2 (-) Estudios serológicos del LCR

o del Suero.

Neisseria gonorrhoeae. Aislamiento. Caracteres bioquímicos.

TOMA DE MUESTRA: En el laboratorio a primera hora antes de la

primera micción (si es posible) De uretra, recto y cuello de útero.

EXAMEN DIRECTO: Frotis y tinción de gram. CULTIVO: en medios enriquecidos (agar

sangre, agar chocolate, Thayer Martin modificado, NYC medium)

Incubar a 35 – 37 ºC, humedad al 70 % y 5 – 10 % de CO2.

Pruebas bioquímicas: O/F, oxidasa, catalasa, etc.

Pruebas serológicas (ELISA).

PUNCIÒN LUMBAR

Pleocitosis

2000Leucocitos/L

2/3 Neutrófilos

Células mononucleares

Proteínas

1/3 100mg/dL

Glucosa

LCRLiquidoClaro

PresiónLigeramente

Cultivo BacterianoNegativo

Cultivo BacterianoNegativo

Cultivo BacterianoNegativo

Cultivo BacterianoNegativo

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