UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

Facultad de Pesquería

Departamento de acuicultura e industrias

pesqueras

Nutrición y Alimentación de Organismos Acuáticos

“DESCAPSULACIÓN DE CISTES DE ARTEMIA Y CONTEO DE

NAUPLIOS RECIÉN ECLOSIONADOS”

PROFESORA : Ing. Jessie Vargas C

2011

I. INTRODUCCION

Dentro del campo de la acuicultura, como ya se menciono anteriormente en la práctica pasada, el alimento natural es de suma importancia en este campo de estudio. Aquí podremos encontrar como alimento vivo a la Artemia sp.

Además los nauplios de Artemia constituyen el alimento más utilizado en larvicultura de peces y crustáceos. La disponibilidad de este tipo de alimento es el uno de los factores de gran importancia que tiene, ya que se le puede encontrar en grandes cantidades a lo largo de la línea costera en lagos, lagunas hipersalinas y salinas solares. Y otro factor de importancia se debe a la capacidad de las hembras de poner huevos protegidos (encapsulados), disponiendo de un alimento vivo en condiciones atípicas de almacenamiento, transporte y conservación.

Existen muchos métodos para la obtención de quistes y técnicas de decapsulación

reportadas por la bibliografía, ya que A. salina es objeto de estudios muy intensos

Para poder hacer uso de este alimento, primero debemos de darle un tratamiento a los cistes de Artemia, siendo estas, cinco etapas fundamentales para la preparación de quistes que son: colecta en zonas naturales o en cultivos intensivos, filtrado, lavado, secado, envasado y almacenado.

En el presente informe se presentara una mayor información bibliográfica acerca de estos procedimientos y la importancia de este alimento en etapas larvales.

II. OBJETIVOS

Lograr en pequeña escala la descapsulación de cistes de Artemia para la obtención de nauplios utilizando hipoclorito de sodio.

Identificar los diferentes estadíos de desarrollo de los cistes desde su hidratación hasta la liberación del nauplios.

Conocer las técnicas de fijación y conteo de nauplios de Artemia.

III. REVISION LITERARIA

La Artemia salina es un crustácco que en estado adulto mide entre 17–18 mm, posee un par de apéndices prenciles, ojos pedunculados, 17 pares de apéndices, una furca (rameada o bifurcada). La hembra adulta posee un ovisaco en el que incuba de 10 a 30 huevecillos generalmente y en condiciones óptimas hasta 70 huevecillos. Algunos autores reportan de 50–200, según la especie. Presenta un ciclo de vida sexual y asexual. Existen especies bisexuales y especies patenogenéticas en ambas.

Pueden presentarse dos alternativas de desarrollo del huevo: uno es el desarrollo de larvas (prenauplio, nauplio) o bien que en condiciones adversas se presente el fenómeno de “Criptobiosis”, en el cual se producen los quistes. Este fenómeno se debe a que la gástrula permanece en este estado en períodos de desecación ambiental; esta gástrula enquistada en condiciones favorables se hidrata y continúa su desarrollo hasta eclosionar el nauplio

Esta capacidad de la Artemia de la formación de huevos resistentes es lo que la ha hecho ser uno de los recursos de alimentación en Acuacultura más importantes, pues los quistes pueden conservar su variabilidad durante varios años hasta que se dan las condiciones necesarias para la eclosión.

Áreas de Distribución

A finales de los 60's la demanda de quistes de Artemia era insuficiente, por lo que se encareció. Debido a esta gran demanda se incrementaron las investigaciones sobre este organismo, principalmente por el Reference Center de la Universidad de Ghent, Bélgica, en colaboración con laboratorios de Estados Unidos e Inglaterra, explorándose varias zonas naturales de producción de Artemia en Europa, Asia, América y Australia (Sorgeloos, 1974).

Aunque su distribución es cosmopólita, la mayor abundancia ocurre en zonas tropicales y subtropicales. Existen dos categorías generales en cuanto a salinidad se refiere de las zonas de producción natural de Artemia: Thalasso-halino donde la mayor concentración de sales son de NaCl (menor número de localidades). Athalasso-halino con sales de Sulfatos, Carbonatos y Sales de Potasio (mayor número de localidades). Estas categorías son importantes, pues determinan las diferentes especies de Artemia.

Figura 1: Ciclo de vida de la Artemia salina

Figura 2: Artemia salina

Artemia salina (Ivleva et al., 1973): A) Hembra, B) Cabeza de macho, C) Cabeza de hembra, 1. Ojo nauplio, 2. antenuelas, 3. antena, 4. apéndice toráxico, 5. saco ovigero, 6. segmento abdominal, 7. furca, 8. ojo pedunculado.

Figura 3: Estados Nauplio de Artemia salina

TABLA 1. ZONAS NATURALES DE PRODUCCION DE Artemia

salina EN EL MUNDO (P. SORGELOOS, 1974)CONTINENTE

NUMERO TOTAL DE LOCALIDADES

PRINCIPALES

PAISES

NUMERO DE LOCALIDADES

ASIA 19    EUROPA 77 ESPAÑA 37AMERICA DEL NORTE

37 U.S.A. 34

    MEXICO 9AMERICA CENTRAL

11 *REGION CARIBE

6

AMERICA DEL SUR**

19 ARGENTINA

7

ASIA 19 URSS 15AFRICA 18    

Méxco (Baja California, Sonora, Sinaloa, Culiacán, S.L. Potosí, Estado de México, Hidalgo, Zacatecas, Yucatán).

* (Bahamas, Puerto Rico, Santo Domingo, Martinica)** (Argentina, Bolivia, Brasil, Colombia, Ecuador, etc.)

Alimentación

Se han encontrado en análisis del contenido del tubo digestivo desde algas y detritus hasta granos de arena, lo que demuestra que es un organismo filtrador no selectivo, por lo que puede ingerir materiales contaminados. Ingiere partículas de 1.2 a 50 μ. Sólo se alimenta de partículas, no de alimentos solubles. La Artemia no regula su nutrición (se alimenta las 24 h). Estos factores deben de considerarse para la adecuada selección de las especies silvestres, y para calcular la concentración y la dieta adecuada para fines acuaculturales.

En las poblaciones silvestres es difícil determinar el rendimiento máximo sostenible (RMS), ya que éste depende de los factores ambientales.

Proceso de Eclosión

El fenómeno de eclosión es un fenómeno químico puro (intercambio iónico), relacionado con la concentración de glicerol que posee el embrión, a mayor producción de glicerol hay mayor absorción de agua; en etapas críticas de presión osmótica la membrana se rompe, y después la concentración de glicerol súbitamente baja a cero, el glicerol es liberado. Si bien se ha observado que en altas densidades de quistes la presencia de glicerol es importante, pues interviene en la sincronía de la eclosión (ya que no actúa tóxicamente sobre las larvas). Es recomendable cambiar esta agua antes de que transcurran diez horas de la eclosión, ya que la presencia del glicerol incrementa las poblaciones bacterianas.

Parámetros que permiten la eclosión de quistes

Temperatura óptima de eclosión de quistes: 25 a 30°C. Salinidad: 5 ppm (límite variable). A mayor S‰ de 30 ppm, los quistes no alcanzan

el período crítico de ruptura o eclosión, y en tal caso no se consigue ésta. Decapsulación: En la decapsulación se controla el proceso de osmo-regulación.

Permitiéndose la decapsulación es más fácil conseguir la eclosión (en el anexo se incluye la técnica de decapsulación recomendada por P. Sorgeloos).

pH: A un pH de 8.0 hay una buena eficiencia de eclosión. Debajo de éste la eclosión disminuye. Se recomienda el uso de 2 g de NaHOO3/1 para asegurar una mayor eclosión.

Oxígeno: En el metabolismo de Carbohidratos de Artemia, la presencia de O2 es relevante. Para conseguir una eclosión eficiente se recomiendan altos niveles de O2 (condiciones anaeróbicas afectan la eclosión y el metabolismo de Carbohidratos).

IMPORTANCIA NUTRICIONAL DE ARTEMIA

La Artemia es un excelente alimento vivo en la Acuacultura por sus características de desarrollo, su pequeño tamaño de nauplio y metanauplio (adecuado para las larvas y juveniles de crustáceos y peces) y fácil manejo, etc. El valor nutritivo de los nauplios recién eclosionados es muy alto; este valor decrece en ausencia de alimento. Si la Artemia (metanauplio y nauplio) es alimentada adecuadamente, podomos obtener un enriquecimiento de nutrientes esenciales en un sustrato de microalgas (vivas o secas), o en una mezcla artificial de nutrientes (lípidos, aminoácidos, ácidos grasos, etc.) (Tacon, 1987).

Se ha calculado que se requiere entre un 2.5 a 5 g de la fuente, enriquecida para un millón de nauplios, y este enriquecimiento se logra en un período no menor de 6 h. En la Tabla 29 se presentan diferentes mezclas de nutrientes y mezclas enriquecidas que se utilizan para Artemia y rotíferos.

Los recursos nutricionales que posee Artemia (proteínas, ácidos grasos, etc.). Su composición química y su concentración varían de una cepa a otra, como se muestra en la Tabla 30. De estos nutrientes, las principales fuentes a considerar son los ácidos grasos y aminoácidos esenciales en los nauplios y metanauplios.

Se ha mencionado ya en capítulos anteriores, que la importancia de los llamados alimentos vivos (fitoplancton y zooplancton), radica en el aporte de ácidos grasos y aminoácidos esenciales que puedan brindar para el desarrollo larvario de peces y crustáceos (Watanabe et al., 1983).

En la Tabla 3 se muestra la composición en ácidos grasos de cuatro cepas de Artemia (nauplios recién eclosionados) de diferentes localidades.

Para lavas de peces marinos, los nauplios de Artemia contienen una alta proporción de ácidos grasos esenciales de tipo W,(20:5W3 y 22:6W3) que son los más nutritivos y que permiten el buen desarrollo y alta supervivencia de las larvas.

Para especies de agua dulce, los nauplios de Artemia contienen una alta proporción de los ácidos grasos esenciales W3 (18:2W6 y 18:3W3) (Watanabe et al., 1983).

La calidad nutricional de Artemia varía de un aislamiento a otro, de tal forma que en el mercado internacional alcanzan un alto valor aquellas cepas de Artemia cuyos quistes poseen concentraciones altas de aminoácidos esenciales y ácidos grasos.

En Latinoamérica y el Caribe se reporta un gran número de localidades en donde se produce Artemia en forma natural en salinas y zonas estuarinas, de las que se conoce muy poco en relación a su producción, caracterización de la cepa (biología básica, análisis proximal, ecología), y potencialidad de industrialización para ser utilizadas en Acuacultura. Es importante el desarrollo de trabajos de investigación que permitan la explotación de este importante recurso en los países latinoamericanos y del Caribe.

TABLA 2. ANALISIS PROXIMAL Y MINERAL DE LA COMPOSICION DE HUEVOS Y

NAUPLIOS DE Artemia DE TRES LOCALIDADES  Huevos Artemia Nauplios de Artemia

(recién eclosionados)Compuestos

San Francisco

S. America

Canada

San Franciso

S. America

Canada

Humedad %

- - - 89.7 90.9 88.2

Proteína %

54.4 51.5 47.5 6.1 6.5 6.8

Grasa % 6.4 10.5 4.8 2.0 1.6 2.1Ceniza % 6.3 13.0 15.3 1.2 1.0 1.5Ca mg/g 3.73 2.21 1.41 0.23 0.24 0.41Mg  " 2.80 2.53 5.59 0.44 0.20 0.68P     " 7.60 6.95 7.63 1.33 1.21 1.44Na   " 6.13 31.91 28.58 4.02 1.43 4.93K     " 5.73 5.34 7.12 1.08 0.96 1.16Fe μ/g 1298 1277 1022 52.2 294.6 287.3Zn  " 91.2 96.0 61.4 16.1 21.1 24.1Mn " 98.3 50.9 14.8 2.1 2.6 3.7Cu  " 10.6 9.1 15.9 0.6 1.1 1.9

* Watanabe et. al. (1983)

TABLA 3. COMPOSICION DE ACIDOS GRASOS (%) DE NAUPLIOS (RECIEN

ECLOSIONADOS) DE Artemia EN CUATRO LOCALIDADES

ACIDOS GRASOS

RAC

Bahía de San Pabl

o

Canadá

China

Francia

14:0 1.79 0.43 0.83 1.80 1.7314:1 2.92 2.26 1.67 2.24 3.0316:0 12.7

07.79 9.99 11.4

011.90

16:1ω7 16.78

5.24 9.03 19.06

11.34

16:3ω4/17:1ω8

4:33 2.44 1.47 2.54 2.20

18:0 4.07 3.08 5.12 3.99 4.2118:1ω9 30.3 29.1 28.24 26.8 24.73

7 5 118:2ω6* 9.62 4.60 7.95 4.68 6.1418:3ω3* 2.55 33.5

919.87 7.38 20.90

18:4ω3 nd 4.88 1.60 1.26 2.0420:2ω6/20:3ω6

0.20 0.24 0.44 0.15 1.13

20:3ω3/20:4ω6

5.82 1.48 4.21 3.34 2.45

20:5ω3** 8.45 1.68 9.52 15.35

8.01

IV. MATERIALES Y METODOS

MATERIALES

2 gr. de cistes de Artemia. Beakers, pipetas y recipientes

graduados. Botellas de plástico de 2 litros. Placas Petri. Hipoclorito de sodio (lejía

comercial). Malla de 86 µ. Equipo de iluminación. Estereoscopio. Pizetas, baguetas, espátula. Aireadores y manguerillas de

aireación. Agua salobre (agua de mar). Cámara de Sedwick Rafter. Lugol.

METODOLOGIA.

A. DESCAPSULACION.

1. Hidratación de los cistes.

2 gr. de cistes de Artemia en agua 15 ‰ con aireación constante por una hora aproximadamente.

2. Preparación de solución descapsuladora. Requerimientos de cloro activo.

0.5 gr. de Cl activo por cada gr. de cistes

Se trabajara con 2 gramos de cistes de Artemia, por lo tanto el requerimiento de Cl activo es de 1 gr.

Según la etiqueta del frasco de hipoclorito de sodio (lejía), contiene 5.25 gr. de Cl activo en 100 ml de solución, por lo que para nuestro requerimiento de 1 gr. de cloro activo tendremos que pipetear aproximadamente 19ml de hipoclorito de sodio (lejía).

Colocar los cistes en la solución descapsuladora preparada con aireación por un lapso de 10 minutos.

Verificar la temperatura, la descapsulación es una reacción exotérmica, por lo cual habrá generación de calor y la temperatura debe ser siempre menor a 40°C, si se presenta una mayor temperatura, adicionar hielo.

Observar la descapsulación durante el tiempo requerido. El cambio de color de los cistes variara de color café, a gris y finalmente a anaranjado que será el color del embrión. Cuando la proporción de color de los cistes anaranjados sea mayor a los cistes de color blanco, detener la aireación y traspasar los cistes a una malla.

Seguidamente se lava con abundante agua hasta que el olor a lejía desaparezca del todo el olor fuerte a lejía (Fig. 4)

Figura 4: Lavado de cistes.

Cosechar los embriones rápidamente.

B. INCUBACION.

Colocar los cistes descapsulados a incubar, en un volumen de agua conocido (1L) con 15 ‰ de salinidad y constante aireación (Fig. 5).

Figura 5: Incubación de nauplios.

Colocar una fuente de luz a 20 cm. Esperar la eclosión en las próximas 24 horas.

C. OBSERVACION DE LOS ESTADIOS DE DESARROLLO.

Tomar una muestra de 1 ml. y diluirla en 10 ml de agua. Homogenizar y de aquí tomar una 4 sub-muestras de 1 ml. cada una.

Homogenizar y de aquí tomar una 4 sub-muestras de 1 ml. cada una. Aplicar lugol a cada una de las sub-muestras. Realizar el conteo de nauplios en los 3 estadios naupliares. Luego de realizar el conteo en una placa de Sedwick Rafter, sumar todo lo

contado y dividirlo entre 4. Multiplicarlo por 10 y esto nos dará la cantidad estimada de nauplios en 1 ml.

Multiplicar por 1000 para totalizar la cantidad de nauplios que se encontraran en 1L.

V. CALCULOS Y RESULTADOS

Un representante de la mesa 3, el compañero Luis Bardales realizando el conteo de las artemias e identificandolas por estadios con la cámara de sedwick rafter. Y se obtuvo los siguientes resultados:

Figura 6. Conteo de Artemias.

TABLA 4. Conteo por estadio

Se hizo 4 conteos de nauplios, en los cuales se contabilizo la cantidad de nauplios que hay en cada estadio E1, E2 Y E3; seguidamente se obtuvo un promedio de estas cantidades, luego se redondeo esta cantidad y se le multiplico por 10 debido a que estaba diluido en una solución de 10ml.

30 nauplios E1 ---------- 1mlX -----------800ml X= 24000 nauplios E1

120 nauplios E2-------1 mlY ---------800ml Y= 96000 nauplios E2

30 nauplios E3 ---------1mlZ -----------800mlZ= 24000 nauplios E3

Nº de conteo E-1 E-2 E-31 2 11 22 3 13 33 4 12 1

4 3 13 4Total 12 49 10

Promedio 3 12.25 2.5

Redondeo 3 12 3

Figura 7. Aireación de la sol. Descap. Figura

8. Incubación de los cistes.

VI. DISCUSIONES

Dados los resultados en la tabla anterior, se puede observar el conteo realizado en los tres estadios posteriores al proceso de incubación y descapsulación de Artemia salina. Según lo observado en el conteo de los tres estadíos, se obtuvo para estadío 1 (E1), 24000 individuos en 800 ml, estadío 2 (E2), 96000 individuos en 800 ml, y estadío 3 (E3), 24000 individuos en 800 ml. Cabe recalcar que hubo un derramamiento de agua, por lo cual estamos considerando 800 ml de solución. En los resultados obtenidos se puede comprobar que a medida que pase el tiempo de incubación de los cistes (ya transcurrido de 15 a 20 horas) es más notorio su desarrollo larval siendo los más abundantes en la observación los embriones que han dejado definitivamente la cáscara y el cual cuelga hacia abajo de la cáscara conocido como estado E-2, posiblemente debido al tiempo expuesto al cloro.Es posible que los cistes no eclosionaron totalmente debido a que no estuvieron cerca de la temperatura óptima de eclosión de quistes: 25 a 30°C.La deficiencia de oxígeno puede ser otro factor que impidió la eclosión de los cistes. Puesto que en el metabolismo de Carbohidratos de Artemia, la presencia de O2 es relevante. Para conseguir una eclosión eficiente se recomiendan altos niveles de O2 (condiciones anaeróbicas afectan la eclosión y el metabolismo de Carbohidratos.)

VII. CONCLUSIONES

Se puede concluir que la mayor cantidad de cistes en estadio E2 se debió al exposición de cloro, ya que mientras más tiempo transcurre en él se puede dar un mayor desarrollo de los nauplios.Se pudo observar que los cistes de Artemia se desarrollaron hasta el estadio E3 debido a que estuvieron por un tiempo en condiciones optimas de oxigeno, que facilito el desarrollo de los nauplios de Artemia.

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Artemia, descapsulación, incubación Setiembre 2009, Galicia. http://www.drpez.net/panel/showthread.php?t=368580

Metodo para descapsular Artemia. Setiembre 2010. Granada http://www.elacuario.es/foro/acuariofilia-general/9507-metodo-para-descapsular-artemia.html

Método de descapsulación de nauplios de Artemia sp. para la alimentación de camarones peneidos. Cecilia Vanegas Pérez y Cecilia Robles Mendoza

La producción de alimento vivo y su importancia en la acuicultura. Una diagnosis. FAO Italia. http://www.fao.org/docrep/field/003/ab473s/AB473S04.htm

Descapsular Artemia salina técnicas y equipos acuariófilos. Abril 2011 http://www.aquanovel.com/artemia.htm