Coccidios

UNIVERSIDAD DE ORIENTENÚCLEO BOLÍVAR

ESCUELA CIENCIAS DE LA SALUDDEPARTAMENTO DE PARASITOLOGIA Y MICROBIOLOGIA

CATEDRA: PARASITOLOGÍA. ENFERMERIA.

COCCIDIOS

LICENCIADA MÓNICA TAGLIOLA

Infección emergente:Una infección que ha aparecido recientemente en una población“Su incidencia se ha incrementado en las últimas dos décadas”

Infección re-emergente:Una infección que ha existido en el pasado pero su incidencia o distribución geográfica se ha incrementado rapidamente.

Factores específicos precipitantes pueden ser identificados

• Raramente los patogenos aparecen de novo.

• Los patogenos que causan nuevas enfermedades ya estan presentes en el ambiente, y para entender su emergencia se debe estudiar no solo el agente causal sino los factores climaticos,

politicos, economicos y sociales (Wilson, 1994).

Las Enfermedades Infecciosas emergentes:

Coccidios Intestinales: Generalidades

• Las infecciones humanas son causadas por Cryptosporidium

parvum, Cyclospora cayetanensis e Isospora belli.

• Transmisión fecal-oral

• Diarrea es la principal manifestación clínica

• Individuos inmunocompetentes e inmunocomprometidos

• Criptosporidiosis produce la más severa y prolongada

enfermedad en pacientes con SIDA.

• Las infecciones humanas son causadas por Cryptosporidium

parvum, Cyclospora cayetanensis e Isospora belli.

• Transmisión fecal-oral

• Diarrea es la principal manifestación clínica

• Individuos inmunocompetentes e inmunocomprometidos

• Criptosporidiosis produce la más severa y prolongada

enfermedad en pacientes con SIDA.

Coccidios Intestinales: Generalidades

•Ciclospora cayetanensis es importante causa de diarrea en

inmunocompetentes.

• Isosporiosis es grave y prolongada en imnocomprometidos

aunque se presenta también en inmunocompetentes.

•Ciclospora cayetanensis es importante causa de diarrea en

inmunocompetentes.

• Isosporiosis es grave y prolongada en imnocomprometidos

aunque se presenta también en inmunocompetentes.

Coccidios. TaxonomiaCoccidios. Taxonomia

Reino ProtistaFilo Apicomplexa (Sporozoa)

Clase Sporozoa (Sporozoasida)Orden Eucoccidida (Eucoccidiorida)

Suborden Eimeriina (Eimeriorina) Família

Sarcocystidae Eimeridae Cryptosporidae

CryptosporidiumC. parvum (Mamiferos)C. muris

CryptosporidiumC. parvum (Mamiferos)C. muris

EimeriaIsospora

Cyclospora

EimeriaIsospora

CyclosporaToxoplasmaSarcocystisToxoplasmaSarcocystis

NeosporaNeospora Babesia, Theileria

Cryptosporidiosis. Cryptosporidiosis.

•Es una infección gastrointestinal (básicamente) causada por protozoarios coccidios pertenecientes al género Cryptosporidium

•Son parásitos obligatorios, pequeños, que afectan las células epiteliales de los vertebrados y pueden causar una diarrea de corta duración en inmunocompetentes y una enfermedad prolongada, parecida al cólera, en inmunosuprimidos (Chacin Bonilla, 1995).

•Es una infección gastrointestinal (básicamente) causada por protozoarios coccidios pertenecientes al género Cryptosporidium

•Son parásitos obligatorios, pequeños, que afectan las células epiteliales de los vertebrados y pueden causar una diarrea de corta duración en inmunocompetentes y una enfermedad prolongada, parecida al cólera, en inmunosuprimidos (Chacin Bonilla, 1995).

Durante los últimos 30 años, nuestro concepto de cryptosporidiosis ha cambiado desde una enfermedad rara, asintomática, para una importante causa de diarrea en animales y humanos en todo el mundo (Mosier & Oberst, 2000).

Durante los últimos 30 años, nuestro concepto de cryptosporidiosis ha cambiado desde una enfermedad rara, asintomática, para una importante causa de diarrea en animales y humanos en todo el mundo (Mosier & Oberst, 2000).

Cryptosporidiosis. Cryptosporidiosis.

Cryptosporidium parvumCryptosporidium parvum

• C. parvum no es nuevo: Tyzzer 1907

• Patógeno de animales humano (Nime et al., 1976)

• Patógeno emergente SIDA

• Parásito oportunista (inmunocompetentes también)

• Principal patógeno entérico

•Resistente al cloro

• Ubicuo en muchos animales (mamíferos)

• Asociado a agua (enfermedad hídrica)

• Dos genotipos: I o H: infección humana/zoonotico

II o C: animales/humanos

No existe tratamiento paliativo o definitivo

Pacientes con Diarrea Controles sin diarrea

Inmnocompetentes

Industrializados 2,2% (0,26%-22%) 0,2% (0%-2,4%)

Subdesarrollados 6,1% (1,4%-40,9%) 1,5% (0%-7,5%)

HIV Positivos

Industrializados 14% (6%-70%) 0% (0%-0%)

Subdesarrollados 24% (8,7%-48%) 5% (4,9%-5,3%)

Tasa de infección por C. parvum entre personas inmunocompetentes e infectadas con HIV en áreas industrializadas y en vías de desarrollo.


• Ciclo monoxenico

• No especificidad de huesped

• Ooquiste sin esporoquiste con 4 esporozoitos

• Microgametos sin flagelos

• Intracelular extracitoplasmático

• Ciclo: fase asexual sexual

• Ooquistes: 80% pared gruesa (ambiente)

20% (autoinfección)

• Ciclo monoxenico

• No especificidad de huesped

• Ooquiste sin esporoquiste con 4 esporozoitos

• Microgametos sin flagelos

• Intracelular extracitoplasmático

• Ciclo: fase asexual sexual

• Ooquistes: 80% pared gruesa (ambiente)

20% (autoinfección)


Variable Cyclospora Cryptosporidium IsoporaVariable Cyclospora Cryptosporidium Isopora

Tamaño Ooquiste 8-10 4-6 20-30 x 10-19No. esporoquistes 2 Ninguno 2No. esporozoitos 2 4 4ZNm Variable Si SiAutofluorescencia Verde-Azul Brillante Variable

TransmisiónTransmisión

1) Directa: persona a persona. Los ooquistes son infectantes

al ser expulsados

2) A través del agua: con 30 ooquistes puede ocurrir la

infección (URBANA)

3) Zoonotica: ambos genotipos están presentes en animales

(RURAL)

1) Directa: persona a persona. Los ooquistes son infectantes

al ser expulsados

2) A través del agua: con 30 ooquistes puede ocurrir la

infección (URBANA)

3) Zoonotica: ambos genotipos están presentes en animales

(RURAL)

Crytosporidium parvumA. Quiste. Soluc. SalinaB. Quiste. ZNm

A

B

DiagnósticoDiagnóstico

A. Diagnostico parasitológicoDemostración de ooquistes en hecesVisualización de ooquistes/otros estadios en secreciones

y biopsia intestinal

1. Métodos de concentración 2. Coloraciones (ZNm, Safranina, quimioluminescentes3. Histología

B. Detección de Antígenos en HecesKit comerciales (IFI, IFD, ELISA)

A. Diagnostico parasitológicoDemostración de ooquistes en hecesVisualización de ooquistes/otros estadios en secreciones

y biopsia intestinal

1. Métodos de concentración 2. Coloraciones (ZNm, Safranina, quimioluminescentes3. Histología

B. Detección de Antígenos en HecesKit comerciales (IFI, IFD, ELISA)

Métodos directosMétodos directos

C. Diagnostico InmunológicoIFIAc monoclonales y policlonalesELISAInmunoblot (Wester Blot)

C. Diagnostico InmunológicoIFIAc monoclonales y policlonalesELISAInmunoblot (Wester Blot)

D. ElectroforesisE. Biologia molecular: PCRD. ElectroforesisE. Biologia molecular: PCR

Métodos indirectosMétodos indirectos

Al fresco. Gránulos negros en los ooquistes

Contraste de fase. Flotacion de Sheather. Ooquistes refractiles.

C. parvumC. parvum

El método de flotación de Sheather solo es usado con heces frescas

Kinyoun. Ooquistes de Rojo intenso con granulos negros caracteristicos.

Kinyoun. Ooquistes de Rojo intenso con granulos negros caracteristicos. Diferciar de las levaduras.

C. parvumC. parvum

Varias modificaciones de la coloración ZN (acid-fast) pueden ser usadas. La coloración de los ooquistes varia según la modificación usada de rosado a rojo intenso.

Cyclospora cayetanensisCyclospora cayetanensis

• Protozoario coccidio de reciente descripción• Enteropatógeneo emergente• Se Busca, se encuentra• No transmisión persona a persona• Distribución estacional (meses mas calientes)• Transmisión: alimentos y agua• Diarrea, enfermedad biliar en SIDA• Por resolver: supervivencia ambiental (alimentos ,

vegetales), potencial zoonotico, transmisión a humanos,

epidemiología.

• Protozoario coccidio de reciente descripción• Enteropatógeneo emergente• Se Busca, se encuentra• No transmisión persona a persona• Distribución estacional (meses mas calientes)• Transmisión: alimentos y agua• Diarrea, enfermedad biliar en SIDA• Por resolver: supervivencia ambiental (alimentos ,

vegetales), potencial zoonotico, transmisión a humanos,

epidemiología.

Cylospora cayetanensis Taxonomía

Cylospora cayetanensis Taxonomía

Reino ProtistaSubFilo Apicomplexa

Subclase: CossidiasinaOrden Eucoccidiorida

Familia EimeriidaeGénero Cyclospora

Ciclo vital de C. cayetanensis

Identificación de ooquistes en especimenes fecales por microscopia

de luz

Otros métodos bajo investigación

A. Microscopia

Guías básicas

1) Muestras de heces multiples (al menos 3)

2) Usar métodos de concentración (Formol eter)

3) Técnica diagnostica de elección:

Disponibilidad de equipos y reactivos

Experiencia

Tiempo y costo

PUNTOS CLAVE PARA EL DIAGNOSTICO LABORATORIAL DE Cyclospora

PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA Cyclospora

1) Montaje el fresco

a) Microscopia de campo brillante (Contraste diferencial por interferencia)

Esferas refractilesOtros objetos con aspecto similarNo permanente

b) Fluorescencia bajo LUV

Autofluorescencia verde (330-335 nm)Otros objetos con aspecto similarNo permanenteMicroscopio de fluorescencia

Contraste de fase: fácil


2) Coloración Acido-alcohol resistente modificada de Kinyoun

Color rojo sobre un fondo verde azuladoPueden tener tonos variables (algunos no coloreados)Pueden no ser perfectamente redondos (colapsados o distorcionados)Gránulos y/o tener una pared característicaPermanenteArtefactos (errores diagnósticos)

3) Coloración con Safranina

Se colorean uniformemente de rojo a naranja

Requiere calentamiento (equipo adicional, p.e.

microonda)

1997: Safranina modificada con calentamiento en

microonda

(Visvesvara et al.)


4) Otros Métodos:

Coloración tricromica

Los ooquistes pueden ser detectados pero no confirmados por este métodoPueden aparecer no coloreadosCuando por Tricromico se sospecha, usar las colroaciones anteriores para confirmar

Identificación histológica en biopsias intestinales

No rutina Varias observaciones

B. Ensayo de Esporulación

C. Métodos Moleculares

DIFERENCIACIÓN ENTRE OOQUISTES DE Cyclospora y Cryptosporidium

Yodo de D’antoni Lugol

C. cayetanensis

Solución SalinaAl fresco (heces recién emitidas: masa morular granular en su interior dejando un espacio libre entre esta y la cubierta externa.

Solución SalinaAl fresco (heces recién emitidas: masa morular granular en su interior dejando un espacio libre entre esta y la cubierta externa.

Contraste de fase. Glóbulos refractiles dentro del ooquiste

Contraste de fase. 2 esporoquistes. Esporozoitos no visibles

C. cayetanensis

Kinyoun.

C. cayetanensis

Kinyoun + Hematoxilina. Rojos sobre fondo gris.

Epifluorescencia ultravioleta

C. cayetanensis

Kinyoun. C. parvun + C. cayetanensis

Kinyoun. C. parvun + C. cayetanensis

C. cayetanensis

Isospora belliIsospora belli

• Pacientes con SIDA/ normales

• Parasita enterocitos• Alli ocurre ciclo sexual y asexual• Ooquistes elíptico no esporulados en las heces. Polos finos y doble pared lisa.• Transmisión: agua y alimentos mas frecuente tropico y en paises subdesarrollados.

• Pacientes con SIDA/ normales

• Parasita enterocitos• Alli ocurre ciclo sexual y asexual• Ooquistes elíptico no esporulados en las heces. Polos finos y doble pared lisa.• Transmisión: agua y alimentos mas frecuente tropico y en paises subdesarrollados.

?Demostración de ooquistes alargados típicos (20-33 m x 10-19 m) NO esporulados en las heces.? Examen directo o concentración (flotación o sedimentación).? En ZNm (acid-fast) el esporoblasto dentro del ooquiste se colorea de rojo

•PUNTOS CLAVE PARA EL DIAGNOSTICO LABORATORIAL DE I. belli

Al fresco. Heces recientes: Ooquiste con 1 esporoblasto

Después de varias horas a temperatura ambiente. Ooquiste con 2

esporoquistes.

Ooquistes esporulados no son vistos en heces frescas

Kinyoun. Kinyoun. Post-tratamiento

I. belliI. belli

Material preservado en formalina. Epifluorescencia

I. belliI. belli

Variable Cyclospora Cryptosporidium IsoporaVariable Cyclospora Cryptosporidium Isopora

Tamaño Ooquiste 8-10 4-6 20-30 x 10-19No. esporoquistes 2 Ninguno 2No. esporozoitos 2 4 4ZNm Variable Si SiAutofluorescencia Verde-Azul Brillante Variable

ACIDO-ALCOHOL MODIFICADA (Kinyoun)

C. parvum C. cayetanensisI. belli

SAFRANINA

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