ELISAEnzyme-LikedImmunosorbentAssayPrueba Inmunoadsorbente Ligado a EnzimasANTGENO (Ag):Molcula exgena, que se encuentra en la superficie de un agente patgeno, y que al entrar en contacto con el organismo, induce la produccin de una respuesta del Sistema Inmune especfica (formacin de Acs)ANTICUERPO (Ac):Protena producida como respuesta a una sustancia extraa (Ag) y que tiene la capacidad de combinarse con l (complejo Ag-Ac).INMUNOENSAYOEs una prueba que usan complejos antgeno:anticuerpo (tambin denominados inmunocomplejos) para medir la presencia de un analito especfico en una muestra. Analito es todo lo que se mide en una prueba de laboratorio. En el inmunoensayo, el analito puede ser tanto un Ac como un Ag.Inmuno se refiere a una respuesta inmunolgica que hace que el cuerpo genere anticuerpos, y ensayo se refiere a una prueba. Entonces, un inmunoensayo es una prueba que utiliza inmunocomplejos cuando hay una unin Ag-Ac.DEFINICIN El ELISA se basa en el uso de antgenos o anticuerpos marcados con una enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunolgica como enzimtica. Al estar uno de los componentes (antgeno o anticuerpo) marcado con una enzima e insolubilizado sobre un soporte (inmunoadsorbente) la reaccin antgeno-anticuerpo quedar inmovilizada y, por tanto, ser fcilmente revelada mediante la adicin de un substrato especificoEl cual al actuar la enzima, producir un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un espectrofotmetro o un colormetro.TIPOS DE ELISAS1. Elisa indirectoEste tipo de Elisa detecta anticuerpos presentes en la muestra del paciente el cual es capturado por el Ag de la fase slida, en la fase solida est el Ag y en la muestra est el Ac y el conjugado reacciona con el Ac unido a la fase slida.

El Elisa indirecto es una de dos pasos Elisa que implica dos procesos de unin del anticuerpo primario y el anticuerpo secundario marcado.El Ac primario se incubo con el antgeno, seguido de la incubacin con el anticuerpo secundario. Sin embargo, esto puede conducir a seales no especficas debido a reaccin cruzada que el anticuerpo secundario puede llevar a cabo.En esta prueba de Elisa indirecta, el anticuerpo de la muestra se intercala entre el antgeno recubierto en el pocillo y una, la globulina anti-especie conjugado marcado con enzima. La adicin de un reactivo sustrato-cromgeno enzima causa el desarrollo del color. Este color es directamente proporcional a la cantidad de anticuerpo muestra unida. Cuanto ms anticuerpo presente en la muestra, ms fuerte es el desarrollo de color en los pocillos de ensayo.2. Elisa sndwichEste tipo de Elisa busca antgenosEl Elisa sndwich Elisa cuantifica Ag entre dos etapas de Ac (es decir Ac de captura y deteccin).El antgeno que va a medir debe contener al menos dos epitipos antgenos capaces de unirse al anticuerpo, ya que al menos dos Ac actan en el sndwich. Cualquiera de los Ac monoclonales o policlonales se pueden usar como Ac de capturaEste tipo de Elisa la muestra contiene el Ag,donde la fase solidaesta cubierta de Ac, al final se tienen el conjugado.

3. Elisa competitivoEn este mtodo el anticuerpo de la muestra va a competir con el conjugado por un nmero limitado de sitios de unin del Ag. Habr ausencia de color en una muestra positiva debido a que el sustrato no encontrara a la enzima porque el conjugado ha sido desplazado por el anticuerpo presente la muestra.En el Elisa competitivo, cuanto mayor es la concentracin de Ag de la muestra, mas dbil ser la seal eventual. La principal ventaja de un Elisa competitivo es la capacidad de utilizar muestras en crudo o impuro y todava selectivamente unirse cualquier antgeno que pueda estar presente.En algunos kits de Elisa competitivo incluyen Ag ligado a enzimas en lugar de Ac ligado a enzimas. El atigeno marcado compite por los sitios de unin a Ac primarios con su Ag de la muestra (no marcado). Cuanto mas antgeno en la muestra el Ag menos marcado se retine en el bien y mas dbil ser la seal.Es comn que el antgeno no se posiciona primero en el pozo.Con antgeno marcadoEs esta tcnica, el antgeno marcado con la enzima compite con el antgeno problema, presente en el espcimen, por los centros de unin de una cantidad limitada de anticuerpos especficos, absorbidos o unidos covalentemente a una fase solida (tubos, bolsas, partculas, etc) una vez alcanzado el equilibrio, mediante un lavado se elimina no solamente el antgeno marcado no unido en el complejo antgeno-anticuerpo, sino tambin todos aquellos componentes del espcimen que pudieran interferir en la reaccin enzimtica. A continuacin, la actividad cataltica asociada al complejo antgeno-anticuerpo, unido a la fase solida es cuantificada aadiendo el sustrato de la enzima y midiendo espectrometrica o fluorometricamente el producto formado (con lectectura multiple o punto final).Con anticuerpo marcadoEsta tcnica es muy asimilar a la descrita anteriormente, si bien son los anticuerpos especficos los que estn marcados con una enzima, y el antgeno unido a la fase solida compite con el antgeno presente en el espcimen por los sitios de unin de los anticuerpos. Despus de un lavado, la actividad cataltica en el complejo que queda unido a la fase solida es inversamente proporcional a la concentracin de antgeno en el espcimen. Esta tcnica ha sido denominada enzimoinmunoanalisis de inhibicin.

4. Elisa de captura

El mtodo de captura es una alternativa ELISA, donde se utiliza un anticuerpo monoclonal para unir el antgeno, es decir, PR3 o MPO, al plstico.La ventaja es que la superficie de plstico no bloquea o desnaturalizar el antgeno.En el anlisis PR3-ANCA esto da una mayor sensibilidad, como eptopos estn expuestos de manera ms eficiente.En el mtodo de MPO-ANCA el anticuerpo monoclonal ha sido elegido con el fin de bloquear un eptopo que no parece que ocurra en vasculitis y por lo tanto la especificidad de vasculitis se ha incrementado.

Referencia Sino Biological Inc. Biological solution specialist. ELISA encyclopedia. Recuperado de.www.Elisa-antibody.com/ELISA-introduction/ELISA-types/indirect-elisa Bioqumica clnica y patologa molecular. I, Volumen 1. Segunda EDICION.CAP 24. Enzimoinmunoanalisas. Pag 352-354 - EDITORIAL REVERTE. 1998.Recuperado de: https://books.google.com.bo/books?id=cKGyh_81v-oC&pg=PA352&dq=elisa+competitivo&hl=es&sa=X&ei=s7AiVe2IC8yfsAWUhoCYDQ&ved=0CCUQ6AEwAA#v=onepage&q&f=false Euro diagnostica. Wieslab. http://www.wieslab.com/index.php?headId=72&pageId=125&subId=92http://translate.google.com.bo/translate?hl=es-419&sl=en&u=http://www.wieslab.com/index.php%3FheadId%3D72%26pageId%3D125%26subId%3D92&prev=search