CROME-LIFE · generalizada de la metodología CROME-LIFE propuesta y aplicada en varios estudios...

”Red ambiental y de salud transMediterránea (CROME)”

LIFE12 ENV/GR/001040

Informe técnico de trabajo

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Red de salud y medioambiental transMediterránea

CROME-LIFE

Deliverable: B6.1

Recomendaciones para los gestores

LIFE ENVIRONMENT PROGRAMME


Acción: B.6

Tarea: 6.1

Informe entregado en fecha: 31/12/2016

http://www.crome-life.eu

http://www.crome-life.eu/




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Información bibliográfica

Proyecto: Red de salud y medioambiental transMediterránea – CROME-

LIFE

Tema: Recomendaciones para los gestores

PROGRAMA LIFE DEL MEDIO AMBIENTE Contrato No. LIFE12 ENV/GR/001040

Duración del contrato: 01/07/2013 - 31/12/2016

ACCIÓN: B.6 - Desarrollo de directrices TAREA: 6.1 - Desarrollo de directrices

Socio Editor: ISS

Otros Socios: AUTH, CSIC, JSI Fecha del Informe: 31/12/2016

Páginas: 42 (incluyendo figuras, tablas, ficheros adjuntos, referencias)

Palabras clave: recomendaciones para los gestores, brechas de datos, interpretación de los datos, biomonitoreo humano

Persona de cotacto en el Socio Editor Autores Socio Editor

Nombre: Dra. Gemma Calamandrei Nombre:

Teléfono:+39 06 49902106 Teléfono: Fax: Fax:

e-mail: [email protected] e-mail:

Página web CROME-LIFE: http://www.crome-life.eu

mailto:[email protected]

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Tabla de Contenidos

Resumen Ejecutivo 4

Descripción de los protocolos seguidos y de las dificultades encontradas en la implementación de los

estudios nacionales 4

Grecia 4

Italia 7

Eslovenia 11

España 13

Datos disponibles y brechas de datos encontradas

Grecia 17

Italia 18

Eslovenia 20

España 22

Analisis de los resultados y recomendaciones para los gestores 24

Recomendaciones específicas para cada país 24

Recomendaciones metodológicas generales 30

Recomendaciones sobre el uso óptimo de las medidas disponibles 31

Conclusiones 33

Resumen general de las recomendaciones metodológicas y específicas de cada país presentadas anteriormente 34

Referencias 36




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Resumen ejecutivo

Este informe tiene como objetivo proporcionar directrices para la reproducibilidad y aplicación

generalizada de la metodología CROME-LIFE propuesta y aplicada en varios estudios desarrollados en los países de demostración incluídos en el proyecto. Incluye recomendaciones para la recopilación de

muestras para la vigilancia ambiental y humana, el procesamiento de datos, su análisis estadístico, así como el documento de referencia y las recomendaciones preliminares para la respuesta política a nivel

nacional y regional europeo. El desarrollo de las directrices se aprovechará de una estrecha colaboración ya establecida con los equipos COPHES y DEMOCOPHES.

El informe está estructurado en tres secciones principales: la primera proporciona una descripción general de los protocolos utilizados junto con las dificultades principales encontradas en la ejecución de los casos de estudio práctico del proyecto y la segunda resume los datos disponibles, así como las

principales brechas de datos identificadas. A partir de estas dos secciones se desarrolla la tercera que resume los hallazgos clave y los resultados derivados de la aplicación de la metodología elaborada y

propone recomendaciones para respuestas políticas a nivel nacional y regional europeo. Dichas recomendaciones incluyen sugerencias para el uso óptimo de las mediciones disponibles, para que estas

mediciones se realicen cuando se identifiquen brechas de datos, así como para los métodos estadísticos que se utilizarán para una interpretación óptima de los datos ambientales y de biomarcadores.

Descripción de los protocolos seguidos y de las dificultades encontradas

en la implementación de los estudios nacionales

Grecia

Oinofoita - Cr (VI)

Se reclutaron 50 individuos de edad estratificada (de 4 a 65 años) para evaluar exposiciones actuales y

pasadas y acumulativas a Cr. Para este propósito, se tomaron muestras de orina y cabello. La población seleccionada se encontraba en un área más amplia que la cuenca de Asopos, lo que refleja la variabilidad

de las exposiciones relacionadas con los diferentes niveles de Cr muestreados en las campañas ambientales mencionadas anteriormente. Se tomaron muestras de cabello en la región occipital de la

cabeza. Las muestras se obtuvieron usando tijeras de acero inoxidable. Las muestras de cabello se cortaron en pedazos de aproximadamente 0,5 cm de longitud y se mezclaron para formar una muestra

de cabello representativa.

El método analítico se basó en lo descrito por Afridi et al (2006). Se recogieron muestras biológicas de

un total de 56 trabajadores de producción de acero expuestos a largo plazo (PW), 35 trabajadores de control de calidad (QCW) y 75 controles normales no expuestos (todos ellos hombres, rango de edad de

25 años y 55 años). La disolución de trabajo de Cr se preparó a partir de soluciones estándar certificadas de todos los analitos de estudio en ácido nítrico 2M. Todas las soluciones se almacenaron a 4°C. Para

cada persona, se lavaronl as hebras de cabello con una mezcla de éter dietílico-acetona (3 + 1), una solución de detergente no iónico (agua destilada) y agua ultrapura, respectivamente. Después del lavado,

las muestras de cabello se secaron a 80°C durante 6 h. Las muestras de cabello de cada participante se colocaron en sobres de plástico separados, que indicaban el número de identificación (ID) del participante. Se colocaron en frascos Pyrex de 50 ml. Duplicados de 0.5 ml de cada muestra de orina certificada,

mientras que 0.2 g de muestras de cabello humano BCR 397. Se agregó un volumen de 5 ml de una mezcla recién preparada de HNO3-H2O2 concentrado (2:1, v/v) en cada matraz, y las soluciones se

calentaron en una placa eléctrica a 80ºC durante 2-3 h, hasta que las digestiones se volvieron transparentes. Las soluciones finales se llevaron a 10 ml con HNO3 2M y se recogieron en un matraz de

polietileno para determinaciones de Cr por ETAAS. Se realizaron digestiones en blanco. Las muestras duplicadas de QCW, PW y controles normales se trataron como se describió anteriormente. La calibración

se verificó periódicamente mediante el análisis del estándar en la frecuencia de 10 lecturas. Se llevó a cabo un procedimiento de digestión asistido por microondas para lograr un tiempo de digestión más corto.

Entremedio de las muestras biológicas para digestión y muestras duplicadas de cabello seco del cuero cabelludo (200 mg) se colocaron tres muestras replicadas de CRM 397, se pesaron directamente en




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recipientes de digestión de Teflon PFA, a los que se agregaron 2 ml de HNO3 y 1 ml de 30% H2O2 y se dejaron reposar durante 10 minutos, luego los recipientes se sellaron y se colocaron en un reactor de

PTFE. Dichos recipientes se calentaron siguiendo un programa de digestión de una etapa (250 W, 15 min para muestras de cabello). Después de enfriar los recipientes de digestión en un baño de hielo durante

20 minutos antes de abrirlos, se evaporó la solución resultante casi hasta sequedad para eliminar el exceso de ácido y luego se diluyó a 10,0 ml en matraces volumétricos con HNO3 2M. Las extracciones en blanco (sin muestra) se realizaron a través del procedimiento completo de ambos métodos. Las

concentraciones se obtuvieron directamente de los gráficos de calibración después de la corrección de la absorbancia por la señal de un blanco de reactivo apropiado.

La metodología para identificar Cr en muestras de orina se basó en la propuesta por Scheepers et al. (2008) Las muestras puntuales de orina se almacenaron a 4ºC en la oscuridad y se transfirieron a un

laboratorio para su posterior almacenamiento a -18 0C. El análisis de Cr se realizó de acuerdo con Lewalter, Korallus et al. (1985). La orina se diluyó con una solución de nitrato de magnesio con Triton-X y

ácido sulfúrico (modificador de la matriz). Los niveles de Cr se determinaron a 357.9 nm utilizando espectrometría de absorción atómica, AAS (Solaar M, Thermo Analytical) con corrección de fondo

Zeeman. El LOQ fue de 0.05 μg/L de orina y el coeficiente de variación fue de 5.4% a 0.31 μg/L.

Aspropyrogos - PCDDs/PCDFs

Se tomaron muestras de sangre de 60 individuos de entre 6 y 58 años que vivían en las proximidades de la planta de reciclaje. Se recogieron aproximadamente 50-80 ml de sangre de cada individuo en

recipientes de polietileno. Inmediatamente después del muestreo se procesaron las muestras de sangre para la separación del suero. Éste se congeló inmediatamente después de la separación y se transportó

al laboratorio para la medición de PCDD/PCDF. Las muestras de suero sanguíneo permanecieron congeladas a una temperatura de -80°C hasta que se analizaron.

Todos los disolventes utilizados fueron para análisis de residuos a nivel de picogrado y se adquirieron de Promochem (Alemania). Los isómeros para la preparación de las soluciones de patrón interno 13C12 se

compraron a Wellington Laboratories (Canadá). El relleno Carbosphere 80-100 se adquirió de Alltech (se lavó por elución con metanol y luego con tolueno durante varias semanas antes de su uso). La alúmina fue

de actividad básica Super 1 para el análisis de dioxinas, MP Biochemicals GmbH. El gel de sílice impregnado con ácido sulfúrico se preparó de la manera siguiente: se activó gel de sílice (100 g, malla 60-200, Merck)

en un horno a 200ºC durante al menos 2 días y luego se mezcló con ácido sulfúrico concentrado (44 ml).

Las muestras de suero sanguíneo se sometieron a un procedimiento de extracción líquido-líquido que

consistía en mezclar con oxalato de sodio y metanol, seguido de etapas de extracción con una combinación de éter de dietilo-éter de petróleo. La capa orgánica de esta extracción se evaporó y el residuo lipídico se

secó y pesó para calcular los niveles de lípidos en suero y leche materna.

Los estándares de cuantificación etiquetados se agregaron a cada muestra antes de la extracción. Eran soluciones de tolueno que contenían una mezcla de los isómeros 13C12 de los 17 congéneres de

PCDD/PCDF, excepto el OCDF.

La cuantificación de PCDD/PCDFs se realizó por HRGC-HRMS (EI) en modo MID en un cromatógrafo de

gases Trace GC (ThermoFinnigan) acoplado a un espectrómetro de masas MAT-95 XP (ThermoFinnigan) equipado con un automuestreador CTC A 200S a 10 000 de poder de resolución (10% definición del

valle). Las condiciones instrumentales y los criterios de control de pureza estuvieron de acuerdo con los métodos EPA 1613B y EPA 1668A. La cuantificación de la concentración y la recuperación se llevó a

cabo mediante el método de dilución isotópica. El límite de detección (LOD) para cada congénere se determinó como la concentración en el extracto que da lugar a una respuesta instrumental en dos iones

diferentes a controlar con una relación señal/ruido de 3: 1 para la señal menos sensible. Para los cálculos de TEQ se usaron los factores equivalentes de toxicidad de la OMS-98 (TEF) (Van den Berg et al., 1994).

Salónica - PM-PAHs

Datos ambientales




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Teniendo en cuenta que hay una gran cantidad de datos sobre la exposición diaria promedio a PM y HAP en el área de Salónica, es de particular interés identificar la variabilidad diurna del aire ambiente y el aire

interior a PM y asociar esta a actividades específicas. Ello nos permitirá refinar aún más las estimaciones de exposición para los diversos grupos y, finalmente, las estimaciones del riesgo de cáncer de pulmón

asociadas a la exposición a los HAP. Por esta razón, las mediciones dinámicas de tiempo de PM (en paralelo al equipo existente para muestreo de PM gravimétrico y análisis químico) se monitorearon continuamente durante el período frío de los años 2014-2015 y 2015-2016 utilizando el Espectrómetro

de Aerosol Mini Laser (Mini- LAS). Con respecto a las mediciones al aire libre, los muestreadores PM10 y PM2.5 se instalaron a 3.5 m sobre el suelo, ubicados en un sitio de tráfico y otro de fondo. El sitio de

tráfico está rodeado por varias calles con niveles típicos de tráfico pesado de la ciudad y el sitio de fondo está ubicado en un entorno urbano sin emisiones directas de tráfico. Las mediciones duraron 2.5 meses,

cubriendo la transición del período cálido al frío (temperaturas medias diarias de 23 y 4ºC respectivamente).

Las mediciones paralelas de la calidad del aire interior (para PM10 y PM2.5) se llevaron a cabo en 30 casas ubicadas cerca del tráfico y la estación de fondo urbano, respectivamente, para validar las

estimaciones de INTERA. Con el fin de identificar la contribución de la quema de biomasa en la calidad del aire interior, las mediciones específicas para el efecto de la operación de chimeneas abiertas en

concentraciones de PM se llevaron a cabo en un lugar interior seleccionado y en condiciones controladas de tasa de intercambio de aire (AER). Más específicamente, dentro de un apartamento en el tercer piso

de 140 m2, se llevaron a cabo extensas mediciones de PM10 y PM2.5, mientras que se usó un medidor de número de partículas para medir la variación temporal del número de PM y la concentración de masa.

La estación meteorológica local ubicada en el sitio de tráfico proporcionó los datos meteorológicos necesarios para el estudio.

Se recogieron muestras de PM2.5 y PM10 utilizando 6 muestreadores de aire de flujo bajo (ENCO PM, TCR TECORA, Italia). Los muestreadores usaron cabezales de muestreo que cumplen con las normas EN 12341 (PM10) y EN 14907 (PM2.5), y operaron a una velocidad de flujo de 38 L/min, con un tiempo de

recolección de 24 h por muestra. Las muestras se recogieron en filtros de membranas de PTFE con anillo de soporte de PMP (PALL Life Sciences, Ø 47 mm, tamaño de poro 2 μm, EE. UU.). Los filtros de teflón se

analizaron gravimétricamente para concentraciones de masa de partículas utilizando una microbalanza electrónica con una sensibilidad de ± 1 μg después de un equilibrio de 24 horas a una temperatura entre

20°C y 23°C y una humedad relativa (HR) entre 30 y 40%. Cada filtro se pesó al menos tres veces antes y después del muestreo, y la masa neta se obtuvo restando el promedio de las ponderaciones de pre-

muestreo del promedio de las posteriores al muestreo. Las diferencias entre las ponderaciones replicadas fueron <5 μg para los blancos y las muestras. Antes del comienzo de la campaña de muestreo, se calibró

el caudal de los muestreadores PM2.5 y PM10. Los filtros de blanco de campo también se recogieron y se usaron para corregir las concentraciones de fondo o las influencias de la manipulación y el transporte.

Se utilizaron los mismos muestreadores para recoger durante 24 horas PM10 y PM2.5 dentro de 30 ubicaciones interiores, con y sin funcionamiento de chimenea. Además de esto, el material particulado

también se monitoreaba a través de un Contador portátil de partículas (Lasair II, Modelo 525, Sistema de medición de partículas). Una bomba incorporada a dicho contador permitía extraer muestras de aerosoles

a través del instrumento con un caudal de 0.01425 m3/min. Las gotitas resultantes se cuentan con un láser de diodo, 780 nm. El equipo Lasair II permite mediciones de concentración de número de partículas

en las clases de tamaño 0.5-0.7 μm, 0.7-1.0 μm, 1.0-5.0 μm, 5.0-10.0 μm, 10-25 μm y materia particulada por encima de 25.0 μm. Este equipo se ha utilizado durante las mediciones de atmósferas interiores con

y sin encendido de chimenea. Las concentraciones de número de partículas se transformaron en concentración de masa usando la fórmula siguiente:

3

3

( / ) 6

PNC d DC =

median

g m




7

Donde PNC es la concentración de número de partículas para el rango de diámetro de partículas dado, p es la densidad de partículas, tomada igual a 1 g/cm3 y Dmedian es el diámetro medio para la clase de

partículas seleccionada.

Italia

El estudio CROME Cross-Mediterranean

Trieste - Metales y resultados neuropsicológicos en niños de 7 años

Dentro del estudio común CROME, el equipo ISS, en colaboración con el Hospital pediátrico Burlo Garofolo

en Trieste, realizó un estudio de seguimiento a la edad de 7 años de 200 niños nacidos dentro de la cohorte NAC II PHIME original, establecida en la región Friuli Venezia Giulia de Italia en 2007. Dicha cohorte

permite disponer de datos relativos a la exposición perinatal a metales y metaloides, el estilo de vida y la salud de la madre, factores socioeconómicos y las medidas neuropsicológicas a los 18 y 40 meses. A los 7 años de edad, el cabello, la saliva y la orina del niño y la muestra de saliva de la madre (kit de auto

recolección de ADN de Oragene) se recogieron en la cita. Las madres completaron un cuestionario nuevo para actualizar la información sobre los factores del estilo de vida. Los niños se sometieron a pruebas

neuropsicológicas por neuropsicólogos capacitados. Estas pruebas incluyeron Wisc-IV (Wechsler Intelligence Scale para niños), Nepsy-II para evaluación de capacidades sensoriomotrices, de atención y

aprendizaje, MT para evaluación de habilidades de lectura, BVSCO2 para evaluación completa de habilidades de escritura, CBCL - Child Behavior Check List para identificar problemas de comportamiento

y emocionales en los niños.

Más en detalle, 201 madres completaron cuestionarios para obtener información sobre los hábitos

alimenticios del niño y la familia, las variables socioeconómicas, el estilo de vida, la exposición ocupacional/residencial y el consumo de pescado. Las madres también fueron sometidas a la prueba PSI

(índice de estrés de los padres) para evaluar la interacción entre el estado psicológico de la madre y factores ambientales. El PSI está específicamente diseñado para la identificación temprana de aquellas

características que pueden afectar el desarrollo normal y el funcionamiento del niño y permite identificar a los niños con trastornos emocionales y del comportamiento y los padres que están en riesgo de vivir en

un papel disfuncional de sus padres (Guarino, Blasio et al. 2008).

Cada niño fue sometido a pruebas neuropsicológicas por neuropsicólogos expertos en las instalaciones

del Hospital pediátrico Burlo Garofolo en Trieste. La evaluación tomó aproximadamente cuatro horas para cada niño e incluyó las pruebas siguientes:

R. Wisc-IV (Wechsler Intelligence Scale for Children) genera un puntaje IQ que representa la capacidad

cognitiva general de un niño.

B. Nepsy-II es específico para la evaluación de las capacidades sensoriomotrices, de atención y aprendizaje

C. MT para la evaluación de las habilidades de lectura

D. BVSCO2 para la evaluación completa de las habilidades de escritura

E. CBCL - Lista de verificación de comportamiento infantil - identifica problemas de comportamiento y emocionales en niños (déficit de atención, trastorno hiperactivo, trastorno negativista desafiante, trastorno

de conducta, depresión infantil, ansiedad por separación, fobia infantil, etc.).

Un factor de incertidumbre de las conclusiones de este estudio estaba relacionado con la ausencia de un

método analítico validado para el análisis de especies individuales de As individual, aparte del As total. Para llenar este vacío, utilizamos un análisis de especiación basado en cromatografía iónica acoplada a ICP-MS

para determinar y cuantificar seis especies As diferentes en los 200 niños: los resultados mostraron que la concentración relativa alta de As orgánico (principalmente como AsBet) reflejaba que la ruta de

exposición principal en niños fue el marisco. Por lo tanto, las concentraciones altas de As total (que incluye también As orgánico) no necesariamente indican una exposición elevada a As inorgánico, que es la forma

tóxica.




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Un aspecto adicional de incerteza de las conclusiones se refiere al cuestionario de conducta y datos dietéticos. La incerteza es debida a que la información sobre exposición externa sólo permite estimaciones

aproximadas de los patrones de exposición, aunque representa una información importante para investigaciones futuras.

Como limitación del estudio común de CROME, se debe tener en cuenta que el seguimiento ha generado un sesgo de selección, ya que es bien sabido que la probabilidad de perderse durante el seguimiento está relacionada con los resultados y el nivel de exposición. Las familias con un nivel socioeconómico más bajo

tienen más probabilidades de salir de un estudio longitudinal. Por lo tanto, nuestra muestra es representativa de familias más educadas y más saludables, lo que posiblemente modifica la calidad y la

cantidad de factores estresantes ambientales a los que está expuesto el niño.

Análisis químicos

Los análisis químicos de muestras biológicas recogidas después de la evaluación neuropsicológica

consistieron en medidas de la concentración en cabello u orina de cinco metales de conocido efecto tóxico sobre el desarrollo neuronal (mercurio, plomo, manganeso, cadmio, arsénico).

Cabello: El manganeso (Mn) y mercurio (Hg) se analizaron en 200 muestras de cabello humano, se

recogieron en bolsas de plástico y se almacenaron en una secadora hasta su análisis. Antes del análisis, las muestras de pelo, puestas en copas de vidrio convenientemente descontaminadas con HNO3, se

trataron de la siguiente manera: (i) tres ciclos de lavados en continuo con agitación durante 30 minutos cada uno en una mezcla de éter etílico-acetona 3: 1 (v/v) (Sigma-Aldrich, St.Louis, MS, EE.UU.) para

eliminar la película sebácea del cabello. Después de cada ciclo las muestras de cabello se lavaron con agua desionizada de alta pureza (EASY-pure UV, PBI, Milán, Italia) con agitación; (ii) un lavado con agitación

durante 1 hora en ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) al 5% (Sigma-Aldrich, EE. UU.) para complejar los elementos químicos presentes en la superficie del cabello y (iii) enjuague repetido con agua desionizada

de alta pureza (EASY-pure UV, PBI, Milán, Italia). Después de secar en la estufa durante 16 horas a 85°C, se pesaron aproximadamente 0.25 g de cabello lavado de cada muestra. Se realizó un ciclo de

mineralización en placa ModBlock (ModBlock CPI International, Santa Rosa, CA, EE. UU.) añadiendo 4 ml de HNO3 a 60-70°C y aproximadamente media hora antes del final se añadieron 1 ml de H2O2. Las

cuantificaciones de Mn y Hg se realizaron con espectrometría de masas de plasma acoplado inductivamente (iCAP Qs ICP-MS, Thermo-Fisher, Bremen, Alemania). La configuración del instrumento y

los parámetros de operación se muestran en la Tabla 1. El iCAP Qs ICP-MS utilizado en este estudio estaba equipado con un nebulizador PFA ST MicroFlow (ESI, Omaha, NB, EE. UU.), una cámara de

pulverización de cuarzo refrigerada Peltier (funcionando a 3 ° C), un inyector de zafiro de 2.0 mm de DI y una antorcha de cuarzo con muestreador de Ni y conos de skimmer.

Table 1. Configuración del instrumento _______________________________________________________________________

Potencia RF 1550 w

Flujo de gas Argon (L/min) Plasma 14, Auxiliar 0.8, Nebulizador 1.08

Celda de gas de colisión He a 4.2 mL/min

Barrera KED 2 V

Parámetros analíticos Tiempo de espera 80 ms por pico, 50 barridos, 3 replicados

Masas analíticas 55Mn, 202Hg

Standard interno 115In

_________________________________________________________________________

Orina: Las muestras de orina (aproximadamente 100 ml) se recogieron en recipientes de polietileno y se

almacenaron a -20°C hasta su análisis. Los contenedores se descontaminaron previamente con HNO3 ultrapuro diluido (10% v/v) (Normatom, Lovaina, Bélgica) y se enjuagaron con agua desionizada de alta

pureza (Barnstead EASY-Pure II, Dubuque, IA, EE. UU.). La orina se analizó mediante un método validado




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internamente, que previamente había sido acreditado por el organismo de acreditación italiano (ACCREDIA). Las muestras de orina se diluyeron 1: 5 (v/v) con agua desionizada de alta pureza antes de

la cuantificación del metal. Los metales se midieron por espectrometría de masas de plasma acoplado inductivo (SF-ICP-MS, Element 2, Thermo Fischer, Bremen, Alemania) trabajando en modo de baja

resolución (LR, m/Δm = 300) para metales no interferidos: 114Cd, 202Hg, 208Pb; en modo de resolución

media (MR, m/Δm = 4000) para metal interferido: 55Mn; en modo de alta resolución (HR, m/Δm =

10,000) para metales muy interferidos: 75As y 82Se. El instrumento estaba equipado con un muestreador de Ni y conos de skimmer, un nebulizador Meinhard, una cámara de pulverización enfriada con agua (tipo Scott) y un dispositivo de electrodo de protección. La calibración ajustada al tipo de matriz combinada con

la estandarización interna por 115In y 69Ga (1 ng/mL en las soluciones analíticas) proporciona un método satisfactorio para compensar los efectos residuales de la matriz y minimizar las derivaciones

instrumentales. Para probar la exactitud del procedimiento analítico se usaron dos materiales de referencia certificados de orina humana liofilizada: Seronorm (Sero AS, Billingstadt, Noruega) y ClinCheck

(Recipe, Munich, Alemania).

Estadística

Las principales exposiciones de interés se encontraron los niveles de metales en sangre (Hg, Mn, Pb, Cd, As) y cabello (Hg, Mn) de niños de 7 años. Al igual que en el estudio PHIME original, la ingesta de pescado

durante el embarazo por parte de la madre se consideró como la fuente de exposición a Hg, la ingesta de diferentes tipos de pescado por el niño se estimó a partir de lo descrito en el artículo 138

El FFQ se completó por parte de las madres poco después del parto. El cuestionario incluyó 7 preguntas cuantitativas sobre peces, que abordaron la frecuencia del consumo de raciones de 150 gramos de

pescado, crustáceos y moluscos (cocidos según diferentes recetas) y pescado en aceite. La distribución de frecuencia de esas variables se describió utilizando números absolutos y porcentajes de sujetos de

cada categoría. Para cada tipo de pescado se convirtieron las categorías de consumo a ingestas continuas de porciones de pescado asignando a cada categoría un nivel de consumo igual al valor mediano para esa

categoría (por ejemplo, 2-4 veces por semana se convirtió en 3 veces por semana). La ingesta total de pescado se calculó sumando la ingesta semanal estimada de todos los tipos de pescado.

Las distribuciones de ingesta de pescado y la concentración de metales se representaron con medias

aritméticas y desviaciones estándar, cuartiles y rangos mínimo-máximo. También se calcularon las medias geométricas para la concentración de Hg. La normalidad de la distribución se evaluó mediante la prueba

de Shapiro-Wilk. La concentración de MeHg en muestras biológicas, que se conocía en una submuestra de la cohorte, se comparó con la concentración de THg entre los sujetos correspondientes.

Los resultados principales de interés se observaron en puntuaciones combinadas de comportamiento cognitivo, socioemocional y de adaptación. Las distribuciones de las puntuaciones neuropsicológicas se

representaron mediante medias aritméticas y SD, cuartiles y rangos máximos mínimos. Las diferencias entre los grupos se evaluaron mediante la prueba de suma de rangos de Wilcoxon (para variables

continuas) y la prueba χ2 (para variables categóricas). Las asociaciones brutas entre las concentraciones de metales y cada puntuación neuropsicológica se analizaron mediante análisis de regresión lineal.

La regresión lineal multivariante se utilizó para evaluar la asociación entre Hg y el neurodesarrollo, después del ajuste por variables de confusión posibles. Las covariables siguientes tienen en cuenta la hipótesis de

afectar el neurodesarrollo infantil y, por lo tanto, se consideraron en los análisis: consumo de pescado fresco, congelado y enlatado por parte del niño y la madre durante el embarazo, sexo del niño, peso al

nacer, edad gestacional, cociente de inteligencia materna ( IQ), edad materna en el parto, IMC antes del embarazo, aumento de peso, estado civil en el momento del parto, índice socioeconómico (SES) (adaptado

de Bennett et al28), tamaño del hogar, número de adultos y niños que viven en el hogar, cigarrillos fumados y el consumo de alcohol durante el embarazo. Los modelos que analizaban la sangre del cordón umbilical

también incluían concentraciones de Cu, Zn y Se.

Debido a que los datos para la mayoría de las covariables se derivaron de cuestionarios, que pueden ser incompletos, y para evitar la pérdida de potencia estadística en análisis multivariados debido a valores que

faltaban, se realizó la imputación para algunas variables, suponiendo que era completamente aleatoria.




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Entre las covariables consideradas como factores de confusión potenciales, solo las que se asociaron con al menos un resultado neuropsicológico (P <0,10) se incluyeron en los modelos finales.

Utilizamos análisis estratificados por sexo del niño para evaluar si el efecto del Hg en el neurodesarrollo difería en niños y niñas.

Los datos se analizaron mediante correlaciones de Pearson entre pares de variables de exposición y resultados y análisis de regresión múltiple mediante el uso del software SPSS.

Región del Lacio - Niveles de metales en adolescentes

En el contexto del PROBE (programa para Biomonitorización de la exposición), empezó en el año 2008 una campaña de biomonitoreo de la población italiana para la detección de varios metales en sangre, se realizó una encuesta especial entre los adolescentes y cooperación con la Asociación Nacional contra la

microcitemia (ANMI) durante la detección anual de talasemia en la población escolar. Dentro del estudio nacional de Italia, se amplió el protocolo de la primera cohorte PROBE a un total de 453 adolescentes y

se volvió a analizar todo el conjunto de datos de biomonitoreo, teniendo en cuenta:

i) la evaluación de cuestionarios para vincular los niveles de metales en el estilo de vida y sangre de los

adolescentes y las características demográficas de cada sujeto como: sexo, área de residencia, intensidad de tráfico, estado socioeconómico (SES), presencia de empastes dentales y aparatos ortopédicos,

piercings y tatuajes, consumo de tabaco de segunda mano, pescado y leche.

ii) la recopilación de datos de calidad del aire (benceno, CO, NO2, NOX, O3, PM10, PM2.5) de las estaciones

de monitoreo de la calidad del aire más cercanas a las direcciones de residencia de cada sujeto, identificadas por GIS y provistas por la Autoridad Ambiental Regional (ARPA, Región del Lacio) para vincular

los niveles de metales en la sangre de los adolescentes y los niveles de marcadores de calidad del aire seleccionados.

iii) La recopilación de datos sobre el contenido de As en el agua potable del área de Viterbo para vincular los niveles de metales en la sangre de los adolescentes y la exposición al As a través del agua.

Población

Se reclutó una cohorte de adolescentes de 453 sujetos, de entre 13 y 15 años, que vivían en áreas

urbanas y rurales de la región del Lacio para estudiar su exposición a los metales. La distribución de adolescentes en las cuatro áreas muestreadas fue: 160 de Viterbo (ciudad pequeña), 131 de Fontenuova

y 72 de Monterotondo (áreas rurales semirurales) y 89 de Roma (ciudad grande). La ANMI obtuvo muestras de sangre en ayunas durante la detección anual de microcitemia en las escuelas (2009). Se

analizaron 19 metales: As, Cd, Co, Cr, Hg, Ir, Mn, Mo, Ni, Pb, Pd, Pt, Rh, Sb, Sn, Tl, U, V y W en las muestra de sangre.

Análisis

Las muestras de sangre se almacenaron a -20°C. En el laboratorio se sometió a digestión con microondas

(Milestone ETHOS MEGA II, FKV, Bérgamo, Italia) 1 ml de muestra de sangre (de aprox. 1.5 ml recogidos en total) con HNO3 ultrapuro (Romil Ltd., Cambridge, RU) que posteriormente se diluyeron con agua

desionizada de alta pureza (sistema EASY Pure, Barnstead, Dubuque, EE. UU.). Los análisis para determinar el contenido de metales se realizaron con un espectrómetro de masas provisto de un plasma

acoplado inductivo (SF-ICP-MS, Element 2, Thermo Scientific, Bremen, Alemania).

El método utilizado para el análisis de sangre fue validado y acreditado por ACCREDIA (el organismo italiano

de acreditación) y se evaluaron los siguientes parámetros: linealidad, límite de detección (LoD) y límite de cuantificación (LoQ), especificidad, precisión (precisión y exactitud), robustez e incertidumbre extendida

(AOAC, 1998, Decisión de la Comisión 2002/657/EC, LGC, 2003, NATA, 2009, Thompson y otros, 2002).

Para cada donante, también se rellenó un cuestionario para recopilar información sobre:

- datos generales como género, piercings, joyas basura, hábitos dietéticos, agua potable, factores de estilo de vida (por ejemplo, exposición al humo de tabaco ambiental, consumo de alcohol, uso de cosméticos,




11

etc.), empastes y aparatos dentales, estado ocupacional familiar. El estado socioeconómico (SES) de la familia se obtuvo fusionando el nivel educativo y el estatus ocupacional de los padres. Se usó la Clasificación

Internacional Uniforme de Ocupaciones (Clasificación Internacional Uniforme de Ocupaciones, 2008) para describir las ocupaciones de los padres. De los cuestionarios administrados se obtuvieron varias

informaciones: 138 adolescentes tenían aparatos ortopédicos dentales y/o obturaciones, mientras que 49 recibieron perforaciones y 93 adolescentes tenían padres fumando en casa. En relación con los hábitos alimentarios, 265 adolescentes consumían pescado 1 vez a la semana (1/s) y 81 2 veces a la semana

o más (≥2/s), mientras que 241 tomaban leche todos los días (7/s), 63 a 4 a 6 veces por semana (4-6/s) y 99 de 1 a 3 veces por semana (1-3/s).

La evaluación de la exposición se completó georeferenciando todas las asignaciones con la ubicación de su dirección de residencia mediante herramientas SIG y teniendo en cuenta también el estilo de vida de

los adolescentes y sus familias.

La limitación principal del estudio PROBE de adolescentes fue la falta de información sobre el estado de

salud de los sujetos monitoreados y la imposibilidad de contactar nuevamente a los mismos sujetos. Sin esta información, no pudimos vincular el contenido de metales en la sangre de los adolescentes y los

efectos potenciales en su salud.

Datos ambientales

Para tener una visión de la exposición en el sentido descrito, se relacionaron las concentraciones de metales con los datos ambientales de la calidad del aire y agua suministrados por la Autoridad Regional

del Medio Ambiente (Región del Lacio). Se aplicaron las técnicas de Kriging para relacionar la concentración de sustancias químicas en el aire exterior resueltas espacialmente con los datos recogidos

por las estaciones de monitoreo del aire. Los productos químicos considerados fueron NOx, PM10, PM2,5, benceno, CO, NO2, O3.

Análisis estadístico

Las estadísticas básicas de los datos relacionados con 453 adolescentes incluyeron los percentiles, la

media geométrica (GM) y el intervalo de confianza del 95% para la media geométrica (IC, GM). La media geométrica representa mejor la tendencia central de los datos si la distribución es asimétrica en lugar de

la media. En los valores de evaluación estadística por debajo del LoD se tuvieron en cuenta como LoD/2 y se excluyeron los valores extremos. Este procedimiento se usó para obtener valores de referencia (RV)

donde el percentil 95 describe el valor superior útil en el campo de la atención médica y la política ambiental. La cohorte adolescente también se estratificó por algunas características, incluido el sexo, el

área de residencia a su vez asociada a la intensidad del tránsito, la presencia de empastes dentales y/o aparatos ortopédicos, piercings y tatuajes, humo de segunda mano, consumo de pescado y leche, SES.

Cada variable se codificó de acuerdo con los niveles aplicados en los cuestionarios: cantidad de empastes dentales y/o frenillos, piercings y tatuajes (0: no; 1: sí), humo de segunda mano (0: no; 1: en casa; 2: al

aire libre), frecuencia de consumo de pescado (0: nunca; 1: 1 vez/semana; 2:> = 2 veces/semana) y consumo de leche (0: nunca; 1: 1-3 veces/semana; 2:> 3 veces/semana; 3: 7 veces/semana), SES de la

familia (0: bajo, 1: medio, 2: alto). Para todas las comparaciones y otros análisis estadísticos, se consideró toda la base de datos, incluidos los valores extremos. Las diferencias para cada concentración de metal

entre los subgrupos basadas en las diferentes variables se evaluaron mediante la prueba U de Mann-Whitney o la prueba de Kruskall-Wallis o Wilcoxon (dependiendo del número de niveles para cada variable

de agrupación). La prueba U de Mann-Whitney con la corrección de Bonferroni se usó para comparaciones múltiples, cuando fue apropiado. El nivel de significación se estableció en p <0.05. Los cálculos estadísticos se realizaron con el software estadístico STATA Versión 8.1 (STATA Corporation, TX). Para el análisis geo-

estadístico, los 453 sujetos se geo-referenciaron en base a su dirección de residencia en un sistema SIG y los datos se almacenaron en una Geodatabase junto con datos de biomonitoreo humano, hábitos de

dieta, datos ambientales y cobertura del suelo. Se utilizó el modelo lineal generalizado (GLM) y el estudio de asociación ambiental (EWAS) para investigar las asociaciones entre los datos de biomonitoreo humano,

el estilo de vida, los patrones de la dieta (pescado y leche) y la cobertura del suelo. El EEA 2006 (http://www.eea.europa.eu/data-and-maps/data/corine-land-cover-2006-raster-3) utilizó la cubierta




12

terrestre a una resolución espacial alta (100 m) para analizar relaciones espaciales posibles entre el tipo de uso de la tierra donde vivían los adolescentes y la concentración de metales en sangre.

Eslovenia

Biomonitoreo humano nacional e identificación de las fuentes de exposición

El programa nacional de biomonitoreo humano nacional (BHN) se realizó por primera vez en Eslovenia en

el período comprendido entre 2007 y 2015 y su ejecución se basó en la legislación para la implementación del programa BHN en Eslovenia (definida en el Artículo 49 Ley de Sustancias Químicas del Capítulo IX). El

programa incluyó la recogida de muestras biológicas para monitorear la exposición interna de los habitantes de diferentes áreas del país, pero no incluyó el monitoreo de la exposición externa. Dentro de

CROME, se diseñaron y ejecutaron varias campañas ambientales junto con la recopilación de datos auxiliares para llenar los datos que faltaban sobre la exposición externa. Teniendo datos adicionales

recopilados y vinculados a los datos existentes, CROME contribuyó significativamente a los objetivos a largo plazo y los requisitos de política del programa BHN en Eslovenia.

Las campañas ambientales focalizadas incluyeron la recogida de muestras de agua del grifo de 108

lugares en toda Eslovenia y el muestreo de musgo de 102 localidades como un bioindicador de la calidad del aire y la deposición. Los datos de calidad del aire (AQ) se complementaron con datos de la red de

monitoreo AQ (O3, PM2.5 y PM10) a escala europea y datos sobre emisiones y liberaciones de fuentes puntuales y difusas (NOx, SOx, CO, amoníaco NH3, dióxido de carbono CO2 y PM10). La composición química

del suelo se obtuvo del mapa geoquímico interpolado de Eslovenia. Además, se recopiló información sobre el entorno de construcción de Catastro de infraestructura pública. Como proxy para el uso de fertilizantes,

se obtuvieron excedentes modelados de nitrógeno y fósforo del Servicio Geológico de Eslovenia.

Las incertidumbres específicas relacionadas con los proxies individuales son las siguientes. En el caso de

la composición geoquímica del suelo, las capas utilizadas son el resultado de una interpolación espacial basada en datos puntuales. Los excedentes de nitrógeno y fósforo son estimaciones basadas únicamente

en el uso de la tierra predominante en el área. En el caso de los datos AQ a escala europea, estos tienen una resolución muy aproximada y, como tales, no proporcionan una idea lo suficientemente detallada sobre

la exposición de un individuo y las diferencias entre los diferentes grupos de población, respectivamente. De forma similar, a falta de datos reales sobre la densidad del tráfico, se utilizó el tipo de infraestructura

vial en las inmediaciones de la residencia de las personas participantes en la cohorte.

Los datos ambientales recopilados junto con las encuestas basadas en cuestionarios de hábitos

conductuales y dietéticos de la población del estudio BHN respaldaron la derivación de los patrones generales de exposición de la población en todo el país. Las dificultades principales encontradas corresponden a diferencias en la resolución espacial entre diferentes bases de datos ambientales y ciertos

parámetros utilizados como proxy (por ejemplo, excedente de nitrógeno como proxy para el uso de fertilizantes artificiales) que aumenta la incertidumbre de los datos ambientales en comparación con datos

precisos sobre la exposición interna.

La fuente adicional de incertidumbre es la conducta y los datos dietéticos basados en cuestionarios. Las

incertidumbres que se originan a partir de la exposición de datos externos solo permiten estimaciones aproximadas de los patrones de exposición, pero son una indicación importante para investigaciones

futuras.

Estudio Cross-Mediterráneo

Como parte del estudio Cross-Mediterranean, la población eslovena de niños reclutados al nacer dentro

del proyecto PHIME ha sido objeto de seguimiento. Con el objetivo de evaluar la asociación entre la exposición prenatal al mercurio (Hg) y el neurodesarrollo/neuroconductual, los niños se reevaluaron

neuropsicológicamente utilizando el test Weschler Intelligance Scale for Children (WISC) a los 7-8 años de edad. Como es bien sabido, varios factores pueden modular el resultado neuropsicológico, entre ellos

la coexposición a otros metales/elementos y factores genéticos. El protocolo implementado para el




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proyecto CROME incluye además de la prueba WISC también la determinación de Hg y otros elementos relevantes (Pb, Mn, Cd, As, Se, Zn, Su) en matrices biológicas y análisis de polimorfismos genéticos, según

los cuales ciertos individuos pueden tener una predisposición a efectos de salud más adversos que los informados en la población general.

Los polimorfismos que se seleccionaron para el protocolo CROME Cross-Mediterranean están en genes que codifican enzimas implicadas en la absorción, distribución, metabolismo o eliminación de metales y algunos también directamente en procesos de desarrollo del cerebro (por ejemplo, sinaptogénesis). Hasta

la fecha, el análisis de genotipado junto con la exposición interna y la evaluación neuropsicológica se completaron en un tamaño de muestra limitado, como está disponible para la población de estudio

esloveno (n = 179). Este número pequeño de muestra no permite la estratificación de los datos recopilados por genotipo. La asociación entre la puntuación de inteligencia y exposición prenatal/infantil

(WISC) se evaluará aún más a medida que se complete la base de datos con datos de otras poblaciones de estudio (Croacia, Italia).

Niveles de BPA en niños y sus madres y padres

Los niveles de bisfenol A (BPA) en orina de niños de 6-11 años, sus madres y padres que se obtuvieron para la población eslovena en el marco de un proyecto de demostración DEMOCOPHES, se evaluaron por

primera vez dentro del CROME,para la evaluación de riesgos . Sobre la base de los datos urinarios, la ingesta diaria de los individuos se calculó de nuevo utilizando un modelo biocinético basado en la fisiología (PBBK) parametrizado adecuadamente para el BPA, junto con un algoritmo de reconstrucción de la

exposición. Al volver a ejecutar el modelo de PBBK en el modo de avance, se pudo estimar la dosis biológicamente efectiva (BPA en plasma libre) y el área diaria correspondiente bajo la curva (AUC).

Finalmente, la relación de caracterización del riesgo se obtuvo utilizando mediciones de dosis tanto externas como internas.

España

Estudio Cross-Mediterráneo - Sabadell – Exposición a metales de mujeres embarazadas

Como parte de la red de investigación de INMA (Infancia y Medio Ambiente) (Guxens, Ballester et al., 2012) se reclutaron 657 mujeres embarazadas en su visita médica de la 12° semana en el Centro de Atención

Primaria Sant Fèlix II (Sabadell), entre 2004 y 2006, se involucraron solo a aquellas mujeres que vivían en Sabadell, tenían más de 16 años, tenían un embarazo único, se ofrecieron como voluntarias para el

programa y querían dar a luz en los Hospitales de Sabadell o Terrassa (una ciudad cercana). Las mujeres que padecían enfermedades crónicas, tienen problemas de comunicación o quedan embarazadas por

reproducción asistida fueron excluidas. Después de obtener el consentimiento de las mujeres admitidas, los cuestionarios se administraron por entrevistadores capacitados en las semanas 12 y 32 del

embarazo. Esta población proporciona un ejemplo representativo de las poblaciones urbanas en las áreas mediterráneas españolas.

Se recogieron muestras de orina en contenedores de polipropileno de 100 ml en el primer y tercer trimestre del embarazo de 489 mujeres embarazadas de esta cohorte. Las muestras se almacenaron en

tubos de polietileno a -20ºC hasta su procesamiento posterior. Este proyecto de investigación fue aprobado por el Comité de Ética en Investigación del CREAL. Para mantener la confidencialidad se codificó, la información de los participantes.

Análisis de muestras de orina

Antes del análisis por Q-ICP-MS, las muestras se digirieron y diluyeron para oxidar y eliminar la materia

orgánica y para minimizar las concentraciones de sólidos inorgánicos (Krachler, Radner et al., 1996, Castillo, Martinez et al., 2008). Tres mL de cada muestra de orina, 3 mL de Instra-Analyzed 65% HNO3

(J.T. Baker, Alemania) y 1.5 mL de Instra-Analyzed 30% H2O2 (Baker) se introdujeron en vasos de teflón. Las mezclas se dejaron en un horno a 90ºC durante la noche. Después de enfriar, los recipientes se

abrieron y luego se colocaron en una placa de calentamiento a 250 ° C para evaporar el ácido nítrico. Una vez secadas, las muestras sólidas resultantes se disolvieron en 3 ml de HNO3 al 4%, se colocaron en

frascos de vidrio de 7 ml y posteriormente se almacenaron en un refrigerador hasta el análisis




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instrumental. Antes del análisis, se introdujo un estándar interno de 10 ppb de In y, dependiendo de la densidad de la muestra, se diluyeron a 30 ml o 60 ml con agua MilliQ para evitar la interferencia no

espectral.

El análisis de Q-ICP-MS se realizó mediante un instrumento X-SERIES II (Thermo Fisher Scientific). Se

seleccionaron iones isotópicos específicos para Co y Ni a fin de evitar posibles interferencias de calcio a partir de la matriz de la muestra. Los átomos de Cl también pueden interferir potencialmente en la determinación de As y Se. En estos casos, se debe agregar la técnica de colisión/reacción a los métodos

instrumentales, pero no se observaron interferencias en las muestras presentes y estas células no se usaron. El límite de detección instrumental (LOD) para todos los metales fue de 0.2 ng/mL atendiendo al

punto más bajo de calibración más confiable. Las dos muestras correspondientes al primer y tercer trimestres de cada sujeto se digirieron y analizaron al mismo tiempo. Se procesó un blanco de agua MilliQ

en cada lote de muestras para controlar contaminaciones eventuales. Si hubo contaminación, se realizó una limpieza completa de todo el material y se repitió la digestión. Las muestras de campo también se

obtuvieron mediante el análisis de agua Milli Q que se almacenó previamente en los recipientes utilizados para botellas de orina materna y se transportó junto con las muestras.

Se utilizó habitualmente un patrón de orina de Bio-Rad Nivel 1 (Lyphochek Urine Metals Control 1-69131; Marnes-la-Coquette, Francia) para evaluar la metodología desarrollada, ya que contiene concentraciones

de metales cercanas a las muestras de orina de la cohorte de estudio . Este material de referencia proporcionó valores certificados para As, Cd, Co, Cr, Cu, Mn, Ni, Pb, Sb, Tl, Zn y Se. Antes de la digestión,

las muestras de orina de referencia liofilizadas se reconstituyeron con 25 ml de agua MilliQ según lo recomendado por el fabricante.

Todo el material de vidrio y polipropileno se limpió a fondo remojando en ácido nítrico al 10% durante 24 h, seguido de enjuague tres veces con agua MilliQ. Los vasos de teflón se limpiaron después de cada uno

enjuagando con ácido nítrico al 10% tres veces y, después del último enjuague, dejándolos en el horno a 90ºC durante la noche. Finalmente, los recipientes se enjuagaron con un gran volumen de agua MilliQ.

La creatinina se determinó en el laboratorio Echevarne de Barcelona por el método de Jaffé (cinética con

medición objetivo, método compensado) con Beckman Coulter © reactivo en AU5400 (IZASA®).

Analisis estadísticos

Los valores de la media, la desviación estándar (SD), la mediana y P91 se calcularon para las concentraciones de metales. La normalidad se verificó mediante la prueba de Kolmogorov-Smirnov. Las

concentraciones de metal entre el primer y el tercer trimestre se compararon mediante correlaciones de Spearman y pruebas de hipótesis de Mann-Whitney. Se calcularon las relaciones individuales entre las

concentraciones de metal durante el tercer y primer trimestre. La media, la desviación estándar y la mediana de los valores para estas relaciones también se calcularon. Todos los análisis estadísticos se

realizaron usando el software Stata 12.0 (Stata Corporation, College Station, Texas).

Asturias – Exposición a compuestos organoclorados

La cohorte de estudio se estableció en Asturias por el Departamento de Prevención de la Universidad de

Oviedo, como parte del Proyecto INMA -Infancia y Medio Ambiente (Guxens, Ballester et al., 2012). Se reclutaron 494 mujeres embarazadas entre mayo de 2004 y junio de 2007. Las entregas se realizaron

entre octubre de 2004 y febrero de 2008 en el hospital de referencia San Agustín, en Avilés (Asturias, España). Se obtuvieron 326 muestras de sangre del cordón umbilical a partir de la asistencia a 485

partos dentro de la población de la cohorte. Finalmente se dispuso de 308 muestras de pares de sangre del cordón umbilical de la madre. Los tejidos placentarios se recogieron en un subconjunto de 50 mujeres.

Presentamos datos de concentración de POP para las 308 muestras pareadas disponibles y 50 muestras de placenta. Las características de las madres de este grupo de 308 muestras pareadas no mostraron

diferencias significativas en todo el grupo reclutado. El protocolo de estudio fue aprobado por el Comité de Ética del hospital de referencia y se obtuvo el consentimiento informado de cada participante.

Datos y recolección de muestras




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Las muestras de sangre materna se recogieron durante el primer trimestre de gestación (mediana = 12 semanas, rango = 10-13 semanas). Se tomaron muestras completas de sangre del cordón umbilical

utilizando venopunción de los vasos del cordón umbilical antes de administrar la placenta. Se recogieron muestras de suero materno y de cordón después de la centrifugación durante 10 minutos, se separaron

en alícuotas de 1 ml y se almacenaron a -80 ° C hasta el análisis. Toda la placenta se recogió inmediatamente después del parto. La mitad de la placenta, incluidos los lados materno y fetal y las partes central y periférica, se colocaron en un recipiente de vidrio de un mezclador (Büchi Mixer B-400 Büchi

Laboratories AG, Flawil, Suiza) para su homogeneización. Una vez homogeneizadas, se almacenaron alícuotas de 25 g y se congelaron a -80ºC. Las mujeres embarazadas completaron dos cuestionarios

detallados en persona (semanas 10-13 y 28-32) sobre las características antropométricas y sociodemográficas y las variables del estilo de vida.

Análisis de laboratorio

Los métodos analíticos de laboratorio y los procedimientos de control de calidad para el análisis de COP

se han descrito en otros estudios (Vizcaino, Arellano et al., 2009, Grimalt, Howsam et al., 2010) donde se desarrollaron métodos para determinar las concentraciones de 7 congéneres de PCB (PCB28, PCB52,

PCB101, PCB118, PCB153, PCB138 y PCB180), α-HCH, β-HCH, γ-HCH, δ-HCH, HCB, PeCB, 2,4'-DDT, 4, 4'-DDT, 2,4'-DDE, 4,4'-DDE, 2,4'-DDD, 4,4'-DDD y 14 congéneres de PBDE (BDE17, BDE28, BDE47,

BDE66, BDE71, BDE85, BDE99) , BDE 100, BDE153, BDE154 BDE138 BDE 183 y BDE 190 y BDE 209) en muestras de placenta, suero materno y de cordón.

En pocas palabras, 1 mL de suero o 1 gr de tejido placentario se enriquecieron con los estándares surrogates de tetrabromobenceno (TBB) y decachlorobifenil (CB 209) y se agitaron en vórtex durante 30

s a 2.000 rpm. Se añadió n-hexano (3 ml), seguido de ácido sulfúrico concentrado (2 ml). Después de la reacción, la mezcla se agitó durante 30 segundos y la fase de sobrenadante de n-hexano se separó por

centrifugación. La solución de ácido sulfúrico restante se reextrajo dos veces con 2 ml de n-hexano (cada una por 30 s de agitación y centrifugación). Los extractos combinados de n-hexano (7 ml) se limpiaron adicionalmente con ácido sulfúrico (2 ml, agitando 30 s). Luego, la fase de n-hexano se separó por

centrifugación y se redujo a un volumen pequeño bajo una corriente de nitrógeno suave. El extracto se transfirió a viales de cromatografía de gases (GC) usando cuatro enjuagues de isooctano de 25 μl. Se

añadieron CB 142, BDE 118 (20 μl) y [13C] -BDE 209 (10 μl) como patrones internos antes de la inyección. Los compuestos organoclorados (OC) se determinaron mediante cromatografía de gases (GC) con

detección de captura de electrones (GC-ECD). Los congéneres de BDE se analizaron mediante GC acoplado a espectrometría de masas en modo de ionización química y registro de iones negativos.

El colesterol total y los triglicéridos se determinaron en muestras de suero materno y de cordón utilizando métodos enzimáticos colorimétricos en el Laboratorio de Bioquímica General del Hospital San Agustín.

Las muestras se procesaron utilizando un Roche Diagnostics COBAS C711. Las concentraciones totales de lípidos en suero se calcularon tal como describen Phillips et al (1989) usando la fórmula siguiente:

TL = (2.27 * TC) + TG + 62.3 mg • dL-1

Los lípidos placentarios se determinaron gravimétricamente. Se homogeneizó 1 gramo de tejido

placentario en 5 ml de cloroformo: metanol: ácido clorhídrico (20: 10: 0,1) (v/v/v). Después de repetir el proceso, se añadieron 10 ml de HCl 0.1 N y se centrifugaron a 3000 rpm durante 10 min. La fase

orgánica se recogió luego; la fase no orgánica se volvió a extraer y se añadió al primer producto de extracción. El contenido total de lípidos se determinó después de secar los extractos orgánicos bajo una

corriente de nitrógeno a peso constante y los lípidos totales se expresaron en gramos de lípidos por gramo de placenta (López-Espinosa, Lopez-Navarrete et al., 2008).

La validación de los resultados analíticos (incluidos los COP y las concentraciones totales de lípidos) se realizó mediante el análisis del material de referencia obtenido del Programa de Monitoreo y Evaluación Ártico (AMAP). Participamos regularmente en el Programa AMAP Ring Proficiency Program para COP en

suero humano (Centro de Toxicología del Instituto Nacional de Salud Pública de Québec, Québec, Canadá) y los resultados de laboratorio generalmente están dentro del 20% de los valores de consenso, incluidas

las concentraciones de lípidos.




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Análisis de datos

Los niveles de POP se expresaron en ng/mL. También se ajustaron a las concentraciones séricas totales

de lípidos (ng/g de lípidos). Los valores de la mitad del límite de detección se asignaron cuando no se encontraron concentraciones medibles de analito. La correlación de Spearman y los diagramas de

dispersión se usaron para examinar las asociaciones entre los niveles de POP en la placenta, el suero materno y del cordón umbilical. La transferencia placentaria se evaluó mediante el cálculo de las relaciones de concentraciones entre muestras pareadas para cada compuesto en ng/ml y ng/g de lípido:

Rcm = Cuc/Cm; Rpm = Cp/Cm

donde Cuc es la concentración del cordón umbilical, Cm es la concentración materna y Cp es la

concentración placentaria. Las correlaciones y las relaciones de concentración se calcularon excluyendo los valores no detectados. Los valores que exceden tres veces la desviación estándar de la media se

consideraron valores atípicos y, por consiguiente, se excluyeron de los cálculos de la relación. Las relaciones de cada compuesto solo se calcularon si había al menos 10 muestras pareadas por encima

del límite de detección (Needham, Grandjean et al., 2011). También se calcularon los análisis de regresión con forzamiento de la regresión a 0. No se encontraron diferencias importantes entre estas opciones

(datos no mostrados). Por lo tanto, solo se informan las proporciones medias de concentración.

Incremento de peso gestacional (GWG)

El GWG se definió como la diferencia entre el último peso registrado durante el embarazo y el peso autoinformado por la madre antes del embarazo. Para evitar efectos posibles de heterocedasticidad y no

linealidad, el GWG se calculó a partir de las tasas semanales de GWG (wGWG) durante el embarazo, que se calcularon para cada semana según las diferencias entre las mediciones de peso de los registros de

visita prenatal y el peso autoinformado antes del embarazo, dividido por la edad gestacional en cada medición. El promedio (± DE) de las mediciones de peso por madre fue de 6.5 ± 2.7. El peso corporal

autoinformado antes del embarazo se reemplazó con el primer registro clínico de peso corporal si se midió antes de las 8 semanas de gestación, y la segunda medida no se registró antes de las 15 semanas (n = 1) (Nielsen et al., 2006 ) El peso autoinformado faltante o inverosímil antes del embarazo (cuando el

peso corporal fue> 1.5 kg/semana o <-1 kg/semana) fue imputado por extrapolación lineal cuando se registraron dos GWG antes de las 15 semanas de gestación (n = 4).

La tasa total de GWG semanal (TWGWG) se calculó como la diferencia entre el último peso al final del embarazo y el peso autoinformado antes del embarazo dividido por la edad gestacional. Para las mujeres

cuya última medición de peso se registró durante 37.5-42 semanas de gestación, usamos la medida más cercana a las 39 semanas (wGWG39). Esta medición no fue necesariamente la última, ya que GWG se

detiene al final del embarazo.

Para 194 mujeres que no tuvieron una medición del peso corporal registrada durante 37.5-42 semanas

de gestación, calculamos twGWG39 a partir de su último peso medido. Específicamente, para la mujer i y la semana k:

twGWGi39 = mean (wGWG39) + {[twGWGik-mean (wGWGk)] · [sd (wGWG39)/sd (wGWGk)]} [1]

Los valores de la media (wGWG39), media (wGWGk), sd (wGWG39) y sd (wGWGk) se obtuvieron a partir

de la distribución de wGWG de una cohorte INMA agrupada que abarca mujeres embarazadas de Asturias, Gipuzkoa, Sabadell y Valencia (n = 2.413). Las distribuciones de wGWG en Asturias y las cohortes

INMA de referencia fueron similares, con mayor wGWG y menor heteroscedasticidad (SD) a mayor edad gestacional, lo que concuerda con estudios previos (Dietz, Callaghan et al., 2006, Kleinman, Oken et al.

2007, Nohr, Timpson et al. 2009).

Finalmente, el GWG total se calculó como el producto de la edad gestacional en semanas y twGWG39.

Esta variable se modeló como una variable continua (kg total) y como una variable categórica (recomendada, inadecuada o excesiva) según lo definido por el Instituto de Medicina (Rasmussen, Stene et al., 2009) de acuerdo con el IMC previo al embarazo. Específicamente, el GWG recomendado es de

11.25-15.75 kg para las mujeres que tienen un IMC normal previo al embarazo (según la definición de la Organización Mundial de la Salud), y como 12.60-18.00 kg, 6.75-11.25 kg y 4.95-9.00 kg para las mujeres




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clasificadas como bajo peso, sobrepeso y obesidad, respectivamente.

Otras variables

La edad gestacional se calculó a partir de la fecha del último período menstrual (LMP) reportado en el reclutamiento y se confirmó mediante un examen de ultrasonido en la semana 12 de gestación. Cuando

la edad gestacional y la determinación del ultrasonido informadas diferían en más de 6 días (12.9% de los participantes), se volvió a calcular a partir de la longitud coronaria utilizando una medición temprana de ultrasonido (Westerway, Davison et al., 2000).

La edad, el IMC antes del embarazo, la paridad, el nivel educativo, la clase social, la ingesta de pescado y los antecedentes previos de lactancia se consideraron factores de confusión posibles debido a sus

asociaciones posibles con las concentraciones séricas de GWG y POP (Sarcinelli, Pereira et al., 2003, Vizcaino, Grimalt et al. al. 2011, Glynn, Miller et al. 2012). Las mujeres embarazadas completaron dos

cuestionarios detallados en persona (semanas 10-13 y 28-32) y proporcionaron información sobre paridad, edad, clase social (definida a partir de una adaptación española ampliamente utilizada del sistema

internacional de codificación ISCO88 (Vrijheid, Casas et al. 2012), nivel de educación, IMC previo al embarazo (basado en la altura medida en el reclutamiento y el peso autoinformado antes del embarazo)

y antecedentes de lactancia materna La información dietética se recolectó a partir de un cuestionario validado de frecuencia alimentaria semicuantitativa de 101 alimentos (Vioque, Navarrete -Munoz et al.,

2013) y se centró en productos lácteos, carne, verduras, frutas y pescado. El consumo total de pescado incluyó pescado blanco, pescado azul, atún enlatado, mariscos, así como pescado procesado, pescado

frito mixto, y secado o pescado ahumado.

Datos existentes y brechas de datos encontradas

Grecia

Oinofoita – Cr(VI)

Hasta donde sabemos, no existen mediciones sistemáticas de Cr (VI) antes de 2007. Desde esta fecha

están disponibles tres conjuntos independientes de mediciones de cromo hexavalente en el área de Oinofyta. Éstas incluyen:

• un estudio del Instituto de Geología y Exploración Minera (IGME 2008) durante el período de noviembre de 2007 a febrero de 2008, en 35 muestras (de 87) tomadas de diferentes pozos en la misma área

encontró niveles superiores a 10 μg/l con un valor máximo de 156 μg/l;

• un estudio realizado por la facultad del departamento de Geología y Geoambiente de la Universidad de

Atenas (Ch. Vasilatos, I. Megremi et al., 2008) durante el período de septiembre de 2008 a diciembre de 2008, en el que los niveles de Cr (VI) variaron entre 41 y 53 μg/l en tres muestras tomadas del suministro

público de agua potable de Oinofyta; y

• mediciones repetidas realizadas por el municipio de Oinofyta en el suministro público de agua potable

durante el período de julio de 2007 a julio de 2010, en las que hay 13 mediciones con niveles superiores a 10 μg/l y con un valor máximo de 51 μg/l

Según las autoridades municipales oficiales de Oinofyta, a principios de 2009 se desvió el suministro principal de agua potable de Oinofyta para recibir agua del lago Mornos (embalse) que forma parte de la red de suministro de agua potable de la ciudad de Atenas. Por lo tanto, las mediciones más recientes

realizadas por el municipio de Oinofyta (junio de 2009 a julio de 2010) registran niveles relativamente




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más bajos de Cr (VI) (<0.01-1.53 μg/l).

Además, en el estudio realizado por Economou-Eliopoulos et al. (2011), las muestras de agua subterránea

del acuífero de Asopos mostraron una variabilidad espacial amplia, que oscilaba entre <2 y 180 ppb de contenido total de Cr [casi igual a los valores de Cr (VI)] a pesar de su asociación espacial. La presencia

de aguas subterráneas contaminadas con Cr (VI) a profundidades> 200m se atribuye a la inyección directa de desechos industriales ricos en Cr (VI) en profundidad en lugar de que el Cr (VI) se derive del río Asopos o por la interacción entre agua y rocas portadoras de Cr.

Los datos de biomonitoreo humano son los datos críticos que faltan para la aplicación de la metodología CROME en la cuenca de Asopos. Dado que las concentraciones ambientales y la exposición real han

disminuido después de 2007, necesitamos identificar la exposición reciente y pasada. Con este fin, se aplicará una combinación de datos de biomonitoreo, incluidas muestras de orina (para evaluar los niveles

de exposición actuales), así como muestras de cabello para evaluar la carga de exposición del pasado. Para los propósitos del análisis, se recogerá una muestra de 20 residentes.

Aspropyrogos – PCDDs/PCDFs

Para estimar el riesgo relacionado con los PCDD/PCDF emitidos durante el incendio, era fundamental

estimar la carga interna de exposición a largo plazo asociada a este evento. La necesidad de abordar la exposición a largo plazo está asociada al hecho de que los PCDD/PCDF son bioacumulativos y persistentes

con una vida media de casi 7,5 años en humanos. Por lo tanto, es fundamental traducir la absorción real durante el evento accidental (que duró algunos días) en una carga de exposición interna a largo plazo (que

dure muchos años). La única forma científicamente sólida de traducir estas dosis externas en exposición interna a los tejidos diana se llevó a cabo con modelos biocinéticos basados en fisiología (PBBK). Para

poder realizar este tipo de cálculo, era fundamental poder identificar (a) los niveles de exposición de fondo a los PCDD/PCDF y (b) la carga adicional de exposición debida a este evento accidental.

Para poder estimar el riesgo adicional planteado por la exposición al evento accidental utilizando la plataforma INTEGRA, se necesitaron los siguientes datos:

- Los datos sobre los niveles de aire ambiente de PCDD/PCDF durante el evento accidental se obtuvieron mediante diversas mediciones de PM y análisis de PCDD/PCDF en la fase gaseosa y de partículas.

- Datos de BHN para estimar la exposición de fondo a la población expuesta. En la práctica, los datos de BHN de la población local recopilados de un estudio previo (antes del accidente) se usaron para estimar

la exposición de fondo equivalente que da como resultado los datos correspondientes de BHN; la exposición adicional de los PCDD/PCDF medidos se agregó a estos niveles de fondo para un período de

6 días.

Salónica PM-PAHs

Hay muchos datos ambientales detallados relacionados con las concentraciones de PM y la especiación química. Esta información incorporada en el marco de modelado avanzado descrito anteriormente permitirá la evaluación precisa de la exposición externa e interna al PM. La exposición a los HAP y, en

consecuencia, a los PM, se verificará mediante mediciones de los metabolitos de los HAP en la orina. Los datos de salud para los puntos finales de salud relevantes mencionados se obtendrán de la Autoridad

estadística griega y a partir de los hospitales del área metropolitana de Salónica.

Para llenar las lagunas de biomonitoreo, se llevó a cabo una campaña de muestreo de biomonitoreo en el invierno de 2014-2015 en Tesalónica, con el objetivo de capturar el efecto de la quema de biomasa en la

exposición a MP y HAP. En total se tomarán muestras de 50 personas no fumadoras de entre 8 y 64 años, cubriendo una amplia distribución espacial de la ciudad. Esto será necesario, ya que se esperan




19

diferencias en la exposición en función de los niveles de las actividades realizadas, las condiciones de ventilación, así como la distribución respectiva de los niveles de MP y PAH en la ciudad.

Italia

Trieste – Estudio crossMediterráneo

Los datos existentes derivados del seguimiento de la cohorte de recién nacidos italiana indicaba que la

concentración interna de metales y metaloides se asocia con la maduración neuropsicológica de niños de 7 años y resaltaba la interacción compleja entre exposiciones ambientales múltiples, factores dietéticos y

de estilo de vida. Una pregunta importante que surge concierne al historial de exposición de los niños inscritos en el seguimiento: ¿cuál es el papel de la exposición más temprana a los mismos

metales/metaloides en los desempeños neuropsicológicos a los 7 años? El diseño del estudio original PHIME consistió en la recopilación de muestras biológicas de madres y sus recién nacidos durante el

embarazo (sangre y pelo venosos), al nacer (sangre del cordón umbilical) y al mes postparto (leche materna). En general, la base de datos existente contenía información diversa para aplicar un modelo

multivariable teniendo en cuenta los factores diferentes que podrían haber influido en el funcionamiento neuropsicológico en la edad escolar. Sobre estas bases, para cada uno de los 200 niños se pudo utilizar

los datos disponibles relativos a niveles perinatales de metales y elementos esenciales en todas estas matrices. En total, se obtuvo finalmente una imagen en la que se observa que los niveles de metales como el mercurio y el plomo y elementos esenciales como el zinc, el selenio y el arsénico en la etapa fetal y

neonatal influyen en el rendimiento neuropsicológico medido a los 7 años. El alcance y la dirección de los efectos dependía del tipo de matriz analizada y del momento de la medición (ver Del 5.2 para más detalles).

Una primera brecha de conocimiento importante se refiere al papel de los hábitos alimenticios distintos al consumo de pescado: ¿qué otros alimentos pueden coincidir con la exposición al metal en los niños?

No hay indicaciones actualizadas sobre los niveles de metales en los alimentos en las áreas donde vive la población estudiada. En 2012, se publicó un informe sobre los niveles nacionales de algunos metales en

productos de pescado y marisco en Italia (Pastorelli, Baldini et al., 2012). Los socios/subcontratistas eslovenos y croatas pueden proporcionar cierta información útil para la evaluación de este tema

específico. Se ha desarrollado un estudio en donde se evalúa la calidad y cantidad de alimentos consumidos por los niños en los 3 días anteriores a las pruebas neuropsicológicas pero al final los datos no se han

puesto a disposición del proyecto CROME. Posiblemente tengamos estos datos analizados en junio de 2017. Este aspecto es particularmente importante ya que algunos niños presentaron una concentración

urinaria muy alta de arsénico (As). La concentración de As puede interpretarse en un contexto de evaluación de riesgos diferenciada si el As surge de la exposición a especies inorgánicas de As (As (III) y

As (V)), As metilado (MMA y DMA) o As orgánico (AsBet y AsChol). Por lo tanto, la medición de la concentración total de As (que contiene As inorgánico y orgánico) no puede utilizarse únicamente para

explicar los efectos biológicos y tóxicos del As.

Sin embargo, las concentraciones de la suma de especies de As [iAs + DMA + MMA] excedieron los niveles

que son consistentes con los niveles de riesgo no cancerosos en algunos niños (21%). Esta parte de la población requerirá atención principal. Además, todavía se necesita información sobre otras fuentes de alimentos, principalmente el consumo de arroz y agua, para comprender mejor si otras fuentes pueden

contribuir a la concentración de As inorgánico en la orina de los niños.

Una segunda brecha de conocimoento se relaciona con la falta de información sobre las fuentes

ambientales de exposición a metales/metaloides además de la dieta. La Agencia Regional para la Protección del Medio Ambiente (ARPA) de la Región de Friuli Venezia Giuli asegura el monitoreo continuo

del aire y el agua. Se dispone de datos sobre las características químicas y microbiológicas del agua potable y la contaminación del aire, en particular con respecto a los COV, PM10, NO2 y la concentración

de benceno en diferentes zonas del municipio de Trieste, pero hasta ahora no se han incluido en el análisis de datos. Como la geolocalización de niños inscritos en el estudio está disponible hemos reconstruido la

exposición mediante dosimetría inversa para estimar la posible contribución de las fuentes ambientales a los niveles de metales/metaloides medidos en niños durante el período de seguimiento. La escasez de

monitoreo de la contaminación del aire en el municipio de Trieste no nos permitió diferenciar entre los




20

niveles de exposición de los niños a los contaminantes del aire. Además, no tenemos ninguna información sobre la contaminación en interiores.

Una tercera brecha en el conocimiento se refiere al tema de la vulnerabilidad genética específica: se ha sugerido que las variaciones genéticas relativamente comunes pueden conferir susceptibilidad incluso a

una dosis baja de Hg. Vale la pena investigar más si este podría ser un factor que aumenta el riesgo de un subconjunto de niños. Como se ha recogido saliva de cada niño en el momento de la evaluación, planeamos realizar el análisis genómico completo de esta muestra siempre que recibamos fondos de las

solicitudes de subvención.

Finalmente, dado que los niños se han evaluado en diferentes etapas de la vida, existe la necesidad de

identificar herramientas metodológicas nuevas para rastrear las trayectorias de desarrollo y desentrañar la compleja interacción entre diferentes metales y micronutrientes y sus efectos sobre el desarrollo

neuropsicológico identificado a través de diferentes tests.

Italia

Región Lacio- Nivel de metales en adolescentes

Una primera falta de conocimiento se debe a que en el estudio adolescente de PROBE solo se disponía de datos sobre las características ematológicas de cada individuo junto con la información derivada del

cuestionario (ver abajo). No se recogió información sobre el estado de salud de los adolescentes en estudio para el objetivo específico de la campaña originalmente promovida por AMNI,.

Otra falta de conocimiento se refiere a la asociación potencial entre la información obtenida por el cuestionario sobre el estilo de vida y/o las características demográficas de cada adolescente y el

contenido de metales en su sangre. Para llenar este vacío, se aplicaron cálculos estadísticos para resaltar las diferencias en los niveles de metales que subdividen la cohorte adolescente PROBE según variables

como sexo, área de residencia, intensidad de tráfico, estado socioeconómico (SES), presencia de empastes dentales y frenillos, piercings y tatuajes, humo de tabaco de segunda mano, pescado y leche.

Otra falta de información fue la asociación potencial entre los datos de calidad del aire en el estudio de la región del Lazio y el contenido de metales en la sangre de los adolescentes. Para llenar este vacío, se

solicitó a la Autoridad Regional del Ambiente (ARPA) de la Región del Lazio el nivel de algunos marcadores de calidad del aire, como benceno, CO, NO2, NOX, O3, PM10, PM2.5, recogidos en el mismo período de

obtención de muestras biológicas desde estaciones cercanas, en la medida de lo posible, a las direcciones de residencia de cada adolescente.

También faltaba la asociación entre el contenido de metales en el agua y el contenido de metales en la sangre de los adolescentes. Para llenar este vacío, se consultó a la Autoridad Regional del Ambiente (ARPA) de la Región del Lazio el nivel de concentración de As en el agua potable de la región donde vivían

los adolescentes.

Una vez que se recopilaron estos datos, se aplicaron modelos que incluían los niveles de metales en la sangre de los adolescentes, su estilo de vida, la información ambiental (agua, tráfico, cobertura terrestre, aire) y los datos GIS.

Eslovenia

Datos BHN nacionales

Los datos existentes del programa nacional de BHN incluyen mediciones de elementos seleccionados y contaminantes orgánicos en muestras biológicas:

- Sangre (mujeres): Pb, Cd, Hg, As, Cu, Zn, Se (datos adicionales: hemograma, creatinina, TSH)

- Sangre (hombres): Pb, Cd, Hg, As, Cu, Zn, Se, plaguicidas organoclorados, marcadores de PCBs (28, 52, 101, 138, 153, 180) (datos adicionales: hemograma, triglicéridos, colesterol, creatinina, TSH)




21

- Leche materna: Pb, Cd, Hg, As, Cu, Zn, Se, plaguicidas organoclorados, marcadores de PCBs (28, 52, 101, 138, 153, 180), (datos adicionales: triglicéridos, colesterol)

- Orina: Pb, Cd, Hg, As, Cu, Zn, Se (datos adicionales: marcadores de función renal, creatinina)

- Cabello: Hg total

Datos del cuestionario obtenidos junto con la exposición interna:

- parte general: edad, peso corporal y altura, educación, ocupación;

- característica básica del hogar: tipo de construcción, años de construcción de la casa, tipo de calefacción,

tipo de suministro de agua, densidad del tránsito;

- condiciones de salud: enfermedad, medicamentos, cantidad de empastes de amalgama;

- hábitos de estilo de vida y nutricionales: tabaquismo, tabaquismo pasivo, uso del ordenador, aficiones, consumo de verduras, frutas, nueces, leche, queso, huevos, aves de corral, caza, otras carnes, pescados

y mariscos, té, café, alcohol, tipo de aceite utilizado, consumo diario de agua, consumo de suplementos;

- preguntas sobre el embarazo y el período de lactancia: cualquier problema durante el embarazo, el

tabaquismo durante el embarazo, el consumo de alcohol, la lactancia materna, el sexo del bebé, el peso al nacer, el peso actual.

Datos ambientales y auxiliares obtenidos dentro de CROME:

Se identificaron y recopilaron tres grupos principales de datos auxiliares: 1) información que describe el

estado ambiental, 2) información sobre liberaciones de contaminantes de diversas fuentes, y 3) datos que respaldan la caracterización del entorno construido en los alrededores de los participantes del programa

de BHN.

- Calidad del agua potable en 10 lugares de Eslovenia (Sb, As, Cu, Ba, Cd, Cr, Ni, V, Pb, Co, Al, Mn, Mo, Fe,

Zn, Sn, Sr, Hg y Rb)

- Calidad del aire: bioindicadores (As, Cd, Cu, Hg, Pb, Zn, Mn y Se en el musgo Hypnum cupressiforme en

102 ubicaciones en toda Eslovenia), datos de la red de monitoreo AQ (O3, PM2.5 y PM10)

- Composición geoquímica del suelo (Al, Ca, Fe, K, Mg, Na, P, Ti, Ba, Cd, Cr, Cu, La, Mn, Mo, Nb, Sc, Sr, Th, V, Y, Zn, Zr y Hg)

- Emisiones de nitrógeno y fósforo

- Entorno de construcción: distancias a tres tipos de carreteras según la clasificación en Eslovenia

(Autopista/Autovía, carreteras principales y carreteras regionales) y la longitud de todas las carreteras (en metros) dentro de tres zonas de amortiguación (50, 100 y 500 m); área (en metros cuadrados) de

tres características del uso de la tierra en un entorno de 500 m desde la dirección de los sujetos individuales: CLC_3xx (clases de cubierta terrestre Corine 3.1 + 3.2 + 3.3), CLC_Urban_verde (clases de

cubierta terrestre de Corine 2.1 + 2.2) y jardines de campos

La exposición interna a elementos seleccionados encontrados en la población eslovena tal como se han

identificado por el análisis de datos informado resultó de los determinantes del estilo de vida, particularmente, para Cd (fumar y dieta) y Hg (consumo de pescado y empastes de amalgama), y de

exposición ambiental, que es un aspecto muy relevante en la zona de Mežica Valley (Pb) y la antigua ciudad minera de mercurio de Idrija (Hg). La vinculación de BHN y las bases de datos ambientales confirmó la

naturaleza ambiental geodependiente de la exposición a Pb y Hg en estos dos casos, mientras que el Cd en el área rural no se asoció con actividades relacionadas con la agricultura, a saber, la fertilización

artificial. Además de la exposición relacionada con la fundición de Pb, los suministros públicos de agua parecen ser una fuente importante de Pb (y también de Mn). La emisión de material particulado de fuentes

residenciales y carreteras se encontró que también era una posible fuente de exposición a Pb en el entorno urbano.

Estudio Cross Mediterráneo




22

La exposición interna de la cohorte de nacimientos establecida en el área mediterránea incluyó niveles de Hg, Cd, Pb, As, Se, Cu, Zn y Mn y mostró una exposición interna de baja a moderada en los niños y

generalmente un nivel suficiente de elementos esenciales. La principal fuente de exposición a Hg en general fue el consumo de pescado. Sin embargo, los empastes de amalgama también fueron una fuente

importante en la población eslovena. La evaluación de Bayley-III a los 18 meses de edad no reveló ningún efecto adverso sobre el desarrollo cognitivo, de lenguaje y motor. Sin embargo, se observó cierta disminución en los puntajes motores finos con el aumento de la exposición a Hg durante el embarazo.

Siguiendo la metodología CROME, se realizó el genotipado de algunos polimorfismos genéticos relevantes y entre los polimorfismos analizados, la apolipoproteína E mostró algunas diferencias en la asociación examinada entre exposición interna y resultado del desarrollo neurológico: se encontró asociación negativa

entre puntuaciones cognitivas y exposición a Hg en los portadores de apolipoproteína ε4 alelo, pero no en otros (datos sobre la cohorte eslovena y croata).

Volviendo a evaluar a los niños a los 7-8 años de edad, demostramos una asociación positiva entre el Hg en el cabello o la sangre y las puntuaciones cognitivas evaluadas mediante el test WISC (datos de la

cohorte eslovena e italiana), pero comportamiento peor (más ansiedad y retroceso) a niveles más altos de Hg (datos de la cohorte italiana). Las asociaciones se volverán a evaluar una vez que el seguimiento se

complete también en la cohorte croata. Al tener un tamaño de muestra suficiente, se podrá estratificar el modelo de regresión por diferentes genotipos y también por género. Además de la apolipoproteína, la

asociación entre las puntuaciones Hg y WISC se estratificará mediante diferentes variantes en los siguientes genes que se han analizado hasta ahora para la población de estudio esloveno: metalotioninas,

arseno-metil-transferasas, ácido deshidrogenasa delta-aminolevulínico, receptor de vitamina D, selenoproteína P y tiorredoxina reductasa.

Debido a la buena concordancia entre los niveles internos de Hg y la frecuencia del consumo de pescado, se presume que la fuente de exposición a Hg en la población de estudio es principalmente pescado, pero no está del todo claro cuál es la contribución de la exposición al mercurio inorgánico al efecto negativo total que tiene el Hg en el neurodesarrollo/neuroconductual. El análisis de especiación en muestras

biológicas en curso ayudará a revelar este aspecto.

España

Estudio de Sabadell – Exposición a metales

La mediana de edad de las madres en el momento de su último período menstrual fue de 31 años, con

un rango de entre 20 y 40 años. Su índice de masa corporal promedio antes del embarazo fue de 23.77 kg/m2 (desviación estándar 4.53 kg/m2, mediana de 22.44 kg/m2, rango 16.69-40.77 kg/m2). Las

mujeres con sobrepeso y obesas abarcaron el 18.1% y 8.4%, respectivamente. La proporción de madres primíparas era de 49%, el 41% tenía otro bebé y el 10.2% tenía más de dos bebés (Fort, Cosin-Tomas et

al., 2014).

Los metales Ni, Cu, Zn, As, Se, Mo, Cd, Cs y Pb se detectaron en más del 90% de las muestras, mientras

que el Co y Sb se detectaron en más del 65% en el primer y tercer trimestre (Fort, Cosin- Tomas et al. 2014). El Tl fue el único elemento detectado en menos del 20% de las muestras. Las diferencias en las concentraciones de metales entre las muestras de orina recogidas en ambos períodos fueron

estadísticamente significativas para todos los metales excepto Ni, As, Tl y Pb (valores medios: 32 (1º)/35 (3º) μg/g de creatinina para As, 3,9/3,9 para Ni, 0,14/0,13 para Tl, 3,8/3,9 para Pb). Las

concentraciones de Co, Cu y Zn fueron más altas durante el tercer trimestre (valores promedio: 0,45 (1º)/1,3 (3º) μg/g de creatinina para Co, 12/15 para Cu, 256/290 para Zn). Se encontró lo contrario

en las concentraciones de Mo, Se, Cd, Sb y Cs (valores medios: 55 (1º)/44 (3º) μg/g de creatinina para Mo, 10/8.7 para Se, 0,61/0,54 para Cd, 0,36 /0.28 para Sb y 8.0/6.8 para Cs).

Consistentemente con estas diferencias, la comparación de las concentraciones individuales reveló que había más madres que tenían concentraciones más altas de Se, Mo, Cd, Sb, Cs y Tl en el primer que en

el tercer trimestre (53-64%) (Fort, Cosin-Tomas et al. al. 2014). Por otro lado, más madres exhibieron concentraciones mayores de Co, Ni, Cu y Zn en el tercer trimestre que en el primer trimestre (55-82%).




23

Las relaciones de concentración entre el tercer y primer trimestres fueron consistentes con estas diferencias observadas. El Co, Cu y Zn mostraron unas relaciones entre el tercer y primer trimestre más

altas y para el Mo, Se, Cd y Sb la relación fue menor.

Las concentraciones del primer y tercer trimestre de todos los metales se correlacionaron

significativamente. Los coeficientes de Spearman oscilaron entre 0.16 (Mo) y 0.60 (Zn). El grado de significación de estas correlaciones fue p <0.001 en la mayoría de los casos (Co, Ni, Zn, Se, As, Cd, Sb, Cs y Pb) y p <0.01 en otros (Cu, Mo) (Fort, Cosin-Tomas et al. 2014).

Exposición a compuestos organohalogenados

Las concentraciones de muestras de suero de cordón umbilical de los contaminantes organoclorados

fueron al menos un orden de magnitud mayores que las de los PBDE (Vizcaino, Grimalt et al., 2014). El 4,4'-DDE fue el pesticida encontrado en la concentración más alta (mediana = 180 ng/g de lípidos) y se

observó en el 99.7% de las muestras, seguido por HCB (mediana de 50 ng/g de lípidos) en el 97.6% de las muestras. El ß-HCH fue el isómero de HCH dominante (mediana = 17 ng/g de lípido, 90.5% de las

muestras). El PCB153 fue el congénere de PCB más abundante (mediana = 47 ng/g de lípidos) seguido de PCB138 (mediana = 31 ng/g de lípidos) y PCB180 (mediana = 27 ng/g de lípidos). El total de BDE en

el suero del cordón varió de <LOD a 816 ng/g de lípido con una mediana de 3.9 ng/g de lípido. El BDE153 fue el congénere más frecuente (43%) seguido de BDE47 (36.5%). El BDE209 solo se detectó en el

14.9% de las muestras, pero fue el congénere BDE encontrado en la concentración más alta cuando se detectó (media = 4.1 ng/g de lípido).

La edad materna promedio fue de 31.4 ± 4.2 años. El 40.2% de las madres tenían un título universitario que era aproximadamente el mismo porcentaje (43.3%) de aquellas que solo habían completado la escuela

secundaria. El 55% de las madres pertenecían a los grupos sociales más bajos. Las mujeres primíparas constituyeron el grupo más grande (63,1%) y el promedio de edad gestacional fue de 39,6 ± 1,4 semanas.

Las categorías de IMC estandarizadas mostraron que el 21.9% de las madres tenían sobrepeso y el 6.5% eran obesas antes del embarazo. En promedio, el peso gestacional fue de 14.1 ± 5.2 kg (rango: -2.9 kg - 34 kg). Hubo una asociación inversa entre el GWG y el BMI previo al embarazo (Spearman r = -0.16 p

<0.01). La mayoría de las madres no se conformaron con las pautas de IOM. El 55% de las mujeres con sobrepeso y obesas excedieron el GWG recomendado en comparación con el 37% de las mujeres con

peso normal y bajo. Las proporciones de mujeres que obtuvieron menos GWG que los intervalos recomendados fueron del 9%, 30%, 14% y 20% para las personas con bajo peso, peso normal, sobrepeso

y obesidad.

Análisis bivariante

Se observaron asociaciones significativas entre los determinantes maternos y algunos, pero no todos, los COP (Vizcaino, Grimalt et al., 2014). Se encontraron correlaciones negativas entre todos los COP

analizados y GWG. Al utilizar las categorías de peso de IOM, las madres con GWG inadecuado tenían niños con concentraciones séricas de cordón POP más altas que las madres con GWG recomendado o excesivo.

Se observó una asociación positiva entre el IMC y el HCB antes del embarazo y las concentraciones de β-HCH. Todas las concentraciones de OC en el suero del cordón umbilical pero no en los PBDE se asociaron

estadísticamente de manera significativa con el aumento de la edad materna. El consumo de pescado fue el único elemento dietético materno asociado a los COP, con PCB totales más elevados, concentraciones

totales de BDE HCB y ß-HCH en recién nacidos con consumo de pescado materno por encima de la mediana. Los niveles totales de PCB y HCB fueron más altos entre los recién nacidos de mujeres con alto

nivel educativo (grado universitario) que entre las madres con títulos secundarios o primarios, mientras que los niveles de 4,4'-DDE fueron más altos en los recién nacidos de mujeres con educación primaria. En

cuanto a la clase social, se encontraron niveles más altos de PCB y HCB en los hijos de madres del más alto nivel (mientras que no se observaron tendencias regulares para los otros contaminantes analizados.) Se observaron asociaciones significativas con la paridad o el historial de alimentación materna anterior

para PCB totales.

Análisis multivariante




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En los modelos multivariados se observó que las asociaciones entre las concentraciones de GWG y POP en suero de cordón también fueron inversas (Vizcaino, Grimalt et al., 2014). Específicamente, la GWG se

asoció inversamente con PCB totales, 4,4'-DDE y ß-HCH, y, en el límite de importancia, para HCB, pero la GWG no se asoció con BDE total o 4,4'-DDT. Con respecto al IMC previo al embarazo, solo las

concentraciones séricas de HCB en las madres con peso bajo mostraron una asociación negativa significativa, aunque para todos los demás compuestos organoclorados fueron más bajos en las mujeres con peso bajo. Otros predictores estadísticamente significativos de las concentraciones de COP en el

suero del cordón umbilical fueron la edad (ΣPCB, 4,4'-DDT, HCB y β-HCH), el nivel de educación (4,4'-DDE) y el consumo de pescado (ΣPCB, ΣBDE, HCB y β -HCH). La clase social, la paridad y la lactancia materna

no fueron predictores significativos en los modelos multivariables.

Cuando los modelos se estratificaron por categorías de IMC materno previo al embarazo, las asociaciones

entre el GWG y los COP difirieron entre los grupos de IMC. Los recién nacidos de mujeres con peso bajo tendieron a tener niveles más altos de OC con GWG más alto. Ello contrasta con los recién nacidos de

mujeres de peso normal, con sobrepeso u obesas, que tendían a tener niveles más bajos de OC con un GWG más alto. Por el contrario, los recién nacidos de mujeres con peso bajo tienden a tener niveles más

bajos de PBDE con un GWG más alto. Agrupando por la variable categórica IOM se mostró que las medias geométricas de las concentraciones ajustadas de compuestos orgánicos persistentes en sangre de

cordón umbilical de los niños de madres con GWG inadecuado fueron más altas que aquellas en los niños cuyas madres tenían el GWG recomendado. No se encontraron diferencias entre las madres con GWG

recomendado o excesivo. Estos hallazgos sugieren que las asociaciones negativas entre los COP y el GWG modelados como una variable continua pueden haber dependido de la asociación positiva entre los COP y

el aumento de peso inadecuado durante el embarazo.

Análisis de sensibilidad

El método de cálculo para twGWG39 mostró una buena concordancia entre los valores de twGWG39 pronosticados y observados cuando había una medida disponible en el tercer trimestre (Vizcaino et al., 2014). Los errores estimados en los cálculos twGWG39 disminuyeron a medida que aumentaba la

semana gestacional de la última medición de peso, con las diferencias porcentuales relativas medias en los valores estimados relativos a los valores observados del 6% para twGWG36 (n = 123), 7.9% para

twGWG33 (n = 52) y 9.5% para twGWG30 (n = 12) y 12.3% para twGWG27 (n = 7). No se encontraron cambios significativos en los resultados cuando se excluyeron los nacimientos prematuros (n = 9) (datos

no mostrados) o los de madres que no tenían mediciones de peso después de 28.5 semanas de gestación (n = 7). Las asociaciones entre GWG y COP fueron comparables cuando excluimos el IMC materno previo

al embarazo o excluimos la concentración materna de COP como una covariable modelo, o modelamos la diferencia relativa en las concentraciones de recién nacidos en comparación con las concentraciones de

la madre. En general, las asociaciones de GWG con congéneres individuales de PCB y PBDE fueron consistentes con las asociaciones de GWG con PCB totales y BDE totales.

Análisis de los resultados y recomendaciones para las mejoras de

gestión

Recomendaciones específicas por país

Grecia

Oinofoita – Cr(VI)

Los niveles en orina varían entre 0.1 y 1.7 (valor medio de 0.7) µg/L, mientras que los niveles de pelo

varían entre 0.1 y 4.2 (valor promedio de 1.3) µg/g. Se observaron valores ligeramente más altos en adultos, lo que podría estar relacionado con cantidades de consumo de agua del grifo mayores. Los niveles de Cr en el cabello mostraron una mayor variabilidad que los niveles urinarios respectivos,

lo que es esperable en cierto modo. La falta de métodos altamente sensibles y el peso limitado del material utilizado (50-200 mg, en lugar de 2-5 ml para fluidos biológicos como la orina y la sangre, o




25

incluso 10 ml, que es el caso de la leche materna) son factores limitantes para el uso generalizado de esta matriz. Además, los parámetros tales como la deposición externa de sustancias químicas o

la pigmentación del cabello se han controlado como factores de confusión posibles.

La correlación entre los niveles de Cr urinario y del cabello es bastante buena, lo que indica que ambas

matrices parecen capaces de capturar la exposición a largo plazo relacionada con la exposición a múltiples fuentes de Cr.

En general, la exposición a Cr (VI) en la cuenca de Asopos parece ser menor que en los años anteriores,

como resultado de las acciones de contramedidas que se relacionan con el agua del grifo. Esto también fue verificado por los niveles bajos de Cr identificados en las diversas matrices biológicas

muestreadas de la población relevante.

Recomendaciones principales:

- Regulación estricta sobre la eliminación de efluentes

- Cambiando el suministro local de agua

- Control periódico de la calidad del agua potable

- Prohibir el riego y el consumo de agua potable de pozos subterráneos

- Uso de matrices urinarias y capilares biológicas para evaluar la exposición prolongada a Cr

- Implementación de un programa nacional de BHN para evaluar la exposición interna de contaminantes

clave que cubran geográficamente la mayor parte de Grecia

Aspropyrogos – PCDDs/PCDFs

Se calcularon los valores totales de TEQ de límite superior para cada categoría de congéneres, suponiendo que las concentraciones de congéneres individuales no detectadas son iguales a su límite de detección

correspondiente. Los resultados del análisis de las 60 muestras indicaron que la exposición a los vapores de PCDD/PCDF dio como resultado niveles de exposición más altos que los identificados en estudios

previos, lo que indica que la ingesta de la población fue significativa. Estos resultados podrían ser la base para un mayor análisis del comportamiento toxicocinético, así como para la evaluación del riesgo de cáncer.

El análisis de la distribución de los niveles plasmáticos de PCDD/PCDF entre niños y adultos, así como entre la población expuesta y no expuesta indicó que el evento accidental dio lugar a una exposición

significativa a la población, elevando las concentraciones sanguíneas de adultos a casi dos niveles. Aunque no se pudo identificar el cambio respectivo en los niños debido a la falta de mediciones previas, se espera

que el evento accidental tenga una mayor contribución a los niños, ya que las generaciones nuevas siempre tienen niveles de fondo interno más bajos de PCDD/PCDF. Sin embargo, esta hipótesis debe explorarse

más a fondo a través del análisis toxicocinético de estos datos y el desarrollo de un factor de riesgo de cáncer asociado a la dosimetría interna.


- Asignación de instalaciones de reciclaje fuera de las áreas pobladas

- Limite la cantidad de material a reciclar según la legislación

- Implementación de un programa nacional de BHN para evaluar la exposición interna de contaminantes

clave que cubran geográficamente la mayor parte de Grecia

Salónica PM-PAHs

A partir de los resultados del análisis de las muestras de orina se identificó que los niveles urinarios de 1-OH-pireno variaron de 0.05 a 0.80. Se debe tener en cuenta que se identificaron niveles más altos de 1-




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OH-pireno en niños. Esto se explica por el hecho de que la captación real (peso corporal normalizado) de los HAP es mayor en los niños. Las diferencias en las distribuciones de ambos grupos de edad se explican

por la mayor tasa de inhalación (normalización del cuerpo) de los niños, como resultado de un metabolismo más elevado, así como de las actividades más intensivas que realizan diariamente los niños. Además, los

niños viajan más a menudo que los adultos, por lo que pasan más tiempo al aire libre, donde los niveles de PM suelen ser más altos.

También se debe destacar que se identificaron niveles más altos de 1-OH pireno en el área oeste de la ciudad en comparación con el área del centro este. Estos resultados también corroboran los hallazgos del estudio previo de PAH en el aire ambiente del área metropolitana de Salónica, donde la exposición al TEQ de los HAP fue mayor en la zona oeste. También debe señalarse que se ha identificado una mayor diferencia (de casi 3 veces) del TEQ real en las dos ubicaciones, mientras que la diferencia en los niveles de 1-OH-pireno es menor (casi el doble). Esto se atribuye al hecho de que el TEQ se calcula teniendo en cuenta la toxicidad de los HAP individuales identificados en las partículas de aire ambiente, por lo tanto, cada compuesto contribuye al EQ total a través de una fracción, definida por su TEF. Por el contrario, el 1-OH-pireno es un metabolito que indica la carga global de exposición a los HAP, independientemente de su toxicidad.

Los datos ambientales y de biomonitoreo adicionales obtenidos en el marco de CROME-LIFE proporcionaron información adicional sobre la asociación entre exposición y efectos para una población fuertemente expuesta a partículas de quema de biomasa para calefacción y a los principales compuestos cancerígenos adsorbidos, fundamentalmente, HAP.

Las mediciones adicionales de la variabilidad diurna de aire ambiente PM nos proporcionaron la base para mejorar las estimaciones de exposición, al derivar datos relacionados con los picos de exposición y cómo estos picos corresponden a las diversas actividades y tasas de inhalación en un momento dado. De esta forma, las estimaciones de exposición son bastante refinadas, ya que se ha encontrado que los picos de aire ambiental no contribuyen como se espera a la exposición diaria general, ya que las personas tienden a relajarse o dormir a esa hora, por lo que la tasa de absorción real es baja. Además, un instrumento que proporciona datos dinámicos en el tiempo, permite la identificación de la contribución de fuentes de exposición específicas, como las que provienen del funcionamiento de una chimenea abierta.

Por otro lado, los datos de biomonitoreo proporcionaron información valiosa sobre la validación de las estimaciones de dosis internas de los HAP, calculados a partir de los datos de exposición al aire ambiente y la distribución del tamaño del PM y la captación real de TEQ de los HAP. Los resultados de biomonitoreo confirmaron que tanto (a) los niños están expuestos a niveles más altos de HAP en comparación con los adultos y (b) las personas que abandonan el oeste de Salónica están expuestas a una mayor cantidad de HAP, destacando el componente socioeconómico de la exposición por la quema de biomasa para calefacción que emite componentes tóxicos.


- Reducir la taxación del petróleo para calefacción

- Introducción de calderas de pellets más nuevas

- Incentivos para mejorar el comportamiento térmico de los hogares

- Fortalecer el sistema de monitoreo de la contaminación del aire

- Implementación de un programa nacional de BHN para evaluar la exposición interna de contaminantes clave que cubran geográficamente la mayor parte de Grecia

Italia

Estudio Cross-Mediterráneo

Algunos niños presentaron niveles muy altos de As a los 7 años de edad. Los niveles de Hg, Cd y Pb también se relacionaron con el consumo de algún tipo de pescado, o con factores dietéticos (consumo de




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pescado en lata, pescado frito). Encontramos un efecto levemente positivo de la concentración de Hg en el pelo de un niño en algún examen neuropsicológico a 7 años. Los niveles de Hg en el cabello se relacionaron positivamente con puntajes más altos en el test de CBCL, lo que indica que las conductas de externalización (ansiedad) e internalización (depresión) aumentaron. Los niveles de manganeso (también relacionados con el consumo de pescado) en el cabello de los niños se asociaron significativamente a niveles más bajos del cociente intelectual general y los bajos en comprensión verbal se asociaron con los niveles más altos de Hg. Los factores del estilo de vida ejercieron un efecto significativo sobre los puntajes neuropsicológicos, que están influenciados positivamente por 1) el consumo de pescado, 2) el coeficiente de inteligencia materna y el nivel educativo de los padres.

También se puede atribuir un papel significativo en el funcionamiento neuropsicológico a la exposición perinatal. El reanálisis de los datos sobre concentraciones de metales en las diferentes matrices resalta la importancia de todas las exposiciones ocurridas durante el desarrollo posconcepcional, y sugiere que junto con metales neurotóxicos, elementos esenciales como Zn, Cu y Se concurren para modular el desarrollo neuroconductual.

Estos resultados apuntan a la necesidad de extender el biomonitoreo y la evaluación del resultado neuropsicológico a toda la cohorte NAC II. El área de Trieste está incluida por ley desde 1998 entre los sitios nacionales contaminados. Esto implica que la contaminación en estas áreas se debe monitorear y que las intervenciones deben ponerse en marcha para eliminar las fuentes de contaminación o al menos reducir las concentraciones de los principales contaminantes en el aire, suelo y agua dentro de niveles aceptables. Las fuentes principales de contaminación en Trieste están representadas por las emisiones de la planta de hierro, el tráfico y las actividades portuarias. La emisión de metales pesados, partículas y benzopireno se ha registrado a lo largo de los años, y el estudio SENTIERI (cuyo responsable es el ISS) señaló una mayor incidencia de algunos tipos de cáncer en la población que vive cerca de la planta industrial. Sin embargo, hasta donde sabemos, hasta la fecha no se ha implementado ningún programa de biomonitoreo para la población expuesta; los datos recopilados desde 2007 por el estudio PHIME en la cohorte de nacimientos del Adriático norteño italiano y luego por el estudio común CROME representan un conjunto valioso de información sobre los niveles de exposición a los niños del municipio de Trieste a metales y metaloides en los últimos diez años. Los hallazgos descritos en D5.2 demuestran que la exposición a metales neurotóxicos constituye una preocupación importante para la salud de los niños. Sobre la base de los resultados del estudio común de CROME, se pueden proponer las recomendaciones específicas siguientes a nivel local:

1. establecer un programa de biomonitoreo de la población que vive cerca de las plantas/actividades industriales, con atención específica a los grupos vulnerables (niños, adolescentes, mujeres embarazadas). El biomonitoreo debe ser paralelo a la evaluación de los resultados de salud relacionados con el crecimiento, la obesidad, los trastornos metabólicos, el asma/alergias y los trastornos del neurodesarrollo/neuropsiquiátricos;

2. potenciar el sistema de monitoreo de la contaminación del aire;

3. monitorear la contaminación en interiores de la escuela del municipio de Trieste;

4. control de la calidad del agua potable; control de la concentración de metales pesados en el suelo y el polvo, prestando atención especial a los jardines y parques infantiles

5. evaluación de la concentración de metales en muestras de peces locales y en muestras de vegetales recogidos en los mercados locales y cultivados en el área de Trieste.

Estudio del caso de Italia

La encuesta italiana de biomonitoreo humano (PROBE - programa de Biomonitorización de la exposición de la población en general) consideró una población de referencia de adolescentes, de entre 13 y 15 años, que viven en áreas urbanas y rurales, por su exposición a los metales. Este estudio investigó 453 adolescentes que vivían en la Región del Lacio (Italia) y se analizaron muestras de sangre para 19 metales (As, Be, Cd, Co, Cr, Hg, Ir, Mn, Mo, Ni, Pb, Pd, Pt, Rh, Sb, Sn, Tl, V y W) por espectrometría de masas de plasma acoplado inductivamente. La evaluación de la exposición se contextualizó en un enfoque extenso




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considerando varios determinantes relacionados con los temas, los parámetros ambientales disponibles y la geocodificación de la ubicación de la dirección de residencia. Para evaluar la influencia de los factores determinantes y modificadores de la exposición en los niveles de biomarcadores infantiles se utilizaron dos metodologías independientes. La primera hizo uso de la denominada metodología de estudio de asociación de medio ambiente (EWAS) mientras que la segunda se basó en la aplicación de un modelo lineal generalizado (GLM) que captura las coexposiciones a pares de determinantes clave.

Los resultados obtenidos en el estudio "original" PROBE de adolescentes proporcionaron los valores de referencia (RV) para 19 metales en una población especialmente susceptible, como son los adolescentes. Las RVs producidas son muy útiles como término de comparación para otros datos de biomonitoreo en adolescentes producidos en todo el mundo, y para rastrear exposiciones potenciales o contaminaciones más altas.

Además, los resultados de la cohorte adolescente PROBE mostraron que el As y Hg se encontraban asociados al consumo de pescado.

En cuanto al As, la contaminación del agua potable es un problema de salud pública en varias zonas italianas debido a los orígenes volcánicos del territorio. En particular, el área de la provincia de Viterbo se caracteriza por la presencia de un sistema volcánico donde un acuífero basal continuo fluye dentro de las rocas sedimentarias del Plioceno-Pleistoceno con concentraciones muy altas (hasta 130-370 μg/L) de As. Los resultados en la encuesta PROBE de adolescentes muestran que los niños que viven en el área de Viterbo tenían niveles más altos de As (y también de Hg y V).

Con respecto al Hg, la concentración en sangre de los adolescentes de PROBE fue ligeramente más alta que la de los reportados en la encuesta representativa nacional (NHANES) para la población de los EE. UU.; probablemente este resultado se deba a un mayor consumo de pescado en adolescentes italianos del área mediterránea y a la existencia de volcanes submarinos.

En lo que concierne a las diferencias de sexo, encontramos que el Pb en sangre es significativamente más alto en los hombres que en las mujeres; este resultado es relevante teniendo en cuenta que los niveles elevados de Pb en sangre pueden presentar efectos neurotóxicos cognitivos deletéreos que pueden ser más pronunciados en los hombres que en las mujeres.

Otro resultado notable fueron los valores más altos para algunos metales como Ir, Pt, Rh en la sangre de los adolescentes que viven en áreas urbanas respecto de los que viven en áreas rurales. Estos metales se asocian típicamente con el tráfico rodado, por lo que los adolescentes de PROBE que viven en áreas urbanas son más proclives a una mayor exposición a los metales derivados del tráfico.

También mediante los enfoques GLM y EWAS, confirmamos que el Hg y As están positivamente asociados con las rutas dietéticas (principalmente por el consumo de pescado y, en menor medida, por el consumo de leche), mientras que el Cr muestra una interacción más compleja entre la coexposición a diferentes vías dietéticas (leche y pescado) junto con la proximidad de la residencia a las actividades industriales. El estado socioeconómico (SES) de la madre reveló asociaciones estadísticas robustas con los niveles de Cd y Ni en la sangre en los niños respectivos. Se encontraron otras asociaciones entre Cd y Pt y el uso de bisutería.

Para ver los datos de biomonitoreo humano producidos dentro del estudio PROBE en un contexto de evaluación de riesgos para la salud, la concentración medida se comparó con los valores de exposición biológica disponibles relacionados con la salud, como los valores del BioMonitoreo Humano (BHN: BHN I y BHN II) establecidos por la Comisión de Biomonitoreo, y Equivalentes de Biomonitoreo (BE) alemana. En relación con el riesgo para la salud, los niveles de metales encontrados en la sangre de los adolescentes no indicaban un riesgo para la salud al considerar los límites de referencia. Por lo tanto, el seguimiento del riesgo de esta cohorte de adolescentes es de prioridad baja.

Sobre la base de los datos del estudio PROBE de adolescentes, en las políticas a nivel local se debería prestar atención especial a las personas que viven en áreas volcánicas (Viterbo) con:

- un control periódico de la calidad del agua potable y los suministros de agua conectados,

- control de alimentos y plantaciones en las mismas áreas, que pueden reflejar el riego con agua de alto nivel de As




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Para las personas que viven en áreas urbanas (Roma):

- control de la contaminación del aire exterior con un esquema más detallado de estaciones de monitoreo de la calidad del aire en las zonas de tránsito en cada municipio;

En todos los casos, se tiene que dedicar una atención especial a los grupos vulnerables (niños, adolescentes, mujeres embarazadas).

Promovido por las autoridades locales, se tiene que implementar un programa de biomonitoreo por parte de las autoridades nacionales de salud y medio ambiente en áreas con alto contenido en As en las aguas potables, y estudiar los efectos en la salud, como se ha hecho en Trieste.

Eslovenia

Sobre la base de los resultados de CROME-LIFE, se podrían proponer las siguientes recomendaciones específicas a nivel local/nacional

- Implementación de un marco nacional de BHN de recogida de datos y evaluación de la exposición de la población eslovena que reside en 12 regiones de todo el país. Las encuestas futuras se basarán en los resultados de la actual, teniendo en cuenta también los problemas encontrados durante el reclutamiento y la falta o insuficiencia de datos.

- Teniendo los datos de exposición interna geográficamente cubriendo la mayor parte de Eslovenia, podemos planificar una encuesta futura mucho mejor. Utilizando los datos existentes y el poder estadístico de cálculo, se puede determinar el tamaño de la muestra que permita detectar diferencias ambientales relevantes en la exposición y las tendencias temporales de manera eficiente, lo que es una ventaja importante en la evaluación de riesgos.

- El análisis de datos basado en los resultados de BHN muestra que la recogida con matrices invasivas no es una opción para evaluar de forma realista la exposición interna. Mostramos que los niveles de ciertos contaminantes ambientales determinados solo en orina no reflejan la exposición real. Este es el caso particularmente para Cd y COPs.

- Para la implementación a largo plazo del BHN, el fortalecimiento de la infraestructura nacional es de crucial importancia. Esto incluye el establecimiento de un biobanco nacional para el almacenamiento de muestras biológicas a largo plazo, la gestión y el almacenamiento de datos, el establecimiento de una plataforma de base de datos, que incluiría datos relacionados con la salud y el medio ambiente y su gestión.

- Para desarrollar programas de BHN, la tasa de respuesta es un componente clave en el éxito de un programa y los datos obtenidos. Para esto, la estrategia de comunicación debe estar bien definida e implementada continuamente en los niveles del público en general, los responsables de las políticas, las agencias reguladoras y también a nivel clínico. A largo plazo, la participación interdisciplinaria es muy importante, reuniendo a los ministerios de medio ambiente, salud, agricultura, economía y ciencia.

España

Exposición a metales

La exposición a metales en mujeres embarazadas se ha evaluado a partir de su composición de orina recogida en el primer y tercer trimestre del embarazo utilizando un protocolo de digestión recientemente desarrollado para el análisis Q-ICP-MS (Fort et al., 2014a). Todos los metales, excepto Ni, As, Th y Pb, mostraron diferencias de concentración estadísticamente significativas entre estos dos períodos. Las concentraciones de todos los metales en el primer y tercer trimestres se correlacionaron significativamente, lo que refleja la ausencia de cambios importantes de las entradas de metales en las mujeres estudiadas durante el embarazo. Las diferencias de concentración significativas entre estos dos períodos de muestreo pueden responder a los cambios metabólicos del embarazo. En consecuencia, las mediciones de los metales traza estudiados en la orina proporcionan estimaciones representativas de la exposición durante todo el período de embarazo.




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Las poblaciones mediterráneas, como la representada por la cohorte de Sabadell, tienen concentraciones de arsénico urinario totales más altas que otras poblaciones europeas o norteamericanas (Fort, Grimalt et al., 2014). Consistentemente, las mujeres embarazadas de la región mediterránea consideradas en este estudio tienen altos niveles de arsénico. El alto consumo de peces y marisco típico de estas poblaciones es la principal causa de estas altas concentraciones de arsénico. Se observa una fuerte asociación entre los niveles urinarios totales de arsénico y el consumo total de peces y marisco en las dos etapas diferentes del embarazo examinado (primer y tercer trimestre). Específicamente, el consumo de pescado blanco es el principal contribuyente a la ingesta de este metaloide. No se observaron diferencias significativas en la excreción de arsénico entre estos dos períodos y las pequeñas diferencias observadas se relacionan principalmente con los cambios en el consumo de pescado blanco entre el primer y el tercer trimestre. Se ha demostrado que el arsénico de peces y marisco está compuesto principalmente de especies orgánicas que son inertes, no tóxicas que se excretan rápidamente. Por lo tanto, estos niveles altos de arsénico urinario que se encuentran en las poblaciones mediterráneas no son motivo de preocupación para la salud. La evaluación del origen del arsénico en la población general es importante para la evaluación de los efectos posibles sobre la salud en la población expuesta. El enfoque descrito en el presente estudio proporciona la información necesaria para la estimación de los efectos tóxicos posibles asociados a la acumulación de arsénico.

Se ha observado que los niveles de cobalto en la orina materna aumentan significativamente desde el primero hasta el tercer trimestre, probablemente debido a la disminución de hierro durante el embarazo (Fort, Grimalt et al., 2016). Se ha encontrado una correlación negativa significativa entre las concentraciones de hemoglobina y de cobalto en la orina en el tercer trimestre, así como en las diferencias entre los niveles de hemoglobina y las concentraciones de cobalto en la orina entre estos dos trimestres. Esta asociación se observó previamente en adolescentes, mujeres y pacientes con hemocromatosis, pero el presente estudio es el primero en el que se observa esta tendencia durante el embarazo. El cobalto mejora la transcripción de la eritropoyetina, lo que conduce a una mayor producción de glóbulos rojos. Una absorción mayor de este metal puede tender a contrarrestar la disminución de hierro durante las últimas etapas del embarazo, cuando la tasa metabólica basal es alta y se produce el 90% del crecimiento fetal y los requerimientos de hierro aumentan. Este mecanismo puede ser útil para contribuir a satisfacer la demanda de oxígeno de estos procesos que son cruciales para el desarrollo apropiado del feto. Sin embargo, los resultados actuales recomiendan la implementación de programas de monitoreo de concentraciones de cobalto en mujeres embarazadas de poblaciones ocupacionalmente o ambientalmente expuestas a este metal. Esta estrategia podría permitir anticipar efectos nocivos posibles para la madre o el feto como consecuencia de una acumulación de cobalto mayor.

Los aportes atmosféricos son posiblemente responsables de las diferencias observadas en las concentraciones de Sb en la orina de mujeres embarazadas que viven en áreas urbanas (Fort, Grimalt et al., 2016). La aparición de este metal en la atmósfera se ha atribuido a la actividad del tráfico como consecuencia de su uso en forros de freno. Las asociaciones del contenido de Sb en la orina de mujeres embarazadas con estacionalidad, actividad física e intensidad de tráfico cerca de sus hogares son consistentes con cierta dependencia de la ingesta de este metal de fuentes atmosféricas. Estas asociaciones sugieren que a pesar de que los aportes dietéticos estimados de este metal son algo más altos que la ingesta estimada de inhalación, las entradas atmosféricas de Sb pueden ser significativas para la incorporación general de este metal en poblaciones de áreas urbanas modernas, p.e. en mujeres embarazadas

El Cu también se usa en revestimientos de frenos, pero el alto predominio de entradas de este metal esencial a partir de componentes dietéticos hace poco probable la importancia de los aportes urbanos atmosféricos en la ingesta humana total (Fort, Grimalt et al., 2016). Esto es consistente con la falta de significación estadística de las diferencias observadas en las concentraciones de orina de Cu cuando se agrupan según los indicadores de contaminación atmosférica.

Exposición a compuestos organohalogenados

Las distribuciones de la mayoría de los compuestos organoclorados entre el suero materno y el suero del cordón y el suero y la placenta maternos muestran correlaciones significativas (Vizcaino y Crawford 2015).

En general, las concentraciones relativas más altas se encuentran en el suero materno y el más bajo en




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el suero del cordón umbilical. Estas distribuciones son consistentes con una fuente materna predominante que transfiere los contaminantes a la placenta y al feto. Sin embargo, éstas no corresponden a la difusión

pasiva contaminante entre los tres tipos de tejidos de acuerdo con su contenido de lípidos. Por el contrario, requieren una transferencia transplacentaria activa de los compuestos, posiblemente en asociación con

el transporte de enzimas a través de las membranas.

Se ha observado que los compuestos que pueden transformarse metabólicamente, a saber, el 4,4'-DDT y varios PBDE, se acumulan selectivamente en la sangre del cordón umbilical (Vizcaino y Crawford 2015). Una vez que estos pueden llegar al feto, están mejor conservados que en los tejidos maternos. Esta

diferencia evidencia una baja capacidad del metabolismo fetal para la degradación de contaminantes orgánicos que puede conducir a la acumulación de contaminantes que generalmente se encuentran en

concentraciones menores en adultos o en madres. Los estudios de evaluación de exposición POP de recién nacidos pueden pasar por alto los efectos de algunos de estos contaminantes si solo consideran las

concentraciones de la madre.

El GWG influye en la acumulación de COP en recién nacidos (Vizcaino, Grimalt et al., 2014). Las concentraciones neonatales de todos los COP fueron menores en asociación con el aumento de GWG después del ajuste para posibles factores de confusión. Otros predictores, como la edad materna, el

consumo de pescado durante el embarazo y el nivel educativo, también podrían ser relevantes para la acumulación de COP en el útero. En promedio, las madres cuyo aumento de peso gestacional estuvo por

debajo de las recomendaciones de la OIM dieron a luz a recién nacidos con mayores concentraciones de COP que las madres que cumplieron o excedieron las recomendaciones de aumento de peso (entre el 9%

y el 30% más que la ganancia recomendada). En consecuencia, las recomendaciones de IOM para GWG durante el embarazo pueden ser beneficiosas para reducir la exposición POP en recién nacidos. Estos

hallazgos y resultados previos sobre la posible asociación entre el GWG y los resultados del nacimiento (Nohr, Rasmussen et al., 2009) apoyan la incorporación de GWG como covariable en los estudios

epidemiológicos de los efectos de los COP en la salud de los niños. Las recomendaciones de la OIM para el GWG también tienen un valor clínico para la atención primaria ya que las mujeres pueden reducir las

concentraciones de COP en sus recién nacidos.

Recomendaciones metodológicas generales

Recomendaciones acerca de cómo optimizar el uso de las medidas disponibles

Los datos de biomonitoreo recopilados en los países mediterráneos que participan en CROME representan una valiosa pieza de información para llenar la brecha de conocimiento relativa a la exposición interna de la población general y grupos vulnerables de la población (mujeres embarazadas, niños y adolescentes) a diferentes clases de contaminantes ambientales (metales, metaloides, organohalogenados, PCDD/PCDF, PM-PAH). Mientras que los valores medios están en general dentro de los valores de referencia establecidos en estudios previos de biomonitoreo de los Estados Unidos y la UE en la población general, estos mismos datos indican que la exposición a metales tóxicos, COP y COV es ubicua en subgrupos de población vulnerables como los niños del área mediterránea. Dada la dificultad de establecer un nivel "seguro" para la mayoría de estos productos químicos con respecto a su implicación en enfermedades basadas en el desarrollo como asma, alergias, obesidad y trastornos del neurodesarrollo, es obligatorio que las mediciones obtenidas se utilicen para estudiar el entorno/asociación de salud en una perspectiva integrada. Por lo tanto, los datos de biomonitoreo deberían integrarse con información más completa de la población en estudio, incluidas las exposiciones a la dieta, los estilos de vida y los comportamientos. El papel del estatus socioeconómico en la modulación de los efectos de la exposición química también se tiene que considerar cuidadosamente. La potencial mejora/modificación de los efectos adversos de los productos químicos en la salud humana por el cambio climático es otro tema que debe incluirse en la evaluación de riesgos. El enfoque expositivo ayudará a mejorar las estrategias destinadas a prevenir y tratar enfermedades.

Recomendaciones acerca de las medidas pendientes cuando se identifican ausencias de datos

Con base en los resultados obtenidos hasta ahora en los cuatro países del consorcio CROME, las

principales ausencias en los datos se refieren a i) medir con mayor precisión fuentes de contaminantes




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en estudio para evitar la exposición indeseable en las poblaciones; ii) estimar o cuantificar el riesgo de resultados de salud (cáncer y trastornos del neurodesarrollo).

Estas dos ausencias se pueden abordar de maneras diferentes: para la evaluación de la exposición externa, el entorno local y nacional y la salud las autoridades deben prever al menos para las áreas/sitios

con mayor riesgo de contaminación ambiental:

1. Un monitoreo periódico de contaminantes seleccionados (dependiendo de las condiciones ambientales críticas del área en estudio) en muestras de suelo, polvo, agua de mar, agua utilizada para regar en

jardines y;

2. Integración de la base de datos de estudios de biomonitoreo con datos derivados de la base de datos

regionales sobre la calidad del aire y del agua potable;

3. Análisis periódico de contaminantes seleccionados en alimentos (que incluyen no solo vegetales, sino

también carne, pescado, productos lácteos y agua potable). El análisis debe incluir un enfoque analítico de especiación para diferenciar las formas orgánicas de algunos metales (es decir, la forma de As no tóxica)

de las inorgánicas (es decir, la forma As tóxica).

4. Uso de sensores personales para una evaluación de exposición más precisa asociada a un patrón de

estilo de vida.

Para la evaluación de la exposición interna y los resultados de salud asociados, se debe implementar la

recopilación de datos de biomonitoreo, incluidos los subgrupos de población vulnerables. Dondequiera que estén disponibles los registros nacionales o locales para los trastornos del neurodesarrollo u otras

afecciones crónicas de la población general, se debe evaluar el vínculo con la morbilidad y/o la mortalidad, para calcular un aumento posible de la enfermedad o el riesgo de mortalidad. En este sentido, hace falta

un apoyo financiero de las autoridades de salud o ambientales a nivel nacional o local para la detección de resultados de salud en bebés y niños. Es deseable que se inicien estudios prospectivos en los diferentes

países, ya que brindan información sobre las dosis bajas y los efectos a largo plazo de la mayoría de los contaminantes bajo escrutinio en la red CROME.

Finalmente, se necesita información completa sobre la complementación recomendada para las mujeres

embarazadas, ya que el estudio de Trieste mostró que algunos elementos esenciales (Zn, Cu o Se) podrían conducir al desarrollo de efectos adversos en el desarrollo neurológico de los niños.

Identificación de los métodos estadísticos recomendados para una interpretación óptima de los datos ambientales y biomarcadores de salud

Por supuesto, se recomienda la aplicación de análisis multivariados para interpretar el vínculo entre los datos ambientales y los biomarcadores. En particular, el enfoque indicado por el EWAS puede ser

específicamente adecuado para evaluar las hipótesis con respecto a las contribuciones generales del medio ambiente a la enfermedad (Patel, Bhattacharya et al., 2010). Las dosis internas se combinan con

los impactos en la salud de la población local a través de métodos estadísticos avanzados para derivar las funciones de respuesta a las dosis que explican las diferencias en los patrones de exposición, diferencias

de susceptibilidad y variación interindividual (por estilo de vida, edad, sexo o estado fisiológico) en los efectos sobre la salud. El enfoque utiliza como punto de partida los valores de los biomarcadores medidos

en diferentes matrices biológicas (orina y/o sangre) para estimar mediante la aplicación del modelo PBTK genérico de todo el ciclo de vida la dosis biológica efectiva en el tejido diana que es consistente con el nivel

de biomarcador medido. Para estimar el impacto en la salud, utilizaremos un enfoque estadístico basado en la regresión logística multivariante ponderada según las diferentes covariables (edad, sexo, estado

socioeconómico (SES), etc.) que vincule las dosis internas con el efecto en la salud considerando la interdependencia de las covariables (utilizando como métrica una analogía de la métrica de "desequilibrio

de enlace" utilizada en estudios de asociación de genoma completo). Aunque la fórmula de exposición-respuesta se derivará de los datos ambientales, biomonitoreo y de salud existentes, estos se utilizarán para estimar los impactos de salud esperados en otros grupos de población a partir de los datos propios

de biomonitoreo.




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Recomendaciones sobre el marco operacional de BHN, incluida la definición de estrategia de reclutamiento, definición de métodos nacionales y aspectos de control de calidad relacionados para el

espécimen de muestreo, incluida la elección de colectores, condiciones de manejo, preservación, envío, almacenamiento y plan de comunicación nacional para todas las etapas del proyecto (reclutamiento para

la difusión de resultados a nivel individual y colectivo).

Hay muchas recomendaciones metodológicas que se pueden avanzadar para implementar campañas de BHN eficientes y útiles. Uno de los aspectos críticos se refiere a las matrices que se recopilarán para

garantizar una evaluación de la exposición real:

Matrices invasivas

La sangre es la matriz invasiva utilizada con más frecuencia para determinar biomarcadores, ya que la sangre es un vínculo universal entre todos los tejidos del organismo (Paustenbach y Galbraith 2006). Sin

embargo, el carácter invasivo del muestreo a menudo afecta negativamente las tasas de participación, y existen cuestiones éticas relacionadas con el uso de la sangre. A menudo se necesita obtener un

consentimiento especial de los participantes y de los comités de supervisión ética locales y nacionales para utilizar la sangre como una matriz de biomonitoreo. Además, el volumen de sangre que se puede

recoger normalmente es limitado. Esto hace que el uso de sangre para biomonitoreo en niños sea subóptimo. El análisis de sangre a menudo se lleva a cabo en el caso de sustancias que se excretan

lentamente del organismo (Polkowska, Kozłowska et al., 2004).

Una ventaja importante del uso de sangre como matriz es que concomitante con los marcadores de

exposición, también permite determinar muchos biomarcadores de efecto relevantes en la sangre. La combinación de marcadores de exposición y efecto en una batería de biomarcadores hace que la

exposición, la dosis, el efecto y el impacto en la salud sean mucho más relevantes.

Matrices no invasivas

La orina es probablemente la matriz más utilizada en la que se miden los biomarcadores. La recolección y análisis de orina no conlleva riesgos asociados, los volúmenes de muestra pueden ser grandes y se obtienen muestras para diferentes edades, incluidos niños pequeños con un impacto mínimo (Kozlowska,

Polkowska y otros 2003, Polkowska, Kozlowska y otros 2004, Bradman y Whyatt 2005). Desafortunadamente, para muchos biomarcadores, la orina no es el indicador más confiable de exposición

porque a menudo contiene metabolitos excretados en lugar de compuestos parentales (Paustenbach y Galbraith 2006). Debido a que los productos químicos a menudo se excretan lentamente en el transcurso

de horas o días después de la exposición, también los factores toxicocinéticos pueden obstaculizar la usabilidad de la orina como matriz. Aunque esto puede reducirse recogiendo muestras de 24 horas en

lugar de muestras individuales. El momento de la recogida de muestras sigue siendo un aspecto esencial de la biomonitoreo utilizando la orina como matriz (Barr, Wilder y otros 2005, Kissel, Curl y otros 2005).

. Las concentraciones urinarias de creatinina, la gravedad específica y la osmolaridad son métodos comunes para ajustar la dilución de las muestras de orina. El método más comúnmente utilizado es el

ajuste de creatinina que implica dividir la concentración del analito por la concentración de creatinina. Las pautas para el ajuste de la creatinina y la interpretación adecuada de los datos están disponibles en la

literatura (WHO 1996, Barr, Wilder et al., 2005).

La sangre del cordón umbilical, el líquido amniótico y la leche materna proporcionan una visión general de

la carga contaminante de las madres y, al mismo tiempo, brindan información relevante sobre la exposición en el útero o la vida temprana de los bebés (Shen, Main et al., 2007). en la exposición en el útero y en la

infancia que reflejan ventanas de vulnerabilidad extrema, estas matrices merecen una gran atención cuando se preparan programas de BHN. Los problemas potencialmente problemáticos que utilizan sangre

del cordón umbilical o líquido amniótico pueden surgir del hecho de que el muestreo no siempre es sencillo ya que obviamente la recolección de muestras de BHN no es la primera prioridad en el momento de la entrega. La leche materna es una matriz confiable para monitorear la presencia de contaminantes

liposolubles tales como bifenilos policlorados (PCB), retardadores de llama bromados (BFR) o dioxinas ((Uehara, Peng et al., 2006, Shen, Main et al., 2007, Yu , Palkovicova et al. 2007)) y puede ser la ruta




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más importante de exposición a contaminantes.

Sin embargo, se debe enfatizar que el BHN en sí mismo no puede reemplazar el monitoreo ambiental y

los datos de modelado. En la mayoría de los casos, los datos de vigilancia ambiental para diferentes compartimentos ambientales (aire, agua, alimentos, suelo) proporcionan una mejor comprensión de las

posibles fuentes, lo que permite el desarrollo de estrategias de reducción de riesgos más informadas y apropiadas. Al mismo tiempo, los enfoques matemáticos para describir el comportamiento farmacocinético y toxicocinético de los agentes ambientales (generalmente denominados modelos PBPK)

ofrecen una visión más mecanicista del comportamiento y el destino de los agentes ambientales después de la exposición agregada (relación EDR indirecta). Dado que los datos de los biomarcadores también

reflejan las características de acumulación, distribución, metabolismo y excreción de los productos químicos (ADME) individuales, los datos de BHN ofrecen una oportunidad excelente para la validación de

estos modelos PBTK. En última instancia, la combinación de ambas líneas de evidencia para evaluar la exposición demuestra ser óptima para relacionar la exposición compleja a agentes ambientales con la

posible evaluación de efectos adversos para la salud.

Conclusiones

Resumen global de las recomendaciones específicas para cada país y metodológicas

presentadas anteriormente

La lista de aspectos clave de alta prioridad en un enfoque preventivo preliminar debe prever

intervenciones estratégicas a nivel nacional y local para:

- Reducir la exposición a los peligros ambientales, incluidos los contaminantes del aire y contaminantes

ambientales e industriales, especialmente los metales pesados, como el mercurio y el plomo.

- Mejorar los materiales de construcción con menores emisiones en casas, escuelas y lugares de

trabajo.

- Reducir la exposición en el útero, la infancia y la niñez proveniente de los padres y otras fuentes

ambientales como el de humo de tabaco.

- Asegurar una ingesta dietética adecuada de los nutrientes clave, incluido el ácido fólico y otras vitaminas y minerales, en las mujeres en edad fértil, para proteger contra las afecciones del tubo neural

y otras consecuencias de las deficiencias vitamínicas. Como hay una asociación entre la exposición neonatal a COP y el GWG inadecuado durante el embarazo, alentar a las mujeres embarazadas a

cumplir con las pautas recomendadas de la IOM para que el GWG pueda reducir la acumulación de COP en los recién nacidos.

En un nivel más específico, recomendamos:

- Implementar un marco nacional y de la UE de BHN, con los datos recopilados y la evaluación realizada,

que proporcione un perfil de exposición para los subgrupos de población general y vulnerable. Utilizando los datos existentes y el potencial del cálculo estadístico, el tamaño de la muestra que nos permite

detectar diferencias ambientales relevantes en la exposición y las tendencias temporales se puede determinarse de manera eficiente, lo cual es una ventaja importante en la evaluación de riesgos.

- Asociar el biomonitoreo con la evaluación de los resultados de salud relacionados con el crecimiento, la obesidad, los trastornos metabólicos, el asma/alergias y los trastornos del

neurodesarrollo/neuropsiquiátricos;




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- Crear biobancos nacionales para el almacenamiento de muestras biológicas a largo plazo, gestión y almacenamiento de datos, establecer una plataforma de base de datos, que incluya datos relacionados

con la salud y el medio ambiente y su gestión.

- Planificar estrategias de comunicación bien definidas y renovadas continuamente a nivel del público en

general, gestores políticos y sociales, agencias reguladoras y también a nivel clínico. A largo plazo, la participación interdisciplinaria es muy importante y debería incluir a los ministerios de medio ambiente, salud, agricultura, economía e investigación científica.




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