Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

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Universidad de La Salle Universidad de La Salle Ciencia Unisalle Ciencia Unisalle Ingeniería Ambiental y Sanitaria Facultad de Ingeniería 2015 Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente de una Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente de una empresa indumotora utilizando organismos del género Daphnia empresa indumotora utilizando organismos del género Daphnia Ángela María Avendaño Andrade Universidad de La Salle, Bogotá Liliana Mora Araque Universidad de La Salle, Bogotá Follow this and additional works at: https://ciencia.lasalle.edu.co/ing_ambiental_sanitaria Part of the Environmental Engineering Commons Citación recomendada Citación recomendada Avendaño Andrade, Á. M., & Mora Araque, L. (2015). Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente de una empresa indumotora utilizando organismos del género Daphnia. Retrieved from https://ciencia.lasalle.edu.co/ing_ambiental_sanitaria/982 This Trabajo de grado - Pregrado is brought to you for free and open access by the Facultad de Ingeniería at Ciencia Unisalle. It has been accepted for inclusion in Ingeniería Ambiental y Sanitaria by an authorized administrator of Ciencia Unisalle. For more information, please contact [email protected].

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Universidad de La Salle Universidad de La Salle

Ciencia Unisalle Ciencia Unisalle

Ingeniería Ambiental y Sanitaria Facultad de Ingeniería

2015

Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente de una Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente de una

empresa indumotora utilizando organismos del género Daphnia empresa indumotora utilizando organismos del género Daphnia

Ángela María Avendaño Andrade Universidad de La Salle, Bogotá

Liliana Mora Araque Universidad de La Salle, Bogotá

Follow this and additional works at: https://ciencia.lasalle.edu.co/ing_ambiental_sanitaria

Part of the Environmental Engineering Commons

Citación recomendada Citación recomendada Avendaño Andrade, Á. M., & Mora Araque, L. (2015). Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente de una empresa indumotora utilizando organismos del género Daphnia. Retrieved from https://ciencia.lasalle.edu.co/ing_ambiental_sanitaria/982

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DETERMINACION DE LA CL50 PARA UN VERTIMIENTO PROVENIENTE

DE UNA EMPRESA INDUMOTORA UTILIZANDO ORGANISMOS DEL

GENERO DAPHNIA

ANGELA MARIA AVENDAÑO ANDRADE

LILIANA MORA ARAQUE

FACULTAD DE INGENIERÍA

PROGRAMA DE INGENIERÍA AMBIENTAL Y SANITARIA

BOGOTÁ D.C

2015

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DETERMINACION DE LA CL50 PARA UN VERTIMIENTO PROVENIENTE

DE UNA EMPRESA INDUMOTORA UTILIZANDO ORGANISMOS DEL

GENERO DAPHNIA

ANGELA MARIA AVENDAÑO ANDRADE

LILIANA MORA ARAQUE

Tesis de Grado para Optar

Al Título de Ingenieros Ambientales y Sanitarios

Director

PEDRO MIGUEL ESCOBAR MALAVER

Químico industrial

Lic. Química y biología

Msc. Alta gestión, consultoría y verificación medio ambiental

Msc. Residuos urbanos e industriales

FACULTAD DE INGENIERÍA

PROGRAMA DE INGENIERÍA AMBIENTAL Y SANITARIA

BOGOTÁ D.C

2015

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NOTA DE ACEPTACION:

…………………………………………………………………..

…………………………………………………………………..

…………………………………………………………………..

…………………………………………………………………..

…………………………………………………………………..

………………………………………………………………………………………

FIRMA DIRECTOR DE TESIS

………………………………………………………………………………………

FIRMA JURADO 1

………………………………………………………………………………………

FIRMA JURADO 2

BOGOTA D.C., 2015

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AGRADECIMIENTOS

A Dios por haberme permitido lograr uno de mis sueños, a mis padres por haberme

apoyado en todo el proceso de formación profesional y a mi compañera de tesis

por haber compartido conmigo la elaboración de nuestro proyecto de grado.

Liliana Mora

Quisiera agradecer a Dios por permitirme sacar adelante esta meta propuesta, que es el

inicio de muchas otras. A mis papas por su apoyo incondicional, por acompañarme en

todo el proceso académico y de formación personal. A mi compañera de tesis por

participar en la elaboración de este nuestro proyecto de grado y haberlo sacado adelante

con tanto esfuerzo.

Ángela María Avendaño

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1

Contenido

GLOSARIO .................................................................................................................................... 5

INTRODUCCION ........................................................................................................................ 10

RESUMEN ................................................................................................................................... 12

ABSTRACT .................................................................................................................................. 13

1. OBJETIVOS .......................................................................................................................... 14

1.1 OBJETIVO GENERAL ...................................................................................................... 14

1.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS .............................................................................................. 14

2. MARCO TEORICO .............................................................................................................. 15

2.1. BIOENSAYOS................................................................................................................... 15

2.1.1. Tipos de bioensayos..................................................................................................... 15

2.2. TOXICIDAD .................................................................................................................. 16

2.2.1. Clasificación de la toxicidad ................................................................................... 17

2.3. DETERGENTES ............................................................................................................ 17

2.3.1. Coadyuvantes .......................................................................................................... 18

2.3.2. Tensoactivos ........................................................................................................... 18

2.4. EFECTOS DE LOS DETERGENTES EN LA SALUD ............................................... 20

2.4.1. Elemento tóxico ...................................................................................................... 20

2.4.2. Síntomas .................................................................................................................. 20

2.5. EFECTOS DE DETERGENTES EN EL MEDIO AMBIENTE ................................... 21

2.6. EFECTOS DE LOS DETERGENTES EN EL TRATAMIENTO DE AGUAS

RESIDUALES .......................................................................................................................... 25

2.6.1 PARAMETROS FISICOQUIMICOS PARA LA DETERMINACION DE LA

CALIDAD DE AGUA .............................................................................................................. 26

2.6.1.1 Temperatura ............................................................................................................... 26

2.6.1.2 Potencial de hidrogeno .............................................................................................. 26

2.6.1.3 Caudal ........................................................................................................................ 27

2.6.1.4 Sólidos suspendidos totales ....................................................................................... 27

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2

2.6.1.5 Sólidos sedimentables ................................................................................................ 28

2.7. Daphnia pulex ................................................................................................................ 28

2.7.1. Hábitat ..................................................................................................................... 30

2.7.2. Condiciones ideales de mantenimiento de cultivo de laboratorio. ......................... 31

2.7.3. Alimentación ........................................................................................................... 32

2.7.4. Morfología .............................................................................................................. 34

2.7.5. Ciclo de Vida .......................................................................................................... 35

2.7.6. Selección ................................................................................................................. 36

2.7.7. Importancia ecológica de Daphnia pulex. .............................................................. 37

2.8. PROCEDENCIA DEL VERTIMIENTO ....................................................................... 37

3. METODOLOGIA .................................................................................................................. 40

3.1. FASE 1. CARACTERIZACIÓN FISICOQUIMICA .................................................... 41

3.1.1. Determinación de parámetros a medir .................................................................... 41

3.1.2. Selección de puntos de muestreo ............................................................................ 43

3.1.3. Descripción del muestreo ........................................................................................ 44

3.1.4. Análisis in-situ ........................................................................................................ 46

3.1.5. Composición de la muestra ..................................................................................... 47

3.1.6. Análisis en el laboratorio ........................................................................................ 48

3.2. FASE 2. MANTENIMIENTO DEL CULTIVO (Daphnia pulex) ................................ 49

3.2.1. Preparación del agua reconstituida ......................................................................... 49

3.2.2. Ensayo de viabilidad ............................................................................................... 51

3.2.3. Preparación del medio bristol y cultivo de algas verdes ......................................... 51

3.2.4. Prueba – Alimento .................................................................................................. 53

3.2.5. Prueba - Aclimatación............................................................................................. 54

3.2.6. Mantenimiento del cultivo de los organismos (Daphnia pulex) ............................. 55

3.2.7. Separación de organismos: ..................................................................................... 56

3.2.8. Limpieza: ................................................................................................................ 58

3.3. FASE 3. ENSAYOS DE TOXICIDAD (Preliminares y Definitivas) ........................... 59

3.3.1. Pruebas de sensibilidad ................................................................................................ 60

3.3.2. Montaje de las pruebas de toxicidad (bioensayos) ...................................................... 60

3.4. FASE 4. OBTENCIÓN DE RESULTADOS ................................................................. 63

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3

3.4.1 Validación de resultados por medio de la determinación del índice toxicológico ....... 63

3.4.1.2 Corrección por caudal al IT de entrada ..................................................................... 65

3.4.1.5. Corrección por caudal del IT a la salida ................................................................... 65

3.4.3 Validación de resultados por medio Del coeficiente de variación. ............................ 65

4. ANALISIS DE RESUTADOS Y RESULTADOS ............................................................... 67

4.1. CARACTERIZACION FISICOQUIMICA DEL VERTIMIENTO .............................. 67

4.1.1. Características del vertimiento en cada punto de muestreo .................................... 67

4.1.2. Características de la muestra primer punto ............................................................. 67

4.1.3. Características de la muestra segundo punto (caja de inspección) ......................... 68

4.1.4. Aforo de caudal ....................................................................................................... 69

4.1.5. Análisis IN- SITU .................................................................................................... 69

4.1.6. Análisis en el laboratorio ........................................................................................ 71

4.2. PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ................................................................................... 73

4.2.1. Análisis ANOVA para las pruebas de sensibilidad con Dicromato de Potasio........... 76

4.3. PRUEBAS DE TOXICIDAD CON EL VERTIMIENTO ............................................. 79

4.3.1. Pruebas de toxicidad con muestra de agua antes de ser sometida a tratamiento ......... 79

4.3.1.1. Análisis ANOVA para las pruebas de toxicidad con el agua residual antes de ser

sometida a tratamiento ........................................................................................................... 81

4.3.1.2. Análisis ANOVA para las pruebas de toxicidad con el vertimiento ........................ 84

4.4. CARGA TÓXICA E ÍNDICE TÓXICOLÓGICO......................................................... 87

4.4.1. Carga toxicológica del afluente de la trampa de grasas .......................................... 87

4.4.2. Índice toxicológico del afluente de la trampa de grasas ......................................... 87

4.4.3 Corrección por caudal al IT de entrada ........................................................................ 87

4.4.3. Carga toxicológica del vertimiento a la salida de la trampa de grasas ................... 88

4.4.4. Índice toxicológico del afluente de la trampa de grasas ......................................... 88

4.4.5. Corrección por caudal del IT a la salida ................................................................. 89

4.5. COEFICIENTE DE VARIACION ................................................................................ 90

4.5.1. Media a la entrada del tratamiento .......................................................................... 90

4.5.2. Media a la salida del tratamiento ............................................................................ 90

4.5.3. Desviación estándar ................................................................................................ 90

4.5.4. Coeficiente de variación a la entrada del tratamiento ............................................. 93

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4

4.5.5. Coeficiente de variación a la salida del tratamiento ............................................... 93

5. CONCLUSIONES ................................................................................................................. 94

6. RECOMENDACIONES ....................................................................................................... 96

7. BIBLIOGRAFIA ................................................................................................................... 97

ANEXOS .................................................................................................................................... 100

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5

GLOSARIO

ACLIMATACIÓN: Es la adaptación fisiológica a un nivel particular de una o más

variables ambientales. El término es generalmente referido al control en condiciones de

laboratorio. (ebookbrowsee, 2013)

AGUA DE DILUCIÓN: El agua natural o reconstituida que por las características

óptimas que presenta para la sobrevivencia y reproducción de los organismos usados en

pruebas de toxicidad, es utilizada para preparar las diferentes diluciones o

concentraciones efectuadas durante una prueba, sea ésta exploratoria o definitiva.

(ebookbrowsee, 2013)

AGUA DESTILADA: Agua que ha sido evaporada y condensada en un aparato de

destilación de vidrio borosilicato u otro material, para remover impurezas.

(ebookbrowsee, 2013)

AGUA RECONSTITUIDA: Es agua destilada con adición de reactivos. El resultado

es agua dulce sintética libre de contaminantes y con características deseables de dureza.

Se prepara con sales inorgánicas en cantidad requerida por el organismo prueba.

(ebookbrowsee, 2013)

BIOENSAYO: El concepto de bioensayo o prueba de toxicidad se deriva de la

toxicología clásica, esta definición actualmente ha sido modificada, adaptada y

extendida al diagnóstico y manejo ambiental. Estas técnicas bioanalíticas son

consideradas complementarias de los análisis fisicoquímicos convencionales y son

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6

alternativas eficaces para la predicción de niveles seguros de concentración de tóxicos

en los que no se generan efectos observables. (Díaz Báez, Bistos López, & Espinosa

Ramirez, 2004)

BIOENSAYOS ACUÁTICOS: Son los procedimientos por los cuales las respuestas de

organismos acuáticos se usan para detectar o medir la presencia o efectos de una o más

sustancias, elementos, compuestos, desechos o factores ambientales solos o en

combinación. (ebookbrowsee, 2013)

BUENAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO (BLP, en inglés GLP): normas

fundamentales incorporadas en las legislaciones nacionales, relativas a la organización

y las condiciones en la que los estudios de laboratorio deben ser planificados,

realizados, controlados, registrados y resumidos en un informe.

CARGA TÓXICA: “La importancia de una descarga sobre el cuerpo receptor esta

conferida no solo por sus concentraciones tóxicas, sino por la cantidad total de tóxico en

un volumen dado de descarga”. (Castillo , 2004)

CL50: concentración letal media, concentración del material en agua, suelo o sedimento

que se estima letal para el 50% de los organismos de ensayo. La CL50y sus límites de

confianza (95%) son usualmente derivados de análisis estadístico. (Castillo , 2004)

CONCENTRACIÓN: En una disolución, relación que existe entre la cantidad de

sustancia disuelta y la del disolvente. (Online Langiaje Dictionaries, Online)

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CONCENTRACIÓN LETAL (CL): Es la concentración de una sustancia (pura o

combinada), o efluente que produce la muerte del organismo. (Online Langiaje

Dictionaries, Online)

CURVA CONCENTRACIÓN – RESPUESTA: Grafico que relaciona la

concentración de la exposición y la proporción de individuos de la población que

manifiesta un efecto determinado. (Jimenez Repetto & Reppetto kuhn, 2009)

CONTAMINANTE: Sustancia ajena, presente en un sistema natural en una

concentración más elevada de lo normal por causa de actividad antrópica directa o

indirecta. En un sentido más amplio se le define como la presencia de cualquier agente

físico, químico o biológico, o de combinaciones de los mismos en lugares, formas y

concentraciones tales y con tal duración que sean o puedan ser nocivos para la salud, la

seguridad o bienestar de la población, o perjudiciales para la vida animal y vegetal, o

que impidan el uso y goce de las propiedades y lugares de recreación. (Castillo , 2004)

Daphnia pulex (cladóceros): Daphnia pulex es la especie más común del grupo de

organismos conocidos como pulgas de agua. Su nombre común se dio a causa de su

aspecto general y espasmódicos movimientos de natación que se asemeja a la de la

pulga de la tierra. Ellos están, en realidad, un tipo de pequeño crustáceo y son

generalmente 0,2-3,0 mm de largo. Sus cuerpos no están claramente segmentados, pero

una característica importante de su anatomía es el caparazón, una estructura en forma de

concha plegada que cubre al animal y lo abre ventralmente y posteriormente. El estudio

de la anatomía de este organismo se hace más fácil por el hecho de que la mayor parte

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8

de su cubierta exterior es clara, mostrando la mayoría de los órganos internos en el

trabajo, incluyendo el corazón. (University of Michigan, MUSEUM OF ZOOLOGU M,

2000).

DILUCIÓN: Consiste en disminuir la concentración de un soluto en una solución con

la adición de más solvente. (Franco, Yepes, & Vargas, 2008)

DOSIS LETAL: La prueba DL50 se desarrolló en 1927 para medir la toxicidad aguda

de ciertos compuestos en animales vivos. Consiste en la administración forzada

mediante ingesta, inhalación o vías parenterales, de distintas cantidades de una

sustancia, lo que conlleva dolorosas y agonizantes consecuencias para los animales

(dolor, convulsiones, diarrea, hemorragias nasales y bucales, vómitos, muerte).

(ANIMA NATURALIAS, 2013).

DUREZA: Concentración de compuestos minerales que hay en una determinada

cantidad de agua, en particular sales de magnesio y calcio. (Serveriche Sierra, Castillo

Bertel , & Acevedo Barrios, 200)

TÓXICO DE REFERENCIA: Es una sustancia química utilizada en bioensayos de

toxicidad, cuyo efecto en los organismos a determinadas concentraciones es conocidoy

por lo tanto, permite establecer el estado de respuesta de los organismos de prueba

empleados, así como comparar los resultados intra e inter laboratorios . El uso de estos

tóxicos, proporciona también una evaluación general de la precisión (estabilidad y

respetabilidad) del método a través del tiempo. (ebookbrowsee, 2013)

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TÓXICOLOGÍA: Consiste en un estudio integrado o multidimensional de la respuesta

de los organismos frente a los tóxicos, aplicando tanto los métodos tradicionales como

los modernos, es decir, la observación clínica, el análisis químico toxicológico, la tóxico

cinética, los análisis bioquímicos y biomarcadores (de exposición, de efecto y de

susceptibilidad), los estudios histológicos, el análisis molecular de expresión de genes,

tóxicogenómica (transcriptó- mica), tóxicoproteómica y metabonómica, etc. que puedan

dilucidar nuevas vías y redes mecanísticas. (Jimenez Repetto & Reppetto kuhn, 2009)

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INTRODUCCION

La descarga de compuestos peligrosos al medio ambiente, intencional o no, podrá

causar consecuencias serias, las cuales serán mayores cuando se generan y manejan

grandes cantidades de químicos que no existían anteriormente en la naturaleza y para

los cuales no existen procesos físicos o biológicos que permitan su degradación a

formas inocuas. (Díaz Báez, Bistos López, & Espinosa Ramirez, 2004).

Uno de los problemas presentados en el control ambiental es la contaminación de

los cuerpos de agua por diferentes vertimientos tóxicos, por ello es necesaria la

determinación de la toxicidad de estos, para así tomar medidas rigurosas de control.

El método más utilizado para la evaluación de la toxicidad de sustancias (vertimientos)

que afectan en alguna medida al medio ambiente son los bioensayos, los cuales son

herramientas ampliamente utilizadas en el campo de la ecotóxicología, la cual se ocupa

del estudio del efecto y destino de los agentes tóxicos de origen antropogénico a los

ecosistemas acuícolas y terrestres (Larrain 1995,P. 89).

El organismo seleccionado para la realización del análisis con el método de

bioensayos fue la Daphnia pulexy el vertimiento corresponde al de una industria

indumotora con contenido de detergentes.

Es necesario el estudio de los detergentes como agente tóxico potencial de los

vertimientos y la evaluación de este frente al medio ambiente y los organismos vivos,

determinando los daños que generan puesto que a pesar de que los detergentes son

sustancias con un nivel tóxico menor a otras, como metales pesados, suelen causar gran

afectación a microorganismos y organismos animales y vegetales, en suelos y cuerpos

de agua, alterando su ciclo de vida natural gracias a sus componentes.

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11

El siguiente proyecto muestra los resultados obtenidos de la investigación

realizada a través de Bioensayos, determinando la concentración de CL 50 del

vertimiento de una de las sedes de Praco Didacol e identificando el efecto del mismo

sobre el recurso hídrico ayudados de resultados de análisis fisicoquímicos.

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12

RESUMEN

Con esta investigación se determinó la concentración letal media de un vertimiento con

contenido de detergentes proveniente de una empresa indumotora, por medio de bioensayos de

toxicidad acuática realizados utilizando organismos Daphnia pulex. Se realizó el respectivo

montaje para la supervivencia del cultivo, estos, se aclimataron durante 15 días y después se

retuvieron en las instalaciones de los laboratorios de la Universidad de la Salle con fines de

realizar las pruebas donde se obtuvo el valor de sensibilidad de los organismos para verificar la

respuesta de estos al vertimiento con contenido de detergentes. La preparación de las sustancias

de referencia con vertimiento se realizó a través de ensayos preliminares y definitivos con los

tóxicos de referencia, se obtuvo la CL50 de vertimiento con contenidos de detergentes mediante

el método PROBIT y aceptabilidad de los resultados obtenidos por medio del análisis de

varianza ANOVA. Los organismos escogidos fueron Daphnia pulex por su gran importancia en

la cadena alimenticia media y por ser sensibles a todos los tipos de toxicidad presentes en el

medio acuático. Los ensayos fueron realizados en el laboratorio de bioensayos de la

Universidad de la Salle, basados en los protocolos establecidos por CETESB. Como resultado

final se determinó el valor de CL50 para un vertimiento con contenido de detergentes sin ser

sometido a tratamiento de 1,51 %. Y para un vertimiento con contenido de detergentes después

de ser sometido a un tratamiento de agua residual se determinó un valor de CL50 de 36,53 %.

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13

ABSTRACT

This research determined the median lethal concentration of a shedding containing

detergent, through aquatic toxicity bioassays conducted using organisms Daphnia pulex.

Mounting the respective crop survival was performed; they were acclimated for 15 days

and then retained in the laboratory facilities of the University La Salle. The

accomplishment of the tests was the value of sensitivity of organisms to verify the

response of these dumping containing detergents. The preparation of the reference

substances with shedding were made through preliminary and final tests with reference

tóxicants, the LC50 of shedding with detergent content was obtained by the probit

method and acceptability of the results obtained by analysis of variance ANOVA. The

organisms were Daphnia pulex chosen for their great importance in the food media

chain and to be sensitive to all types of toxicity in the aquatic environment. The tests

were conducted in laboratory bioassays Salle University, based on protocols established

by CETESB. As a final result was determined LC50 value for shedding containing

detergents without being subjected to treatment was 1.51%. And for a detergent

containing shedding after being subjected to a wastewater treatment LC50 value of

36.53% was determined.

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1. OBJETIVOS

1.1 OBJETIVO GENERAL

Determinar la toxicidad de un vertimiento proveniente de una industria

indumotora con contenido de detergentes utilizando organismos del genero Daphnia.

1.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

• Establecer la sensibilidad de la Daphnia pulex mediante la exposición al Dicromato de

Potasio

•Determinar la concentración letal media de detergentes sobre Daphnia pulex en el

vertimiento de la industria indumotora.

•Determinar índice de efecto tóxico potencial (IETP) con el fin de clasificar el

vertimiento según su toxicidad.

•Evaluar la eficiencia del tratamiento realizado al vertimiento proveniente de la

industria indumotora.

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2. MARCO TEORICO

Las industrias automotrices generan vertimientos en el proceso de lavado de

autopartes. Por ende los contaminantes con mayor concentración presentes en estos

vertimientos son los tensoactivos.

Para la determinación la toxicidad de este tipo de contaminantes se debe tener en cuenta

los siguientes conceptos.

2.1. BIOENSAYOS

Los bioensayos son herramientas ampliamente utilizadas en el campo del eco

toxicología, la cual se ocupa del estudio del efecto y destino de los agentes tóxicos de

origen antropogénico a los ecosistemas acuícolas y terrestres. Estas pruebas de toxicidad

permiten realizar mediciones experimentales del efecto de agentes químicos o físicos en

sistemas biológicos, estableciendo relaciones concentración-respuesta bajo condiciones

controladas en terreno o en laboratorio. (Silva et al.2003)

2.1.1. Tipos de bioensayos.

Se pueden destacar varios tipos de pruebas de bioensayos, las cuales permiten

determinar variables cuantitativas y cualitativas como las siguientes:

• De tipo estático: Se efectúa sin la renovación continua de la cantidad constante de

las diluciones usadas en el ensayo. (FAO, 1981)

Page 21: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

16

• Sin renovación: los organismos se exponen a la misma solución de prueba y el

tiempo de duración del ensayo es el mismo 48 o 96 horas. (Esclapés, 1999)

• Con renovación: los especímenes se someten a una preparación fresca de la

misma concentración inicialmente empleada, periódicamente (generalmente cada 24

horas). (Esclapés, 1999) Tal renovación puede ser necesaria cuando importantes

sustancias tóxicas se deterioran, o son absorbidas, o se pierden por cualquier otra razón,

con suficiente rapidez para influir considerablemente con los resultados del ensayo.

(FAO, 1981)

• De flujo continuo: Circula continuamente una corriente de sustancia de prueba

nueva en contacto con los individuos experimentales. (Esclapés, 1999) Se realizan con

la renovación continua o casi continua de las diluciones sometidas al ensayo, con el fin

de mantener casi constantes las concentraciones de las sustancias tóxicas activas. (FAO,

1981)

2.2. TOXICIDAD

Las pruebas de toxicidad constituyen una herramienta eficaz para la predicción de

niveles de concentración de compuestos tóxicos, en los que mediante la analítica clásica

no se logra obtener efectos observables, extendiéndose estas evaluaciones al ámbito de

poblaciones, comunidades o ecosistemas para la identificación de elementos biológicos

en riesgo. (Castillo , 2004)

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2.2.1. Clasificación de la toxicidad

La Tabla 1 muestra la relación entre la clasificación de ensayos de toxicidad y el

objetivo del mismo.

Tabla 1

Clasificación de la toxicidad

Según su respuesta Ensayos de toxicidad aguda

Ensayos de toxicidad crónica

Según el enlace Ensayos de toxicidad directa

Ensayos de toxicidad indirecta

Según su finalidad De toxicidad de muestra única

De toxicidad de efluente

De bioestimulación

Organolépticos

Según su técnica De sistemas estáticos

De sistemas de renovación

De sistemas de flujo continuo NOTA: Forma general de clasificación de los ensayos de toxicidad. Fuente: Tesis Determinación de la

toxicidad de los detergentes mediante sistemas estáticos utilizando Daphnia pulex / Pedro Miguel Escobar

Malaver, Luis Eduardo García.

2.3. DETERGENTES

Los detergentes o agentes tensoactivos son un grupo de compuestos orgánicos que

poseen la propiedad de disminuir la tensión superficial de los líquidos en que se

encuentran disueltos. (Vargas , 2004)

Un detergente está formado por uno o más tenso activos, que constituyen la materia

viva y por un conjunto de componentes complementarios: coadyuvantes (builders),

aditivos y auxiliares de presentación o carga. (Dominguez & Asociación de

Investigación de la Industria Española de Detergentes, 1986)

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La composición de los detergentes comprende numerosos compuestos según tres

categorías importantes; Tenso activos, coadyuvantes y otros como: agentes

blanqueadores, abrillantadores, etc.

2.3.1. Coadyuvantes

Estos compuestos son sustancias que se incorporan a la formulación de un

detergente para mejorar o proteger la eficacia detersiva del tenso activo. Entre los más

frecuentes se consideran poli fosfatos, silicatos, carbonatos, citratos, etc. (Manrique ,

2009)

2.3.2. Tensoactivos

Los agentes tenso activos son aquellas sustancias que modifican las propiedades

físicas de una superficie o de una interface, reduciendo la tensión superficial. Poseen en

su estructura química dos regiones claramente diferenciadas, lo que les confiere el

carácter dual característico de todas las sustancias anfifilas. Una es la porción hidrófoba

(o apolar), que presenta afinidad por disolventes orgánicos o polares y corresponde

frecuentemente a una cadena hidrocarbonada, de tipo alquilo o alguilobenceno, de

longitud variable. La otra es la porción hidrófila (o polar), caracterizada por mostrar

atracción hacia disolventes polares, sobre todo agua y puede estar formada por átomos

de oxígeno, azufre, fosfato o nitrógeno incluidos en grupos funcionales como alcoholes,

tioles, éteres, esteres, ácidos, sulfonatos, sulfatos, fosfatos, aminas, amidas, etc. (Rosen

& Rosen, 2004)

Page 24: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

19

2.3.2.1. Clasificación de los tensoactivos o surfactantes

Los surfactantes aniónicos se disocian en un anión anfífilo y un catión, el cual es en

general un metal alcalino o un amonio cuaternario. A este tipo pertenecen los

detergentes sintéticos como los alquil benceno sulfonatos, los jabones (sales de sodio de

ácidos grasos), los agentes espumantes como el lauril sulfato, los humectantes del tipo

sulfosuccinato, los dispersantes del tipo lignosulfonatos, etc. La producción de los

surfactantes aniónicos representa alrededor del 55% de los surfactantes producidos

anualmente en el mundo. (Salager, 2002)

Los surfactantes noiónicos están en el segundo rango por orden de importancia con un

poco menos del 40% del total. En solución acuosa no se ionizan, puesto que ellos

poseen grupos hidrófilos del tipo alcohol, fenol, éter o amida. Una alta proporción de

estos surfactantes pueden tornarse relativamente hidrofílicos gracias a la presencia de

una cadena poliéter del tipo polióxido de etileno. El grupo hidrófobo es generalmente un

radical alquilo o alquil benceno y a veces una estructura de origen natural como un

ácido graso, sobre todo cuando se requiere una baja toxicidad. (Salager, 2002).

Los surfactantes catiónicos se disocian en solución acuosa en un catión orgánico

anfífilo y un anión generalmente del tipo halogenuro. La gran mayoría de estos

surfactantes son compuestos nitrogenados del tipo sal de amina grasa o de amonio

cuaternario. La fabricación de estos surfactantes es mucho más cara que la de los

anteriores y es por esta razón que no se les utilizan salvo en caso de aplicación

particular, como cuando se hace uso de sus propiedades bactericidas o de su facilidad de

adsorción sobre sustratos biológicos o inertes que poseen una carga negativa. Esta

Page 25: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

20

última propiedad hace que sean excelentes agentes antiestáticos, hidrofobantes, así

como inhibidores de corrosióny puedan ser utilizados tanto en productos industriales

como para uso doméstico. (Salager, 2002)

2.4. EFECTOS DE LOS DETERGENTES EN LA SALUD

Los detergentes son productos de limpieza potentes que pueden contener ácidos,

álcalis o fosfatos fuertes. Los detergentes catiónicos a menudo se utilizan como

germicidas (antisépticos) en hospitales y los detergentes aniónicos algunas veces se

emplean para limpiar alfombras o tapetes. La intóxicación ocurre cuando alguien

ingiere detergentes catiónicos o aniónicos. (Biblioteca Nacional de Medicina de

EE.UU, online)

2.4.1. Elemento tóxico

•Ácidos dañinos (corrosivos), como el cloruro de benzalconio

•Jabón común

2.4.2. Síntomas

La tabla 2 muestra los efectos de los detergentes en la salud correspondientes al ser

humano con la respectiva descripción de los mismos.

Page 26: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

21

Tabla 2

Efectos de los detergentes en la salud

Sangre Cambio significativo en el

nivel acido de la sangre

(equilibrio en el pH) que lleva a

daño en todos los órganos del

cuerpo.

Ojos, oídos, nariz y garganta Perdida de la visión

Fuerte dolor de garganta

Fuerte dolor o ardor en nariz,

ojos, oídos, labios o lengua

Gastrointestinales Sangre en las heces

Quemaduras y posibles

orificios en el esófago

Dolor abdominal fuerte

Vómitos

Vómitos con sangre

Corazón y sangre Desmayos

Hipotensión que se presenta

rápidamente

Pulmones y vías

respiratorias Dificultad respiratoria (por la

inhalación del detergente)

Inflamación de la garganta

causando dificultad al respirar.

Piel Quemaduras

Orificios (necrosis) en la piel

o tejidos subyacentes

Irritación NOTA. Algunos efectos representativos de los detergentes sobre la salud del ser humano. Fuente: Wax

PMyarema M. Corrosives. In: Shannon MW, Borron SW, Burns MJ, eds. Haddad and Winchester's

Clinical Management of Poisoning and Drug Overdose. 4th ed. Philadelphia, Pa: Saunders Elsevier;

2007: chap 98.

2.5. EFECTOS DE DETERGENTES EN EL MEDIO AMBIENTE

Los tensoactivos se clasifican en Aniónicos, No iónicos y catiónicos. Cada uno de

ellos tiene una característica primordial y es su concentración en el agua como lo

muestra la Tabla 3. Algunos tenso activos típicos son el tetrapropileno-benzil-sulfonato

(TPBS) en el mejor de los casos se consigue su biodegradación al 50% en las

Page 27: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

22

depuradoras urbanas, aunque existen límites establecidos admisibles para

concentraciones de tensoactivos antes de su tratamiento o depuración como lo muestra

la Tabla 4. El grupo de los nonilfenoleroxilatos se degrada también de forma muy lenta,

formándose compuestos intermedios más tóxicos que el inicial.

Según (Luna, 2009) los aspectos que se deben tener en cuenta desde un punto de

vista medioambiental son los siguientes:

BIODEGRADABILIDAD

Según la legislación vigente, en un paquete de detergente se puede poner la palabra

"biodegradable" si el tensoactivos (sustancia de los jabones que causa perjuicios a la

vida acuática) deja de tener un 90% de su propiedad de disminuir la tensión superficial

del agua 28 días después de ser vertido a ésta.

EUTROFIZACIÓN

Muchos detergentes convencionales utilizan fosfatos, fosfonatos o percarboxilatos como

potenciadores. Estas sustancias actúan como fertilizantes de las algas, haciendo que se

reproduzcan muy rápido. La gran cantidad de algas agota el oxígeno del agua, que deja

de estar disponible para la fauna acuática (microbios y peces)y genera malos olores.

Este fenómeno se llama eutrofizacióny ha causado desequilibrios muy graves en lagos y

ríos.

BLANQUEADORES

Estos productos pueden contener cloro u oxígeno. Uno de los principales problemas de

la industria del cloro es que genera sustancias organocloradas, como dioxinas y furanos,

que causan muchos problemas de salud como: disfunciones hormonales,

malformaciones en el feto y cáncer, entre otrosy debido a que no se pueden metabolizar,

Page 28: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

23

se acumulan en los tejidos de los seres vivos. Actualmente, casi no se usan

blanqueadores de este tipo para detergentes.

ANTIBACTERIALES

Últimamente, muchos detergentes convencionales contienen agentes antibacteriales No

tienen ninguna utilidad prácticay en cambio pueden causar problemas a la vida

bacteriana acuática.

Tabla 3

Tenso activos Vs. Concentración en agua bruta

TENSOACTIVOS CONCENTRACION EN

AGUA BRUTA (mg/L)

Aniónicos 4 – 20

No-iónicos 2 – 6

Catiónicos 1 – 2 NOTA: Concentraciones de los diferentes tipos de tensoactivos en agua bruta Fuente: Instituto

Sindical de Trabajo, Ambiente y Salud. (s.f.). ISTAS. Obtenido de http://www.istas.net/web/portada.asp.

Tabla 4

Valores de porcentaje de eliminación de tensoactivos

Grupo Tensoactivos % de eliminación

Aniónicos Alquilobenceno

sulfonato

50-70

Alquil silfato (C12) 0-10

Alquileter sulfato 50-70

No-iónicos Alcohol graso etox.

(C12-C14)

0-10

Nonilfenol etoxilado 0-10

Catiónicos Diestearil dimetil

amonio

90-100

Hexadecil

trimetilamonio

15-30

NOTA: Porcentajes sobresalientes de depuración de tensoactivos. Fuente: Instituto Sindical

de Trabajo, Ambiente y Salud. (s.f.). ISTAS. Obtenido de http://www.istas.net/web/portada.asp

Page 29: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

24

Los jabones son sustancias que alteran la tensión superficial (disminuyen la

atracción de las moléculas de agua entre sí en la superficie) de los líquidos,

especialmente el agua, este fenómeno permite que el oxígeno disuelto en el agua escape

con mayor facilidad ocasionando el deterioro de la calidad del cuerpo de agua. Este tipo

de sustancias se denominan tensoactivas.

La mayoría de los detergentes son compuestos de sodio del sulfonato de benceno

substituido, denominados sulfatos lineales de alquilos (LAS), hay otros que son los

alquilbencen sulfatos de cadena ramificada (ABS) que se degradan más lentamente que

los LAS. El extremo sulfato es soluble en agua y el extremo del hidrocarburo es soluble

en aceite. La ventaja de los detergentes es que no forman natas con el agua dura.

(Canjura & Lemus, 2003)

Por su amplia utilidad los detergentes se usan tanto en la industria como en los

hogares, sin embargo, puesto que se emplean en grandes cantidades constituyen una

fuente de contaminación del agua. En cuanto a la biodegradabilidad, tanto los

detergentes como los jabones son biodegradables, pero la biodegradabilidad se ve

limitada si estos compuestos se encuentran en exceso en un cuerpo de agua. (Texas,

2008)

Uno de los principales problemas que causa el uso de detergentes, es que los de tipo

comercial deben contener ciertos aditivos que se pueden convertir en graves

contaminantes del agua. El principal aditivo de los detergentes es un compuesto

llamado tripolifosfato de sodio, al que se le denomina en forma genérica como fosfato.

Page 30: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

25

Actualmente se encuentran en mercado los llamados detergentes anti-bacteriales,

los cuales contienen agentes bactericidas, esto en parte es bueno pero si se usa este

detergente en exceso, entonces el agente bactericida llega a los cuerpos de agua y mata

una buena proporción de los microorganismos presentes en éste, disminuyendo la

capacidad de los microorganismos para degradar al detergente. (TRIPOD, 2000)

2.6. EFECTOS DE LOS DETERGENTES EN EL TRATAMIENTO DE AGUAS

RESIDUALES

Cuando se desecha el detergente fosfatado, los fosfatos son arrastrados por el

drenaje y la mayoría de las plantas de tratamiento de aguas negras no están diseñadas

para eliminar fosfatos y por lo tanto, éstos pasan al medio ambiente acuático a través del

efluente de las agua negras. Se calcula que alrededor del 50% de los fosfatos de las

aguas negras provienen de los detergentes, el porcentaje restante se deriva de

compuestos fosforosos de desechos humanos y animales y fertilizantes de fosfato. El

problema de los fosfatos, es que actúa como elemento nutritivo para algas y plantas

acuáticas, lo que a su vez provoca la degradación de las aguas naturales.

La espuma producida en plantas de tratamiento de agua provoca problemas de

operación, afecta la sedimentación primaria ya que engloba partículas haciendo que la

sedimentación sea más lenta, dificulta la dilución de oxígeno atmosférico en agua y

recubre las superficies de trabajo con sedimentos que contienen altas concentraciones de

surfactantes, grasas, proteínas y lodos. (TRIPOD, 2000)

Entre otros efectos secundarios producidos por los detergentes es que afectan los

procesos y producen cambios en la demanda bioquímica de oxígeno y en los sólidos

Page 31: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

26

suspendidos, efectos corrosivos en algunas partes mecánicas de las plantas,

interferencias en el proceso de cloración y en la determinación de oxígeno disuelto y

algunos aditivos en los detergentes pueden intervenir en la formación de flóculos.

(Mohander, 2013)

2.6.1 PARAMETROS FISICOQUIMICOS PARA LA DETERMINACION DE

LA CALIDAD DE AGUA

Dentro de los parámetros existentes para la determinación de la calidad de agua se

encuentran:

2.6.1.1 Temperatura

La determinación exacta de la temperatura es importante para diferentes procesos

de tratamiento y análisis de laboratorio, puesto que, por ejemplo, el grado de saturación

de oxígeno disuelto, la actividad biológica y el valor de la saturación con carbonato de

calcio se relacionan con la temperatura. (Romero, 2009).

2.6.1.2 Potencial de hidrogeno

El término pH es una forma de expresar la concentración del ion hidrogeno o, más

exactamente, la actividad del ion hidrogeno (H+). En general se usa para expresar la

intensidad de la condición acida o alcalina de una solución, sin que esto quiera decir que

mida la acidez total o la alcalinidad total. (Romero, 2009)

Page 32: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

27

2.6.1.3 Caudal

La medición de caudal se puede desarrollar por métodos diferentes y su elección

depende del tipo de fuente que se pretenda aforar, de las características del sitio y de las

condiciones al momento de su realización, uno de estos métodos es el volumétrico;

realizando la medición manual del caudal utilizando un cronómetro y un recipiente

aforado, en este caso un balde.

El procedimiento a seguir es tomar un volumen de muestra cualquiera (V) y medir

el tiempo transcurrido (t) desde que se introduce a la descarga hasta que se retira de ella;

la relación de estos dos valores permite conocer el caudal (Q) en ese instante de tiempo.

Se debe tener un especial cuidado en el momento de la toma de muestra. (Hernandez

Muñoz, 1998)

2.6.1.4 Sólidos suspendidos totales

Los sólidos suspendidos totales es un parámetro asociado con pequeñas

cantidades de materia orgánica y material suspendido. El principal interés de este

parámetro, asociado con la turbidez del agua natural, se relaciona con la destinación del

recurso para el consumo público y con las condiciones de vida de la fauna acuática. Una

alta concentración de sólidos producirá disturbios en el crecimiento de los huevos de los

peces, modifica su movimiento natural, su migración y reduce la abundancia de

alimentos. (Ramalho, Lora, & Beltran, 1996)

Page 33: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

28

2.6.1.5 Sólidos sedimentables

Los sólidos sedimentables son el grupo de sólidos cuyos tamaños de partículas

corresponde a diez o más micras y se pueden sedimentar. Son los sólidos más pesados

que al tratarlos con elementos químicos, por el propio tratamiento sedimentan en el

fondo del lugar de tratamiento de las aguas.

Los sólidos sedimentables están formados por partículas más densas que el agua,

se mantienen dispersos dentro de ella en virtud de la fuerza de arrastre causada por el

movimiento o turbulencia de la corriente. Por esta razón, sedimentan rápidamente por

acción de la gravedad cuando la masa de agua se mantiene en reposo. La turbidez va en

directa relación con los sólidos sedimentables en la muestra de agua. (Ramalho, Lora, &

Beltran, 1996).

2.7. Daphnia pulex

En general las Daphnia son micro crustáceos de agua dulce que habitan en aguas

estancadas o de movimiento muy ligero. También ha sido localizada en las

proximidades de lagos y lagunas de agua salobre. Por su forma de natación se las

conoce como "Pulgas de Agua", la figura 1 muestra la estructura de cómo es una

Daphnia pulex en general.

Page 34: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

29

Figura 1 Organismo DAPHNIA pulex Fuente: (s.f.). Recuperado el 21 de Noviembre de 2014, de www.dr-ralf-

wagner.de/Bilder/

Las pulgas de agua como Daphnia pulex, son parte integral de los consumidores

primarios de los sistemas acuáticos, participa en el movimiento de sustancias y energía,

obteniendo ésta por transformación de materia orgánica, especialmente de organismos

vivos. Este organismo planctónico se apodera de otros más pequeños y sirve de

alimento de muchos animales más grandes como los peces por tanto es fuente de

alimento de consumidores secundarios, es decir, sirve de puente en la cadena trófica

entre un productor y un consumidor, la tabla 5 muestra la respectiva clasificación

científica.. (Canjura & Lemus, 2003)

Page 35: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

30

Tabla 5

Clasificación científica

CLASIFICACION CIENTIFICA

Philum Artropoda

Clase Crustáceo

Subclase Branchiopoda

Orden Anomopoda

Suborden Cladócera

Familia Daphniidae

Genero Daphnia

Subgéneros -Ctenodaphnia

-Hyalodaphnia NOTA: Clasificación científica de organismos de género Daphnia. Fuente: SIB. (s.f.). Administración de

Parques Nacionales. Obtenido de http://www.sib.gov.ar/taxonomia/genero/Daphnia

2.7.1. Hábitat

La Daphnia pulex es un organismo que se encuentra en territorio colombiano en

cuerpos de agua y escorrentías clasificadas como aguas blandas (dureza 0-75 mg/l

CaCO3). Estos crustáceos filtradores son principalmente de agua dulce, reservorios

artificiales, charcos temporales. Son abundantes en ambientes con alta concentración de

materia orgánica en donde proliferan bacterias, levaduras y micro algas, igualmente las

concentraciones más altas de las poblaciones viven como plancton en el agua abierta de

los lagos, Ver Tabla 6. (FAO, s.f.)

Page 36: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

31

2.7.2. Condiciones ideales de mantenimiento de cultivo de laboratorio.

Para el buen mantenimiento del cultivo en el laboratorio, se deben mantener

ciertas condiciones específicas, referidas a la simulación del habitad natural de los

organismos, estas condiciones se especifican en la Tabla 6.

Tabla 6

Condiciones ideales de mantenimiento del cultivo de Daphnia pulex en el laboratorio

TEMPERATURA 20 ± 2°C

CALIDAD DE LUZ FLUORESCENTE

INTENSIDAD

LUMINOSA

600 – 1000 Lux (luz blanca fría) en la

superficie de liquido

FOTOPERIODO 16 horas luz/ 8 oscuridad

ALIMENTACION Cultivos puros de Scenedesmus quadricauda

DOSIS DE ALIMENTO La cantidad de alimento suministrada se

calcula de la siguiente manera:

V= A x B / C

Donde V= volumen a ser adicionado

A= número de organismos

B= número de células por Daphnia

C= densidad celular de la suspensión algar

El alimento suministrado diariamente

DENSIDAD

POBLACIONAL

No mayor a 22 individuos / 2 L

LIMPIEZA Diariamente se debe retirar las mudas y los

restos que se encuentren en el fondo de los

recipientes. Cada viernes se cambia el agua de

los acuarios los cuales deben lavarse con

varias veces con agua desionizada.

No se debe emplear jabón ni otros detergentes

RECOLECCION DE

NEONATOS

Diariamente se retiran con un micro pipeta

Pasteur de plástico, con una abertura lo

suficientemente ancha como para no ocasionar

daños a los neonatos. NOTA. Condiciones a las cuales se debe mantener el cultivo para su supervivencia. FUENTE: Alarcón y

Ardila. 2008

Page 37: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

32

2.7.3. Alimentación

Los organismos Daphnia pulex Son normalmente fitófagos, alimentándose por

filtración. Filtran continuamente el agua en la cual viven, deteniendo las partículas

suspendidas en ésta a través sedas situados en los apéndices toráxicos; el tamaño

promedio de las partículas ingeridas se sitúa entre 0,5 y 50 μm. Mediante diversos

mecanismos de gran complejidad, las corrientes de alimento pasan al interior de una

cámara sencilla precedente de la dirección anteroventral; esta cámara está cerrada

dorsalmente por la pared del cuerpo, lateralmente por las valvas y los cinco pares del

tronco y centralmente por el tercer y cuarto par de los mismos cuando se encuentran

juntos. (Bosch 1974, citado por Matuk 1996).

El primer y segundo par de apéndices crean una corriente de agua y así, un movimiento

de partículas suspendidas; el quinto par se encarga de la succión del agua, mientras el

tercer y curto par realiza la filtración de las partículas (Bosch y Gonzalez 1974, citado

por Matuk 1996).

2.7.3.1. Algas para alimentación

• Scenedesmus quadricauda

Es una microalga típica plantónica. En el laboratorio de biología, tiene un recurso

maravilloso para demostrar fotosíntesis, pero en el resto del mundo, ofrece un potencial

para la creación de los biocombustibles de algas.

Page 38: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

33

Las microalgas son capaces de remover microorganismos patógenos, metales

pesadosy compuestos orgánicos tóxicos mediante procesos aún en vías de estudio.

(Oswald, 1978)

Dado que una gran variedad de estos microorganismos crecen en medios

completamente inorgánicos, confiriéndoles capacidades para remover nutrientes y al

mismo tiempo producir material celular potencialmente útil, se iniciaron estudios sobre

su aplicación en el tratamiento de aguas residuales desde la década de los 40, al respecto

se citan los trabajos de Cadwell (Cadwell,1946) y más tarde de Oswald y Gotaas

(Oswald y Gotaas,1957), quienes introdujeron un nuevo concepto en la producción

masiva de micro algas, demostrando que los cultivos a gran escala podrían ser

simultáneamente utilizados para el tratamiento de aguas residuales y la producción de

biomasa para la obtención de proteína vegetal.

• Chlorella

La Chlorella es una alga microscópica, unicelular de agua dulce que existe en la

Tierra desde hace más de 540 millones de años, siendo uno de los organismos más

primitivos.

Sorprendentemente se ha conservado de forma casi inalterada hasta nuestros días

gracias a su extraordinaria capacidad de supervivencia.

• Debido a su existencia elemental y a su rápido crecimiento, la Chlorella contiene una

gran concentración y variedad de nutrientes esenciales para la vida, especialmente

proteínas, vitaminas y minerales.

Page 39: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

34

La Chlorella existe en la Tierra desde hace más de 540 millones de años. Por

tanto, se trata de una de las formas de vida más primitivas y sorprendentemente su

estructura genética se ha mantenido prácticamente intacta hasta nuestros días. La razón

por la cual esta alga ha podido sobrevivir a los cataclismos y cambios climáticos durante

todos esos millones de años radica en la extrema dureza de su membrana celular, capaz

de aislar y proteger el material genético hallado en el interior de la célula. Por otro lado,

también su extraordinaria habilidad reproductiva ha jugado un papel en su favor. Una

sola célula de Chlorella puede reproducirse hasta por 4 cada 20 horas. Debido a su

existencia elemental y a su rápido crecimiento, la Chlorella contiene una gran

concentración y variedad de nutrientes esenciales para la vida, especialmente proteínas,

vitaminas y minerales. Además, constituye la mayor fuente de clorofila que se pueda

encontrar en un vegetal. (Indigo Hierbas)

2.7.4. Morfología

En la Figura 2 se evidencia la morfología del organismo. Estos organismos se

caracterizan por poseer un cuerpo comprimido lateralmente y ovalado, no se distinguen

segmentos como en otros crustáceos. Presentan dimorfismo sexual marcado, la hembra

es más grande que el macho. Presenta un caparazón de quitina transparente, las antenas

o apéndices con numerosas setas, ojos compuestos y simples (ojo nauplio), una cavidad

embriónica con huevo y embriones situados en la parte dorsal, entre el caparazón y el

dorso del cuerpo. (Díaz Báez, Bistos López, & Espinosa Ramirez, 2004)

Page 40: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

35

FIGURA 2 Daphnia pulex

Fuente: (s.f.). Recuperado el 1 de Noviembre de 2014, de www.asturnatura.com

2.7.5. Ciclo de Vida

Generalmente, el ciclo se incrementa cuando la temperatura decrece debido a la

disminución en la actividad metabólica. El ciclo de vida de Daphnia pulex a 20°C es de

50 días como se muestra en la figura 3.

FIGURA 3 Ciclo de vida Daphnia pulex

Fuente: (s.f.). Recuperado el16 de Octubre de 2014, de

www.imasd.fcien.edu.uy

Page 41: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

36

Daphnia pulex posee 3 a 4 instares juveniles, donde cada instar es terminado por una

muda, de esta forma, el crecimiento ocurre inmediatamente después de cada muda,

hasta que el nuevo caparazón deja de ser elástico.

Daphnia pulex tiene de 18 a 25 instares adultos. Generalmente, la duración de los

instares aumenta con la edad, pero también de las condiciones ambientales. (Castillo ,

2004)

2.7.6. Selección

El género Daphnia es utilizado extensivamente en pruebas de toxicidad, permiten

determinar la letalidad potencial de sustancias químicas puras, aguas residuales

domésticas e industriales, lixiviados, aguas superficiales o subterráneas, agua potable,

entre otros. (Díaz et al, 2006).

A la hora de seleccionar la especie es necesario tener en cuenta la aclimatación, los

ciclos de vida, la alimentación, en fin los cuidados de los microorganismos

seleccionados de tal forma que no se cometan errores en la manipulación y cuidado de

los mismos. Por esto, algunas razones para seleccionar este organismo fueron:

•Conocimiento previo de la biología de la especie (comportamiento, hábitos

alimenticios, ciclo de vida, reproducción y desarrollo, etc.).

•Son fáciles de encontrar, en número suficiente y se recolectan sin dificultad en los

humedales de la ciudad.

•Presentan sensibilidad muy alta a cualquier tipo de tóxico.

Page 42: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

37

•Son fáciles de criar y manipular en el laboratorio, dado su tamaño suficientemente

pequeño, no ocupan mucho espacio.

•Por su ciclo de vida corto y su tasa de renovación alta.

•Los costos de cultivo y mantenimiento son bajos.

•Es fácil comparar los resultados obtenidos con trabajos realizados en diferentes partes,

dada la gran utilización de estos microorganismos por diferentes entidades ambientales

y laboratorios.

2.7.7. Importancia ecológica de Daphnia pulex.

Estas especies se encuentran comúnmente en los márgenes de los estanques y

charcas permanentes y temporales, en el fondo del agua y cerca de las raíces o la parte

aérea de las plantas acuáticas. Las aguas donde se encuentran son aguas oxigenadas,

con un contenido de calcio y magnesio alto. El rango de pH del agua donde se

encuentran está entre 6.5 y 8.5 (Pennak, 1989). Su importancia en la cadena alimenticia

acuática esta, en que sirve de alimento para peces juveniles y adultos, Hydras, Insectos

maduros y otros organismos (Golulden, 1982). Como las Daphnia son animales

planctónicos altamente sensibles, que se alimentan de organismos más pequeños y a la

vez sirven de alimento para otros más grandes, una alteración en el ecosistema o un

efecto en ellos afectara a los demás eslabones de la cadena trófica.

2.8. PROCEDENCIA DEL VERTIMIENTO

El vertimiento proviene de la empresa indumotora PRACO-DIDACOL, la

cual consta de varias sucursales en el país como se muestra en la figura 4.

Page 43: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

38

FIGURA 4 Mapa sucursales PRACO- DIDACOL en Colombia

FUENTE: (s.f.). Recuperado el 30 de Octubre de 2014, de

www.pracodidacol.com/Inicio/Sucursales/tabid/1812/Default.aspx

La sede de donde proviene el vertimiento está ubicada en la localidad de

Engativá. Y se muestra en la figura 5.

FIGURA 4 Ubicación sucursal en la que se tomó la muestra

FUENTE: (s.f.). Recuperado el 28 de Noviembre de 2014, de

http://www.pracodidacol.com/Inicio/Sucursales/tabid/1812/Default.aspx

La industria indumotora se caracteriza por realizar actividades provenientes del

área indumotora más específicamente se dedica a mercadeo automotriz prestando el

servicio de venta y posventa de vehículos automotrices, vehículos de carga pesada y

Page 44: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

39

mantenimiento de estos. El mantenimiento corresponde a servicios de taller tales como

cambio de aceite, de filtro, repuestos entre otros. Adicionalmente realizan la actividad

que influye directamente en esta investigación que es la de lavado de vehículos en un

área específica.

Para el lavado de los vehículos utilizan aguas lluvias, realizan el lavado y

finalmente reutilizan parte del agua para volver a ser utilizado en el lavado. Como se

muestra en las siguientes Imágenes 1 y 2.

IMAGEN 1 Zona de lavado de vehículos

FUENTE: Autoras

IMAGEN 2 Tanque recolector de Aguas lluvias

FUENTE: Autoras

Page 45: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

40

3. METODOLOGIA

La metodología del proyecto permite el seguimiento del desarrollo del mismo bajo

una metodología común. A continuación se describe de forma detallada cada uno de los

procedimientos realizados en el desarrollo de este proyecto de investigación, los cuales

fueron ejecutados en el laboratorio de bioensayos de la Universidad de la Salle.

El diagrama de flujo de la metodología utilizada se encuentra en el ANEXO 1.

Se llevaron a cabo pruebas de toxicidad con el fin de determinar la concentración letal

media (CL50) del vertimiento, que produce la muerte al 50% de los organismos de

Daphnia pulex expuestos en un tiempo de 48 horas.

El desarrollo del proyecto se llevó a cabo basándose en la metodología

experimental por medio de la cual se pretende la recolección de información y datos

necesarios para la determinación de la toxicidad del vertimiento con contenido de

detergentes, esto, evaluando la concentración letal a la cual sobrevive la Daphnia

pulex.

Los procedimientos realizados en el desarrollo de este proyecto de investigación se

dividieron en 4 fases; Fase 1. Caracterización fisicoquímica; Fase 2. Mantenimiento del

Cultivo; Fase 3. Ensayos de Toxicidad; Fase 4. Obtención y Análisis de Resultados.

Al realizar las pruebas preliminares se limitan los rangos de concentración para

las pruebas definitivas, de la muestra de entrada del vertimiento a la trampa de grasas

fue de 0,1% a 3%; mientras que la muestra de la salida del vertimiento de la trampa de

grasas fue de 0% a 48%; al obtener esos valores, se realizan las pruebas definitivas

utilizando cinco organismos por recipiente de ensayo, baterías de cinco concentraciones

más el control y cuatro replicas por ensayo, dando un total de 24 recipientes por ensayo

Page 46: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

41

de prueba, 120 organismos por montaje y 20 organismos por concentración

correspondiendo cada uno al 5%.

Al tener los resultados de mortalidad, se realizó en análisis Probit para la

obtención de la respectiva CL50, utilizando el protocolo LB06 “Análisis de Regresión y

Análisis Probit”, de donde se extrajeron los pasos a seguir para la obtención de la

concentración letal media; la información obtenida fue analizada por el método

conocido como ANOVA, método que consiste en aislar y estimar las varianzas

separadas que contribuyen a la varianza total de un experimento.

3.1. FASE 1. CARACTERIZACIÓN FISICOQUIMICA

El agua utilizada para el lavado de carros es agua lluvia. Al realizar el lavado, sale

el vertimiento con detergentes y es tratado por medio de una trampa de grasas.

Posteriormente es reutilizada el agua en el mismo proceso.

Se realizó la caracterización fisicoquímica del vertimiento proveniente del proceso de

lavado de carros en 2 puntos, antes del tratamiento realizadoy después del tratamiento

determinando así la eficiencia del tratamiento del mismo.

Para realizar la caracterización fisicoquímica se tuvo en cuenta 6 fases las cuales son:

Determinación de parámetros a medir, selección de puntos de muestreo, descripción del

muestreo, análisis IN-Situ, composición de la muestra y análisis en el laboratorio.

3.1.1. Determinación de parámetros a medir

Para la determinación de los parámetros a medir se tuvo en cuenta la Resolución

3957 de 2009 de la Secretaría Distrital de Ambiente, "Por la cual se establece la

norma técnica, para el control y manejo de los vertimientos realizados a la red de

Page 47: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

42

alcantarillado público en el Distrito Capital". En donde se especifican los

parámetros evaluados para el cumplimiento de vertimientos al alcantarillado público

con los respectivos valores referencia que permiten realizar el análisis correspondiente

(valor muestra vs valor norma) al realizar la caracterización.

Los parámetros a medir con sus respectivos valores límites según la resolución

3957 se presentan en la tabla N° 7

Tabla 7

Parámetros con valores limites según la Resolución 3957 de 2009

PARAMETROS UNIDADES VALOR

Ph 5,0 – 9,0

TEMPERATURA DE

LA MUESTRA

°C 30

SOLIDOS

SEDIMENTABLES

mL/L – h 2

SOLIDOS

SUSPENDIDOS

mg/l 600

FENOLES TOTALES mg/l 0,2

DBO mg/L O2 800

DQO mg/L O2 1500

TENSOACTIVOS mg/l 10

GRASAS Y ACEITES mg/l 100

NOTA. Parámetros con los respectivos valores límite permisible según la Resolución 3967.FUENTE:

Autoras

Page 48: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

43

3.1.2. Selección de puntos de muestreo

Para realizar el respectivo muestreo se seleccionaron dos puntos de muestreo con

el fin de obtener datos que permitan el análisis del comportamiento de los parámetros

específicos antes y después de un debido proceso de tratamiento.

a) Primer punto de muestreo: Para la selección del primer punto de muestreo se

tomó como criterio principal obtener una muestra de agua sin tratar con la finalidad de

obtener datos base de análisis. El primer punto de muestreo corresponde a la entrada del

agua antes del respectivo tratamiento.

b) Segundo punto de muestreo: Para la selección del segundo punto de muestreo

se tuvo en cuenta 2 criterios principales. El primero basado en la resolución 3957,

CAPITULO IX CARACTERIZACION Y OBTENCION DE MUESTRAS Artículo

24º. Sitio de la Caracterización, el cual establece que para efectuar caracterización

para un vertimiento a alcantarillado público el sitio de muestreo” debe ser una caja de

inspección externa, acondicionada para el aforo y recolección de muestras”. El

segundo criterio basado en obtener una muestra tratada con el objetivo de obtener datos

base para el análisis.

Este punto corresponde a la salida del tratamiento de agua residual

correspondiente a la caja de inspección externa mostrada en la IMAGEN 3, ésta reúne

las aguas provenientes del lavado de vehículos que se lleva a cabo al interior de las

instalaciones de la industria indumotora.

Page 49: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

44

IMAGEN 3 Caja de inspección correspondiente

al Segundo punto de muestreo

FUENTE: Las Autoras

La tabla N°8 muestra la ubicación específica de los puntos de muestreo.

Tabla 8

Ubicación puntos de muestreo

MUESTRA TIPO DE AGUA ORIGEN DE LA

MUESTRA

1 Agua residual industrial sin

tratar

Efluente de la planta de

tratamiento.

2 Agua residual industrial Caja de inspección

externa

NOTA. Ubicación especifica de los puntos de muestreo .FUENTE: Autoras

3.1.3. Descripción del muestreo

Se realizó muestreo de tipo compuesto en los dos puntos entre las 7: 00 y las 18:

30 horas el día 11 de agosto de 2014; se tomó muestra cada hora obteniéndose un total

de 10 muestras en total por cada punto, el criterio por el cual se tomó la frecuencia fue

basado el horario laboral en donde está en funcionamiento el proceso directo de

Page 50: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

45

vertimiento correspondiente al lavado de vehículos, con el objetivo de obtener valores

representativos del vertimiento.

Para el punto N°1 Se tomó un total de 12 muestras cada una con un volumen de

500 ml, ver Tabla 9.

Tabla 9

Frecuencia de toma de muestra para el punto No. 1

# MUESTRA HORA VOLUMEN (ml)

1 7:00 500

2 8:00 500

3 9:00 500

4 10:00 500

5 11:00 500

6 12:00 500

7 13:00 500

8 14:00 500

9 15:00 500

10 16:00 500

11 17:00 500

12 18:00 500

TOTAL 6000

NOTA. Frecuencia en la que se realizó el muestreo en el punto 1. FUENTE: Autoras.

Para el punto N°2 se tomaron un total de 12 muestras cada una con un volumen

de 250 ml como se muestra en la tabla 10.

Page 51: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

46

Tabla 10

Frecuencia de toma de muestra para el punto n°2

#

MUESTRA

HORA VOLUMEN (ml)

1 7:30 250

2 8:30 250

3 9:30 250

4 10:30 250

5 11:30 250

6 12:30 250

7 13:30 250

8 14:30 250

9 15:30 250

10 16:30 250

11 17:30 250

12 18:30 250

TOTAL 3000

NOTA. Frecuencia en la que se realizó el muestreo en el punto 2. FUENTE: Autoras.

3.1.4. Análisis in-situ

En cada punto y para cada muestra compuesta se realizó análisis IN-situ de los

parámetros especificados en la tabla 11.

Tabla 11

Parámetros medidos IN-SITU

PARAMETROS IN SITU

TEMPERATURA DE LA MUESTRA

pH

CAUDAL

SOLIDOS SEDIMENTABLES

NOTA. Parámetros medidos IN SITU.FUENTE: Autoras

Page 52: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

47

3.1.5. Composición de la muestra

La composición de la muestra se llevó a cabo por asignación simple en donde se

adiciona la misma cantidad de cada muestra a la composición.

Para el punto número uno se realizó la composición de la muestra de 250 ml por cada

muestra para un volumen total de muestra compuesta de 3 litros como se muestra en la

Tabla No. 12.

Tabla 12

Composición de la muestra del punto No. 1

# MUESTRA VOLUMEN

(ml)

VOLUMEN PARA

COMPOSICIÓN (ml)

1 500 250

2 500 250

3 500 250

4 500 250

5 500 250

6 500 250

7 500 250

8 500 250

9 500 250

10 500 250

11 500 250

12 500 250

TOTAL COMPOSICIÓN 3000 NOTA. Volúmenes escogidos para la composición de la nuestra en el punto 1.FUENTE: Autoras

Con respecto al punto N°2 se realizó la composición de muestra de a 125 ml por

muestra para un volumen total de muestra de 1,5 litros como se muestra en la tabla No.

13.

Page 53: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

48

Tabla 13

Composición de la muestra del punto No. 2

# MUESTRA VOLUMEN

(ml)

VOLUMEN PARA

COMPOSICION (ml)

1 250 125

2 250 125

3 250 125

4 250 125

5 250 125

6 250 125

7 250 125

8 250 125

9 250 125

10 250 125

11 250 125

12 250 125

TOTAL COMPOSICIÓN 1500

NOTA. Volúmenes escogidos para la composición de la nuestra en el punto 1.FUENTE: Autoras

3.1.6. Análisis en el laboratorio

A continuación se mostraran los procedimientos realizados en el

laboratorio para el análisis de las muestras tomadas en la Tabla 14.

Tabla 14

Métodos de análisis STANDARD METHODS

PARAMETRO METODO TECNICA

DBO Standard Methods. Edition

20.5210 B Potenciométrico

Incubación 5 días

DQO Standard Methods. Edición

20.5220 D

Flujo cerrado

GRASAS Y

ACEITES

Standard Methods. Edición

20.5520 D

Extracción soxhlet

FENOLES Standard Methods. Edition

20.5530 B, D

Colorimétrica

SAAM Standard Methods. Edición

20.5540 C

NOTA. Métodos por los cuales se realizó la caracterización fisicoquímica n el laboratorio. FUENTE:

Autoras

Page 54: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

49

3.2. FASE 2. MANTENIMIENTO DEL CULTIVO (Daphnia pulex)

El mantenimiento del cultivo se realizó según la metodología CETESB (L5.018)

VER ANEXO 4, Protocolo LB – M04, para conservar un cultivo masivo de 4 edades.

En esta fase fue muy importante la preparación del medio Bristol y cultivo de algas

verdes (Chlorella, Scenedesmus quadricauda).

Para la óptima reproducción de la Daphnia pulex en medio experimental se

requieren dos medios básicos: el agua reconstituida en la cual se aclimata y reproduce

la población y el medio Bristol, en el que se produce el alimento para el organismo

constituido básicamente de Chlorella.

3.2.1. Preparación del agua reconstituida

La preparación de agua reconstituida consiste en el acondicionamiento del hábitat

natural de la Daphnia pulex, esto, garantizando una dureza de 40 – 48 mg/l CaCO3

rango característicos para la supervivencia de este tipo de organismos Daphnia,

El agua reconstituida fue elaborada a partir de agua desionizada y de los reactivos

a diferentes concentraciones mostrados en la tabla 15 y todas las especificaciones

presentes en el ANEXO 4, protocolo LB – M01

Page 55: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

50

Tabla 15

Concentraciones de reactivos utilizaos para preparación de agua reconstituida

REACTIVO NOMENCLARURA CONCENTRACIÓN

Bicarbonato de sodio NaHCO3 10g/L

Cloruro de Calcio CaCL2 13,5g/L

Sulfato de magnesio

heptahidratado

MgSO4 7H2O

20,5 g/L

Cloruro de potasio KCl 10g/L

Fuente: Escobar Malaver. 1997

El agua reconstituida se debe oxigenar por un ciclo de 48 horas como se muestra

en la Imagen 4 antes de adicionar el organismo a prueba, manteniendo unos

parámetros necesarios para garantizar las condiciones de simulación del hábitat natural,

los parámetros de control se relacionan en la tabla 16.

IMAGEN 4 Oxigenación del agua reconstituida

FUENTE: Las Autoras

Page 56: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

51

Tabla 16

Parámetros de control

Parámetro

de control

Método según el Standard

Methods

Rango Rango Ideal

Oxígeno

Disuelto

4500-0 G. Electrodo de

Membrana

> 6 mg/L 6 mg/L

pH 4500-H B Electrométrico 7.3 – 7.5 Unid. 7.4 Unid.

Temperatura 2550 B Laboratorio 18 – 22 ºC 20 ºC

Fuente: Bernal Paredes, Alba Janeth. Rojas Avellana, Andrea Paola, Determinación de la Concentración

Letal Media (CL50-48) del Cromo y el Cobre por Medio de Bioensayos de Toxicidad Acuática sobre

Daphnia pulex, 2008, Universidad de La Salle, Facultad de Ingeniería Ambiental y Sanitaria.

3.2.2. Ensayo de viabilidad

Para identificar la viabilidad del agua elaborada se realizó una prueba con algunos

organismos expuestos (5 organismos) a ella durante 24 horas y evaluar el

comportamiento de los mismos determinando el porcentaje de mortalidad que no debe

ser superior al 10 %.

En caso de que el porcentaje de mortalidad en esta prueba de viabilidad supere el

10 % se anula la posibilidad de utilizar esta agua reconstituida y se elabora una nueva

realizando el mismo procedimiento.

3.2.3. Preparación del medio bristol y cultivo de algas verdes

El método más usado para realizar el cultivo del alimento de los organismos es el

medio Bristol, la preparación de este medio se realizó según la metodología Dutka

(1989) VER ANEXO 4, protocolo LB – M02 y LB – M03. Para la preparación del

cultivo de algas fue necesario la utilización de soluciones de macro y micronutrientes,

cuya composición se muestra en la tabla 18; este medio Bristol permite la producción

Page 57: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

52

de algas verdes para garantizar el medio adecuado para la supervivencia de las Daphnia

pulex duplicando las algas verdes a través de condiciones estandarizadas y el proceso

de fotosíntesis. (VER IMAGEN 5)

IMAGEN 5 Soluciones para la preparación del medio Bristol.

FUENTE: Autoras

IMAGEN 6 Montaje Medio Bristol

FUENTE: Autoras

Page 58: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

53

4.1.2. Conteo de algas en la cámara de Neubauer

Se realiza el conteo de algas con el objetivo de suministrar a los organismos la

cantidad correcta de alimento garantizando la no sobrealimentación y la no limitación

de alimentos, a través de la cámara de Neubauer mostrada en la ilustración 6.

FIGURA 5 Cámara de Neubauer

3.2.4. Prueba – Alimento

El cultivo se alimentó con un concentrado de algas verdes compuesto por

Scenedesmus y Chlorella cultivadas como se describió anteriormente. Cada organismo

en su mantenimiento, necesitó una dosis de 3.0 x 106 células por Daphnia pulex /día.,

según la metodología CETESB y la Universidad Nacional de Colombia. Gracias a la

Cámara de Neubauer, se estableció qué cantidad de alimento se debe suministrar. Según

protocolos del convenio UN-CAR del año 1994 la frecuencia de alimentación fue los

días lunes, miércoles y viernes de cada semana la IMAGEN 7 muestra un ejemplo de

cómo se alimentaron los organismos en la frecuencia establecida.

Page 59: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

54

IMAGEN 7Suministro de alimento.

FUENTE: Autoras

3.2.5. Prueba - Aclimatación

El cultivo se manejó en 4 peceras por semana, obteniendo 16 recipientes de vidrio

en el mes, cada una con 20 organismos de Daphnia pulex y dos litros de agua, esto con

el fin de establecer condiciones óptimas para el crecimiento de los organismos.

Obteniendo un total de 320 organismos cultivados. Así mismo se realizó una reserva de

organismos de cada una de las generaciones obtenidas. Incluyendo las peceras de

reserva serian 20 en total.

Los organismos se introdujeron en recipientes de vidrio con agua del ambiente

natural. Después de 24 horas se estabilizaron las condiciones fisicoquímicas del agua

del vertimiento a tratar con la del ambiente, con el fin de que los organismos se

adaptaran a esta agua colocando los organismos en los recipientes de vidrio con 50% de

agua natural y 50 % del vertimiento a tratar, 48 horas después se pasaron a recipientes

de vidrio con el 100% de agua del vertimiento procedente de la industria indumotora

completándose así su aclimatación a esta condición y se iniciara la frecuencia de

alimentación.

Page 60: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

55

3.2.6. Mantenimiento del cultivo de los organismos (Daphnia pulex)

El mantenimiento del cultivo se llevó a cabo bajo la metodología expuesta en el

ANEXO 4, protocolo LB – M04

El cultivo se renovó de acuerdo al ciclo reproductivo de indicador de la Daphnia

pulex, conservándose las etapas óptimas de reproducción en peceras separadas por

edades:

• 0 – 1 semanas - hasta cuatro semanas.

• Se renovó el cultivo con neonatos que se obtuvieron el mismo día y se eliminaron

los organismos mayores a 5 semanas.

• Se tuvo el control de cada pecera, teniendo en cuenta fecha de inicio del cultivo

para así poder facilitar la separación que cada pecera tiene.

• Diariamente se verificó que la temperatura ambiente no fuera diferente de 20 ±

2°C. Adicionalmente con el fin de mantener las condiciones necesarias para el

crecimiento de los individuos, estuvieron expuestos a fotoperiodo de 16 horas de luz y

8 horas de oscuridad, controlado con un temporizador, el cual se apagaba a las 9:00 p.m.

dando oscuridad y se volvía a prender a las 5:00 a.m., con una intensidad lumínica de

alrededor de 1000 lux.

La IMAGEN 8 muestra las condiciones externas a las cuales se mantenía el cultivo.

Page 61: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

56

IMAGEN 8 Mantenimiento del cultivo FUENTE: Autoras

3.2.7. Separación de organismos:

El cultivo se renovó con el objeto de mantener una población masiva de tres

edades. La separación de los organismos se realizó todos los días, con ayuda de una

pipeta Pasteur de plástico de 3 ml, con ella se extrajeron los neonatos de 6 a 24 horas de

nacidos. La figura 3 muestra un ejemplo de cómo se realizó la extracción de neonatos.

Los neonatos se utilizaron para la nueva generación de los cultivos, pruebas de

viabilidad del agua reconstituida, pruebas de sensibilidad y realización de las pruebas

preliminares y definitivas de toxicidad.

Page 62: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

57

IMAGEN 9 Extracción de neonatos

FUENTE: Autoras

Para la separación de organismos debe tenerse en cuenta el haber obtenido las 4

generaciones, este procedimiento se debió previamente haberse realizado en 4 peceras

cada una con 20 organismos, la estructura del procedimiento lo muestra la ilustración 8.

FIGURA 3 Separación y mantenimiento de organismos prueba

Fuente: OROZCO Y TORO. 2008

Page 63: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

58

3.2.8. Limpieza:

Para el mantenimiento del cultivo fue necesario realizar limpiezas con

determinada frecuencia siguiendo las siguientes recomendaciones:

Diariamente se retiraron los restos que se encontraban en el fondo de los

recipientes.

Cada lunes se cambió el 50% del agua de las peceras. (Ver IMAGEN 10).

Las peceras se lavaron con abundante agua, retirando del vidrio las algas

adheridas a este, posteriormente se realizó enjuague varias veces con agua des-ionizada

y se procedió purgando las peceras con vertimiento. No se emplearon jabones ni otros

detergentes.

IMAGEN 10 Limpieza de peceras

FUENTE: Autoras

Page 64: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

59

3.3. FASE 3. ENSAYOS DE TOXICIDAD (Preliminares y Definitivas)

Cuando el cultivo y los neonatos se encontraban dispuestos para los ensayos por

cumplir con condiciones necesarias como lo son color, tamaño, edad (planteadas en

investigaciones de toxicidad). Se dio inicio a la fase de ensayos de toxicidad siguiendo

la metodología expuesta en el ANEXO 4, protocolo LB – M05.

En esta fase se llevó a cabo por medio de 5 pruebas por duplicado, las de sensibilidad

que son las dispuestas para Dicromato de Potasio (K2Cr2O7), 12 pruebas finales con los

vertimientos procedentes del lavado de autos antes de realizarles tratamiento y 12

pruebas finales con los vertimientos procedentes del lavado de autos después de ser

sometidos a tratamiento.

Estos ensayos se realizaron por medio de 2 fases:

Fase 1: Pruebas preliminares, en las que se emplea un rango con el fin de

establecer el 0 y 100% de mortalidad por el tóxico de referencia Dicromato de Potasio

(K2Cr2O7).

Fase 2: Pruebas definitivas, se realizaran de acuerdo a los resultados obtenidos en

las pruebas preliminares.

La prueba definitiva con Dicromato de Potasio se repitió 20 veces.

Adicionalmente se medió oxígeno disuelto, dureza y pH, en las dos concentraciones

extremo de la batería, para corroborar que el efecto tóxico fue producido por un agente

químico, en este caso el vertimiento proveniente de la industriay no por las constantes

que se manejan en la prueba toxicológica. De igual manera las pruebas definitivas son

consideradas válidas según metodología CETESB, dentro de las siguientes condiciones:

Page 65: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

60

• La mortalidad en los controles no pueden ser mayor que el 10% y preferiblemente

no más que el 5%. En dado caso que la mortalidad en el control sobrepase el 10%, esta

prueba se considera no representativa, se descarta y se requiere la repetición de la

misma.

• La concentración de oxígeno disuelto en las soluciones test durante el transcurso

del ensayo fue mayor a 4mg/L.

La anterior metodología fue la misma a usar en las pruebas de toxicidad del detergente

en estudio.

El vertimiento fue aclimatado a temperatura ambiente durante un periodo de 3

horas, antes de los ensayos de toxicidad, para evitar la mortalidad de los organismos de

prueba debido a un cambio brusco de temperatura.

3.3.1. Pruebas de sensibilidad

Las pruebas de sensibilidad son fundamentales ya que proporcionan información

fundamental para saber si el cultivo de Daphnia pulex se encuentra en condiciones

óptimas para la realización de las pruebas definitivas con el vertimiento a estudio.

El dicromato de potasio (K2Cr2O7) se ha utilizado en varios tipos de bioensayos como

tóxico de referencia con el fin de tener un control de calidad analítica de los organismos

que son utilizados en las pruebas.

3.3.2. Montaje de las pruebas de toxicidad (bioensayos)

Para el montaje de pruebas de toxicidad se utilizó la metodología expuesta en el

ANEXO 4, protocolo LB – M05, se utilizaron 24 recipientes de ensayo, distribuidas

Page 66: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

61

para cinco concentraciones de las respectivas soluciones tanto de las pruebas de

dicromato como las del vertimiento, un control y cuatro replicas por cada concentración.

Teniendo listos los 24 recipientes estos se colocan en una bandeja como se

muestra en la IMAGEN 11 a lo cual se le denomina la batería de ensayos que

principalmente es “el conjunto de bioensayos de toxicidad inespecíficos en condiciones

controladas.”. (De la torre, Nuñoz, & Caballo, 2004), inmediatamente se adicionaron 10

mL de las concentraciones a evaluar y sus respectivos controles.

La prueba se adicionaron cinco organismos por recipiente, dando un total de 20

organismos por concentracióny cuatro réplicas de cada concentración, utilizando un

total de 120 organismos por batería de ensayo.

Se realizó el mismo procedimiento tanto para la muestra de afluientede la trampa

de grasas, como a la muestra del vertimiento a la salida de la trampa de grasas.

Las baterías se cubrieron con una bolsa negra y papel kraff, se guardaron sin luz y

por un periodo de 48 horas.

Al pasar las 48 horas, con ayuda de una lámpara, se realizó la lectura de los

organismos muertos en cada copa, reportando el número de ellos en el registro LB001

“Registro de resultados por muestra analizada”

Page 67: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

62

IMAGEN 11 Montaje de Pruebas realizadas al vertimiento

FUENTE: Autoras

3.3.2.1. Preparación de soluciones con vertimiento

Las pruebas realizadas con el vertimiento de la industria tipo, requieren que se

realicen 5 concentraciones diferentes. Por ello es necesario realizar diluciones obtenidas

volumen a volumen como se muestra en la ilustración 17.

Tabla 17

Volúmenes requeridos para la prueba preliminar del vertimiento

CONCENTRACION VOLUMEN AGUA

RECONSTITUIDA (%)

VOLUMEN VERTIMIENTO

(%)

BLANCO 100 0

1 80 20

2 60 40

3 40 60

4 20 80

5 0 100 NOTA. Volúmenes escogidos para la realización de las pruebas preliminares

FUENTE: Autoras

Al obtener los resultados, se plantean concentraciones a valores más bajos para

realizar las pruebas definitivas y obtener el valor de la CL50 del vertimiento con

contenido de detergentes.

Page 68: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

63

Es necesario tener en cuenta que siempre debe existir un blancoy una

concentración en la cual la mortalidad sea del 100%:

Al ir disminuyendo las concentraciones se vuelve a repetir todo el procedimiento

anteriormente explicado.

3.4. FASE 4. OBTENCIÓN DE RESULTADOS

Las lecturas de los resultados se obtuvieron a las 48 horas transcurridas después

de la elaboración del montaje de cada una de las pruebas. La determinación de la CL50

se da por medio de análisis probabilísticos, la estimación de este valor sigue un modelo

matemático que asume relación continua entre dosis y respuesta.

El valor se calcula con una confiabilidad del 95%. Este valor se obtiene por

medio del método PROBIT, obteniéndola con sus respectivos límites de confianza, para

ello se utilizara el protocolo “LB 06 Análisis de regresión y análisis PROBIT “VER

ANEXO 4.

Después de tener este resultado se procede a realizar el análisis de varianza según

el protocolo LB07 “Análisis de varianza” VER ANEXO 4 para comprobar que a

diferentes concentraciones de la sustancia pura o vertimiento se produce un efecto

diferente en todos los organismos.

3.4.1 Validación de resultados por medio de la determinación del índice

toxicológico

Con el fin de evaluar y clasificar el vertimiento se determinó la carga e índice

toxicológico.

Page 69: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

64

Para el cálculo del índice toxicológico es necesario tener en cuenta el caudal del

vertimiento que está en estudio, la concentración letal media del mismo y la carga

tóxica del efluente. Una vez conocida la toxicidad de los efluentes es posible la

estimación de su carga tóxica; por lo tanto, se puede estimar la contribución de cada una

de las muestras del efluente con respecto a su cuerpo receptor. (Escobar, Malaver. 1997)

Este tipo de clasificación es muy útil para definir las prioridades en las

actuaciones que se deben tomar con cada uno de los vertimientos que se estudien con el

fin de controlar la calidad del mismo.

Para el cálculo de la Carga Tóxica se utiliza la siguiente ecuación:

𝐶𝑎𝑟𝑔𝑎 𝑇𝑜𝑥𝑖𝑐𝑎 (𝑈𝑇) = 100

𝐶𝐿 50× 𝑄

Dónde:

La carga tóxica se expresa en Unidades Tóxicas (UT)

CL50= Concentración Letal Media del vertimiento que produjo la muerte del 50%

de los organismos expuestos en un periodo de 48 horas.

Q= Caudal promedio del efluente. (𝑚3/𝑑).

Al obtener el cálculo de la carga tóxicay al transformarlo logarítmicamente en

base 10, se obtiene el índice toxicológico:

𝐼𝑇 = Log(1 + 𝑈𝑇)

Page 70: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

65

3.4.1.2 Corrección por caudal al IT de entrada

𝐶𝑎𝑟𝑔𝑎 𝑇𝑜𝑥𝑖𝑐𝑎 (𝑈𝑇) = 100

1,5133×

8,98𝑚3/𝑑

0,01

𝐶𝑎𝑟𝑔𝑎 𝑇𝑜𝑥𝑖𝑐𝑎 (𝑈𝑇) = 59339,84

𝐼𝑇 = Log(1 + 59339,84)

3.4.1.5. Corrección por caudal del IT a la salida

𝐶𝑎𝑟𝑔𝑎 𝑇𝑜𝑥𝑖𝑐𝑎 (𝑈𝑇) = 100

36,5359×

7,94𝑚3/𝑑

0.4

𝐶𝑎𝑟𝑔𝑎 𝑇𝑜𝑥𝑖𝑐𝑎 (𝑈𝑇) = 54,3294

𝐼𝑇 = Log(1 + 54,3294)

3.4.3 Validación de resultados por medio Del coeficiente de variación.

El coeficiente de variación es el indicador del grado de variabilidad en un

conjunto de datos. A partir de los datos arrojados por el análisis PROBIT en las 12

pruebas realizadas tanto en el afluente como el afluente del tratamiento se determina

este coeficiente, el primer paso para hallar el COEFICIENTE DE VARIACION la

determinación de la Media.

El coeficiente de variación (cv) se determina para medir el error muestral, este

mide la magnitud de variabilidad de la distribución maestral, es decir, es la cantidad

más adecuada para comparar la variabilidad.

El primer paso para la determinación del coeficiente de variación es hallar la media, dad

por la siguiente formula:

Page 71: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

66

𝑥 = ∑𝑛1 + 𝑛2 + 𝑛3 + ⋯ + 𝑛𝑛

𝑛

El segundo paso para la determinación del coeficiente de variación es halla la

varianza, dad por la siguiente formula:

𝒮 = √1

𝑛∑(𝑥𝑖 −

𝑛

𝑖=1

𝑥)2

El coeficiente de variación está dado por la siguiente formula:

𝐶𝑉 =𝒮

𝑥 * 100

Donde

𝒮 Corresponde a la varianza

𝑥 Corresponde a la media

En el ANEXO 1 se muestra al diagrama de flujo de la metodología utilizada

para el desarrollo de todo el proyecto de investigación

Page 72: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

67

4. ANALISIS DE RESUTADOS Y RESULTADOS

Esta investigación se realizó en el laboratorio de bioensayos de la Universidad de

La Salle, con las condiciones fisicoquímicas controladas como son el pH, dureza,

oxígeno disuelto, luz, temperatura, espacios separados para el mantenimiento de los

cultivos, entre otros y algunas pruebas realizadas en la industria tipo.

Para el desarrollo y análisis de las pruebas de toxicidad del vertimiento con sobre

organismos Daphnia pulex, se implementó la metodología ya establecida CETESB, la

cual se ha venido trabajando por los grupos de investigación de bioensayos del

Programa de Ingeniería Ambiental y Sanitaria de la Universidad de la Salle.

4.1. CARACTERIZACION FISICOQUIMICA DEL VERTIMIENTO

4.1.1. Características del vertimiento en cada punto de muestreo

El vertimiento a la entrada como en la salida del tratamiento mostró

características físicas específicas en el muestreo

4.1.2. Características de la muestra primer punto

El agua presenta características organolépticas como color, olor.

El agua presenta gran cantidad de solidos suspendidos.

Durante el monitoreo predominó el tiempo seco, con ausencia de lluvia durante y

antes del monitoreo.

La imagen 12 muestra el aspecto del vertimiento en el primer punto de muestreo.

Page 73: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

68

IMAGEN 6 Característica del vertimiento en el primer punto

FUENTE: Autoras

4.1.3. Características de la muestra segundo punto (caja de inspección)

Se evidencia presencia de espuma en la caja de inspección externa

El agua presenta características organolépticas como color, olor e iridiscencia.

Durante el monitoreo predominó el tiempo seco, con ausencia de lluvia durante y

antes del monitoreo.

La imagen 13 muestra el aspecto del vertimiento en el segundo punto de muestreo.

Imagen 7 Características del vertimiento En el segundo punto.

FUENTE: Las Autoras

Page 74: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

69

4.1.4. Aforo de caudal

La tabla 18 muestra los valores obtenidos de caudal en cada punto de muestreo

para cada toma de muestra y el respectivo valor promedio.

Tabla 18

Valores obtenidos de caudal para los dos puntos de muestreo

#

MUESTRA

PRIMER PUNTO SEGUNDO PUNTO

Q (L/S) Q (L/S)

1 0,080 0,070

2 0,095 0,080

3 0,033 0,023

4 0,105 0,099

5 0,23 0,223

6 0,055 0,043

7 0,163 0,153

8 0,086 0,07

9 0,032 0,026

10 0,141 0,129

11 0,115 0,096

12 0,118 0,093

PROMEDIO 0,104 0,092

NOTA. Resultados obtenidos de caudal en los dos puntos. FUENTE: Autoras

4.1.5. Análisis IN- SITU

La tabla 19 muestra los valores obtenidos para temperatura, pH, caudal y sólidos

sedimentables al realizar el análisis IN- SITU en cada uno de los puntos y para cada

muestra compuesta.

Page 75: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

70

Tabla 19

Resultados obtenidos de análisis IN-SITU

PARAMETRO IN-SITU PRIMER

PUNTO

SEGUNDO

PUNTO

Temperatura Muestra (°C) 15,00 16,30

Ph 6,000 7,190

Caudal (L/s) 0,104 0,092

Sólidos Sedimentables (mL/L-

h)

2,000 0,100

NOTA. Resultados obtenidos de la caracterización fisicoquímica en los dos puntos de muestreo.

FUENTE: Autoras.

Se evidencia notoriamente la diferencia de valores en los parámetros; caudal y

solidos sedimentables, tanto a la entrada del tratamiento correspondiente al primer

punto, como a la salida del tratamiento correspondiente la del vertimiento después del

tratamiento, esto demuestra que el tratamiento realizado al vertimiento es óptimo.

La imagen 12 muestra uno de los métodos IN- SITU realizados para las mediciones.

IMAGEN 12 Medición in-situ de solidos sedimentables

FUENTE: Autoras

La imagen 13 muestra una de las características físicas del vertimiento como los

son la presencia de tensoactivos evidenciada por la espuma presente en el aforo por el

Page 76: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

71

método volumétrico, motivo por el cual el vertimiento se caracteriza por ser un

vertimiento con contenido de detergentes.

IMAGEN 13 Presencia de tensoactivos en el vertimiento

FUENTE: Autoras

4.1.6. Análisis en el laboratorio

La tabla 20 muestra los valores obtenidos para sólidos suspendidos totales,

demanda biológica de oxigeno (DBO), Demanda química de oxigeno (DQO),

Tensoactivos, grasas y aceites y fenoles totales en cada uno de los puntos y para cada

muestra compuesta.

Page 77: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

72

Tabla 20

Resultados análisis en el laboratorio

PARÁMETRO CONCENTRACIÓN

PUNTO UNO (mg/L)

CONCENTRACIÓN

PUNTO DOS (mg/L)

SST 80 71

DBO 140 139

DQO 205 199

TENSOACTIVOS 5.3 4,57

GRASAS Y ACEITES 26 18,1

FENOLES TOTALES 0.15 0,153

NOTA. Resultados obtenidos de la caracterización fisicoquímica en los dos puntos de muestreo.

FUENTE: Autoras

Los valores obtenidos de los parámetros en el análisis en el laboratorio

evidencian un proceso óptimo de tratamiento de las unidades de rejilla y trampa grasas

pues, disminuye un 11.25 % solidos suspendidos totales y en un 30.38 % las grasas y

aceites antes y después de ser sometido al tratamiento.

A continuación se muestra la eficiencia del tratamiento que se realiza para los

parámetros de SST, Grasas y aceites y solidos sedimentables. Ver tabla 21.

Tabla 21

Eficiencia del tratamiento PARÁMETRO CARGA

CONTAMINANTE

PUNTO UNO (Kg/d)

CONCENTRAC

IÓN PUNTO

DOS (Kg/d)

EFICIENCIA

EN EL

TRATAMIENT

O (%)

SST 0,71 0,56 21,12

GRASAS Y ACEITES 0,23 0,14 39,13

Sólidos Sedimentables

(mL/L-h)

0,017 0,007 58,82

FUENTE: Autoras

En la tabla 21 se observa la eficiencia del tratamiento que recibe el vertimiento.

La eficiencia optima de remoción de una trampa grasas de grasas y aceites debe ser de

un 30 %, el resultado obtenido para el tratamiento al que se somete el vertimiento es de

Page 78: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

73

un porcentaje de remoción de un 39.13 % lo que quiere decir que el procedimiento es

eficiente.

El tratamiento es eficiente solo para estos parámetros pues el vertimiento es

sometido solo al proceso de cribado y remoción de grasas y aceites (trampa grasas).

4.2. PRUEBAS DE SENSIBILIDAD

La pruebas de sensibilidad permiten dar confiabilidad en los resultados obtenidos

al someter los organismos al vertimiento pues demuestran que el efecto tóxico resultante

en las prueba de toxicidad no se deben a factores de variabilidad en la sensibilidad de

los organismos o factores como la aplicación metodológica

Con el fin de determinar la Concentración Letal Media CL50 de la prueba de

sensibilidad con dicromato de potasio (K2Cr2O7) para Daphnia pulex, se utilizó el

programa estadístico Probit, ver ANEXO 2A, el cual nos muestra el límite superior e

inferior para cada prueba de toxicidad, con un límite de confianza de 95%.

Las concentraciones utilizadas en las pruebas de toxicidad iniciaron en 0,05 ppm

y finalizaron 0,5 ppm.

Posteriormente con los valores de la CL50, se elaboró una tabla con las 20

pruebas realizadas, cada una con el valor promedio y los respectivos límites. (VER

TABLA 22)

Page 79: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

74

Tabla 22

Tabla resultados Probit pruebas de sensibilidad

No. LIMITE INFERIOR CL 50-48 LIMITE

SUPERIOR

1 0,77 0,184 0,243

2 0,139 0,209 0,268

3 0,025 0,153 0,211

4 0,132 0,194 0,230

5 0,094 0,175 0,233

6 0,159 0,237 0,290

7 0,118 0,188 0,240

8 0,053 0,139 0,190

9 0,115 0,184 0,231

10 0,124 0,190 0,244

11 0,178 0,233 0,279

12 0,039 0,161 0,223

13 0,129 0,198 0,250

14 0,075 0,217 0,289

15 0,045 0,170 0,233

16 0,101 0,165 0,205

17 0,114 0,168 0,213

18 0,035 0,163 0,219

19 0,12 0,187 0,232

20 0,07 0,139 0,186

PROMEDIO 0,182 0,131 0,235

FUENTE: Autoras

De la tabla 22 podemos ver que los valores de CL50 se encuentran en un rango de

0,139 ppm a 0,237 ppmy que ningún valor estuvo por debajo del límite inferior ni por

encima del límite superior, dando así unos resultados certeros y demostrando que los

organismos Daphnia pulex siempre presentaron capacidad de respuesta dentro del rango

establecido.

En la tabla 23 se pueden observar los resultados promedio para el tóxico de

referencia (Dicromato de potasio).

Page 80: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

75

Tabla 23

Resultados pruebas con dicromato de potasio

LIMITE SUPERIOR 0,235

CL50 0,182

LIMITE INFERIOR 0,131

FUENTE: Autoras

A continuación se representa la distribución de las sensibilidades de la tabla de

resultados para la prueba con Dicromato de potasio en la Grafica 1.

Gráfica 1 Concentración Letal Media de Dicromato de Potasio

FUENTE: Autoras

En la tabla 24, se realizó la comparación del valor obtenido de la CL50, con resultados

obtenidos anteriormente por estudiantes de la Universidad de la Salle.

0

0,05

0,1

0,15

0,2

0,25

0 5 10 15 20 25

CL5

0 d

e D

icro

mat

o d

e P

ota

sio

Numero de Pruebas

CL 50 de Dicromato de Potasio Vs. Numero de Pruebas

CL 50-48 Lim Inferior Lim Superior CL50 promedio

Page 81: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

76

Tabla 24

Resultados de sensibilidad con Dicromato de Potasio en investigaciones anteriores

AÑO REFERENCIA CL50

2010 Determinación de CL50-48 de Hierro y

Manganeso sobre Daphnia pulex.

Mediante bioensayos de toxicidad

acuática.

0.20

ppm

2011 Determinación de la concentración letal

media de Arsénico y Litio mediante

bioensayos de toxicidad sobre el

organismo acuático Daphnia pulex.

0.20

ppm

FUENTE: Modificado por Las Autoras

Al analizar la taba anterior, podemos evidenciar que la CL50 obtenida en esta

investigación, muestra similitud con los resultados obtenidos en otras investigaciones

realizadas por estudiante de la Universidad de la Salle. Con el único que se ve una

variación significativa es con la investigación: Determinación de la concentración letal

media (CL50-48) del Mercurio por medio de bioensayos de toxicidad acuática sobre

Daphnia pulex ya que el CL50 dio 0,39 ppm, lo cual pudo deberse a variaciones en la

humedad, entre otros factores.

4.2.1. Análisis ANOVA para las pruebas de sensibilidad con Dicromato de Potasio

Al obtener la concentración letal media en las pruebas definitivas de sensibilidad

con Dicromato de Potasio, se realizó el análisis de varianza con el fin de validar los

resultados obtenidos en el programa PROBIT. A continuación en la Tabla 25 y 26, se

Page 82: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

77

presenta uno de los resultados de pruebas de sensibilidad y análisis de varianza, en el

ANEXO 3 se encuentran las pruebas restantes con el análisis de varianza.

Tabla 25

Resultados obtenidos en una prueba con dicromato de potasio

SENSIBILIDA

D N° 1

Concentración

(ppm)

# de organismo muertos Total

% DE

MORTALID

AD

R1 R

2

R

3

R

4

Blanco 0 0 0 0 0 0%

0,05 0 1 1 1 3 15%

0,1 1 1 2 2 6 30%

0,2 3 3 2 2 10 50%

0,3 4 5 4 4 17 85%

0,5 5 5 5 5 20 100

%

Total 56

FUENTE: Autoras

Tabla 26

Análisis de Varianza prueba con dicromato de potasio

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de los

cuadrados

F Valor

crítico

para F

Entre grupos 77,833 5 15,566 80,057

2,772

Dentro de los

grupos

3,5 18 0,194

Total 81,333 23

FUENTE: Autoras

Adicional en la Tabla 27 se presentan los resultados del análisis de varianza para

cada una de las pruebas realizadas (20) con Dicromato de Potasio.

Page 83: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

78

Tabla 27

Resultados Análisis de Varianza ANOVA para pruebas con

Dicromato de Potasio

No. De

Prueba F Valor

crítico para

F

1 80,05 2,77

2 104,56 2,77

3 305,40 2,77

4 102,68 2,77

5 114,24 2,77

6 122,20 2,77

7 73,60 2,77

8 112,85 2,77

9 85,64 2,77

10 126,72 2,77

11 112,41 2,77

12 101,07 2,77

13 127,92 2,77

14 72,34 2,77

15 101,07 2,77

16 143,04 2,77

17 236 2,77

18 120,24 2,77

19 93,6 2,77

20 141,933 2,77 FUENTE: Autoras

En la Tabla 27, se puede observar que el F siempre es mayor al valor crítico para

F o el F teórico, por lo cual se rechaza la hipótesis nula y se acepta la hipótesis alterna.

Sencillamente se puede explicar de forma en que las diferentes concentraciones

producen efectos diferentes en los organismos Daphnia pulex, generando a mayor

concentración mayor tasa de mortalidad.

Page 84: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

79

4.3. PRUEBAS DE TOXICIDAD CON EL VERTIMIENTO

4.3.1. Pruebas de toxicidad con muestra de agua antes de ser sometida a

tratamiento

Con el fin de demostrar la capacidad de respuesta de los organismos Daphnia

pulex al ser expuestos a un vertimiento con contenido de detergentes, se determinó la

concentración letal media, por medio de cartas de control, cálculo por medio del

programa estadístico PROBIT y el análisis de varianza.

Las pruebas preliminares se realizaron en los siguientes rangos: 100%, 80%, 60%,

40%, 20% y el blanco, al existir una mortalidad del 100 % en todas las concentraciones

a excepción del blanco, se tomaron nuevos porcentajes de concentración usando 20%,

15%, 10%, 5%. Nuevamente se evidencio mortalidad del 100%. Así se redujo el

porcentaje de concentración a 3%,1.5%, 1%, 0,5% y 0,1%, usando estos valores para

las pruebas definitivas.

Tabla 30

Control de la prueba definitiva CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS MUERTOS NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMOS

% DE

MORTALIDAD

1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0

0,1 0 0 0 0 0 0 0

0,5 1 1 1 1 0 4 16

1 3 3 3 2 2 13 52

1,5 4 3 4 4 4 19 76

3 5 5 5 5 5 25 100

FUENTE: Autoras

En la tabla 30 se puede observar que el mayor porcentaje de mortalidad se

evidencia entre las concentraciones 1% y 1,5%, donde el porcentaje de mortalidad es

Page 85: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

80

del 52% y 76%, lo cual indica que la concentración letal media corresponde o está muy

cerca a estos valores.

En la tabla 31 se presentan los resultados de la concentración letal media de las pruebas

definitivas con la muestra del agua residual antes de ser sometido a tratamiento.

Tabla 31

Carta de control pruebas definitivas del agua residual antes de ser sometida a

tratamiento

No.

Prueba

CL50 Límite

inferior

Límite

superior

1 2,144 1,443 4,259

2 1,698 1,469 2,117

3 1,954 1,585 4,118

4 1,512 1,391 1,791

5 1,236 1,036 1,459

6 1,38 1,152 1,622

7 1,258 1,065 1,43

8 1,348 1,068 1,662

9 1,065 0,816 1,287

10 1,254 1,006 1,369

11 1,191 1,017 1,331

12 2,12 1,479 3,986

FUENTE: Autoras

El promedio resultante de las pruebas definitivas sobre los organismos Daphnia

pulex.se presenta en la tabla 32.

Tabla 32

Resultados pruebas con el agua residual antes

de sometida a tratamiento.

LIMITE SUPERIOR 2,202

CL50 1,513

LIMITE INFERIOR 1,210

FUENTE: Autoras

Page 86: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

81

4.3.1.1. Análisis ANOVA para las pruebas de toxicidad con el agua residual antes

de ser sometida a tratamiento

Al obtener la concentración letal media en las pruebas definitivas de la muestra de

agua antes de ser sometida a tratamiento, se realizó el análisis de varianza con el fin de

validar los resultados obtenidos en el programa PROBIT. En la Tabla 33 y 34 se

presenta uno de los resultados obtenidos al realizar las pruebas de toxicidad y análisis

de varianza, en el ANEXO 4 se encuentran las pruebas restantes con el análisis de

varianza.

La Tabla 33 muestra los porcentajes de mortalidad en una de las pruebas

realizadas con las concentraciones a las que se encontró el resultado de CL50 que

corresponden a porcentajes de 0.1, 0.5, 1, 1.5 y 3.

Tabla 33

Resultados prueba agua residual antes de ser sometida a tratamiento

CONCENTRACIO

N NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS MUERTOS NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMOS

% DE

MORTA

LIDAD

1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0

0,1 0 0 1 0 1 2 28

0,5 0 1 0 1 0 2 8

1 0 1 0 0 0 1 4

1,5 0 1 0 0 0 1 4

3 5 5 5 5 5 25 100

FUENTE: Autoras

Page 87: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

82

Tabla 34

Análisis de varianza para el agua residual antes de ser sometida a tratamiento

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados

F Valor crítico

para F

Entre grupos 92,8 5 18,56 44,544

2,620654148

Dentro de los

grupos

10 24 0,416666667

Total 102,8 29

FUENTE: Autoras

Adicional en la tabla 34, se presentan los resultados del análisis de varianza para cada

una de las pruebas definitivas.

Tabla 35

Resultados análisis ANOVA con el agua residual antes

de sometida a tratamiento

RESUMEN ANOVA DE ENTRADA

No. De

Prueba

F Valor

crítico para

F

1 44,544 2,620

2 616 2,620

3 961 2,620

4 65535 2,866

5 65535 2,866

6 65535 2,620

7 65535 2,620

8 616 2,620

9 106,472 2,620

10 151 2,620

11 65535 2,620

12 27,005 2,620

FUENTE: Autoras

Page 88: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

83

Al analizar la tabla 35, se puede observar que el F es mayor que el valor crítico

para F, por tanto, se rechaza la hipótesis nula y se toma la hipótesis alterna. Así se

concluye concluir que en los organismos de prueba se evidencian efectos producidos a

diferentes concentraciones. Dando así una relación proporcional entre concentración y

mortalidad, pues a mayor concentración se genera mayor mortalidad con muestra a la

salida del tratamiento de agua residual.

Gráfica 2Concentración letal media del vertimiento

FUENTE: Autoras

En la gráfica 2, se evidencia que los valores de la mayoría de las pruebas se

encuentran dentro del rango de los límites de confianza (límite superior-Límite inferior),

Sin embargo hay 2 puntos en los cuales no se cumple, pues son valores más bajos que el

límite inferior establecido. Esto puede deberse a variaciones en el ambiente como

humedad y temperatura.

0

0,5

1

1,5

2

2,5

0 2 4 6 8 10 12 14

CL5

0 d

el a

flu

en

te d

e la

tra

mp

a d

e g

rasa

s

No. De Pruebas

CL50 de vertimiento Vs. No. De pruebas

CL50 limite inferior limite superior CL50 PROMEDIO

Page 89: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

84

4.3.1.2. Análisis ANOVA para las pruebas de toxicidad con el vertimiento

Ya realizando el análisis ANOVA para las pruebas de toxicidad con el vertimiento

de entrada fue necesario realizar el mismo análisis para el vertimiento de salida al

tratamiento para evaluar las características del vertimiento tanto en la entrada como a la

salida.

Las pruebas de toxicidad con el vertimiento de salida se realizaron inicialmente

con los rangos correspondientes a: 100%, 80%, 60%, 40%, 20% y el blanco, evaluando

los resultados a estas concentraciones los cuales la mayoría de pruebas dieron un

porcentaje de mortalidad del 100 % a concentraciones de 100%, 80% y 60 %, lo que

conlleva a que tomaron nuevos porcentajes de concentración pues el porcentaje de

mortalidad debe ser del 50%, los nuevos porcentajes tomados fueron porcentajes de

12%, 24%, 36%, 48% y 60 % rango que corresponden a los realizados en las pruebas

definitivas.

Porcentajes en el que se encontró el CL50 en las pruebas definitivas. Esto

significa que el vertimiento a la salida va a tener su concentración letal media dentro

del rango definitivo.

Tabla 36

Resultados obtenidos en la prueba al vertimiento CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS MUERTOS NUMERO DE MUERTOS

/ TOTAL DE

ORGANISMOS

% DE

MORTALIDAD

1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0

12 0 0 0 0 0 0 0

24 0 0 2 0 1 3 12

36 2 0 1 0 3 6 24

48 3 3 3 3 1 13 60

60 5 5 5 5 5 25 100

FUENTE: Autoras

Page 90: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

85

Tabla 37

Análisis de varianza para la muestra de vertimiento

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de

las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados

de

libertad

Promedio

de los

cuadrados

F Probabilidad Valor

crítico

para F

Entre

grupos

94,166 5 18,833 34,242 3,609E-10 2,620

Dentro de

los grupos

13,2 24 0,55

Total 107,366 29

FUENTE: Autoras

En la Tabla 36 y 37 se observan uno de los resultados obtenidos para una de las

pruebas y el análisis de varianza. Así mismo en la tabla 38 muestra los resultados de

análisis ANOVA con el vertimiento a la salida de la trampa de grasas.

Tabla 38

Resultados análisis ANOVA con el vertimiento

RESUMEN ANOVA DE

LA SALIDA

F Valor crítico

para F

34,242 2,620

42,816 2,620

26,420 2,620

33,212 2,620

202,2 2,620

97,846 2,620

89,057 2,620

69,576 2,620

123,84 2,620

49,415 2,620

19,025 2,620

48,933 2,620

FUENTE: Autoras

Page 91: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

86

Teniendo en cuenta los datos presentados en la tabla 38, se observa que el F continua

siendo, mayor que el valor crítico para F, por tanto, continuamente se rechaza la

hipótesis nula y se toma la hipótesis alterna. Lo cual hace referencia a que los

organismos de prueba reaccionan a diferentes concentraciones. Así mismo, a mayor

concentración se va a evidenciar mayor porcentaje de mortalidad.

El resto de los análisis pueden observarse en el ANEXO 5.

Gráfica 3 Concentración letal media del vertimiento

FUENTE: Autoras

En la gráfica 3, se evidencia que los valores se CL50 en gran cantidad de

las pruebas se encuentran dentro del rango de los límites de confianza (límite

superior-Límite inferior), sin embargo las pruebas 1,2 y 3 superan el valor del

límite superior promedio, esto puede deberse a diferentes circunstancias como lo

son variaciones en el ambiente, humedad, entre otras. También se evidencia la

0

10

20

30

40

50

60

0 2 4 6 8 10 12 14

CL5

0 d

el v

ert

imie

nto

a la

sal

ida

de

la t

ram

pa

de

gr

asas

N° DE PRUEBAS

CL50 de vertimiento a la salida Vs. No. De pruebas

CL 50 limite inferior limite superior promedio CL 50

Page 92: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

87

variación de resultados respecto a la CL50 del afluente del tratamiento pues se

evidencia que el vertimiento a la salida tiene mayor valor de CL50 que a la

entrada, Es decir que el afluente tiene una mayor toxicidad, generando la muerte

de diferentes organismos con concentraciones más bajas.

4.4. CARGA TÓXICA E ÍNDICE TÓXICOLÓGICO

Se obtuvieron los siguientes datos de índice toxicológico para cada punto:

4.4.1. Carga toxicológica del afluente de la trampa de grasas

𝐶𝑎𝑟𝑔𝑎 𝑇𝑜𝑥𝑖𝑐𝑎 (𝑈𝑇) = 593,40

4.4.2. Índice toxicológico del afluente de la trampa de grasas

𝐼𝑇 = 2,77

4.4.3 Corrección por caudal al IT de entrada

𝑰𝑻 = 𝟒, 𝟕𝟕

Con los valores obtenidos anteriormente se clasifico el vertimiento según la tabla 39.

Page 93: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

88

Tabla 39

Rangos Índice Toxicológico

CARGA

TÓXICA

RANGOS

Despreciable 1 – 1,99

Reducida 2 – 2,99

Moderada 3 – 3,99

Considerable 4 - 4,99

Elevada >5

NOTA Rangos que clasifican el vertimiento según su toxicidad.

.FUENTE: Escobar Malaver, Pedro Miguel

El afluente de la trampa de grasas se encuentra dentro del rango (4 – 4,99),

basándonos en la escala establecida en la tesis “Implementación de un sistema de alerta

de riesgo toxicológico utilizando Daphnia pulex para la evaluación de muestras

ambientales”.

Al ser clasificada la calidad de vertimiento como considerable, implica que tiene

un alto índice toxicológico.

4.4.3. Carga toxicológica del vertimiento a la salida de la trampa de grasas

𝐶𝑎𝑟𝑔𝑎 𝑇𝑜𝑥𝑖𝑐𝑎 (𝑈𝑇) = 21,73

4.4.4. Índice toxicológico del afluente de la trampa de grasas

𝐼𝑇 = 1,3565

Page 94: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

89

4.4.5. Corrección por caudal del IT a la salida

𝑰𝑻 = 𝟏, 𝟕𝟒

Con los valores obtenidos anteriormente se clasifico el vertimiento según la tabla 40.

Tabla 40

Rangos Índice Toxicológico

CARGA TÓXICA RANGOS

Despreciable 1 – 1,99

Reducida 2 – 2,99

Moderada 3 – 3,99

Considerable 4 - 4,99

Elevada >5

FUENTE: Escobar Malaver, Pedro Miguel

El vertimiento ase encuentra dentro del rango (1 – 1,99), basándonos en la escala

establecida en la tesis “Implementación de un sistema de alerta de riesgo toxicológico

utilizando Daphnia pulex para la evaluación de muestras ambientales”

Al ser clasificada la calidad de vertimiento como despreciable, implica que no

tiene un alto índice toxicológico, sin embargo es necesario mejorar la calidad del agua

para evitar alteraciones en fuentes de agua.

Page 95: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

90

Para el análisis es necesario tener en cuenta que se realizaron diluciones del

vertimiento, por tanto el vertimiento nos e puede catalogar como despreciable ya que no

se tomó la concentración inicial para los resultados obtenidos.

4.5. COEFICIENTE DE VARIACION

4.5.1. Media a la entrada del tratamiento

𝑥 = 1,51

4.5.2. Media a la salida del tratamiento

𝑥 = 36,53

4.5.3. Desviación estándar

Para la determinación de la desviación estándar de la Cl50 a la entrada del tratamiento

se obtuvieron los resultados mostrados en la tabla 41.

Page 96: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

91

Tabla 41

Desviación estándar a la entrada del tratamiento

ENTRADA

No. CL50 (𝒙𝒊 − 𝒙) (𝒙𝒊 − 𝒙)2

1 2,14 0,63 0,402

2 1,70 0,19 0,035

3 1,95 0,44 0,197

4 1,51 0,00 0,000

5 1,24 -0,27 0,075

6 1,38 -0,13 0,016

7 1,26 -0,25 0,063

8 1,35 -0,16 0,026

9 1,07 -0,45 0,198

10 1,25 -0,26 0,065

11 1,19 -0,32 0,101

12 2,12 0,61 0,372

TOTAL ∑ 1,55

FUENTE: Autoras

Obteniéndose así una desviación estándar de:

𝒮 = 0,37

Para la determinación de la desviación estándar de la Cl50 a la salida del tratamiento se

obtuvieron los resultados mostrados en la tabla 42.

Page 97: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

92

Tabla 42

Desviación estándar a la salida del tratamiento

SALIDA

No. CL 50 (𝒙𝒊 − 𝒙) (𝒙𝒊 − 𝒙)2

1 43,14 6,61 43,71

2 50,13 13,60 184,91

3 49,60 13,07 170,69

4 49,18 12,65 160,10

5 26,28 -10,25 105,08

6 28,50 -8,03 64,46

7 26,27 -10,26 105,25

8 28,11 -8,42 70,93

9 28,74 -7,79 60,75

10 34,96 -1,57 2,46

11 38,49 1,96 3,85

12 35,04 -1,49 2,23

TOTAL ∑ 974,42

FUENTE: Autoras

Obteniéndose así una desviación estándar de:

𝒮 = 9,41

Finalmente se obtuvo el coeficiente de variación para cada uno de los puntos.

Page 98: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

93

4.5.4. Coeficiente de variación a la entrada del tratamiento

𝐶𝑉 = 24,50%

4.5.5. Coeficiente de variación a la salida del tratamiento

𝐶𝑉 =25,76 %

De acuerdo a los resultamos obtenidos de Coeficiente de variación (CV) a la entrada

del tratamiento 24,50% y a la salida 25,76 %, se puede evidenciar que los porcentajes

son cercanos al 30 %, valor que según El Servicio de Protección Ambiental de Canadá

(EPS, 1990) y la Agencia de Protección Ambiental de los Estados Unidos (USEPA,

1990) ha sido fijado como la máxima variabilidad permitida entre los índices de

toxicidad. (Silva, Torrejón, Bay -, & Larrain , 2003)

De esta forma, se evidencia la confiabilidad de los resultados contando con una media

representativa y demostrando una exactitud intralaboratorio óptima.

Page 99: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

94

5. CONCLUSIONES

La sensibilidad obtenida para el cultivo de Daphnia pulex expuesta a dicromato de

potasio (tóxico de referencia), arrojó un valor para la CL50 de 0,1827 ppm con estos

valores se estableció que la sensibilidad del cultivo Daphnia pulex al Dicromato de

Potasio, se encuentra dentro del rango de datos de investigaciones pasadas, de esta

manera se evidencia así una repro-ducibilidad de estas pruebas, y se demuestra la

existencia de confiabilidad en los resultados y adecuadas condiciones intralaboratorio.

Además los valores de CL50 no sobrepasan los límites inferior y superior (0,1317ppm –

0,235 ppm respectivamente), resultados que garantizan que los organismos tienen buena

respuesta ante los tóxicos y que en las pruebas de toxicidad los resultados se van a deber

por variaciones en la sensibilidad de los organismos y no por agentes externos.

Se determinó que la concentración letal media CL50 del vertimiento sobre Daphnia

pulex es de 1,51 % a la entrada del tratamiento y de 36,53 % a la salida del tratamiento

con sus respectivos limites superiores de 2,20 % y 45,60 % e inferiores de 1,21 % y

25,89 %, y se evidencia con estos resultados que el afluente (agua residual sin

tratamiento) es más tóxico con respecto al vertimiento, demostrando que la trampa de

grasas realiza un tratamiento óptimo.

Obteniendo los resultados del índice toxicológico se reitera el óptimo tratamiento al cual

se somete el agua residual pues el afluente se clasifica como un agua residual con carga

tóxica considerable en dilución, y ya al ser sometido a tratamiento, el vertimiento se

clasifica como un vertimiento despreciable en dilución. Con esto se evidencia una

reducción en carga tóxica de efluente a afluente del tratamiento , sin embargo pueden

implementarse otras medidas de tratamiento que disminuyan más el índice toxicológico.

Page 100: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

95

Teniendo en cuenta que para la determinación de la CL50 del afluente del tratamiento el

porcentaje de dilución fue alto, se concluye que el vertimiento en este punto es altamente

tóxico.

Los parámetros analizados para el vertimiento después del tratamiento se encuentran

dentro de los límites permisibles establecidos en la Resolución 3957 de 2009 Por la cual

se establece la norma técnica, para el control y manejo de los vertimientos realizados a la

red de alcantarillado público en el Distrito Capital"

En todos los análisis de varianza para cada uno de los test de toxicidad, se rechaza la

hipótesis nulaya que el F calculado es mayor al F teórico. Lo cual quiere decir que

efectivamente se presentan efectos aleatorios sobre los organismos a diferentes

concentraciones.

Conforme a los resultados obtenidos en las pruebas de análisis fisicoquímico y

toxicológico realizados al vertimiento tanto antes como después de ser sometido a

tratamiento (trampa de grasas), se evidencia que el tratamiento al agua residual

proveniente de la industria indumotora es efectivo, puesto que al comparar las

concentraciones de los parámetros fisicoquímicos con las pruebas toxicológicas sobre el

organismo Daphnia pulex tanto a la entrada como a la salida del tratamiento, demuestran

una reducción significativa dando cumplimiento a la normatividad vigente y mejorando

la calidad del agua vertida disminuyendo los posibles impactos al ecosistema acuático.

Page 101: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

96

6. RECOMENDACIONES

Los bioensayos se deben realizar con todas las sustancias de interés sanitario, para

garantizar la supervivencia de los ecosistemas acuáticos en el país.

Es importante seguir llevando a cabo pruebas de toxicidad con organismos

representativos de la cadena trófica para luego aplicarlos a normas restrictivas en el

control de vertimientos y protección de la fauna y flora.

Es pertinente realizar más investigaciones con organismos como la Daphnia pulex

(organismo de prueba)ya que demuestran ser una herramienta confiable y económica

para este tipo de proyectos donde se busca clasificar los vertimientos.

Se recomienda la implementación de un sedimentador para la remoción de solidos

pequeños y pesados como arena. Evitando así la acumulación de sedimentos en las

tuberías, produciendo obstrucción en el escurrimiento de fluidos.

Se recomienda a la empresa la implementación de un tratamiento adicional con el

fin de disminuir la carga tóxica. Se propone la implementación de un humedal

subsuperficial puesto que es una alternativa de bajo costo, fácil de operar, el sistema

puede operar sin ningún coste energético, son muy efectivos en la remoción de la DBO,

la DQO, los SST, los metales y algunos compuestos orgánicos refractarios de las aguas

residuales domésticas.

Se recomienda a la empresa la optimización de la caja de Inspección externa

acondicionándola para aforo de caudal y toma de muestras para cumplir a cabalidad con

lo que exige la Resolución 3957 acerca del punto de muestreo.

Page 102: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

97

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Page 105: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

100

ANEXOS

ANEXO 1 DIAGRAMAS DE FLUJO METODOLOGIA DEL PROYECTO

FASE I

Page 106: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

101

FASE II

Page 107: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

102

FASE III y IV

Page 108: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

103

ANEXO 2

ANEXO 2ª PROBIT PRUEBAS DE SENSIBILIDAD

1)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 8,999 2,195 4,100 ,000 4,697 13,301

Intersecció

n

-1,654 ,639 -2,589 ,010 -2,293 -1,015

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 4,818 ,741

Respuesta natural ,239 ,022

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Page 109: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

104

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

20 0 ,000 ,147

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

2,239 3 ,524b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

2)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 9,012 1,659 5,433 ,000 5,761 12,263

Intersecció

n

-1,882 ,485 -3,876 ,000 -2,367 -1,396

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Page 110: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

105

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 2,751 ,462

Respuesta natural ,096 ,016

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

20 0 ,000 ,126

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

6,711 3 ,082b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

3)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 10,558 2,836 3,723 ,000 4,999 16,117

Intersecció

n

-1,615 ,754 -2,142 ,032 -2,369 -,861

Page 111: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

106

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 10,558 2,836 3,723 ,000 4,999 16,117

Intersecció

n

-1,615 ,754 -2,142 ,032 -2,369 -,861

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 8,045 ,784

Respuesta natural ,423 ,036

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

20 0 ,000 ,190

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

7,652 3 ,054b

Page 112: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

107

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

7,652 3 ,054b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

4)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 12,631 3,271 3,861 ,000 6,219 19,043

Intersecció

n

-2,454 ,792 -3,099 ,002 -3,246 -1,662

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 10,702 ,783

Respuesta natural ,171 ,004

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

Page 113: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

108

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

20 0 ,000 ,067

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

,406 3 ,939b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

5)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 9,206 1,876 4,908 ,000 5,529 12,883

Intersecció

n

-1,614 ,521 -3,100 ,002 -2,135 -1,094

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Page 114: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

109

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 3,519 ,593

Respuesta natural ,158 ,020

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

20 0 ,000 ,142

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

4,141 3 ,247b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

Page 115: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

110

6)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 8,823 2,124 4,154 ,000 4,660 12,987

Intersecció

n

-2,093 ,643 -3,253 ,001 -2,736 -1,449

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 4,513 ,737

Respuesta natural ,134 ,007

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

20 0 ,000 ,085

Page 116: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

111

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

1,272 3 ,736b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

7)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 10,931 2,167 5,044 ,000 6,684 15,178

Intersecció

n

-2,056 ,592 -3,474 ,001 -2,647 -1,464

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 4,696 ,569

Respuesta natural ,169 ,019

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Page 117: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

112

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

20 0 ,000 ,137

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

7,430 3 ,059b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

8)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 11,827 2,719 4,349 ,000 6,498 17,157

Intersecció

n

-1,650 ,645 -2,556 ,011 -2,295 -1,005

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Page 118: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

113

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 7,395 ,695

Respuesta natural ,319 ,029

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

20 0 ,000 ,169

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

4,119 3 ,249b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

Page 119: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

114

9)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 10,758 2,296 4,685 ,000 6,258 15,259

Intersecció

n

-1,978 ,596 -3,319 ,001 -2,574 -1,382

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 5,273 ,653

Respuesta natural ,171 ,013

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

20 0 ,000 ,114

Page 120: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

115

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

2,884 3 ,410b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

10)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 10,330 1,942 5,319 ,000 6,523 14,137

Intersecció

n

-1,966 ,530 -3,707 ,000 -2,496 -1,435

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 3,772 ,501

Respuesta natural ,130 ,018

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Page 121: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

116

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

20 0 ,000 ,133

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

6,530 3 ,088b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

11)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 10,648 2,172 4,902 ,000 6,391 14,905

Intersecció

n

-2,477 ,604 -4,098 ,000 -3,081 -1,873

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Page 122: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

117

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 4,719 ,542

Respuesta natural ,104 ,008

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

20 0 ,000 ,088

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

1,914 3 ,590b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

Page 123: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

118

12)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 10,525 2,110 4,988 ,000 6,389 14,660

Intersecció

n

-2,088 ,589 -3,543 ,000 -2,677 -1,498

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 4,452 ,577

Respuesta natural ,155 ,016

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

20 0 ,000 ,128

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

5,427 3 ,143b

Page 124: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

119

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

5,427 3 ,143b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

13)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 10,525 2,110 4,988 ,000 6,389 14,660

Intersecció

n

-2,088 ,589 -3,543 ,000 -2,677 -1,498

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 4,452 ,577

Respuesta natural ,155 ,016

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Page 125: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

120

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

20 0 ,000 ,128

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

5,427 3 ,143b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

14)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 7,579 1,968 3,851 ,000 3,721 11,437

Intersecció

n

-1,646 ,683 -2,411 ,016 -2,329 -,963

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 3,874 ,779

Respuesta natural ,237 ,024

Page 126: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

121

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 3,874 ,779

Respuesta natural ,237 ,024

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

20 0 ,000 ,155

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

5,765 3 ,124b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

Page 127: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

122

15)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 9,026 2,285 3,950 ,000 4,547 13,506

Intersecció

n

-1,536 ,667 -2,303 ,021 -2,202 -,869

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 5,223 ,755

Respuesta natural ,300 ,030

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

20 0 ,000 ,174

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

3,777 3 ,287b

Page 128: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

123

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

3,777 3 ,287b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

16)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 13,357 3,098 4,311 ,000 7,285 19,430

Intersecció

n

-2,207 ,709 -3,111 ,002 -2,916 -1,497

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 9,599 ,711

Respuesta natural ,241 ,012

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Page 129: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

124

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

20 0 ,000 ,109

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

4,104 3 ,250b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

17)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 12,758 2,280 5,596 ,000 8,290 17,226

Intersecció

n

-2,147 ,542 -3,958 ,000 -2,689 -1,604

Page 130: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

125

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 12,758 2,280 5,596 ,000 8,290 17,226

Intersecció

n

-2,147 ,542 -3,958 ,000 -2,689 -1,604

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 5,197 ,445

Respuesta natural ,139 ,019

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

20 0 ,000 ,136

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

5,250 3 ,154b

Page 131: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

126

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

5,250 3 ,154b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

18)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 10,213 2,779 3,675 ,000 4,766 15,660

Intersecció

n

-1,660 ,753 -2,205 ,027 -2,412 -,907

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 7,722 ,799

Respuesta natural ,384 ,030

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Page 132: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

127

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

20 0 ,000 ,173

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

3,305 3 ,347b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

19)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 11,090 2,471 4,488 ,000 6,247 15,933

Intersecció

n

-2,079 ,633 -3,282 ,001 -2,713 -1,446

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Page 133: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

128

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 6,107 ,690

Respuesta natural ,176 ,011

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

20 0 ,000 ,103

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

1,725 3 ,631b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

Page 134: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

129

20)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 12,208 2,546 4,794 ,000 7,217 17,199

Intersecció

n

-1,702 ,577 -2,948 ,003 -2,279 -1,124

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 6,484 ,612

Respuesta natural ,239 ,024

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

20 0 ,000 ,154

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

4,785 3 ,188b

Page 135: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

130

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

4,785 3 ,188b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

Page 136: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

131

ANEXO 2 B PROBIT SALIDA

1)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS ,083 ,013 6,599 ,000 ,058 ,107

Intersecció

n

-3,575 ,540 -6,622 ,000 -4,114 -3,035

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Información sobre los datos

Nº de casos

Válidos 6

Rechazados Perdidos 0

Número de respuestas

> Número de sujetos

0

Grupo control 1

Información sobre la convergencia

Número de

iteraciones

Solución

óptima

encontrada

PROBI

T

18 Sí

Contrastes de chi-cuadrado

Page 137: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

132

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

6,474 4 ,166b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 150, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

2)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS ,290 ,132 2,197 ,028 ,031 ,548

Intersecció

n

-14,526 6,413 -2,265 ,024 -20,938 -8,113

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS ,017 ,054

Respuesta natural ,000 ,001

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Page 138: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

133

Estimación de tasa de respuesta

naturala

Estimación

Error

típico

PROBI

T

,106 ,035

a. No se ha proporcionado el

grupo control.

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

5,431 2 ,066b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

3)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS ,248 ,099 2,516 ,012 ,055 ,442

Intersecció

n

-12,320 4,842 -2,544 ,011 -17,163 -7,478

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Page 139: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

134

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS ,010 ,074

Respuesta natural ,000 ,002

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta

naturala

Estimación

Error

típico

PROBI

T

,134 ,040

a. No se ha proporcionado el

grupo control.

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

1,027 2 ,598b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

Page 140: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

135

4)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS ,247 ,114 2,156 ,031 ,022 ,471

Intersecció

n

-12,125 5,592 -2,168 ,030 -17,716 -6,533

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS ,013 ,091

Respuesta natural ,000 ,002

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta naturala

Estimación Error típico

PROBIT ,134 ,040

a. No se ha proporcionado el grupo control.

Page 141: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

136

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

3,063 2 ,216b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

5)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS ,065 ,011 5,718 ,000 ,043 ,088

Intersecció

n

-1,719 ,490 -3,506 ,000 -2,209 -1,229

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS ,000 ,306

Respuesta natural ,001 ,037

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

Page 142: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

137

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

25 0 ,000 ,193

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

5,139 3 ,162b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

6)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS ,066 ,012 5,430 ,000 ,042 ,090

Intersecció

n

-1,885 ,561 -3,358 ,001 -2,446 -1,323

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Page 143: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

138

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS ,000 ,440

Respuesta natural ,001 ,035

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

25 0 ,000 ,186

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

4,150 3 ,246b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

Page 144: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

139

7)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS ,070 ,012 5,633 ,000 ,046 ,094

Intersecció

n

-1,835 ,509 -3,603 ,000 -2,344 -1,326

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS ,000 ,307

Respuesta natural ,001 ,035

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

25 0 ,000 ,188

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

3,349 3 ,341b

Page 145: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

140

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

3,349 3 ,341b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

8)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS ,055 ,009 6,218 ,000 ,038 ,072

Intersecció

n

-1,543 ,430 -3,589 ,000 -1,973 -1,113

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS ,000 ,294

Respuesta natural ,000 ,034

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Page 146: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

141

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

25 0 ,000 ,183

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

4,189 3 ,242b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

9)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS ,060 ,010 5,911 ,000 ,040 ,080

Intersecció

n

-1,734 ,484 -3,586 ,000 -2,218 -1,251

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Page 147: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

142

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS ,000 ,363

Respuesta natural ,001 ,032

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

25 0 ,000 ,179

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

2,551 3 ,466b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

Page 148: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

143

10)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS ,054 ,010 5,575 ,000 ,035 ,073

Intersecció

n

-1,884 ,555 -3,396 ,001 -2,439 -1,330

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS ,000 ,564

Respuesta natural ,001 ,026

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

25 0 ,000 ,161

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

2,013 3 ,570b

Page 149: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

144

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

2,013 3 ,570b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

11)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS ,052 ,014 3,879 ,000 ,026 ,079

Intersecció

n

-2,021 ,880 -2,296 ,022 -2,901 -1,140

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS ,000 ,825

Respuesta natural ,002 ,039

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Page 150: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

145

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

25 0 ,000 ,197

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

5,053 3 ,168b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

12)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS ,045 ,007 6,066 ,000 ,030 ,060

Intersecció

n

-1,579 ,474 -3,331 ,001 -2,053 -1,105

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Page 151: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

146

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS ,000 ,513

Respuesta natural ,001 ,029

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

25 0 ,000 ,170

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

3,727 3 ,293b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

Page 152: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

147

ANEXO 2 C PROBIT ENTRADA

1)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 3,628 1,600 2,268 ,023 ,493 6,764

Intersecció

n

-7,778 3,228 -2,410 ,016 -11,006 -4,551

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 2,559 ,097

Respuesta natural ,003 ,000

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

Page 153: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

148

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

25 0 ,048 ,020

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

2,587 3 ,460b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

2)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 2,000 ,519 3,855 ,000 ,983 3,016

Intersecció

n

-3,394 ,774 -4,384 ,000 -4,169 -2,620

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Page 154: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

149

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS ,269 ,245

Respuesta natural ,003 ,000

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

25 0 ,030 ,021

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

4,879 3 ,181b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

Page 155: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

150

3)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 2,560 1,213 2,111 ,035 ,183 4,936

Intersecció

n

-5,001 2,231 -2,242 ,025 -7,232 -2,770

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 1,471 ,595

Respuesta natural ,016 ,000

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

25 0 ,024 ,022

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

3,634 3 ,304b

Page 156: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

151

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

3,634 3 ,304b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

4)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 4,664 1,779 2,622 ,009 1,178 8,150

Intersecció

n

-7,051 2,592 -2,721 ,007 -9,642 -4,459

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 3,163 -,148

Respuesta natural -,026 ,010

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

Page 157: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

152

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

25 0 ,000 ,100

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

,215 3 ,975b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

5)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 2,454 ,463 5,304 ,000 1,547 3,360

Intersecció

n

-3,032 ,590 -5,142 ,000 -3,621 -2,442

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS ,214 ,088

Respuesta natural ,004 ,012

Page 158: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

153

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS ,214 ,088

Respuesta natural ,004 ,012

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

25 0 ,000 ,110

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

3,249 3 ,355b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

Page 159: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

154

6)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 2,586 ,627 4,127 ,000 1,358 3,814

Intersecció

n

-3,569 ,893 -3,996 ,000 -4,463 -2,676

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS ,393 ,370

Respuesta natural ,023 ,010

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

25 0 ,000 ,101

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

,610 3 ,894b

Page 160: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

155

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

,610 3 ,894b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

7)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 3,121 ,675 4,624 ,000 1,798 4,444

Intersecció

n

-3,926 ,919 -4,273 ,000 -4,845 -3,007

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS ,456 ,343

Respuesta natural ,025 ,011

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

Page 161: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

156

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

25 0 ,000 ,107

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

,396 3 ,941b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

8)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 1,530 ,237 6,448 ,000 1,065 1,994

Intersecció

n

-2,063 ,359 -5,750 ,000 -2,421 -1,704

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Page 162: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

157

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS ,056 ,223

Respuesta natural ,004 ,007

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

25 0 ,000 ,084

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

7,698 3 ,053b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

9)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 2,069 ,360 5,739 ,000 1,362 2,775

Intersecció

n

-2,203 ,479 -4,598 ,000 -2,682 -1,724

Page 163: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

158

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 2,069 ,360 5,739 ,000 1,362 2,775

Intersecció

n

-2,203 ,479 -4,598 ,000 -2,682 -1,724

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS ,130 ,453

Respuesta natural ,016 ,009

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

25 0 ,000 ,095

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

2,356 3 ,502b

Page 164: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

159

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

2,356 3 ,502b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

10)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 3,521 ,800 4,403 ,000 1,954 5,089

Intersecció

n

-4,414 1,106 -3,990 ,000 -5,520 -3,308

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS ,640 ,447

Respuesta natural ,039 ,012

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Page 165: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

160

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

25 0 ,000 ,108

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

,142 3 ,986b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

11)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 3,918 ,829 4,724 ,000 2,293 5,544

Intersecció

n

-4,667 1,093 -4,272 ,000 -5,760 -3,575

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Page 166: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

161

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS ,688 ,380

Respuesta natural ,035 ,012

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

25 0 ,000 ,110

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

,121 3 ,989b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

Page 167: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

162

12)

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación

Error

típico Z Sig.

Intervalo de confianza al

95%

Límite

inferior

Límite

superior

PROBITa

DOSIS 3,465 1,491 2,324 ,020 ,542 6,387

Intersecció

n

-7,345 2,955 -2,486 ,013 -10,300 -4,391

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX

Covarianzas y correlaciones de estimaciones de los

parámetros

DOSIS

Respuesta

natural

PROBI

T

DOSIS 2,223 ,094

Respuesta natural ,004 ,001

Covarianzas (abajo) y correlaciones (arriba).

Estimación de tasa de respuesta natural

Grupo control

Estimación

Error

típico

Número de

sujetos

Número de

respuestas

PROBI

T

25 0 ,094 ,027

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

6,362 3 ,095b

Page 168: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

163

Contrastes de chi-cuadrado

Chi-

cuadrado gla Sig.

PROBI

T

Contraste de la bondad

de ajuste de Pearson

6,362 3 ,095b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los

estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que, 050, no se utiliza un

factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

Page 169: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

164

ANEXO 3

PRUEBAS ANOVA SENSIBILIDAD

1.

SENSIBILIDAD

Concentración

(ppm)

# de organismo muertos

Total

% DE

MORTALIDAD

R1 R2 R3 R4

Blanco 0 0 0 0 0 0%

0,05 0 1 1 1 3 15%

0,1 1 1 2 2 6 30%

0,2 3 3 2 2 10 50%

0,3 4 5 4 4 17 85%

0,5 5 5 5 5 20 100%

Total 56

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor

crítico para

F

Entre grupos 77,83333333 5 15,56666667 80,057143 2,77285315

Dentro de los

grupos 3,5 18 0,194444444

Total 81,33333333 23

Page 170: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

165

2.

Concentración

(ppm)

# de organismo muertos

Total % DE

MORTALIDAD

R1 R2 R3 R4

Blanco 0 0 0 0 0 0%

0,05 0 0 0 0 0 0%

0,1 2 2 1 1 6 30%

0,2 3 3 2 3 11 55%

0,3 4 4 3 3 14 70%

0,5 5 5 5 5 20 100%

Total 51

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los

cuadrados F

Valor

crítico para

F

Entre grupos 79,875 5 15,975 104,56364 2,77285315

Dentro de los

grupos 2,75 18 0,152777778

Total 82,625 23

3.

Concentración

(ppm)

# de organismo muertos

Total % DE

MORTALIDAD

R1 R2 R3 R4

Blanco 0 0 0 0 0 0%

0,05 1 1 1 1 4 20%

0,1 2 2 2 2 8 40%

0,2 3 2 2 3 10 50%

0,3 5 5 5 5 20 100%

0,5 5 5 5 5 20 100%

Total 62

Page 171: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

166

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los

cuadrados F

Valor

crítico para

F

Entre grupos 84,83333333 5 16,96666667 305,4 2,77285315

Dentro de los

grupos 1 18 0,055555556

Total 85,83333333 23

4.

Concentración

(ppm)

# de organismo muertos

Total % DE

MORTALIDAD

R1 R2 R3 R4

Blanco 0 0 0 0 0 0%

0,05 0 0 0 1 1 5%

0,1 0 0 1 1 2 10%

0,2 2 3 3 3 11 55%

0,3 4 5 5 4 18 90%

0,5 5 5 5 5 20 100%

Total 52

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los

cuadrados F

Valor

crítico para

F

Entre grupos 99,83333333 5 19,96666667 102,68571 2,77285315

Dentro de los

grupos 3,5 18 0,194444444

Total 103,3333333 23

5.

Page 172: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

167

Concentración

(ppm)

# de organismo muertos

Total % DE

MORTALIDAD

R1 R2 R3 R4

Blanco 0 0 0 0 0 0%

0,05 0 0 1 1 2 10%

0,1 2 2 2 2 8 40%

0,2 3 2 3 3 11 55%

0,3 5 4 4 4 17 85%

0,5 5 5 5 5 20 100%

Total 58

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor

crítico para

F

Entre grupos 79,33333333 5 15,86666667 114,24 2,77285315

Dentro de los

grupos 2,5 18 0,138888889

Total 81,83333333 23

6.

Concentración

(ppm)

# de organismo muertos

Total % DE

MORTALIDAD

R1 R2 R3 R4

Blanco 0 0 0 0 0 0%

0,05 1 0 0 0 1 5%

0,1 1 1 1 0 3 15%

0,2 2 2 2 2 8 40%

0,3 3 3 4 3 13 65%

0,5 5 5 5 5 20 100%

Total 45

Page 173: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

168

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor

crítico para

F

Entre grupos 76,375 5 15,275 122,2 2,77285315

Dentro de los

grupos 2,25 18 0,125

Total 78,625 23

7.

Concentración

(ppm)

# de organismo muertos

Total % DE

MORTALIDAD

R1 R2 R3 R4

Blanco 0 0 0 0 0 0%

0,05 0 0 0 0 0 0%

0,1 2 2 2 1 7 35%

0,2 2 2 2 3 9 45%

0,3 5 5 5 3 18 90%

0,5 5 5 5 5 20 100%

Total 54

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor

crítico para

F

Entre grupos 92 5 18,4 73,6 2,77285315

Dentro de los

grupos 4,5 18 0,25

Total 96,5 23

Page 174: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

169

8.

Concentración

(ppm)

# de organismo muertos

Total % DE

MORTALIDAD

R1 R2 R3 R4

Blanco 0 0 0 0 0 0%

0,05 1 1 1 1 4 20%

0,1 3 2 1 2 8 40%

0,2 3 3 3 4 13 65%

0,3 5 5 5 5 20 100%

0,5 5 5 5 5 20 100%

Total 65

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor

crítico para

F

Entre grupos 86,20833333 5 17,24166667 112,85455 2,77285315

Dentro de los

grupos 2,75 18 0,152777778

Total 88,95833333 23

9.

Concentración

(ppm)

# de organismo muertos

Total % DE

MORTALIDAD

R1 R2 R3 R4

Blanco 0 0 0 0 0 0%

0,05 1 0 0 0 1 5%

0,1 1 2 2 1 6 30%

0,2 2 2 3 3 10 50%

0,3 5 5 4 4 18 90%

0,5 5 5 5 5 20 100%

Total 55

Page 175: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

170

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor

crítico para

F

Entre grupos 89,20833333 5 17,84166667 85,64 2,77285315

Dentro de los

grupos 3,75 18 0,208333333

Total 92,95833333 23

10.

Concentración

(ppm)

# de organismo muertos

Total % DE

MORTALIDAD

R1 R2 R3 R4

Blanco 0 0 0 0 0 0%

0,05 0 0 0 0 0 0%

0,1 2 2 1 2 7 35%

0,2 3 3 2 2 10 50%

0,3 4 4 4 5 17 85%

0,5 5 5 5 5 20 100%

Total 54

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor

crítico para

F

Entre grupos 88 5 17,6 126,72 2,77285315

Dentro de los

grupos 2,5 18 0,138888889

Total 90,5 23

Page 176: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

171

11.

Concentración

(ppm)

# de organismo muertos

Total % DE

MORTALIDAD

R1 R2 R3 R4

Blanco 0 0 0 0 0 0%

0,05 0 0 0 0 0 0%

0,1 1 0 1 0 2 10%

0,2 2 2 3 2 9 45%

0,3 4 4 3 3 14 70%

0,5 5 5 5 5 20 100%

Total 45

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor

crítico para

F

Entre grupos 85,875 5 17,175 112,41818 2,77285315

Dentro de los

grupos 2,75 18 0,152777778

Total 88,625 23

Page 177: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

172

12.

Concentraci

ón (ppm)

# de organismo muertos

Total % DE

MORTALID

AD

R1 R2 R3 R4

Blanco 0 0 0 0 0 0%

0,05 2 1 1 1 5 25%

0,1 2 1 1 2 6 30%

0,2 3 3 3 3 12 60%

0,3 5 5 4 4 18 90%

0,5 5 5 5 5 20 100%

Total 61

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor

crítico

para F

Entre grupos 77,20833333 5 15,44166667

101,072

73

2,772853

15

Dentro de los grupos 2,75 18 0,152777778

Total 79,95833333 23

13.

Concentración

(ppm)

# de organismo muertos

Total % DE

MORTALIDAD

R1 R2 R3 R4

Blanco 0 0 0 0 0 0%

0,05 0 0 0 0 0 0%

0,1 1 2 2 1 6 30%

0,2 2 2 3 2 9 45%

0,3 4 4 4 5 17 85%

0,5 5 5 5 5 20 100%

Total 52

Page 178: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

173

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor

crítico para

F

Entre grupos 88,83333333 5 17,76666667 127,92 2,77285315

Dentro de los

grupos 2,5 18 0,138888889

Total 91,33333333 23

14.

Concentración

(ppm)

# de organismo muertos

Total % DE

MORTALIDAD

R1 R2 R3 R4

Blanco 0 0 0 0 0 0%

0,05 0 0 1 1 2 10%

0,1 2 2 2 1 7 35%

0,2 1 2 2 2 7 35%

0,3 4 3 3 4 14 70%

0,5 5 5 5 5 20 100%

Total 50

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor

crítico para

F

Entre grupos 70,33333333 5 14,06666667 72,342857 2,77285315

Dentro de los

grupos 3,5 18 0,194444444

Total 73,83333333 23

Page 179: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

174

15.

Concentración

(ppm)

# de organismo muertos Total % DE

MORTALIDAD R1 R2 R3 R4

Blanco 0 0 0 0 0 0%

0,05 1 1 1 1 4 20%

0,1 1 2 2 2 7 35%

0,2 2 2 3 3 10 50%

0,3 4 4 5 5 18 90%

0,5 5 5 5 5 20 100%

Total 59

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor

crítico para

F

Entre grupos 77,20833333 5 15,44166667 101,07273 2,77285315

Dentro de los

grupos 2,75 18 0,152777778

Total 79,95833333 23

16.

Concentración

(ppm)

# de organismo muertos

Total % DE

MORTALIDAD

R1 R2 R3 R4

Blanco 0 0 0 0 0 0%

0,05 0 0 0 1 1 5%

0,1 2 2 1 1 6 30%

0,2 2 3 3 3 11 55%

0,3 5 5 5 5 20 100%

0,5 5 5 5 5 20 100%

Total 58

Page 180: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

175

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor

crítico para

F

Entre grupos 99,33333333 5 19,86666667 143,04 2,77285315

Dentro de los

grupos 2,5 18 0,138888889

Total 101,8333333 23

17.

Concentración

(ppm)

# de organismo muertos

Total % DE

MORTALIDAD

R1 R2 R3 R4

Blanco 0 0 0 0 0 0%

0,05 0 0 0 0 0 0%

0,1 2 2 2 1 7 35%

0,2 3 3 3 3 12 60%

0,3 5 5 5 4 19 95%

0,5 5 5 5 5 20 100%

Total 58

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor

crítico para

F

Entre grupos 98,33333333 5 19,66666667 236 2,77285315

Dentro de los

grupos 1,5 18 0,083333333

Total 99,83333333 23

Page 181: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

176

18.

Concentración

(ppm)

# de organismo muertos

Total % DE

MORTALIDAD

R1 R2 R3 R4

Blanco 0 0 0 0 0 0%

0,05 1 1 1 1 4 20%

0,1 2 1 1 2 6 30%

0,2 3 3 3 2 11 55%

0,3 4 5 5 5 19 95%

0,5 5 5 5 5 20 100%

Total 60

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor

crítico para

F

Entre grupos 83,5 5 16,7 120,24 2,77285315

Dentro de los

grupos 2,5 18 0,138888889

Total 86 23

19.

Concentració

n (ppm)

# de organismo muertos

Total % DE

MORTALIDA

D

R1 R2 R3 R4

Blanco 0 0 0 0 0 0%

0,05 0 1 0 0 1 5%

0,1 2 1 1 1 5 25%

0,2 3 2 2 3 10 50%

0,3 5 5 4 4 18 90%

0,5 5 5 5 5 20 100%

Total 54

ANÁLISIS DE VARIANZA

Page 182: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

177

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor

crítico

para F

Entre grupos 91 5 18,2

93,

6

2,7728531

5

Dentro de los grupos 3,5 18 0,194444444

Total 94,5 23

20.

Concentración

(ppm)

# de organismo muertos

Total % DE

MORTALIDAD

R1 R2 R3 R4

Blanco 0 0 0 0 0 0%

0,05 0 1 1 1 3 15%

0,1 3 2 2 2 9 45%

0,2 4 3 3 3 13 65%

0,3 5 5 5 5 20 100%

0,5 5 5 5 5 20 100%

Total 65

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor

crítico para

F

Entre grupos 88,70833333 5 17,74166667 141,93333 2,77285315

Dentro de los

grupos 2,25 18 0,125

Total 90,95833333 23

Page 183: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

178

RESUMEN SENSIBILIDAD

RESUMEN ANOVA

DE SENSIBILIDAD

F

Valor

crítico para

F

80,0571429 2,77285315

104,563636 2,77285315

305,4 2,77285315

102,685714 2,77285315

114,24 2,77285315

122,2 2,77285315

73,6 2,77285315

112,854545 2,77285315

85,64 2,77285315

126,72 2,77285315

112,418182 2,77285315

101,072727 2,77285315

127,92 2,77285315

72,3428571 2,77285315

101,072727 2,77285315

143,04 2,77285315

236 2,77285315

120,24 2,77285315

93,6 2,77285315

141,933333 2,77285315

Page 184: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

179

ANEXO 4

PRUEBAS ANOVA ENTRADA

1.

ENTRADA

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 14/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0

0,1 0 0 1 0 1 2 8

0,5 0 1 0 1 0 2 8

1 0 1 0 0 0 1 4

1,5 0 1 0 0 0 1 4

3 5 5 5 5 5 25 100

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor crítico

para F

Entre grupos 92,8 5 18,56 44,544 2,620654148

Dentro de los grupos 10 24 0,416666667

Total 102,8 29

Page 185: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

180

2.

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 09/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0

0,1 1 0 1 0 0 2 8

0,5 0 0 0 0 0 0 0

1 0 2 0 1 1 4 16

1,5 1 2 2 2 1 8 32

3 5 5 5 5 5 25 100

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor crítico

para F

Entre grupos 154 5 30,8 616 2,620654148

Dentro de los grupos 1,2 24 0,05

Total 155,2 29

3.

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 09/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0 0

0,1 0 1 0 0 0 1 4

0,5 0 0 0 0 0 0 0

1 0 0 0 1 1 2 8

1,5 1 1 1 0 0 3 12

3 5 5 5 5 5 25 100

Page 186: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

181

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor crítico

para F

Entre grupos 160,1666667 5 32,03333333 961 2,620654148

Dentro de los grupos 0,8 24 0,033333333

Total 160,9666667 29

4.

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 07/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0

0,1 0 0 0 0 0 0 0

0,5 0 0 0 0 0 0 0

1 0 0 0 0 0 0 0

1,5 3 2 3 2 2 12 48

3 5 5 5 5 5 25 100

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor crítico

para F

Entre grupos 100 4 25 65535 2,866081402

Dentro de los grupos 0 20 0

Total 100 24

Page 187: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

182

5.

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 07/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0

0,1 0 0 0 0 0 0 0

0,5 0 0 0 0 0 0 0

1 2 2 2 2 2 10 40

1,5 4 4 3 3 3 17 68

3 5 5 5 5 5 25 100

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor crítico

para F

Entre grupos 100 4 25 65535 2,866081402

Dentro de los grupos 0 20 0

Total 100 24

6.

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 02/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0

0,1 0 0 0 0 0 0 0

0,5 0 0 0 0 0 0 0

1 1 1 1 1 1 5 20

1,5 2 3 4 3 3 15 60

3 5 5 5 5 5 25 100

Page 188: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

183

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor crítico

para F

Entre grupos 104,1666667 5 20,83333333 65535 2,620654148

Dentro de los grupos 0 24 0

Total 104,1666667 29

7.

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 02/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0

0,1 0 0 0 0 0 0 0

0,5 0 0 0 0 0 0 0

1 2 1 1 1 1 6 24

1,5 5 4 2 5 3 19 76

3 5 5 5 5 5 25 100

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor crítico

para F

Entre grupos 104,1666667 5 20,83333333 65535 2,620654148

Dentro de los grupos 0 24 0

Total 104,1666667 29

Page 189: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

184

8.

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 02/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0

0,1 0 0 0 0 0 0 0

0,5 0 1 0 1 0 2 8

1 2 2 2 1 2 9 36

1,5 3 4 3 3 4 17 68

3 5 5 5 4 5 24 96

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor crítico

para F

Entre grupos 102,6666667 5 20,53333333 616 2,620654148

Dentro de los grupos 0,8 24 0,033333333

Total 103,4666667 29

9.

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 02/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0

0,1 0 0 0 0 0 0 0

0,5 1 1 1 1 0 4 16

1 3 3 3 2 2 13 52

1,5 4 3 4 4 4 19 76

3 5 5 5 5 5 25 100

Page 190: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

185

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor crítico

para F

Entre grupos 97,6 5 19,52 106,472727 2,620654148

Dentro de los grupos 4,4 24 0,183333333

Total 102 29

10.

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 30/09/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0

0,1 0 0 0 0 0 0 0

0,5 0 0 0 0 0 0 0

1 1 1 1 1 1 5 20

1,5 4 4 4 4 4 20 80

3 5 5 5 5 5 25 100

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor crítico

para F

Entre grupos 100,6666667 5 20,13333333 151 2,620654148

Dentro de los grupos 3,2 24 0,133333333

Total 103,8666667 29

Page 191: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

186

11.

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 02/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0

0,1 0 0 0 0 0 0 0

0,5 0 0 0 0 0 0 0

1 1 1 2 1 1 6 24

1,5 4 5 4 4 5 22 88

3 5 5 5 5 5 25 100

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor crítico

para F

Entre grupos 104,1666667 5 20,83333333 65535 2,620654148

Dentro de los grupos 0 24 0

Total 104,1666667 29

12.

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 02/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0

0,1 0 3 2 0 0 5 20

0,5 0 2 0 1 0 3 12

1 0 1 0 1 0 2 8

1,5 0 2 0 0 0 2 8

3 5 5 5 5 5 25 100

Page 192: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

187

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados de

libertad

Promedio de

los cuadrados F

Valor crítico

para F

Entre grupos 87,76666667 5 17,55333333 27,0051282 2,620654148

Dentro de los grupos 15,6 24 0,65

Total 103,3666667 29

RESUMEN ENTRADA

RESUMEN ANOVA DE ENTRADA

F Valor crítico para F

44,544 2,620654148

616 2,620654148

961 2,620654148

65535 2,866081402

65535 2,866081402

65535 2,620654148

65535 2,620654148

616 2,620654148

106,4727273 2,620654148

151 2,620654148

65535 2,620654148

27,00512821 2,620654148

Page 193: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

188

ANEXO 5

PRUEBAS ANOVA SALIDA

1.

SALIDA

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 14/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0

12 0 0 0 0 0 0 0

24 0 0 2 0 1 3 12

36 2 0 1 0 3 6 24

48 3 3 3 3 1 13 52

60 5 5 5 5 5 25 100

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados

de

liberta

d

Promedio

de los

cuadrados F

Probabilida

d

Valor

crítico para

F

Entre grupos

94,166666

7 5

18,8333333

3

34,242424

2

3,60987E-

10

2,62065414

8

Dentro de los

grupos 13,2 24 0,55

Total

107,36666

7 29

2.

Page 194: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

189

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 14/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0/25 0

12 0 0 1 0 2 3 3/25 12

24 0 0 0 0 0 0 0/25 0

36 0 0 1 2 2 5 0,2 20

48 1 2 1 2 3 9

36

60 5 5 5 5 5 25 25/25 100

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados

de

libertad

Promedio de

los

cuadrados F Probabilidad

Valor crítico

para F

Entre grupos 89,2 5 17,84 42,816 3,44936E-11 2,620654148

Dentro de los grupos 10 24 0,416666667

Total 99,2 29

3.

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 14/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0/25 0

12 0 0 1 1 0 2 2/25 8

24 0 0 2 0 2 4 4/25 16

26 0 0 1 3 0 4 4/25 16

48 2 3 1 3 2 11 11/25 44

60 5 5 5 5 5 25 25/25 100

Page 195: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

190

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados

de

liberta

d

Promedio

de los

cuadrados F

Probabilida

d

Valor

crítico para

F

Entre grupos

85,866666

7 5

17,1733333

3

26,420512

8

5,02838E-

09

2,62065414

8

Dentro de los

grupos 15,6 24 0,65

Total

101,46666

7 29

4.

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 14/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0/25 0

12 0 0 0 1 0 1 1/25 4

24 0 0 3 0 1 4 4/25 16

36 0 0 2 2 1 5 5/25 20

48 2 3 3 2 2 12 12/25 48

60 5 5 5 5 5 25 25/25 100

Page 196: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

191

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados

de

libertad

Promedio de

los

cuadrados F Probabilidad

Valor crítico

para F

Entre grupos 88,5666667 5 17,71333333 33,2125 4,94941E-10 2,620654148

Dentro de los grupos 12,8 24 0,533333333

Total 101,366667 29

5.

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 09/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0/25 0

20 3 2 2 2 3 12 12/25 48

40 4 4 3 4 3 18 18/25 72

60 5 5 5 5 5 25 25/25 100

80 5 5 5 5 5 25 25/25 100

100 5 5 5 5 5 25 25/25 100

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados

de

libertad

Promedio

de los

cuadrados F Probabilidad

Valor crítico

para F

Entre grupos 101,1 5 20,22 202,2 8,48497E-19 2,620654148

Dentro de los grupos 2,4 24 0,1

Total 103,5 29

Page 197: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

192

6.

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 09/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0/25 0

20 3 2 2 1 2 10 10/25 40

40 3 4 4 4 2 17 27/25 68

60 5 5 5 5 5 25 25/25 100

80 5 5 5 5 5 25 25/25 100

100 5 5 5 5 5 25 25/25 100

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrado

s

Grados

de

liberta

d

Promedio

de los

cuadrados F

Probabilida

d

Valor

crítico para

F

Entre grupos 106 5 21,2

97,846153

8 3,71137E-15

2,62065414

8

Dentro de los

grupos 5,2 24

0,21666666

7

Total 111,2 29

Page 198: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

193

7.

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 02/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0/25 0

20 3 3 2 2 1 11 12/25 44

40 3 4 3 4 5 19 19/25 76

60 5 5 5 5 5 25 25/25 100

80 5 5 5 5 5 25 25/25 100

100 5 5 5 5 5 25 25/25 100

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrado

s

Grados

de

liberta

d

Promedio

de los

cuadrados F

Probabilida

d

Valor

crítico para

F

Entre grupos 103,9 5 20,78

89,057142

9 1,07965E-14

2,62065414

8

Dentro de los

grupos 5,6 24

0,23333333

3

Total 109,5 29

Page 199: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

194

8.

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 02/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0/25 0

20 3 2 2 2 2 11 11/25 44

40 3 4 3 4 5 19 21/25 76

60 5 5 3 5 5 23 23/25 92

80 5 5 5 5 5 25 25/25 100

100 5 5 5 5 5 25 25/25 100

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados

de

liberta

d

Promedio

de los

cuadrados F

Probabilida

d

Valor

crítico para

F

Entre grupos

98,566666

7 5

19,7133333

3

69,576470

6

1,72645E-

13

2,62065414

8

Dentro de los

grupos 6,8 24

0,28333333

3

Total

105,36666

7 29

Page 200: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

195

9.

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 02/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0/25 0

20 2 3 2 1 2 10 10/25 40

40 4 3 4 4 3 18 18/25 72

60 5 4 5 5 5 24 24/25 96

80 5 5 5 5 5 25 25/25 100

100 5 5 5 5 5 25 25/25 100

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados

de

libertad

Promedio de

los

cuadrados F Probabilidad

Valor crítico

para F

Entre grupos 103,2 5 20,64 123,84 2,50637E-16 2,620654148

Dentro de los grupos 4 24 0,166666667

Total 107,2 29

10.

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 02/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0/25 0

20 2 1 3 1 0 7 7/25 28

40 3 4 3 2 3 15 15/25 60

60 5 4 3 5 5 22 22/25 88

80 5 5 5 5 5 25 25/25 100

100 5 5 5 5 5 25 25/25 100

Page 201: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

196

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados

de

liberta

d

Promedio

de los

cuadrados F

Probabilida

d

Valor

crítico para

F

Entre grupos

107,06666

7 5

21,4133333

3

49,415384

6

7,40262E-

12

2,62065414

8

Dentro de los

grupos 10,4 24

0,43333333

3

Total

117,46666

7 29

11.

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 02/10/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0/25 0

20 0 0 3 4 0 7 7/25 28

40 2 1 3 4 0 10 10/25 40

60 4 5 5 3 5 22 22/25 88

80 5 5 5 5 5 25 25/25 100

100 5 5 5 5 5 25 25/25 100

Page 202: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

197

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados

de

liberta

d

Promedio

de los

cuadrados F

Probabilida

d

Valor

crítico para

F

Entre grupos

112,56666

7 5

22,5133333

3

19,025352

1

1,19105E-

07

2,62065414

8

Dentro de los

grupos 28,4 24

1,18333333

3

Total

140,96666

7 29

12.

FECHA DE TOMA DE LA

MUESTRA 30/09/2014

CONCENTRACION

NOMINAL (%)

# DE ORGANISMOS

MUERTOS

NUMERO DE

MUERTOS /

TOTAL DE

ORGANISMO

S

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

BLANCO 0 0 0 0 0 0 0/25 0

20 1 2 3 1 2 9 9/25 36

40 3 2 4 2 3 14 14/25 56

60 3 5 4 5 5 22 20/25 88

80 5 5 4 5 5 24 24/25 96

100 5 5 5 5 5 25 25/25 100

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las

variaciones

Suma de

cuadrados

Grados

de

liberta

d

Promedio

de los

cuadrados F

Probabilida

d

Valor

crítico para

F

Entre grupos

97,866666

7 5

19,5733333

3

48,933333

3 8,2302E-12

2,62065414

8

Dentro de los

grupos 9,6 24 0,4

Total 107,46666 29

Page 203: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

198

RESUMEN SALIDA

ANALISIS ANOVA DE LA SALIDA

F Valor crítico para F

34,24242424 2,620654148

42,816 2,620654148

26,42051282 2,620654148

33,2125 2,620654148

202,2 2,620654148

97,84615385 2,620654148

89,05714286 2,620654148

69,57647059 2,620654148

123,84 2,620654148

49,41538462 2,620654148

19,02535211 2,620654148

48,93333333 2,620654148

Page 204: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

199

ANEXO 5

FACULTAD DE

INGENIERIA

AMBIENTAL Y

SANITARIA

LB – M02

LABORATORIO DE

BIOENSAYOS

PREPARACION DEL MEDIO

BRISTOL Y CENTRIFUGACION DE

ALGAS VERDES Scenedesmus

Quadricauda

Página 1 de 10

Versión 0

CONTENIDO

1. Objetivo

2. Materiales

3. Reactivos

4. Principio del método

5. Definiciones

6. Procedimiento

7. Bibliografía

8. Anexo A – Preparación del medio Bristol

Anexo B – Formato LB-M003. Preparación de soluciones

1. OBJETIVO

Preparar el medio Bristol para multiplicar las algas verdes Scenedesmus Quadricauda, por

medio de la fotosíntesis con ayuda de nutrientes y luz artificial, las cuales servirá como

alimento del cultivo masivo del microorganismo prueba. (Daphnia pulex)

Page 205: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

200

FACULTAD DE

INGENIERIA

AMBIENTAL Y

SANITARIA

LB – M02

LABORATORIO DE

BIOENSAYOS

PREPARACION DEL MEDIO

BRISTOL Y CENTRIFUGACION DE

ALGAS VERDES Scenedesmus

Quadricauda

Página 2 de 10

Versión 0

2. MATERIALES

Probeta de 2 litros (Brand) o

recipiente de vidrio de 3.5 L

Pipeta graduada de 10 ml

Aireador de una (1) sola entrada

(atman)

Pipeta graduada de 1 ml

Agua destilada Pipeta Pasteur de vidrio

Lámpara luminiscente Pipeteador

Beaker de 2000 y 500 ml Tubos de ensayo

Probeta de 10 ml Centrifugadora DINAC II Brand

3. REACTIVOS

NaNO3 KOH KH2PO4

CaCl2 .2H2O EDTA MnCl2. 4H2O

MgSO4.7H2O FeSO4. 7H2O ZnSO4. 7H2O

K2HPO4 H2SO4, MoO3,

NaCl H3BO3 CoCl2. 6H2O

CuSO4. 5H2O Co (NO3)2. 6H2O

4. PRINCIPIO DEL METODO

El medio Bristol según la metodología Dutka (1989) se realiza con el fin de

Page 206: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

201

FACULTAD DE

INGENIERIA

AMBIENTAL Y

SANITARIA

LB – M02

LABORATORIO DE

BIOENSAYOS

PREPARACION DEL MEDIO

BRISTOL Y CENTRIFUGACION DE

ALGAS VERDES Scenedesmus

Quadricauda

Página 3 de 10

Versión 0

multiplicar las algas verdes Scenedesmus Quadricauda, en condiciones de laboratorio por

medio de la fotosíntesis, con ayuda de una lámpara luminiscente y nutrientes para la

reproducción de las mismas, las cuales después de un proceso están listas para la

administración del alimento dependiendo la cantidad calculada con ayuda de la Cámara

Neubauer.

5. DEFINICIONES

Medio Bristol: solución de macro y micro – nutrientes necesarios el incremento de las

algas verdes, en condiciones estandarizadas.

Micronutrientes: Nutrientes que requiere una planta en menor cantidades (boro, cobre,

zinc, molibdeno, cloro, ferro), para su crecimiento.

Macronutrientes: Nutrientes que requiere una planta en mayor cantidades (boro, cobre,

zinc, molibdeno, cloro, ferro), para su crecimiento.

Elementos Traza: son elementos químicos requeridos para la vida de los organismos en

muy pequeñas cantidades. Se trata de elemento esenciales y a veces también se les

denomina oligoelementos

Page 207: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

202

FACULTAD DE

INGENIERIA

AMBIENTAL Y

SANITARIA

LB – M02

LABORATORIO DE

BIOENSAYOS

PREPARACION DEL MEDIO

BRISTOL Y CENTRIFUGACION DE

ALGAS VERDES Scenedesmus

Quadricauda

Página 4 de 10

Versión 0

Fitoplancton: está constituido por algas microscópicos que flotan libremente en las diversas

capas de agua; existen en formas unicelulares, colonias o filamentosas. Son las

responsables por la base de la cadena alimenticia del medio acuático.

Fotosíntesis: Síntesis de compuestos químicos por la acción de la luz, llevada a cabo por

las células vegetales que contienen clorofila, especialmente la producción de compuestos

orgánicos (principalmente carbohidratos) a partir de dióxido de carbono y una fuente de

hidrógeno (tal como el agua), con liberación simultánea de oxígeno.

Aireación: Adición de aire al medio Bristol, para la realización de la fotosíntesis.

6. PROCEDIMIENTO

(Ver diagrama 2 Anexo C)

6.1. Preparación de reactivos del medio Bristol (metodología Dutka 1989)

6.1.1. Disolver la cantidad de reactivos en el volumen indicado de agua destilada,

teniendo el stock de macro y micro - nutrientes en el anexo A

6.1.2. Anotar la fecha de preparación y el pH de las soluciones en el formato de

identificación de reactivos preparados Anexo B formato LB-M003

6.1.3. Preservar estas soluciones mediante refrigeración por un tiempo máximo de 6

meses.

Page 208: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

203

FACULTAD DE

INGENIERIA

AMBIENTAL Y

SANITARIA

LB – M02

LABORATORIO DE

BIOENSAYOS

PREPARACION DEL MEDIO

BRISTOL Y CENTRIFUGACION DE

ALGAS VERDES Scenedesmus

Quadricauda

Página 5 de 10

Versión 0

6.2. Preparación del medio Bristol (metodología Dutka 1989)

6.2.1. Tomar 1500 ml de agua destilada en un Beaker de 2000 ml.

6.2.2. Adicionar las diferentes alícuotas de macro y micro nutrientes expuestas en el

anexo A.

6.2.3. Transferir la solución a una probeta de 2000 ml, completando con agua destilada

hasta su volumen graduado.

6.2.4. Llevar la solución Bristol una vez preparada a un Erlenmeyer de 2000 ml, colocar

un tapón de papel kraff y esterilizar en autoclave por un periodo de 15 minutos a

121ºC y 15 libras de presión.

6.2.5. Una vez esterilizado y enfriado el medio a temperatura constante Adicionar una

alícuota de 2 ml del cultivo de algas verdes Selenastrum Capricornutum,

Scenedesmus Quadricauda, de la semana anterior, por medio de una pipeta Pasteur.

Y transferir a una probeta de 2000 ml.

6.2.6. Tapar la probeta con un corcho o el recipiente de vidrio de 3.5L con papel parafilm

evitando así la contaminación del cultivo por agentes externos.

6.2.7. Oxigenar e iluminar con ayuda de un aireador y una lámpara luminiscente de

manera continua las 24 horas, proporcionando así las condiciones necesarias para

Page 209: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

204

FACULTAD DE

INGENIERIA

AMBIENTAL Y

SANITARIA

LB – M02

LABORATORIO DE

BIOENSAYOS

PREPARACION DEL MEDIO

BRISTOL Y CENTRIFUGACION DE

ALGAS VERDES Scenedesmus

Quadricauda

Página 6 de 10

Versión 0

Que se multipliquen por medio de la fotosíntesis. No se puede apagar en ningún momento

el aireador y la lámpara.

6.2.8. El medio Bristol se debe mantener en las condiciones anteriormente descritas en

un tiempo no mayor de 15 días. Tornándose en color verde en su totalidad

6.2.9. Trasvasar el medio Bristol a un Beaker de 500 mly de este transferirlo a tubos

de centrifuga en volúmenes de 10 ml con ayuda de la probeta.

6.2.10. Llevar los tubos de ensayo a la centrifugadora “DINAC II Centrifugue

(Brand)” por quince (15) minutos, de 2000 a 2500 rpm, con el fin de concentrar

el cultivo de algas verdes Scenedesmus Quadricauda.

6.2.11. Retirar los tubos de la centrifugadora DINAC II y eliminar el sobrenadante

6.2.12. Extraer el concentrado de las algas con ayuda de la pipeta Pasteur

6.2.13. Almacenar el concentrado de algas en frascos destinados para el mismo.

6.2.14. Sellar los frasco de almacenamiento con papel parafilm, rotular, identificando

fecha de siembra y refrigerar a 4°C

6.2.15. Realizar el conteo algal mediante el procedimiento LB-M003, con el fin de

determinar la cantidad de células de algas y frecuencia de alimentación del

cultivo de organismos.

Page 210: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

205

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INGENIERIA

AMBIENTAL Y

SANITARIA

LB – M02

LABORATORIO DE

BIOENSAYOS

PREPARACION DEL MEDIO

BRISTOL Y CENTRIFUGACION DE

ALGAS VERDES Scenedesmus

Quadricauda

Página 7 de 10

Versión 0

7. BIBLIOGRAFIA

ESCOBAR MALAVER, Pedro Miguel; GARCIA, Eduardo. Determinación de la

toxicidad agua de los detergentes mediante sistemas estáticos, utilizando Daphnia

Magna. Universidad de la Salle; Facultad de ciencias de la educación;

departamento de Química y Biología. Bogotá D.C., 1993. Anexo 4

CETESB. Pruebas de Toxicidad aguda. Protocolos L5.017/ 92

Proyecto CAR – BID – Contrato 298–94. Estudio de evaluación de toxicidad

relativa de sustancias tóxicas en vertimientos y cuerpos receptores.

VILLEGAS GONZALEZ, Guillermo. Protocolos analíticos para agua. Corporación

Autónoma Regional de Cundinamarca; Subdirección Científica. Bogotá D.C.,

1999.1ª edición

Adaptado para D. PULEX por: María Angélica Castelblanco 41022124

Yasmín Maldonado Malaver 41021149

Revisión: Pedro Miguel Escobar Malaver

Page 211: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

206

FACULTAD DE

INGENIERIA

AMBIENTAL Y

SANITARIA

LB – M02

LABORATORIO DE

BIOENSAYOS

PREPARACION DEL MEDIO BRISTOL

Y CENTRIFUGACION DE ALGAS

VERDES Scenedesmus Quadricauda

Página 8 de 10

Versión 0

ANEXO A

PREPARACIÓN DEL MEDIO BRISTOL

N° COMPUESTO SOLUCION

MADRE

ml de solución

madre por litro

de solución

1 NaNO3 25.0 g/L 10

2 CaCl2.2H2O 2.5 g/L 10

3 MgSO4.7H2O 7.5 g/L 10

4 K2HPO4 7.5 g/L 10

5 NaCl 2.5 g/L 10

6 KH2PO4 17.5 g/L 10

7 KOH 15.5 g/ 500 ml 1

EDTA 25.0 g/ 500 ml

8 FeSO4.7H2O 2.49 g/ 500 ml 1

H2SO4 0.05 ml/ 500 ml

9 H3BO3 5.71 g / 500 ml 1

SOLUCION DE ELEMENTOS TRAZA

10 ZnSO4. 7H2O 4.41 gr. /

500 ml

ZnSO4. 7H2O 4.41 gr. /

500 ml

1 ml del

stock

combinado

11 11 MnCl2. 4H2O 0.72 gr. /

500 ml

11 MnCl2. 4H2O 0.72gr.

/ 500 ml

12 12 MoO3 0.355 gr. / 500

ml

12 MoO3 0.355 gr. / 500

ml

13 13 CuSO4. 5H2O 0.785 gr.

/ 500 ml

13 CuSO4. 5H2O 0.785

gr. / 500 ml

14 14 Co (NO3)2. 6H2O

0.245 gr. / 500 ml

14 Co (NO3)2. 6H2O

0.245 gr. / 500 ml Fuente: ESCOBAR MALAVER, Pedro Miguel. Determinación de la toxicidad agua de los detergentes

mediante sistemas estáticos, utilizando DAPHNIA Magna. Universidad de la Salle. 1994.

Adicionar los volúmenes indicados de macronutrientes, más un (1) ml de los elementos

traza y completar el volumen de la probeta que se desee preparar

Agitar y ajustar el pH

Anotar el pH y la fecha de preparación

Page 212: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

207

FACULTAD DE

INGENIERIA

AMBIENTAL Y

SANITARIA

LB – M02

LABORATORIO DE

BIOENSAYOS

PREPARACION DEL MEDIO BRISTOL

Y CENTRIFUGACION DE ALGAS

VERDES Scenedesmus Quadricauda

Página 9 de 10

Versión 0

ANEXO B

Formato LB – M003 PREPARACION DE SOLUCIONES

FACULTAD DE INGENIERIA

AMBIENTAL Y SANITARIA

LABORATORIO AREA DE

BIOENSAYOS

IDENTIFICACION DE SOLUCIONES PREPARADOS

Nombre de la solución:

Fecha de preparación:

pH:

Determinación:

Volumen a preparar:

Preparado por:

Fuente: Autoras

Page 213: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

208

FACULTAD DE

INGENIERIA

AMBIENTAL Y

SANITARIA

LB – M02

LABORATORIO DE

BIOENSAYOS

PREPARACION DEL MEDIO BRISTOL

Y CENTRIFUGACION DE ALGAS

VERDES Scenedesmus Quadricauda

Página 10 de 10

Versión 0

ANEXO C

DIAGRAMA DEL PROCESO

Fuente: Autoras

Page 214: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

209

FACULTAD DE

INGENIERIA

AMBIENTAL Y

SANITARIA

LB – M03

LABORATORIO DE

BIOENSAYOS

CONTEO DE ALGAS CON LA

CAMARA NEUBAUER

Página 1 de 8

Versión 0

CONTENIDO

1. Objetivo

2. Materiales

3. Definiciones

4. Procedimiento

5. Ejemplo

6. Bibliografía

1. OBJETIVO

Determinar la cantidad de células algales (cultivo de algas verdes Scenedesmus Quadricauda)

que se debe suministrar las Daphnia pulex, los días de limpieza del cultivo, mediante la

utilización de la cámara Neubauer.

2. MATERIALES

Papel de arroz

Microscopio trinocular CME Leica

Cámara Neubauer

Frasco de solución de algas Scenedesmus Quadricauda a evaluar

Page 215: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

210

FACULTAD DE

INGENIERIA

AMBIENTAL Y

SANITARIA

LB – M03

LABORATORIO DE

BIOENSAYOS

CONTEO DE ALGAS CON LA

CAMARA NEUBAUER

Página 2 de 8

Versión 0

Pipeta Pasteur

Pipeteador

Agua destilada

3. DEFINICIONES

Cámara Neubauer: Es una cámara que se utiliza para realizar el conteo de glóbulos, en

una cantidad fija de líquido. La profundidad de la cámara es de 0.1 mm. La cuadricula

de recuento muestra 9 cuadros grandes, cada uno de un (1) mm2; los cuatro cuadrados

grandes de las esquinas señalados con una L están en 16 cuadrados con aristas de 0.25

mm. Se utiliza para el recuento de leucocitos. El cuadrado grande central está dividido

en 25 cuadrados medianos.

Con aristas de 0.2 mm, estando cada cuadrado mediano dividido en 16 cuadrados

pequeños con aristas de 0.05 mm y una superficie de 0.0025 mm2. Los 5 cuadrados

medianos señalados con una “E” se utilizan para el recuento de eritrocitos y

trombocitos.

Tiene especial relevancia que todos los cuadros medianos presentan en todos sus lados

líneas límite triple. La línea central es la frontera y decide si las células de esta zona se

deben contar o no.

Page 216: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

211

FACULTAD DE

INGENIERIA

AMBIENTAL Y

SANITARIA

LB – M03

LABORATORIO DE

BIOENSAYOS

CONTEO DE ALGAS CON LA

CAMARA NEUBAUER

Página 3 de 8

Versión 0

Microscopio Trinocular: El microscopio es un instrumento que permite observar objetos que

son demasiado pequeños para ser vistos a simple vista.

Pipeta Pasteur: Son de vidrio sódico-cálcico, para uso único, ISO 7712, con punta larga y fina,

con estrangulación en el tubo de aspiración apta para colocar un tapón de algodón, sin tapón de

laboratorio

Micro pipeta: Instrumento de laboratorio empleado para medir absorber pequeños volúmenes

de líquidos y permitir su manejo en las distintas técnicas científicas.

Agua Destilada: Agua producida por intercambio iónico con resinas catiónicas y aniónicas con

ayuda de la unidad de osmosis inversa la cual reduce el contenido de sales totales en más del

90%.

Factor de dilución: El factor de dilución es igual al volumen final de la dilución dividido entre

la cantidad alicuotada para la dilución.

4. PROCEDIMIENTO

A continuación se describe el procedimiento a realizar con la cámara de Neubauer, con

capacidad de 1 x 10-4 ml.

4.1. Limpiar la cámara Neubauer con papel de arroz (figura 1)

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CONTEO DE ALGAS CON LA

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4.2.Colocar el cubreobjetos sobre los canales de la cámara (figura 2)

4.3.Agitar manualmente el frasco con la solución de algas verdes concentradas, a evaluar,

hasta observar coloración homogénea o disolver los agregados celulares.

4.4.Tomar una alícuota de 0.1 ml del concentrado de algas, con ayuda de una pipeta

Pasteur

4.5.Colocar la punta de la pipeta Pasteur en el borde del cubreobjetos.(Figura 3)

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4.6. Dejar ingresar la solución a la cámara por capilaridad en un tiempo de 2 minutos sin que

pase a los canales laterales, no se puede dejar burbujas dentro de la cámara.

4.7. Colocar la cámara de Neubauer en la platina del microscopio trinocular y enfocar con el

objetivo 10X.

4.8. Localizar el cuadro central de la rejilla, el cual está dividido en 25 cuadros, teniendo cada

uno un área de 0.04 mm2.

4.9. Cambiar de lente al objetivo de 40x y realizar 5 lecturas de forma diagonal, teniendo

presente que las células que se encuentren sobre las líneas de la cuadricula deben ser

descartadas; la lectura se realiza en el orden señalado como se observa en el siguiente

diagrama 1.

Diagrama 1: Lectura en la Cámara de Neubauer

Fuente: Las autoras.

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4.10. De las células contadas en cada cuadro en forma diagonal se multiplica por 4 o 5

dependiendo de la cuadricula; se suman los valores obtenidos hallando su promedio.

4.11. Si se tienen entre 200 y 250 células; realizar una dilución de las algas verdes

Scenedesmus Quadricauda a evaluar en agua destilada.

4.11.1. Estas diluciones pueden ser 0.1 ml de concentrado de algas / 2.9 ml de agua destilada y

así sucesivamente, hasta obtener un numero de algas entre 40 y 80 por cada cuadricula.

4.12. Con la dilución se realiza los procedimientos de 4.5 a 4.9.

4.13. Registrar esta información en el formato LB-M004.

4.14. Se determina la cantidad de células que existen en un 1 ml, partiendo que la cámara tiene

una capacidad de 1 x 10-4 ml, de la siguiente manera:

𝑋𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠

1 × 10−4𝑚𝑙=

𝑁𝑜. 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠

1 𝑚𝑙

4.13. Este valor se multiplica posteriormente por el factor de dilución, dado así el valor real de

células que existe en 1 ml

4.14. Calcular el volumen de alimento que necesita cada pecera que contiene 20 Daphnia

pulex con la siguiente fórmula:

𝑉 =( 𝐴 × 𝐵)

𝐶

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Dónde:

V = Volumen del concentrado de algas

A = Número de Daphnia pulex por acuario.

B = Dosis óptima recomendada (4.5 x 106 células por Daphnia pulex /día).

(según metodología CETESB / L5.018)

C = Concentración (número de células/ml) de la suspensión de algas descritas y

halladas anteriormente.

4.15. Determinar la cantidad de alimento que se debe suministrar en cada pecera que contiene

20 Daphnia pulex, la frecuencia de alimentación y la limpieza deben realizarse todos los

días ya que la algo podría pegarse al cuerpo del organismo.

5. BIBLIOGRAFÍA

DIAZ BÁEZ, María Consuelo; PICA GRANADOS Yolanda; RONCO Alicia. Ensayos

tóxicológicos y métodos de evaluación de calidad de aguas; conteo con la cámara de

Neubauer. Canadá; IDRC, 2004. 90p.

www.google.com/cámaraneubauer/procedimientoparaelconteodeglobulos

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• CETESB. Pruebas de Toxicidad aguda. Protocolos L5.017/ 92

Proyecto CAR – BID – Contrato 298–94. Estudio de evaluación de toxicidad relativa de

sustancias tóxicas en vertimientos y cuerpos receptores.

Adaptado para D. pulex por: María Angélica Castelblanco 41022124

Yasmín Maldonado Malaver 41021149

Primera: Pedro Miguel Escobar Malaver

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CONTENIDO

1. Objetivo

2. Materiales

3. Definiciones

4. Principio del método

5. Procedimiento

6. Bibliografía

7. Anexo A – Mantenimiento, separación y conservación del cultivo en peceras

8. Anexo B – Ciclo de renovación del cultivo.

9. Anexo C – Diagrama del proceso.

1. OBJETIVO

Realizar el mantenimiento y limpieza del cultivo de los organismos prueba Daphnia pulex,

bajo condiciones de laboratorio.

2. MATERIALES

• Peceras

• Bandeja para el conteo y separación de microorganismo modelo

• Mallas de filtro

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• Pipetas Pasteur plásticas de 3 ml

• Recipientes plásticos de 250 y 120mm aproximadamente.

• Lavadores con agua destilada

• Agua reconstituida (dureza 160-180 mg CaCO3)

• Agua Caliente de la llave

• Toallitas absorbentes

• Esponja para lavado de peceras

3. DEFINICIONES

Cladóceros: Subgrupo de Braquiópodos, conformado por animales de tamaño pequeño. Se les

encuentra mayormente en agua dulce.

Daphnia: Crustáceos planctónicos, pertenecientes al orden Cladóceros, que viven en las aguas

dulces. En épocas favorables se reproducen por partenogénesis originando sólo hembras que

incrementan de forma rápida la población.

Bandeja para el conteo y separación de microorganismos: Utensilio de color blanco; utilizado

para la separar neonatos y contar las madres de la especie Daphnia pulex, los días de limpieza.

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Pipetas Pasteur plásticas de 3 ml: Pipeta plástica, en la cual se establece puede establecer el

tamaño de la boca de succión dependiendo del microorganismos que se esté separando y

recolectando (neonatos y madres de la especie Daphnia pulex)

Mantenimiento: Operación realizada con el fin de conservar el cultivo de los organismos

en óptimas condiciones de reproducción, evitando alteraciones del mismo por la presencia

de efipios y madres que ya culminaron su etapa reproductiva.

Limpieza: Acción realizada con el propósito de mantener las peceras donde se encuentra el

cultivo en óptimas condiciones sin residuos de alimentación y caparazones de los

microorganismos.

Neonatos: Crustáceos de la especie Daphnia pulex, de 6 a 24 horas de nacidos en

condiciones controladas de laboratorio.

Daphnia Madres: Crustáceos planctónicos que se encuentra en el ambiente óptimo para su

reproducción partenogenética, en condiciones controladas.

4. PRINCIPIO DEL METODO

El mantenimiento del cultivo de organismos Daphnia pulex, se realiza según la metodología

CETESB (L5.018), para conservar un cultivo masivo de 4 edades, manteniendo la posibilidad

de usar neonatos del primero al cuarto parto, donde su etapa reproductiva es la más alta.

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Eliminando cualquier alteración que puede producir bajas en la reproducción de los

organismos entre ellas:

• Presencia de efipios (machos).

• Residuos que pueden entrar en contacto con las Daphnia pulex y provocar

mortandad de las mismas.

• Falta de oxígeno o alimentación en el cultivo

5. PROCEDIMIENTO

(Ver diagrama 3, anexo C)

5.1.MANTENIMIENTO

5.1.1. El cultivo de Daphnia pulex se deben mantener en peceras de 2 litros con el fin de

establecer el escenario óptimo para el crecimiento de los individuos. Según

metodología (EPA 1994).

5.1.2. En cada una de ellas se deben mantener 20 individuos, manejando la relación de

1/100 (1 individuo por cada 100ml de agua reconstituida), con una dureza total que

puede variar entre 160 y 180 mg/L para su desarrollo.

5.1.3. Cada pecera debe permanecer tapada para ello se puede utilizar plástico evitando el

polvo, sustancias químicas y vapores que puede afectar la calidad del agua y alterar

el cultivo.

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5.1.4. Renovar el cultivo teniendo en cuenta el ciclo reproductivo de la Daphnia pulex,

conservándose en las etapas óptimas de reproducción, manteniéndolas en peceras separados

por edad desde 0 – 1 semana hasta cuatro semanas; eliminando los organismos mayores a

cinco semanas y renovando el cultivo con neonatos que se obtuvieron ese día. (CETESB

/L5.018, 1992).

5.1.5. Esta renovación se debe realizar de manera continua hasta obtener organismos de quinta

generación bajo condiciones estandarizadas de laboratorio, teniendo esta descendencia se

procede a realizar las pruebas tóxicológicas preliminares de sensibilidad como se muestra en el

anexo A.

5.1.6. El cultivo se debe manejar en 4 peceras por semana, obteniendo 16 peceras en el mes

con un total de 320 organismos prueba. Esto se debe realizar después de su aclimatación como

se muestra en el anexo B, anexo C.

5.1.7. Conservar el cultivo a una temperatura de 20 ± 2°C, para ello se debe ubicar un

termómetro en el sitio de almacenamiento. Revisándolo y registrando continuamente en el

formato LB-M004

5.1.8. Se debe manejar foto - periodo 16 horas de luz / 8 de oscuridad

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5.2.LIMPIEZA

5.2.1. La limpieza del área de trabajo se debe realizar solo con agua, no se debe usar

detergentes, desinfectantes, bactericidas, etc.

5.2.2. Limpiar diariamente las peceras, con el fin de eliminar los caparazones de los

organismos y los restos (comida) que se pueden encontrar en el fondo.

5.2.3. Pasar el agua de las peceras con el cultivo a la bandeja de separación.

5.2.4. Realizar la separación entre neonatos de 6 a 24 horas de nacidos y adultas (madres) en

recipientes plásticos.

5.2.5. Realizar el conteo del cultivo tanto de neonatos como la corroboración de las madres.

Consignar esta información en el formato LB-M005.

5.2.6. Lavar las peceras con abundante agua de la llave; enjuagarlas con agua destilada y

purgarlas con agua reconstituida (no se puede emplear ningún tipo de detergentes).

5.2.7. Filtrar el agua en un tamiz y recuperar el volumen de cada pecera

5.2.8. Cambiar una parte mínima (±1/6) del volumen; por agua reconstituida nueva y fresca,

esto se realiza cada ocho días.

5.3.RECOLECCION Y MANIPULACION DE ORGANISMOS PRUEBA Daphnia pulex

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5.3.1. Extraer los organismos modelo ( neonatos de 6- a 24 horas de nacidos empleando

una pipeta Pasteur de plástico de 3 mililitros, la cual, debe tener una abertura

suficiente para no ocasionarle daños a ningún microorganismo

5.3.2. No se pueden formar burbujas dentro de las pipetas Pasteur.

5.3.3. Colocar los microorganismos dentro y no sobre el agua reconstituida en recipientes

plásticos, porque la tensión superficial afecta la flotabilidad de los organismos y

tiende a irse hacia la superficie.

5.3.4. Realizar la separación y recolección de los neonatos de manera cuidadosa evitando

el estrés que se puede provocar a los organismos modelo por la transferencia de un

recipiente a otro. Estos serán utilizados para las pruebas de toxicidad, renovación

de cultivo y pruebas de viabilidad.

5.3.5. Alimentar los cultivos de las peceras, teniendo en cuenta el Protocolo LB-M03

(conteo de algas con la cámara Neubauer)

5.3.6. Guardar las peceras en el sitio de almacenamiento y taparlo con plástico evitando el

polvo, sustancias químicas y vapores que pueden estar en el ambiente del

laboratorio.

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ANEXO A

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ANEXO B

Recolección de Organismos

Aclimatación de las 8 Daphnia pulex Hembras adultas, representadas por la

letra H cada una en un cristalizador

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ANEXO C

DIAGRAMA DEL PROCESO - MANTENIMIENTO DEL CULTIVO D. pulex

Fuente: Autoras

MANTENIMIENTO CULTIVO D. pulex

MANTENIMIENTO

4 peceras 20 organismos

T 20°C - 16 h luz/ 8 h oscuridad - tapadas

Nueva siembra c/8-12 dias. Hasta 4

semanas

Realizar pruebas de sensibilidad

LIMPIEZA

Lavar con agua destilada

Separar D. pulex en recipientes plasticos

c/8 dias cambio 1/2 de agua dura

reconstituida nueva.

RECOLECCION Y MANIPULACION DE

ORG.

Extraer neonatos

Colocarlos en recipientes plasticos

Condiciones mantenimiento

inicial

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6. BIBLIOGRAFIA

• ESCOBAR MALAVER, Pedro Miguel. Implementación de un sistema de alerta de

riesgo tóxicológico utilizando Daphnia Magna para la evaluación de muestras

ambientales. Santafé de Bogotá; 1997.

• CETESB. Mantenimiento del cultivo. Protocolo L5.018, 1992

• Proyecto CAR – BID – Contrato 298–94. Estudio de evaluación de toxicidad

relativa de sustancias tóxicas en vertimientos y cuerpos receptores.

Adaptado para D. pulex por: María Angélica Castelblanco Marcelo 41022124

Yasmín Maldonado Malaver 41021149

Primera Revisión: Pedro Miguel Escobar Malaver

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CONTENIDO

1. Objetivos

2. Definiciones

3. Materiales

4. Principio del método

5. Procedimiento

6. Bibliografía

7. Anexos

1. 1. OBJETIVO

Determinar la concentración la concentración letal media (CL50 – 48) de una sustancia pura o

de un vertimiento mediante pruebas estáticas sin renovación de la sustancia pura o efluente,

que produce la muerte al 50% de los organismos expuestos en un tiempo de 48 horas.

2. 2. DEFINICIONES

Prueba Estática: Ensayo tóxicológico en el cual no existe renovación de las soluciones test a lo

largo de toda la prueba 8corto tiempo de duración no más de 96 horas)

Condiciones de la Prueba: Medición de parámetros de control después de cada una de las

pruebas, con fin de demostrar que la manifestación de los organismos expuestos se debe al

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Efecto de las sustancias puras o vertimientos y no a alteraciones de las características

fisicoquímicas de las mismas. Para ello se verifican el pH, el oxígeno disuelto y la dureza.

Concentración Letal (CL50-48): Concentración del compuesto tóxico que afecta al 50 % de la

población de la especie modelo, causando su muerte, bajo condiciones de prueba en un tiempo

determinado

Pruebas de Sensibilidad: Estandarización de pruebas de toxicidad, cuyo propósito es establecer

la sensibilidad de las especies y su secuencia de efecto frente a un tóxico de referencia, según

las repeticiones de las mismas; con esto se garantiza y certifica la confiabilidad de los datos en

relación con la capacidad de respuesta de los organismos.

Con las pruebas se determina el rango de sensibilidad frente al tiempo de exposición de igual

manera se comprueba que la manifestación de los organismos expuestos se debe al efecto del

tóxico de referencia y no a fallas operacionales en la aplicación del método, elaborando así

cartas de vigilancia, teniendo en cuenta la precisión y exactitud que se deben y pueden

obtenerse en los resultados generados por un determinado bioensayo. Los tóxicos de referencia

a utilizar en estas pruebas pueden ser: NaCl, KCl, CdCL, CuSO4, SDS o K2CR2O7

Pruebas Preliminares (Screening Test): Pruebas de toxicidad donde se establece el rango de

concentraciones de sustancias problema o vertimientos en las cuales hay efectos observables

en los organismos prueba sin que se presente alta mortalidad.

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Pruebas Definitivas: Pruebas de toxicidad que se realizan a partir de los resultados de las

pruebas preliminares. En ellas se determinan si se pueden mantener las mismas

concentraciones, o si es necesario cambiar el factor de dilución en algún intervalo u otro

aspecto que resulte relevante.

Pruebas de Toxicidad Aguda: El principio de estas pruebas es determinar bajo condiciones

específicas de una sustancia pura o efluente su letalidad al 50% de la población expuesta

después de un período de exposición de 24, 48, 72 o 96 horas. Esta determinación se

designa como la concentración letal media en el tiempo de exposición.

3. MATERIALES

Frascos de vidrio boca ancha de 100 y 500 ml Gradillas

Balones aforados de 100 ml y 500 ml Pipeta graduada de 10 ml

Lápiz de cera Pipeteador

Tubos de ensayo Cristalizadores de 60 y 70 mm

Frascos de vidrio boca ancha de 100 y 500 ml Pipeta Pasteur plástica de 3 ml

4. PRINCIPIO DEL METODO

Las pruebas de toxicidad se realizan según la metodología CETESB (L5.017 y L5.022),

con el fin de exponer individuos de 24 horas de nacidos a diferentes porcentajes de dilución

de una sustancia de interés sanitario o de un vertimiento, determinándose la concentración

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Que afecta al 50 % de la población del organismos prueba Daphnia pulex, causando su

muerte, en un tiempo determinado.

5. PROCEDIMIENTO

5.1 Preparación de sustancias puras para pruebas de toxicidad Agua.

5.1.1 Preparar 100 ml de sustancia pura en un balón aforado 100 ml utilizando la sal de la

sustancia y agua reconstituida en una concentración de 100 mg/l y a partir de ella hacer 5

diluciones siguiendo un factor de 10. ( 100, 10, 1, 0,1, 0,01 y 0,001 mg/l)

5.1.2 Transferir las soluciones a frascos de vidrio de boca ancha, rotular indicando la fecha

de preparación y mantenerlas refrigeradas por un tiempo máximo de 2 meses.

5.1.3 Aclimatar las soluciones durante un periodo de tres (3) horas antes de la realización

de las pruebas toxicológicas.

5.2 Vertimientos

5.2.1 Determinar el sitio de muestreo en la industria

5.2.2 Realizar la caracterización fisicoquímica del agua residual, siguiendo los

lineamientos del estándar Methods versión 19. AWWA.

5.2.3 Establecer si es necesario efectuar un tratamiento a la muestra ambiental (filtración o

precipitación, centrifugación) para facilitar el montaje de las pruebas de toxicidad.

5.2.4 Mantener refrigerada la muestra por un tiempo no mayor a 12 horas.

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5.2.5 P5.2.5 Preparar diluciones partiendo del 100% del efluente y a partir de ella preparar soluciones de

20, 40, 60, 80 % del efluente diluyendo con agua reconstituida a un volumen final de 500 ml.

5.2.6 Pasar las soluciones en frascos de boca ancha y mantenerlas tapadas, hasta iniciar las

pruebas de toxicidad.

5.2.7 Realizar las pruebas toxicológicas en un tiempo no mayor a 24 horas.

5.2.8 Aclimatar las soluciones durante un periodo de tres (3) horas antes de la realización de las

pruebas toxicológicas.

5.2.Montaje de la pruebas toxicológicas

5.2.1. Colocar en una gradilla 24 tubos de ensayo, los cuales, deben estar distribuidos en cinco

(5) concentraciones de las respectivas soluciones (pruebas de sensibilidad, sustancia pura y

muestra ambiental) y en un control de agua reconstituida. Para ello cada tubo debe ser marcado

con un lápiz de cera.

5.2.2. Adicionar 10 ml de los diferentes porcentajes de concentración con ayuda de una pipeta

graduada en los tubos de ensayo, siendo preparadas cuatro (4) replicas por concentración, cada

una, con su respectivo control (agua reconstituida dureza 160 - 180 g/l CaCO3).

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5.2.3. Transferir en cada tubo de ensayo 5 neonatos de 6 a 24 horas de nacidos con ayuda de una

pipeta Pasteur de plástico, separados con anterioridad según el protocolo LB04 “mantenimiento

del cultivo Daphnia pulex”. Cada concentración necesita 20 organismos y en cada batería de

ensayo se utilizan 120 organismos.

5.2.4. Cubrir el montaje con una bolsa de color negro que aislé la luz, a una temperatura de 20± 2

°C bajo condiciones de oscuridad durante 48 horas.

5.2.5. Al terminar las 48 horas revisar con ayuda de una lámpara con lupa, la batería de ensayo y

realizar la lectura de los organismos muertos en cada tubo, reportando el número de ellos en el

formato LB M001 "registro de resultados por muestra analizada”.

5.2.6. Realizar la medición de parámetros de control el pH, OD y dureza después de cada prueba,

tomando de manera aleatoria cualquier concentración, con fin de demostrar que la manifestación

de los organismos expuestos se debe al efecto de las sustancias puras o vertimientos y no a

alteraciones de las características fisicoquímicas de las mismas. Reportando estos datos en el

formato LB001

5.2.7. Registrar y reportar los datos en la siguiente tabla:

Concentración

Replicas Total

Muertos

% de

Mortalidad

pH OD DUREZA

1 2 3 N

Tabla 1. Formato LB M001. Reporte de datos de bioensayos

Fuente: Guía para la realización de ensayos de toxicidad (Bioensayos) en organismos acuáticos

Page 239: Determinación de la CL50 para un vertimiento proveniente ...

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5.2.8. Este procedimiento se realiza hasta encontrar los rangos de concentraciones que produce

la muerte al 50% de los organismos para la realización de las pruebas definitivas de

sensibilidad como para sustancias puras y vertimientos.

5.3. Pruebas de Sensibilidad

5.3.1. Realizar las pruebas definitivas de sensibilidad siguiendo la metodología descrita en los

pasos 5.2.1. hasta 5.2.7. utilizando los rangos establecidos según los resultados en las

pruebas preliminares

5.3.2. Los rangos de dicromato de potasio que producen la muerte al 50% de los organismos

están entre 0.1 y 1 mg/l de dicromato de potasio.

5.3.3. Con los resultados obtenidos entre este rango determinar la concentración letal media

CL50-48 de cada prueba de sensibilidad, por medio del método Probit que está en el

protocolo LBM 06 “Análisis de Regresión y análisis Probit”

5.3.4. Realizar una carta de control con los resultados obtenidos en las pruebas de sensibilidad y

determinar la concentración letal media (CL50-48) promedio para el Dicromato de

Potasio, así como la desviación estándar (σ) de la (CL50-48), sus límites superior

(promedio +2(σ)), e inferior (promedio - 2(σ))

5.3.5. Estos resultados, corresponden al intervalo de la concentración en el cual varía la

respuesta de los organismos al tóxico de referencia, con una confiabilidad del 95%.

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5.3.6. La carta de control se debe realizar como mínimo con 20 pruebas de sensibilidad con el

dicromato de potasio.

5.4. Pruebas Definitivas

5.4.1. Realizar las pruebas definitivas siguiendo la metodología descrita en los pasos 5.2.1.

hasta 5.2.7. utilizando los rangos establecidos según los resultados en las pruebas

preliminares

5.4.2. Reportar estos resultados en el formato LBM001

5.4.3. Obtener la concentración letal media (CL50-48), con sus respectivo límite superior e

inferior con una confiabilidad del 95% por medio del método Probit, para ello remítase la

protocolo LB006 “Análisis de Regresión y Análisis Probit”

5.4.4. Realizar el análisis de varianza (ANOVA) del resultado con el procedimiento descrito en

el protocolo LB07 “análisis de varianza”

Notas:

1. La mortalidad en los controles no debe ser mayor que el 10% y preferiblemente

no más que el 5%.

2. Si la mortalidad en el control sobrepasa el 10%, esta prueba se considera no

representativa y se requiere la repetición de la misma.

3. La concentración de oxigeno medida en el bioensayo después de 48 horas debe

ser mayor de 2 mg/l.1

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4. Se debe realizar semanalmente una prueba de sensibilidad con los rangos

establecidos del dicromato de potasio; el resultado de la concentración letal media

(CL50-48) del tóxico de referencia debe estar dentro de los límites superiores e

inferiores establecidos en la carta de control.

6. BIBLIOGRAFIA

•CETESB. Pruebas de Toxicidad aguda. Protocolos L5.017 y L5.022 1992

•Proyecto CAR – BID – Contrato 298–94. Estudio de evaluación de toxicidad relativa de

sustancias tóxicas en vertimientos y cuerpos receptores.

Elaboro: Alba Janneth Bernal Paredes 41012014

Andrea Paola Rojas Avella 41001100

Primera Revisión: Pedro Miguel Escobar Malaver

Segunda Revisión: Rubén Darío Londoño

Modificado por: María Angélica Castiblanco 41

Jazmín Maldonado 41

María Isabel Sierra 41012146

Andrés Felipe Zárate 41012166

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7. ANEXOS

PROGRAMA DE INGENIERIA AMBIENTAL Y SANITARIA

LB 01

LABORATORIO DE BIOENSAYOS

VERSION 0

REGISTRO DEL TEST DE TOXICIDAD

PRUEBAS PRELIMINARES

TIPO DE MUESTRA:

MUESTRA:

DATOS FISICOQUIMICOS DE LA MUESTRA:

DUREZA:

PH:

OD:

TRATAMIENTO DE LA MUESTRA:

SEDIMENTACION:

FILTRACION:

AJUSTE DEL PH:

INICIO DE LA PRUEBA: HORA:

FIN DE LA PRUEBA: HORA:

AGUA DE DILUCION

FECHA TOMA DE LA MUESTRA:

RESULTADOS

CONCENTRACIO

N NOMINAL (%)

# DE

ORGANISMOS

MUERTOS

# 𝑫𝑬 𝑴𝑼𝑬𝑹𝑻𝑬𝑺

𝑻𝑶𝑻𝑨𝑳 𝑫𝑬 𝑶𝑹𝑮𝑨𝑵𝑰𝑺𝑴𝑶𝑺

% DE

MORTALIDA

D 1 2 3 4 5

Elaboro: ESCOBAR MALAVER, Pedro Miguel. Implementación de un sistema de alerta de

riesgo tóxicológico utilizando Daphnia Pulex para la evaluación de muestras ambientales.

Santafé de Bogotá; 1997

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CONTENIDO

1. Objetivo

2. Definiciones

3. Principio del modelo matemático

4. Procedimiento

5. Bibliografía

1. OBJETIVO

Evaluar los resultados de los ensayos por medio de un modelo estadístico

2. DEFINICIONES

Concentración: La concentración es la magnitud física que expresa la cantidad de un elemento o

un compuesto por unidad de volumen.

Dosis: Contenido de principio activo, expresado en cantidad por unidad de toma, por unidad de

volumen o de peso en función de la presentación, que se administrará de una vez.

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Efecto: Consecuencia positiva o negativa, de la ocurrencia de un evento.

Modelo: Conceptualización de un evento, un proyecto, una hipótesis, el estado de una cuestión,

que se representa como un esquema con símbolos descriptivos de características y relaciones

más importantes con un fin: ser sometido a modelización como un diseño flexible, que emerge y

se desarrolla durante el inicio de la investigación como una evaluación de su relevancia.

Toxicidad aguda: La toxicidad aguda tiene por objeto determinar los efectos de una dosis única y

muy elevada de una sustancia. Usualmente, el punto final del estudio es la muerte del animal y la

toxicidad aguda se expresa por la dosis letal 50, que viene a representar más o menos la dosis de

la sustancia que produce la muerte en el 50% de los animales.

Probit: Modelo estadístico que analiza las pruebas de toxicidad. El método consiste en la

aplicación de correlaciones estadísticas para estimar las consecuencias desfavorables sobre una

población a los fenómenos físicos peligrosos; nos da una relación entre la función de

probabilidad y una determinada carga de exposición.

3. PRINCIPIO DEL MODELO MATEMATICO

En un experimento típico de pruebas de toxicidad se tiene la siguiente situación:

• Concentración de la sustancia o dosis (d).

• Número de individuos (n).

• Número de organismos muertos o afectados (r).

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Porcentaje de efecto (p).

𝑝 = (𝑟

𝑛) × 100

La representación gráfica de p vs. d, o relación dosis-respuesta, genera una curva parabólica que

muchas veces presenta dificultades en la construcción de un modelo lineal.

Una forma de abordar este problema es transformando d a una escala logarítmica (X = log10

(d)), lo cual mostrará una relación dosis-respuesta de forma S o sigmoidea normal, como se

muestra en la figura 1; de esta manera la distribución de p vs. X será de tipo normal.

Figura 1. Relación dosis-respuesta

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Posteriormente, mediante las tablas de Probit se transforma p (porcentaje de efecto) a unidades

Probit (buscando en una tabla de distribución normal el valor de z correspondiente a una

probabilidad acumulada igual a p y sumándole a continuación cinco unidades), se obtiene una

distribución de puntos en un sistema bivariado de tipo lineal, los cuales se procesan según un

análisis de regresión típico. Vale la pena enfatizar que el Probit es una transformación sobre la

tasa de efecto (p)y la ecuación generada es de la forma: 𝑦 = 𝑎 + 𝑏𝑥

Dónde:

y (expresado en unidades Probit) = z + 5

z= Variable normal estándar = zO tal que la Prob (z ≤ zO) = p

a y b son los estimadores de los parámetros de la recta de regresión

Así, cuando p= 50% entonces y = 5, por lo tanto:

X5= log10 CL50, entonces CL50 = 105

Para facilitar los cálculos, simplemente se puede usar un software como el suministrado por la US

Environmental Protection Agency (US EPA): Probit Analysis Program, El procedimiento Probit

permite encontrar estimadores m-verosímiles de parámetros de regresión y de tasas naturales (por

ejemplo, tasas de mortalidad) de respuesta para ensayos biológicos, analizando porcentajes de

efecto vs. dosis dentro del marco de la regresión.

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1. PROCEDIMIENTO

Para el cálculo de la CL50 por este método es necesario contar, por lo menos, con dos

porcentajes intermedios del efecto esperado (valores entre 0 y 100%).

Con los resultado obtenidos en los ensayos de toxicidad aguda con Daphnia pulex se debe

construir una tabla que contenga los siguientes datos:

Concentración de la sustancia ensayada en %

Logaritmo en base 10 de las concentraciones (x)

Numero de organismos en cada concentración

Número de organismos muertos en cada concentración (r).

Porcentaje de mortalidad en cada concentración (P).

Probit empírico (PE).

Probit esperado o calculado (Y).

Los cinco primeros resultados corresponden a datos experimentales; el Probit empírico se

obtiene de una tabla con el porcentaje de mortalidad observada en cada una de las

concentraciones.

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Tabla 1: Calculo de la CL50 por el método Probit

Concentración

del agente

tóxico (%)

Log10 de la

concentración

(X)

Numero de

organismos

(N)

Núm. De

muertos (r)

Porcentaje

de

mortalidad

(P)

Probit

empírico

(PE)

Probit

calculado

(Y)

A partir de estos datos se elabora una gráfica en papel cuadriculado, colocando en el eje x el

logaritmo de las concentraciones y en el eje Y el Probit empírico (figura 1)y se ajusta la recta a

través de estos puntos. En el gráfico se traza una línea a partir del Probit 5,0 hasta cortar la línea

trazada; el valor correspondiente en el eje x se denomina m y el antilogaritmo de este valor

corresponderá a la CE50 o CL50.

Para el cálculo del Probit esperado o calculado, debe hallarse el valor de S correspondiente a la

tasa de incremento del log de la concentración (x) por unidad de incremento del Probit.

Para el cálculo del Probit esperado o calculado, debe hallarse el valor de S correspondiente a la

tasa de incremento del log de la concentración (x) por unidad de incremento del Probit

En la recta trazada se calcula la pendiente, tomando el porcentaje donde se halló el mayor y el

menor efecto, así como los probits correspondientes a estos valores, remplazando en la siguiente

formula:

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ANALISIS DE RESULTASDOS,

METODO PROBIT

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𝑆 = (𝑋 − 𝑥)/(𝑃𝐸 − 𝑃𝑒)

Dónde:

X: Mayor concentración

x: Menor concentración

PE: Probit empírico correspondiente a la mayor concentración

Pe: Probit empírico correspondiente a la menor concentración

Así, los valores del Probit esperado o calculado (Y) para cada concentración podrán ser

calculados utilizando la siguiente expresión:

𝑌 = 5 +(𝑥 − 𝑚)

𝑆

Una vez calculados se colocan en la columna correspondiente de la tabla 1.

La prueba de hipótesis utilizada para establecer la asociación entre la concentración de la

sustancia tóxica y la respuesta en unidades probit es la prueba de CHI-cuadrado (X2). Los datos

para el cálculo de este valor se colocan en una tabla 2 de la siguiente forma:

Concentración de la sustancia estudiada en %

Logaritmo decimal de la concentración (x).

Probit calculado o esperado (Y).

Numero de organismos (N)

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Mortalidad observada (r)

Porcentaje de efecto esperado (P).

La mortalidad esperada (NP') se calcula multiplicando (N) por (P').

El cálculo de la desviación de la mortalidad se obtiene hallando la diferencia entre la mortalidad

observada y la esperada. La contribución al Chi cuadrado de cada uno de los valores se calcula:

(𝑟 − 𝑁𝑃)2/𝑁𝑃 (1 − 𝑃)

Y para el cálculo de los grados de libertad (n):

𝑛 = 𝐾 − 2

Donde K es el número de concentraciones utilizadas

Con los datos obtenidos de realiza la siguiente tabla 3 para el cálculo del intervalo de confianza:

Tabla 3. Valores de X2 para una P=0.05

Grados de libertad (n) X2

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METODO PROBIT

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Para el cálculo de los límites es necesario establecer el error estándar. El error estándar de log de

la concentración letal para el 50% de los organismos se obtiene a través de la siguiente

expresión:

4.17. Inicialmente, se construye una tabla en la cual se incorporen los siguientes datos:

• Logaritmo decimal de las concentraciones (x).

• Numero de organismos por concentración (N).

• Probit esperado o calculado (Y).

• Factor p, el cual se obtiene de la tabla 4 con el valor Y.

• Productos Np, Npx y Npx2, obtenidos de los datos de la misma tabla

• Sumatoria de los productos correspondientes a los valores SNp, SNpx y S Npx2

• Factor p debe ser obtenido en la tabla entrando el valor de Probit calculado

• Producto Np resultante de la multiplicación de los valores de número de organismos por el

factor p y su respectiva sumatoria.

• Producto Npx resultante de la multiplicación del producto anterior por el logaritmo de las

concentraciones con su respectiva sumatoria.

• Producto Npx2 resultante de la multiplicación del producto anterior por el logaritmo de la

concentración con su respectiva sumatoria.

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Tabla. 5. Calculo del error estándar del log 10 CL50

Log 10 de la

concentración

(x)

Núm. De

organismos

(N)

Probit

calculado

(Y)

Factor

(p)

Producto

(Np)

Producto

(Npx)

Producto

(Npx2)

Al tener la CL50 y no olvidando que el intervalo de confianza es 95% tendremos la

concentración letal con sus límites inferior y superior respectivamente.

Para el desarrollo de esta investigación se adquirió el Software de Probit, el cual determinar la

CL50-48 y los límites de confianza más rápidoy su procedimiento es el siguiente:

Se instala el programa en un computador que cuente con un software de Windows 98 en

adelante, creándose una carpeta de Probit en el escritorio.

Dentro de esta carpeta quedaran registrados varios archivos; se dirige al archivo con nombre

PROBFIS2 y se da doble clic donde se abre una ventana de la siguiente manera:

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Da dos opciones para manejar el programa, la (1) es para introducir los datos con el teclado, la

(2) para introducirlos en fila. Es este paso se escribe (1)y sale:

Ahora se le da un nombre al archivo que se crea con los resultados que determina el programa,

así:

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Ahora el programa pide que se inserten el número de concentraciones, sin el control, número de

muertes en el control, numero de organismos en el control, así:

Ahora se procede a insertar los datos de las concentraciones comenzando por la concentración

menor, el número de muertes en cada una y el número de tratamientos, así:

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Así, sucesivamente hasta completar los datos de las 5 concentraciones. Al terminar este paso se

da enter y se cierra esta ventana, en la carpeta de probit aparece un archivo con el nombre que se

le designo a esa batería donde dará los resultaos de la CL50 son los límites de confianza.

Este procedimiento se debe realizar para cada batería de ensayo, quedaran registrados los

resultados en su respectivo archivo.

5. BIBLIOGRAFÍA

http://www.metodologia probit.htm

http://www.unizar.es/guiar/1/Accident/An_conse/Probit.htm

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CONTENIDO

1. Objetivo

2. Definiciones

3. Principio del modelo

4. Procedimiento

5. Ejemplo

6. Bibliografía

7. Anexo A

1. OBJETIVO

Comparar si los valores de un conjunto de datos numéricos son significativamente distintos a los

valores de otro o más conjuntos de datos.

2. DEFINICIONES

Variable: conceptos que forman enunciados de un tipo particular denominado hipótesis. Las

variables se refieren a propiedades de la realidad que varían, es decir, su idea contraria son las

propiedades constantes de cierto fenómeno.

Variable Dependiente: características de la realidad que se ven determinadas o que dependen del

valor que asuman otros fenómenos o variables independientes.

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Variables independientes: Los cambios en los valores de este tipo de variables determinan

cambios en los valores de otra (variable dependiente).

Grados de libertad: número efectivo de observaciones que contribuyen a la suma de cuadrados en

un ANOVA, es decir, el número total de observaciones menos el número de datos que sean

combinación lineal de otros.

Hipótesis: Las hipótesis son proposiciones provisionales y exploratorias sobre la veracidad o

falsedad de un concepto, una teoría o un modelo con un alcance de trabajo de investigación por

simulación y con métodos de campo o de laboratorio

3. PRINCIPIO DEL MODELO

- El análisis de varianza parte de algunos supuestos que han de cumplirse:

- La variable dependiente debe medirse al menos a nivel de intervalo.

- Independencia de las observaciones.

- La distribución de la variable dependiente debe ser normal.

- Homogeneidad de las varianzas

Los modelos de efectos aleatorios asumen que en un factor se ha considerado tan sólo una

muestra de los posibles valores que éste puede tomar, estos modelos se usan para describir

situaciones en que ocurren diferencias incomparables en el material o grupo experimental. El

ejemplo más simple es el de estimar la media desconocida de una población compuesta de

individuos diferentes y en el que esas diferencias se mezclan con los errores del

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instrumento de medición.

La técnica fundamental consiste en la separación de la suma de cuadrados (SS, 'sum of squares')

en componentes relativos a los factores contemplados en el modelo. Como ejemplo, mostramos

el modelo para un ANOVA simplificado con un tipo de factores en diferentes niveles. (Si los

niveles son cuantitativos y los efectos son lineales, puede resultar apropiado un análisis de

regresión lineal).

𝑆𝑆 𝑇𝑂𝑇𝐴𝐿 = 𝑆𝑆 𝑒𝑟𝑟𝑜𝑟 + 𝑆𝑆 𝑓𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟𝑒𝑠

El número de grados de libertad (gl) puede separarse de forma similar y se corresponde con la

forma en que la distribución chi-cuadrado describe la suma de cuadrados asociada.

𝑔𝑙𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 = 𝑔𝑙 𝑒𝑟𝑟𝑜𝑟 + 𝑔𝑙 𝑓𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟𝑒𝑠

4. PROCEDIMIENTO

Al realizar una prueba de toxicidad, se pasan los datos correspondientes a la siguiente tabla 1

Tabla 1. Formato de Datos de Prueba de Toxicidad

TRATAMIENTOS OBSERVACIONES Yi Yi promedio

1 2 3 4

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4.3. Se plantea la hipótesis nula y la hipótesis alterna

Ho: μ1 = μ2 = μ3 = μn

H1: μ1 ≠ μ2 , para algún par

4.4. El tratamiento de análisis de varianza seria mediante la siguiente tabla 2::

Tabla 2. Análisis de Varianza

FV SS GL Ms Fc Ft

Tratamiento SSTTO A – 1 𝑆𝑆𝑇𝑇𝑂

𝑎 − 1

𝑆𝑆𝑇𝑇𝑂𝑎 − 1𝑆𝑆𝐸

𝑁 − 𝑎

𝐹𝑎 (𝑉1 𝑉2)

Error SSE N – a 𝑆𝑆𝐸

𝑁 − 𝑎

Total SST N - 1

Dónde:

o N: Número total de observaciones; N: a * n

o n: número de observaciones en cada grupo

o a: número de tratamientos

o FV : Fuente de varianza

o SS: Suma de cuadrados

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o GL: Grados de libertad

o Ms: Cuadrados medios

o Fc: F calculado

o Ft: F tabulado

o V1: a – 1

o V2: N – a

4.5. Para obtener el SSTTO, se debe reemplazar la siguiente formula

4.6.Para obtener el SST, se debe reemplazar la siguiente formula:

4.7. Para obtener el SSE:

𝑆𝑆𝐸 = 𝑆𝑆𝑇 − 𝑆𝑆𝑇𝑇𝑂

4.7. Al obtener el Fc lo comparamos el Ft, el cual se encuentra en el libro Diseño y análisis de

experimentos Douglas C. Montgomery (anexo A), para refutar o aceptar alguna hipótesis, esto se

hace así:

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Fc > Ft Se rechaza la Ho

Fc < Ft Se acepta la Ho

6. BIBLIOGRAFÍA

. http://www.estadistico.com/arts.html?20011022

. http://www.udc.es/dep/mate/estadistica2/sec3_7.html

. http://es.wikipedia.org/wiki/An%C3%A1lisis_de_varianza

Elaboro: Alba Janneth Bernal Paredes 41012014

Andrea Paola Rojas Avella 41001100

Primera Revisión: Pedro Miguel Escobar Malaver

Segunda Revisión: Rubén Darío Londoño

Modificado Por: María Angélica Castiblanco 41

Jazmín Maldonado 41

María Isabel Sierra 41012146

Andrés Felipe Zárate 41012166

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ANEXOS

Fuente: Diseño y análisis de experimentos Douglas C. Montgomery

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