CROMATOGRAFÍA DE COLUMNA

CROMATOGRAFÍA DE COLUMNA

Es una técnica de purificación, puesto que permite aislar los compuestos deseados de una mezcla.se utiliza una columna de vidrio vertical que se llena con un soporte sólido adsorbente que será la fase estacionaria. La muestra que se quiere separar se deposita en la parte superior de este soporte. El resto de la columna se llena con un disolvente que constituye la fase móvil que, por efecto de la gravedad, hace mover la muestra a través de la columna. Debido a que cada uno de los componentes de una mezcla establecerá interacciones diferentes con la fase estacionaria y la móvil, serán transportados a diferentes velocidades y se conseguirá su separación.

1. extracción y separación de pigmentos vegetales, Macilla, C.G.E. Castrejón, CR; Rosas, T.M; Blanco, E.Z, Pérez, S.L.J. Universidad Del Valle De México.

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RESULTADOS Se hizo el respectivo montaje de la columna,

se coloco en la parte inferior un poco de algodón, posteriormente se relleno con gel sílice con etanol, se volvió a colocar algodón, luego se agrego el pigmento a estudiar y luego se agrego el hexano-etanol 2-1. Posteriormente, se abrió la llave y se empezó a separar los pigmentos en varios tubos de ensayo.

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RESULTADOS Los pigmentos se marcaron como A, B, C y D.

A: Xantofilas B: Clorofila a C: Clorofila b D: Carotenos

C,B

A,B

A,B

A

D D DB C

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DISCUSIÓN

La separación surge de las interacciones mutuas de los componentes de una muestra (pigmentos), solvente y adsorbente (hexano-etanol y silica gel). El adsorbente presenta sitios polares capaces de unir reversiblemente pequeñas concentraciones de sustancias por un proceso esencialmente electrostático. El solvente compite con los componentes de la muestra por los sitios de unión. Estos componentes son desplazados reversible y continuamente en la dirección del flujo del solvente.

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Los compuestos que se encuentran disueltos en la fase móvil, poco a poco saldrán de la columna cromatografía, y se recogen en fracciones. Las fracciones menos polares, que son por lo general las que se retienen poco o nada en el absorbente, serán las primeras en salir de la columna. En cambio, las sustancias más polares, quedan retenidas por más tiempo en el absorbente.

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Lo anterior se debe a que entre más polar sea un compuesto, más fuertemente se adsorbe en la fase estacionaria, por lo que su migración a lo largo de ella es menor, siendo eluído (arrastrado) más lentamente por la fase móvil, que los compuestos menos polares. De este modo, la separación selectiva de los componentes de una muestra, por cromatografía, se debe a las diferencias en la migración de los componentes individuales a lo largo de la fase estacionaria.

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Los carotenos fueron las que tuvieron mayor afinidad por el solvente hexano-etanol 2-1 mientras que las xantofilas fueron los que presentaron la menor afinidad por este solvente al ser los primeros y últimos pigmentos en obtenerse.

La cromatografía de columna es una técnica de mucho cuidado ya que se hace una separación fraccionada de los pigmentos y si se aplica mal la técnica se pueden pasar dos pigmentos en un mismo tubo.

El hexano-etanol 2-1 presentaba una polaridad media lo que permitía la separación de los pigmentos, ya que la fase estacionaria era polar (gel sílice) y por lo tanto atrapaba los compuesto mas polares y dejaba correr a los menos polares.

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CONCLUSIONES

Al llevar a cabo un cronograma es importante mantener siempre el nivel de solvente arriba de la columna del adsorbente para prevenir la formación de cuarteaduras en el adsorbente.

La columna se preparo y desarrollo usando el solvente hexano-etanol, el cual disuelvio a la muestra y permitió el movimiento de los compuestos a una velocidad práctica, esto es debido a que tiene una polaridad proporcional para los pigmentos que se separaron.

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En la práctica, los pasos de desarrollo y elusión frecuentemente son distinguibles, ya que la banda que se mueva más rápido puede empezar a emerger de la columna antes de que se complete la separación de las bandas que se mueven más lentamente.

Los resultados de esta cromatografía dependerán de variables como la fuente de los pigmentos, la eficiencia de la extracción, la actividad de la silica gel utilizada como adsorbente, las dimensiones de la columna, los volúmenes de cada solvente y las mezclas de cada solvente utilizadas en el desarrollo. Cambios muy pequeños en algunos de estos factores pueden afectar la separación e incluso causar cambios en las posiciones individuales de los pigmentos en el cronograma.

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Cual es el desarrollo múltiple y el bidimensional en la cromatografía de capa delgada?

R/: la cromatografía de desarrollo múltiple se usa para aumentar el poder de resolución de la cromatografía, dejando correr nuevamente el solvente sobre la cromatografía ya desarrollada. La cromatografía bidimensional permite la separación con dos solventes, se desarrolla la cromatografía de forma normal con un primer solvente después se extrae la fase estacionaria , se deja secar y se gira 90° con respecto a su posición original , y se desarrolla con el segundo solvente.

2. Valcárcel, M. 1988, Técnicas analíticas de separación. Editorial Reverte. España. PP 335-336, 597-613.

Preguntas 10

En que consiste la cromatografía de capa delgada preparativa?R/. Consiste en tomar la muestra y hacer una línea delgada sobre una placa grande y desarrollarla en una dirección perpendicular a la línea , después de esto es posible recoger de la fase estacionaria los con con ayuda de una espátula.

2. Valcárcel, M. 1988, Técnicas analíticas de separación. Editorial Reverte. España. PP 335-336, 597-613.

Preguntas 11

Que es una resina de intercambio anicónica y una catiónica?R/. Las resinas anicónicas poseen cargas positivas, por que interactúan con cargas negativas, las resinas anicónicas poseen cargas negativas e interactúan con cargas positivas, estas resinas son sintéticas, solidas e insolubles en agua, de estructura porosa, las reacciones entre estas resinas y el medio son completamente reversibles.

2. Valcárcel, M. 1988, Técnicas analíticas de separación. Editorial Reverte. España. PP 335-336, 597-613.

Preguntas 12

BIBLIOGRAFÍA

1. extracción y separación de pigmentos vegetales, Macilla, C.G.E. Castrejón, CR; Rosas, T.M; Blanco, E.Z, Pérez, S.L.J. Universidad Del Valle De México.

2. Valcárcel, M. 1988, Técnicas analíticas de separación. Editorial Reverte. España. PP 335-336, 597-613.

3. Rubén Darío Cortez, Técnicas De Separación, Cromatografía, En Línea: Sección de La Red Latinoamericana De Química, Barquisimeto Lara Versión 21 De Enero De 1998.

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GRACIAS 14