Curso de cg sp
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CURSO TEÓRICO - PRÁCTICO
CROMATOGRAFÍADE
GASES
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CROMATOGRAFIA CROMATOGRAFIA GAS-LIQUIDO (GLC)GAS-LIQUIDO (GLC)
Definición.- FundamentosDefinición.- FundamentosInstrumentación para GLC.- Componentes básicosInstrumentación para GLC.- Componentes básicosGases portadores.- CaracterísticasGases portadores.- CaracterísticasColumnas y materiales de empaque.- Columnas y materiales de empaque.- CaracterísticasCaracterísticasDetectoresDetectores
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLOFACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
CURSO: TEÓRICO - PRÁCTICOCURSO: TEÓRICO - PRÁCTICO
Contenidos
Profesor:
M.Sc. Q.F. Segundo M. Miranda Leyva
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The new Agilent 7890A Gas Chromatograph
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Cromatografía de gases
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CROMATOGRAFIA • El método más general para tratar una
interferencia, – consiste en la separación física del analito.
• Hoy en día el método más utilizado con este fin es la cromatografía.
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DESCRIPCIÓN GENERAL DE LA CROMATOGRAFIA
• Grupo variado e importante de métodos para – separar, aislar e identificar componentes
estrechamente relacionados; • muchas de estas separaciones son imposibles por otros
medios.
• Se emplea una fase estacionaria y una fase móvil. – Los componentes son transportados a través de la
fase estacionaria por medio de la fase móvil; • la separación se basa en las diferencias de velocidad de
migración de los componentes de la muestra.
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Proceso cromatográfico
• Los componentes que se desea separar deben ser solubles en la fase móvil.– Deben ser capaces de interaccionar con la
fase estacionaria ya sea disolviéndose en ella, adsorbiéndose, o reaccionando con ella en forma química.
• Como consecuencia, durante la separación los componentes se distribuyen entre ambas fases.
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Cromatografía en columna empacada
• La fase estacionaria es – un sólido finamente dividido
• sostenido en un estrecho tubo de vidrio o metal.
• La fase móvil, puede ser – líquido o gas,
• se obliga a pasar a través del sólido bajo presión.
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Cromatografía en columna capilar
• Las columnas capilares tienen diámetros internos (DI) de menos de 1 mm y la pared interna está recubiertas con una película de fase estacionaria. – Las columnas con DI de 530 μm se llaman de megaporo; y – las con DI de 100 μm se llaman de microporo.
• La cromatografía de gases capilar ha reemplazado a la cromatografía de gases en columna empacada; por – la alta eficiencia de la primera: 200 000 platos teóricos en
comparación con • sólo 10 000 o menos de las columnas empacadas.
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Cromatografo de Gases
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Cromatografía de gases.• Existen dos tipos generales
decromatografía de gases (CG):– Cromatografía Gas-Sólido
• Fase estacionaria: Sólido– Cromatografía Gas-Liquido
• Fase estacionaria: Liquido inmovilizado
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Principios de la CG• Volumen de retención: Se tienen en cuenta los
efectos de presión y temperatura.– VR= tR ·F VM= tM ·F– Retenida no retenida
• F=flujo volumétrico promedio (mL/min), se estima midiendo la velocidad del gas de salida de la columna usando un medidor de pompas de jabón.
– Pero medir VR y VM depende de • la presión dentro de la columna• la temperatura de la columna
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Principios de la CG• VR y VM dependen de la presión
promedio dentro de la columna• La columna tiene una resistencia al flujo
– En la entrada, P= alta, F= bajo– En la salida, P= baja, F= alto
• P·F= constante• El factor de la caída de presión j se usa para
calcular la presión promedio desde la presión de entrada Pinlet y la presión de salida Poutlet
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Medidor de pompas de jabón
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Principios de la CG
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Factor de caída de presión j:
Volumen de retención corregido:
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Principios de la CG
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Volumen de retención especifico
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Principios de la CG• Relacion entre Vg y K
• ρFe ; densidad de la fase estacionaria• Vg ; parámetro útil para identificar especies
– Vg depende de la constante de distribución para una T dada
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Cromatografía de gases
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Cromatografía de gases
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Sistema de Inyección• La eficacia de la columna requiere que la
muestra sea de un tamaño apropiado.– Es necesario que la muestra sea como un
tapón de vapor.• La inyección lenta de muestras demasiado
grandes– Provoca
• Ensanchamiento de las bandas y mala resolución
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Sistema de Inyección
• En general, se inyecta la muestra con una micro jeringa a través de un septum.– Que esta situado
• En una cámara de vaporización instantánea en la cabeza de columna.
– La cámara debe estar • 50 ºC por encima del punto de ebullición del
compuesto mas volátil.
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Sistema de inyección• Split: Método de rutina
• 0.1-1% de la muestra va a la columna Resto a desperdicios• Splitless: Toda la muestra va a la columna
• Ideal para análisis cuantitativo• Solo para análisis de trazas o muestras de baja
concentración• On-column: Para muestras que se descomponen por
encima de su punto de ebullición - portal de inyección no calentado
• Columna: a una temperatura baja• Muestra: condensada en una estrecha• Cromatografía: comienza al calentar la columna.
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CG. Sistema de Inyección
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CG. Sistema de Inyección
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CG. Sistema de Inyección
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Configuración del horno• La temperatura de la columna
– Dependiente de:• Punto de ebullición de la muestra y • Grado de separación requerido.
• Programa de temperaturas: – Se utiliza para:
• Muestras con un amplio intervalo de puntos de ebullición.
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Elución isotérmica
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Programa de temperaturas
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Programa de temperatura• Si la temperatura aumenta,
– La presión de vapor del analito aumenta, y• Se eluye mas rápidamente.
• La columna– Alcanza la temperatura durante la
separación, y • Las especies se separan según su rango de
polaridades o presión de vapor.
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 29
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Detectores. Características• NECESARIO
– Adecuada sensibilidad (10-8-10-15 g soluto/s)– Buena estabilidad y reproducibilidad– Respuesta lineal a varios ordenes de magnitud– Intervalo de temperaturas (0- 400ºC)
• DESEADO– Tiempo de respuesta corto– Alta fiabilidad y manejo sencillo– Respuesta semejante para todos los analitos– No destructivo de la muestra
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 30
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Sistemas de detección
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Detector de Ionización de Llama (FID)
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 32
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Detector de Ionización de Llama (FID)
• Los compuestos orgánicos se pirolizan en llama de H2/Aire, produciendo iones y electrones que conduce la electricidad a través de la llama.
• La señal depende del número de átomos de C que entra por unidad de tiempo. Detector sensible a la masa.
• Se aplica a compuestos orgánicos. Poco sensible a grupos carbonilos, aminas, alcoholes.
• No sensitivo a no-combustibles-H2O, CO2, SO2, NOx
• Elevada sensibilidad (10-13 g/s)• Gran intervalo lineal, (107)• Bajo ruido• Destructivo de la muestra.
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 33
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Detector de Conductividad Térmica (TCD)
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 34
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GC-MS (espectrometría de masa)
• MS: mide la razón masa/radio (m/z) de los iones producidos por la muestra.– La mayoría de los iones que se generan están
univalentemente cargados.
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 35
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GC-MS (espectrometría de masa)
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 36
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GC-MS (espectrometría de masa)
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 37
![Page 38: Curso de cg sp](https://reader030.fdocuments.es/reader030/viewer/2022032715/55adc5891a28aba11c8b46cc/html5/thumbnails/38.jpg)
Detector Quimiluminiscente deAzufre (SCD)
• Se basa en una reacción entre ciertos compuestos de azufre y ozono. El eluyente se mezcla con H2 y aire y se queman en un FID. – Los gases resultantes se mezclan con
ozono generando luminiscencia.• La intensidad de luminiscencia es
proporcional a la concentración de azufre.– Útil para cuantificar mercaptanos.
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 38
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Detector de captura de electrones(ECD)
• El eluyente pasa sobre un emisor beta (Ni-63) y provoca la ionización del gas portador.– En ausencia de especies orgánicas se obtiene una corriente
constante.– La corriente disminuye en presencia de moléculas orgánicas
que tienden a capturar los electrones.– Selectivo a compuestos con grupos funcionales
electronegativos (halógenos, quinonas, nitros, peróxidos).– Altamente sensible, bajo rango lineal.– No alteran la muestra significativamente.
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 39
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Detector de emisión atómica
• El eluyente se introduce en un plasma de He obtenido por microondas, que – se acopla a un espectrofotómetro de
emisión.– Aplicación:
• análisis de los componentes de la gasolina y derivados.
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 40
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Detector de emisión atómica
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 41
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Detector Termoiónico (TID)
• Detector selectivo para compuestos orgánicos que contienen P y N.– Útil en la determinación de pesticidas.
• Semejante a FID. – El fluyente se quema en una llama que fluye
alrededor de una bola de silicato de rubidio calentada eléctricamente (600-800 C).
• No esta bien establecido el mecanismo pero eso hace que se produzcan gran cantidad de iones a partir de las moléculas que contienen P y N.
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 42
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Otros Detectores
• Detector de fotoionización– El eluyente se irradia con luz UV
provocando la ionización de las moléculas• Detector fotométrico de llama
– Análisis de pesticidas e hidrocarburos– Selectivo a compuestos que contienen S y
P.
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 43
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Columnas y fases estacionarias en CG
• Dos tipos de columnas– Empaquetadas
• Material de soporte sólido formado por partículas de sílice recubiertas con liquido (100-300 μm diámetro) en un tubo de vidrio.
• Ideal para gran escala pero lenta e ineficiente– Capilares/ tubulares abiertas
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 44
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Columnas capilares/tubulares abiertas
• Ideal para una mayor velocidad de análisis y eficacia, solo aplicable a muestras pequeñas– WCOT (wall coated open tubular) < 1 μm de líquido
recubriendo el interior de un tubo de sílice. • Actualmente, se utilizan capilares de sílice fundida con un
recubrimiento externo protector de poliimida.
– SCOT ( support coated open tubular ) 30 μm de líquido soportado en el interior de un tubo de sílice.
• La superficie interna esta revestida de una capa fina tal como tierra de diatomeas.
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 45
![Page 46: Curso de cg sp](https://reader030.fdocuments.es/reader030/viewer/2022032715/55adc5891a28aba11c8b46cc/html5/thumbnails/46.jpg)
Soporte
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 46
![Page 47: Curso de cg sp](https://reader030.fdocuments.es/reader030/viewer/2022032715/55adc5891a28aba11c8b46cc/html5/thumbnails/47.jpg)
Columnas tubulares abiertas
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 47
![Page 48: Curso de cg sp](https://reader030.fdocuments.es/reader030/viewer/2022032715/55adc5891a28aba11c8b46cc/html5/thumbnails/48.jpg)
Columnas empaquetadas
• Se fabrican con tubos de vidrio, metal, con longitud de 2 a 3 metros y diámetro de 4 mm– Se empaquetan con un material de relleno sólido
finamente dividido y homogéneo.– El material de relleno se puede recubrir con una
delgada capa de FE liquida (SCOT).
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 48
![Page 49: Curso de cg sp](https://reader030.fdocuments.es/reader030/viewer/2022032715/55adc5891a28aba11c8b46cc/html5/thumbnails/49.jpg)
Tamaños de partículas
• Eficacia aumenta con la disminución de la partícula.• La diferencia de presión varia inversamente con el
cuadrado del diámetro de la partícula.• No es conveniente trabajar con presiones superiores a
50 psi.• Las partículas son por lo general de 250-170
micrómetros
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 49
![Page 50: Curso de cg sp](https://reader030.fdocuments.es/reader030/viewer/2022032715/55adc5891a28aba11c8b46cc/html5/thumbnails/50.jpg)
Materiales de soporte sólidos
• Sirven para retener y ubicar la fase estacionaria– Partículas esféricas, pequeñas, uniformes, buena
resistencia física, superficies especifica de 1m2/g.• Tierras de diatomeas:
– Esqueletos de miles de especies de plantas unicelulares que habitaban mares y lagos.
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 50
![Page 51: Curso de cg sp](https://reader030.fdocuments.es/reader030/viewer/2022032715/55adc5891a28aba11c8b46cc/html5/thumbnails/51.jpg)
03/11/12M.Sc. Segundo M. Miranda LeyvaPágina 51
No pidas a la vida
Muchas Gracias
A todos ustedes
¡Aquello que temes vivir!