Determinación de resistencia antihelmíntica frente a las ...
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Universidad de La Salle Universidad de La Salle Ciencia Unisalle Ciencia Unisalle Medicina Veterinaria Facultad de Ciencias Agropecuarias 2008 Determinación de resistencia antihelmíntica frente a las lactonas Determinación de resistencia antihelmíntica frente a las lactonas macrocíclicas por parte de nemátodos gastrointestinales del macrocíclicas por parte de nemátodos gastrointestinales del equino mediante el test de reducción de la oviposición FECRT en equino mediante el test de reducción de la oviposición FECRT en los municipios de Aguazul, El Yopal, Maní y Paz de Ariporo los municipios de Aguazul, El Yopal, Maní y Paz de Ariporo departamento del Casanare departamento del Casanare Erik Chaparro Salamanca Universidad de La Salle, Bogotá Follow this and additional works at: https://ciencia.lasalle.edu.co/medicina_veterinaria Part of the Large or Food Animal and Equine Medicine Commons, Parasitology Commons, and the Veterinary Microbiology and Immunobiology Commons Citación recomendada Citación recomendada Chaparro Salamanca, E. (2008). Determinación de resistencia antihelmíntica frente a las lactonas macrocíclicas por parte de nemátodos gastrointestinales del equino mediante el test de reducción de la oviposición FECRT en los municipios de Aguazul, El Yopal, Maní y Paz de Ariporo departamento del Casanare. Retrieved from https://ciencia.lasalle.edu.co/medicina_veterinaria/71 This Trabajo de grado - Pregrado is brought to you for free and open access by the Facultad de Ciencias Agropecuarias at Ciencia Unisalle. It has been accepted for inclusion in Medicina Veterinaria by an authorized administrator of Ciencia Unisalle. For more information, please contact [email protected].
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Universidad de La Salle Universidad de La Salle
Ciencia Unisalle Ciencia Unisalle
Medicina Veterinaria Facultad de Ciencias Agropecuarias
2008
Determinación de resistencia antihelmíntica frente a las lactonas Determinación de resistencia antihelmíntica frente a las lactonas
macrocíclicas por parte de nemátodos gastrointestinales del macrocíclicas por parte de nemátodos gastrointestinales del
equino mediante el test de reducción de la oviposición FECRT en equino mediante el test de reducción de la oviposición FECRT en
los municipios de Aguazul, El Yopal, Maní y Paz de Ariporo los municipios de Aguazul, El Yopal, Maní y Paz de Ariporo
departamento del Casanare departamento del Casanare
Erik Chaparro Salamanca Universidad de La Salle, Bogotá
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Part of the Large or Food Animal and Equine Medicine Commons, Parasitology Commons, and the
Veterinary Microbiology and Immunobiology Commons
Citación recomendada Citación recomendada Chaparro Salamanca, E. (2008). Determinación de resistencia antihelmíntica frente a las lactonas macrocíclicas por parte de nemátodos gastrointestinales del equino mediante el test de reducción de la oviposición FECRT en los municipios de Aguazul, El Yopal, Maní y Paz de Ariporo departamento del Casanare. Retrieved from https://ciencia.lasalle.edu.co/medicina_veterinaria/71
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DETERMINACIÓN DE RESISTENCIA ANTIHELMÍNTICA FRENTE A LAS LACTONAS
MACROCÍCLICAS POR PARTE DE NEMÁTODOS GASTROINTESTINALES DEL EQUINO
MEDIANTE EL TEST DE REDUCCIÓN DE LA OVIPOSICIÓN (FECRT) EN LOS MUNICIPIOS
DE AGUAZUL, EL YOPAL, MANÍ Y PAZ DE ARIPORO
DEPARTAMENTO DEL CASANARE
ERIK CHAPARRO SALAMANCA
UNIVERSIDAD DE LA SALLE
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA
BOGOTA D.C.
2008
DETERMINACIÓN DE RESISTENCIA ANTIHELMÍNTICA FRENTE A LAS LACTONAS
MACROCÍCLICAS POR PARTE DE NEMÁTODOS GASTROINTESTINALES DEL EQUINO
MEDIANTE EL TEST DE REDUCCIÓN DE LA OVIPOSICIÓN (FECRT) EN LOS MUNICIPIOS
DE AGUAZUL, EL YOPAL, MANÍ Y PAZ DE ARIPORO
DEPARTAMENTO DEL CASANARE
ERIK CHAPARRO SALAMANCA
14012027
Trabajo de grado presentado como parte de los requisitos
para optar por el título de Médico Veterinario
UNIVERSIDAD DE LA SALLE
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA
BOGOTA D.C.
2008
DIRECTIVOS
RECTOR Hno. Carlos Gabriel Gómez Restrepo. VICERRECTOR ACADÉMICO Hno. Fabio Coronado Padilla. VICERRECTOR DE PROMOCIÓN Hno. Carlos Pabón Meneses. Y DESARROLLO HUMANO VICERRECTOR ADMINISTRATIVO Dr. Mauricio Fernández Fernández. DECANO DE LA FACULTAD Dr. Pedro Pablo Martínez Méndez. SECRETARIA ACADÉMICA Dra. María Teresa Uribe Mallarino. DIRECTOR CLÍNICA VETERINARIA Dr. Juan Pablo Pinedo Méndez.
ACEPTACIÓN
DIRECTOR __________________________ Dr. Germán Prada. JURADO _________________________ Dr. Dildo Márquez. JURADO __________________________ Dr. Ernesto Dalmau. SECRETARIA ACADÉMICA ___________________________ Dra. María Teresa Uribe.
COMPROMISO
El presente trabajo de investigación no contiene ideas que de una u otra forma
sean contrarias a la Iglesia Católica en cuanto a su doctrina, dogma y moral.
Las ideas aquí expuestas no son responsabilidad del director del proyecto de
investigación, de los jurados, ni de la Universidad de la Salle, son opiniones de libre
expresión del autor y directo responsable del escrito.
DEDICATORIA
Primero a Dios por haberme permitido nacer y mas en la familia que tengo, a la gran devoción de la Virgen de la medalla Milagrosa por permitirme cumplir el sueño de ser Medico Veterinario. A mis padres, Pedro León Chaparro R. y Camelia Salamanca E. por su gran ejemplo, dedicación, consejos y regaños para que lograra cumplir mis objetivos, por que no solo han sido mis padres si no mis amigos. A mi abuelo, Pedro León Chaparro, que con sus historias y sus vivencias mantuvieron firmes mis deseos de crecer y algún día ser un llanero como el.
AGRADECIMIENTOS
Al Doctor Germán Prada, mi inmensa gratitud por el apoyo y dirección de este trabajo, y por la gran enseñanza que me brindo durante la carrera, siendo un ejemplo a seguir como medico Veterinario. Al Doctor José Alejandro Espinosa, también una gratitud muy grande por su apoyo, amistad y enseñanza. A Leydy Rodríguez por su apoyo y amistad incondicional. Al Club Equino Lasallista, donde tuve la oportunidad de conocer a mis mejores amigos Pedro Rojas, Juan Manuel Montenegro y José Luís Rivera que trabajando en tantas ferias hicimos una historia. A la Doctora, Stefany Romero, por su constante apoyo y asesoramiento en la realización de este trabajo.
TABLA DE CONTENIDO
Pág.
1. MARCO TEÓRICO Y ESTADO DEL ARTE 1
1.1 PEQUEÑOS STRONGYLUS 1
1.2 GRANDES STRONGYLUS. 3
1.3 PARASCARIS EQUORUM 6
1.4 ANTIPARASITARIOS 8
1.4.1 Lactonas Macrocíclicas. 8
1.4.1.1 Ivermectina. 9
1.4.1.1.1 Mecanismo de Acción. 9
1.4.1.1.1 Espectro. 10
1.4.1.1.2 Farmacocinética. 10
1.5 RESISTENCIA ANTIHELMÍNTICA 11
1.5.1 Factores que favorecen el desarrollo de resistencia
antihelmíntica.
12
1.5.2 Estrategias para limitar el desarrollo de resistencia
antihelmíntica.
13
1.5.3 Resistencia a la Ivermectina. 15
1.5.4 Técnicas para determinar resistencia antihelmíntica. 16
1.5.4.1 Métodos in vivo 17
1.5.4.1.2 Test de reducción de la oviposición 17
1.5.4.2 Métodos in vitro 20
1.5.2.2.5 Análisis del desarrollo de larvas (LDA). 20
2 MARCO DE REFERENCIA 21
2.1 MARCO DEMOGRÁFICO 21
2.2 MARCO GEOGRÁFICO 22
2.2.1 Ubicación Y Localización Geográfica 23
2.2.2 Municipios de investigación 23
2.2.2.1 Municipio de Aguazul. 23
2.2.2.1.1 Finca la Esperanza. 24
2.2.2.2 Municipio de El Yopal. 24
2.2.2.2.1 Finca Santa Lucía 24
2.2.2.3. Municipio de Maní 25
2.2.2.3.1 Finca Titiriji. 25
2.2.2.4. Municipio de Paz de Ariporo 26
2.2.2.4.1 Finca La Defensa. 26
2.3 CONDICIONES CLIMÁTICAS DURANTE EL MUESTREO 26
2.3.1 Temperaturas máximas, media y mínima. 26
2.3.2 Precipitación. 27
3. METODOLOGIA 28
3.1 MÉTODOS Y PROCEDIMIENTOS. 28
3.1.1. Descripción De Las Técnicas 29
3.1.1.1 Técnica De MacMaster 29
3.1.1.1.1 Identificación y diferenciación de huevos eliminados en la
materia fecal
30
3.1.1.1.2 Coprocultivo 31
3.1.1.1.2.1 Identificación y diferenciación del Larvas L3 por
coprocultivo.
33
3.1.1.1.3 Test de reducción de la oviposición 35
3.1.2 Materiales de las técnicas desarrolladas. 36
4. ANÁLISIS DE DATOS 37
5. RESULTADOS 38
5.1 TÉCNICA DE MACMASTER PRE TRATAMIENTO CON
IVERMECTINA
38
5.1.1 Municipio de Aguazul. 38
5.1.2 Municipio de El Yopal. 39
5.1.3 Municipio de Maní. 40
5.1.4 Municipio de Paz de Ariporo 41
5.1.5 Resultados generales técnica de MacMaster para los 4
predios.
42
5.1.6.1 Comparación de los 4 predios de eliminación de hpg de
materia fecal.
43
5.2 COPROCULTIVOS PRE TRATAMIENTO CON IVERMECTINA. 44
5.2.1 Municipio de Aguazul 44
5.2.2 Municipio de El Yopal 45
5.2.3 Municipio de Maní. 46
5.2.4 Municipio de Paz de Ariporo 47
5.2.5 Resultados generales técnica de Coprocultivo para los 4
predios.
48
5.3 TEST DE REDUCCIÓN DE LA OVIPOSICIÓN (FECRT) 49
5.3.1 Municipio de Aguazul. 49
5.3.2 Municipio de El Yopal 49
5.3.3 Municipio de Maní. 50
5.3.4 Municipio de Paz de Ariporo 50
5.4 COPROCULTIVO POST TRATAMIENTO CON IVERMECTINA 51
5.5 ANÁLISIS ESTADÍSTICO 51
5.5.1 Resultados técnica de MacMaster Pre tratamiento con
Ivermectina.
51
5.5.1.1 Prueba de Shapiro & Wilk para normalidad de los errores 52
5.5.1.2 Prueba de Levene para homogeneidad de varianzas. 52
5.5.1.3 Análisis De Varianza De Una Vía 52
5.5.1.4 Comparación no Planeada – Tukey. 53
5.5.2 Test de Reducción de la oviposición. 54
5.5.2.1 Comparación no Planeada – Tukey. 54
5.5.3 Comparación Test De Reducción De La Oviposición
(FECRT) Y Análisis Del Desarrollo De Larvas (LDA).
55
5.5.3.1 Prueba de Shapiro & Wilk para normalidad de los errores. 55
5.5.3.2 Prueba de Levene para homogeneidad de varianzas. 55
5.5.3.2 Análisis de varianza 56
6. DISCUSIÓN 57
7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES 63
8. BIBLIOGRAFÍA 65
9. ANEXOS 72
TABLA DE FIGURAS
Pág.
Figura 1. Ciclo biológico de Pequeños strongylus 3
Figura 2. Ciclo biológico de los Grandes strongylus 5
Figura 3. Ciclo de vida de Parascaris equorum 7
Figura 4. Ubicación geográfica Departamento del Casanare. 22
Figura 5. Municipios de estudio. 23
Figura 6. Finca La Esperanza municipio de Aguazul. 24
Figura 7. Finca Santa Lucía municipio de El Yopal. 25
Figura 8. Finca Titiriji municipio de Maní. 25
Figura 9. Finca La Defensa Municipio de Paz de Ariporo. 26
Figura 10. Mapas de precipitación en milímetros del departamento del
Casanare
27
Figura 11. Forma y Tamaño larvas L3 del equino. 34
TABLA DE TABLAS
Pág.
Tabla 1. Pruebas para la detección de resistencia antihelmíntica. 17
Tabla 2. Indicadores del Porcentaje de reducción de la oviposición. 19
Tabla 3. Temperatura máxima, media y mínima de los municipios de
estudio.
27
Tabla 4. Identificación y diferenciación de huevos eliminados en la
materia fecal de los equinos
30
Tabla 5. Características de larvas L3 de Strongylidos del equino. 33
Tabla 6. Interpretación del porcentaje de reducción de la
oviposición.
35
Tabla 7. Resultados de la técnica de MacMaster municipio de
Aguazul.
38
Tabla 8. Resultados técnica de MacMaster municipio de El Yopal. 39
Tabla 9. Resultados técnica de MacMaster municipio de Maní. 40
Tabla 10. Resultados técnica de MacMaster municipio de Paz de
Ariporo.
41
Tabla 11. Resultados identificación de larvas L3 municipio de
Aguazul.
44
Tabla 12. Resultados identificación de larvas L3 municipio de El
Yopal.
45
Tabla 13. Resultados identificación de larvas L3 municipio de Maní. 46
Tabla 14. Resultados identificación de larvas L3 municipio de Paz de
Ariporo.
47
Tabla 15. Resultados del test de reducción de la oviposición
municipio de Aguazul.
49
Tabla 16 Resultado del test de reducción de la oviposición municipio
de El Yopal.
49
Tabla 17. Resultado del test de reducción de la oviposición
Municipio de Maní.
50
Tabla 18. Resultado del test de reducción de la oviposición municipio
de Paz de Ariporo.
50
Tabla 19. Resultados coprocultivo 14 días post tratamiento con
Ivermectina.
51
Tabla 20. Anova resultados técnica de MacMaster pre tratamiento
con Ivermectina.
52
Tabla 21. Comparación de medias de eliminación de hpg de materia
fecal.
53
Tabla 22. Resultados test de reducción de la oviposición. 54
Tabla 23. Resultados mortalidad de Larvas L3 para FERCT y LDA por
municipio.
55
Tabla 24. Anova resultados comparación FECRT y LDA. 56
TABLA DE GRÁFICAS
Pág.
Gráfica 1. Porcentaje de observación de cada tipo de huevo 42
Gráfica 2. Promedio de hpg de materia fecal de cada municipio. 43
Gráfica 3. Porcentaje de larvas L3 municipio de Aguazul. 45
Gráfica 4. Porcentaje de larvas L3 municipio de El Yopal. 46
Gráfica 5. Porcentaje de larvas L3 municipio de Maní. 47
Gráfica 6. Porcentaje de larvas L3 municipio de Paz de Ariporo 48
TABLA DE ANEXOS
Pág.
ANEXOS 72
Anexo 1. Estadística 72
Anexo 2. Fotos Huevos identificados por MacMaster 81
Anexo 3. Fotos Larvas L3 identificadas por Coprocultivo 82
DETERMINACIÓN DE RESISTENCIA ANTIHELMÍNTICA FRENTE A LAS LACTONAS
MACROCÍCLICAS POR PARTE DE NEMATODOS GASTROINTESTINALES DEL EQUINO
MEDIANTE EL TEST DE REDUCCIÓN DE LA OVIPOSICIÓN (FECRT) EN LOS MUNICIPIOS
DE AGUAZUL, EL YOPAL, MANÍ Y PAZ DE ARIPORO
DEPARTAMENTO DEL CASANARE
RESUMEN
La presente investigación se llevó a cabo en los municipios de Aguazul, El Yopal,
Maní y Paz de Ariporo, departamento del Casanare; el objetivo principal fue determinar
los grados de resistencia o susceptibilidad antihelmíntica de parásitos
gastrointestinales del equino, frente a las lactonas Macrocíclicas (Ivermectina) para lo
cual se muestrearon 40 equinos (10 equinos por municipio), criollos dedicados a la
reproducción en estado silvestre. A todos los animales se les tomó una muestra de
materia fecal el día cero (antes del tratamiento con Ivermectina) y el día 14 (post
tratamiento con Ivermectina) (Ivermectina comercial no genérico), estas muestras se
procesaron mediante las técnicas de MacMaster y Coprocultivo, estableciendo un
recuento de huevos por gramo de materia fecal (hpg) para cada municipio pre y post
tratamiento. Se realizaron coprocultivos pretratamiento determinando que el 98.15%
del total de larvas L3 correspondían a Pequeños strongylus. Con los conteos de hpg
pre y post tratamiento con Ivermectina, se realizó el Test de Reducción de la
oviposición (FECRT), estableciendo que las poblaciones de Pequeños strongylus son
altamente susceptibles a la acción de las Lactonas Macrocíclicas (Ivermectina),
resultados que se confirmaron mediante coprocultivo post tratamiento, donde no se
encontraron larvas L3 en ninguno de los predios en estudio. Los resultados del FECRT
se compararon con los resultados del Análisis del Desarrollo de Larvas (LDA) realizado
simultáneamente a los mismos equinos obteniendo con las dos pruebas la ausencia
de resistencia antihelmíntica.
Palabras clave: Pequeños strongylus, Ivermectina, resistencia antihelmíntica.
ABSTRACT
DETECTION OF ANTIHELMINTIC RESISTANCE AGAINST MACROCYCLIC LACTONES IN
EQUINE NEMATODE OF BY THE FAECAL EGG COUNT REDUCTION TEST (FECRT)
IN HORSES OF AGUAZUL, EL YOPAL, MANI AND PAZ DE ARIPORO
DEPARMENT OF CASANARE.
This investigation was development in Aguazul, El Yopal, Mani and Paz de Ariporo,
Deparment of Casanare. The principal objective was to determine the antihelmintic
resistance grades or susceptibility, of gastrointestinal parasites in the equines, against
macrocyclic lactones (Ivermectin). To zero day (pretreatment with Ivermectin) and
fourteen day (postreatment with Ivermectin) fecal samples were collected per rectum
to 40 wild horses (10 horses by town) (used Ivermectin containg no generic product);
the fecal samples were analyzed by MacMaster and Coprocultive techniques were
identifying the fecal egg count for each town pre and post treatment. The 98.15% of
nematodes found by coprocultive technique were Small strongyles. With the fecal egg
count pre and post treatment with Ivermectin was calculated for each horse the
percentage of reduction in fecal egg count determining that Small strongyles were very
likely to the Ivermectin. These results were confirmed by coprocultive post treatment
were not found L3 larvae in any farm. The Feecal egg count reduction test (FECRT)
results were compared with Larval Develoment Assay (LDA) results getting by two test
there isn´t antihelmintic resistance in Small strongyles in the four towns located in
Casanare.
Key words: Small strongyles, Ivermectin, antihelmintic resistance.
INTRODUCCÓN
La relación biológica negativa por la cual el hospedador utiliza los nutrientes del
hospedero para su conveniencia sin aportarle beneficio aparente, se conoce como
parasitismo, esta relación hospedero-parásito puede mantenerse en equilibrio siempre
que el daño que genere en el hospedador sea leve y no ponga en peligro la vida del
animal (Sievers y Valenzuela, 1998; Prada, 2002).
Cuando existe algún fenómeno que desequilibre esta relación, como por
ejemplo, un ambiente con alta cantidad de parásitos, variaciones ambientales,
situaciones de estrés tales como parto, cambio de ambiente, fuerte entrenamiento,
alta carga de trabajo, mala nutrición, etc, se inclina la balanza en favor del parásito
generando daños al hospedero y ocasionando las llamadas parasitosis, sin olvidar que
el parásito depende metabólica y evolutivamente del hospedador (Cordero del
Campillo y Rojo, 1999; Solis, 2004).
Actualmente los endoparásitos que revisten mayor importancia clínica para la
especie equina son los Pequeños strongylus, debido a su creciente prevalencia,
efectos patógenos y a la sospecha de estar desarrollando resistencia al grupo de
antiparasitarios más comúnmente utilizados en los equinos como las Lactonas
Macrocíclicas que se hace necesario implementar técnicas con las cuales se detecte
dicho fenómeno, ya sea a través de pruebas realizadas en campo o con pruebas
desarrolladas a nivel de laboratorio (Paulrut y col., 1997).
La Asociación Mundial para el Avance de la Parasitología Veterinaria ha
estandarizado pruebas in vivo e in vitro para la evaluación de resistencia a
antiparasitarios en equinos (Coles y col., 1992) dentro de las técnicas in vivo, el Test
de Reducción de la oviposición (FECRT) es el método más usado, constituyéndose una
prueba fácil de implementar en poblaciones equinas con o sin tratamientos
antihelmínticos rutinarios (Craven y col., 1999).
La presente investigación fue realizada con el fin de determinar los grados de
susceptibilidad o resistencia antihelmíntica frente a las Lactonas Macrocíclicas
(Ivermectina) por parte de Pequeños strongylus del equino, mediante el test de
reducción de la oviposición (FECRT) en cuatro municipios del Departamento del
Casanare, así como comparar los resultados otorgados por la prueba in vitro Análisis
del Desarrollo Larval (LDA), realizada simultáneamente y como parte de otro trabajo de
investigación utilizando los mismos equinos, para confirmar la presencia o ausencia de
resistencia a las Lactonas Macrocíclicas (Ivermectina).
1. OBJETIVOS
1.1 OBJETIVO GENERAL
Establecer los grados de susceptibilidad o resistencia antihelmíntica de
parásitos gastrointestinales del equino en cuatro municipios del departamento del
Casanare frente a las Lactonas Macrocíclicas (Ivermectina) mediante el Test de
Reducción de la oviposición (FECRT).
1.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
• Identificar y clasificar los género de parásitos gastrointestinales de los equinos
de los municipios de Aguazul, El Yopal, Maní y Paz de Ariporo, Casanare,
durante la época de invierno.
• Determinar el porcentaje de presentación de nemátodos gastrointestinales
presentes en estos cuatro municipios.
• Analizar las poblaciones de parásitos gastrointestinales encontradas, mediante
el Test de reducción de la oviposición (FECRT), con el fin de determinar la
presencia o no de resistencia antihelmíntica frente a las Lactonas Macrocíclicas
(Ivermectina).
• Comparar los resultados de la prueba in vivo Test de Reducción de la
oviposición (FECRT), con los resultados de la técnica in vitro Análisis del
desarrollo de larvas (LDA), ambas pruebas se realizan simultáneamente (Pero
la prueba LDA será realizada dentro de otro trabajo de investigación, que
utilizara los mismos equinos).
1. MARCO TEÓRICO Y ESTADO DEL ARTE
Los equinos pueden ser atacados por una gran variedad de parásitos
gastrointestinales Lichtenfels, (1975), Jub y col. (1985), Lombardero (1990), Colahan y
col. (1998), Sievers y Valenzuela (1998), y Prada (2002), Romero (2007) y factores
como el encierro, hacinamiento, manipulación de la alimentación, desparasitaciones,
trabajo entre otras, pueden llevar al desequilibrio de la relación hospedero-patógeno y
causar alteraciones tales como disminución del rendimiento, pérdida de peso, falla
multiorgánica e incluso la muerte.
En la actualidad los nemátodos gastrointestinales que revisten mayor importancia
clínica para los equinos son, los Pequeños strongylus y en contadas ocasiones los
Grandes strongylus, así como el Parascaris equorum en potros.
1.1 PEQUEÑOS STRONGYLUS.
Son parásitos del ciego y colon ventral de los équidos, considerados
actualmente como los endoparásitos más comunes y de mayor patogenicidad en esta
especie debido a la drástica reducción causada desde 1980 por los antihelmínticos
modernos sobre los Grandes stróngylos (Herd, 1990; Lyons, 1999; Kaplan, 2002).
Más del 80% de los huevos eliminados en la materia fecal corresponden a este tipo de
parásitos (Prada, 2002; Romero; 2007).
1
Se encuentran agrupados en 13 géneros, siendo los más importantes
Cylicostephanus, Cylicocyclus y Cyathostomum y se han identificado más de 51
especies (Corwin y Nahm, 1997; Lichtenfels y col., 1997; Lichtenfels y col., 1998;
Lichtenfels y col., 2001; Vitaliy y col., 2001).
Su distribución es mundial y su prevalecía es alta con reportes de hasta del
100% (Klei y Chapman, 1999; Chapman y col., 1999). Su ciclo biológico es directo
Figura 1., las larvas L3 una vez son ingeridas, llegan al intestino delgado donde
pierden su cutícula de protección, penetran la submucosa del colón formando nódulos
de tamaño variable, donde mudan a L4 (Klei y French, 1998; Monahan, 2002), cuando
la cantidad de Pequeños strongylus es alta se presenta destrucción de la mucosa
trayendo como consecuencia el paso de sustancias toxicas desde el intestino grueso
hacia el torrente sanguíneo, la L4 sale del nódulo de la submucosa y en la luz
intestinal muda a L5 y finalmente a parásito adulto.
Los Pequeños strongylus, son capaces de realizar hipobiosis (Cordero del
Campillo y Rojo., 1999), la que consiste en la disminución del metabolismo casi a cero
y el enquistamiento de las larvas L3 en la mucosa intestinal, al parecer para garantizar
la presencia de la población parasitaria cuando las cantidades de parásitos adultos
libres en el intestino disminuyen, cuando las salidas de las larvas hipobióticas son
masivas se puede presentar el cuadro clínico conocido como Ciatostomosis larval que
cursa con diarreas, emaciación, hipoalbuminemia y colitis granulomatosa (Prada,
2002), cobra vital importancia en países con estaciones, durante los meses de
invierno o en lugares donde los cambios climáticos son marcados. (Lyons y col., 1999;
Monahan, 2002).
2
Figura 1. Ciclo biológico de Pequeños strongylus. Modificado de Merial, 2006 y Cordero del Campillo y Rojo, 1999. ID: intestino delgado.
1.2 GRANDES STRONGYLUS.
Las especies de Grandes strongylus que afectan a los equinos son S. vulgaris, S.
edentatus y S. equinus, de los tres el más frecuente y patógeno es el S. Vulgaris.
En general estos parásitos dentro de su ciclo biológico Figura 2., realizan
importantes migraciones, en cuanto al S. Vulgaris, luego de ser ingerida la L3 y de
perder su cutícula en el intestino delgado, penetra la mucosa y submucosa tanto del
3
intestino delgado como del grueso donde muda a L4 hacía el 7 día post infección (pi),
las larvas que han penetrado la luz de las arteriolas de la submucosa ascienden por
ellas en dirección contraria a la corriente sanguínea para llegar a las arterias cecal y
cólica el día 14 pi, y al tronco de las mesentéricas anteriores y arteria aorta hacia el día
21 pi, donde mudan a L5, en este lugar generalmente causan aneurismas de tipo
verminoso, finalmente la L5 penetra la luz arterial y llega hasta el intestino, donde
atraviesa la mucosa del colón mayor mudando a parásito adulto (Jonhstone, 1998).
La L5 puede también producir lesiones tales como, trombos, émbolos, infartos
intestinales, cólicos e incluso la muerte (Jub y col., 1985; Lombardero, 1990; Colahan
y col., 1998). En cuanto a las lesiones producidas por los parásitos adultos, estas
corresponden a hemorragias y ulceraciones a nivel del colon mayor y ciego (Prada y
Romero, 2007).
4
Figura 2. Ciclo biológico de los Grandes strongylus. Modificado de Campillo y Rojo., 1999
El diagnóstico tanto para Pequeños como para Grandes strongylus, se realiza
mediante las técnicas coprológicas de MacMaster o de sedimentación–flotación, sin
5
embargo para diagnosticarlos con seguridad es necesario realizar cultivos y
diferenciación de larvas (Bürger y Stoye, 1968; Corwin y Nahm, 1997, Prada y Romero,
2007).
Para el tratamiento de las parasitosis causadas por Grandes y Pequeños
strongylus, actualmente se utilizan Lactonas Macrocíclicas, en especial Ivermectina.
(Lyons y col., 1999; Sangster, 1999; Prada, 2004).
1.3 PARASCARIS EQUORUM
Es de importancia en animales jóvenes, entre 3 a 9 meses de edad (Soulsby,
1987). La principal fuente de infección es la contaminación a partir de los pastos.
Después de los 6 meses de edad se desarrolla una inmunidad importante, cuando se
trata de infecciones graves, pueden causar obstrucción del conducto biliar e intestino,
enteritis severas, diarrea de olor fétido y color pálido, cólico, ocasionalmente
perforación intestinal y muerte (Prada, 2002).
El ciclo de vida es directo Figura 3., realiza una migración hepatopulmonar-
traqueal migrando finalmente al intestino delgado, luego de transcurridas 48 horas las
larvas se ubican en el hígado, para posteriormente llegar a los pulmones entre los 7 -
14 días post infección, donde mudan a L3 y L4 y como L4 atraviesan la pared de los
alvéolos pulmonares y bronquíolos, ascienden a través del árbol bronquial, donde son
expectoradas y luego de pasar por la traquea llegan a orofaringe donde son deglutidas
alojándose en intestino delgado.
Esta fase migratoria dura hasta 4 semanas y las larvas, tras una nueva muda,
se convierten en L5 inmaduro, comenzando después un periodo de crecimiento
relativamente rápido que puede durar 10 semanas, completando su desarrollo,
haciéndose fértiles. (Cordero del Campillo y Rojo, 1999).
6
El diagnóstico se basa en la identificación de los huevos en las heces mediante
las técnicas de MacMaster y sedimentación-flotación.
Como tratamiento se utilizan la Piperazina (88 mg/Kg VO) o Tiabendazol (100
mg/Kg VO) los cuales son efectivos para las formas adultas del parásito. Cambendazol
(20 mg/Kg), Febantel (6 mg/Kg), Fenbendazol (7.5 mg/Kg), Mebendazol (10 mg/Kg),
Pamoato de Pirantel (19 mg/Kg) e Ivermectina (0.2 mg/Kg) vía oral siendo efectivas
contra las formas adultas y estadios larvarios del parásito (Prada, 2004).
Figura 3. Ciclo de vida de Parascaris equorum, Cordero del Campillo y Rojo, 1999.
7
Otros especies de parásitos menos importantes clínicamente, pero que pueden
llegar a causar en un momento dado problemas a la integridad de los equinos
corresponden a: Strongyloides westeri, Oxyuris equi, Habronema muscae, H., majus (H.
microstoma) y Draschia megastoma (H. megastoma), Trichostrongylus axei,
Dyctiocaulus arnfieldi. Anoplocephala Perfoliata, Anoplocephala magna y
Paranoplocephala mamillana.K La mayoría de estas especies no causan un problema
de salud tan serio debido a su baja incidencia de infección (MacAllister y Freeman,
2007).
1.4 ANTIPARASITARIOS.
La herramienta más utilizada para el control de nemátodos gastrointestinales
es el tratamiento antihelmíntico (Torres y col., 2003). En la actualidad los
medicamentos antihelmínticos se clasifican en 7 grupos que corresponden a:
Piperazinas, Organofosforados, Tetrahydropyrimidinas, Imidazothiazoles,
Bencimidazoles, Pro-bencimidazoles y Lactonas macrocíclicas (Hardman y Limbird,
2001; Sumano y Ocampo, 2006), la forma como actúan no se conoce en detalle, pero
su mecanismo de acción podría explicarse con la interferencia en el metabolismo
generador de energía por lo que el parásito muere por hambre o bien por bloqueo en la
transmisión neuromuscular causando la parálisis del parásito (Ralston, 2000; Prada,
2002).
1.4.1 Lactonas Macrocíclicas.
Son moléculas obtenidas de la fermentación del Streptomyces sp. Se les llama
macrocíclicas por su estructura química (un azúcar y una aglicona) que permite
relacionarlas con los macrólidos, obtenidos también del Streptomyces sp.
8
Este grupo se divide a su vez en dos familias, de acuerdo a su origen en,
Avermectinas y Milbemicinas, las primeras son extraídas del Streptomyces avermitilis
(Nicholas, 1999; Prada, 2003) y las segundas del Streptomyces hygroscopicus
(Sumano y Ocampo, 2006).
Las Avermectinas pueden ser de origen natural, donde se incluyen la
Ivermectina y la Abamectina o biosintéticas, tales como la Doramectina,
Epironomectina y Selamectina mientras que las Milbemicinas agrupan a la
Milbemicina y a la Moxidectina (Sumano y Ocampo, 2006).
1.4.1.1 Ivermectina.
La ivermectina es una Lactona Macrocíclica perteneciente como ya se
mencionó al grupo de las Avermectinas, aparece en la década de 1980, siendo
efectiva frente a un gran numero de parásitos tanto internos como externos,
permitiendo además varias formas de administración (Antonelli, 2004).
1.4.1.1.1 Mecanismo de Acción.
La entrada del fármaco al parásito puede ser por vía oral o transcuticular, una
vez dentro del nemátodo, ejercen su acción al unirse a los canales de Cl-, ligados al
receptor de glutamato (GluCl), estos canales iónicos están compuestos por tres
subunidades (α, β, δ), la Ivermectina, presenta gran afinidad por la subunidad α.
Los receptores para la Ivermectina se encuentran localizados en mayor
proporción en las neuronas, células musculares y en el útero de los invertebrados.
Cuando la ivermectina se une selectivamente e irreversiblemente a estos receptores
se produce un aumento representativo en la permeabilidad al Cl-, lo que genera la
hiperpolarización de la membrana celular. (Martin y Robertson, 2000).
9
A concentraciones bajas, potencializa el efecto del glutamato y a
concentraciones elevadas produce por sí misma la apertura del canal, causando una
hiperpolarización y un aumento irreversible en la conducción de entrada al Cl-. Como
consecuencia del proceso se genera una parálisis flácida que origina pérdida de la
motilidad y termina provocando la muerte del parásito, cuando es utilizada a
concentraciones mucho menores tienen la capacidad de inhibir el bombeo faríngeo en
determinados parásitos, alterando la ingestión del alimento (Antonelli, 2004)
1.4.1.1.1 Espectro.
En general los parásitos afectados son nemátodos y artrópodos, careciendo de
actividad frente a céstodos, trematodos y protozoos (Sumano y Ocampo, 2006), debido
a la falta de receptores GluCl. Se conocen especies y estadios del ciclo de los
parásitos que son menos sensibles al tratamiento o cuya localización dificulta el
acceso de la Ivermectina, lo que se conoce como especies y estadios limitantes a la
dosis, Entre ellos se pueden destacar los géneros Cooperia y Nematodirus en
rumiantes, Trichuris en suidos y los Cyasthostoma en equinos como menos sensible y
las fases hipobióticas de los géneros Ostertagia y Haemonchus, larvas de
Cyathostomas y las fases adultas de Trichuris y Onchocerca, como fases resistentes,
dentro del ciclo vital del parásito (Antonelli, 2004).
1.4.1.1.2 Farmacocinética.
Se caracterizan por presentar una amplia distribución y una larga persistencia
en el organismo. La absorción depende en gran medida de la vía de administración,
de la formulación farmacéutica y de la especie, por ejemplo en bovinos la vía oral no se
recomienda debido a que presenta escasa absorción, en equinos la vía intramuscular,
no es utilizada dada la reacción local que presenta, cuya inflamación y localización de
la lesión impediría la dinámica de la absorción. Debido a que son compuestos muy
10
liposolubles su distribución es buena presentando un elevado porcentaje de unión a
proteínas plasmáticas, concentrándose principalmente en grasa e hígado.
El metabolismo se realiza en hígado, siendo eliminados los metabolitos
principalmente por materia fecal, orina y leche (Antonelli, 2004).
1.5 RESISTENCIA ANTIHELMÍTICA
El desarrollo de resistencia a los antihelmínticos por parte los nemátodos que
parasitan a los herbívoros domésticos se está incrementando rápidamente, los
primeros antecedentes, así como la mayor magnitud del problema, corresponden a los
pequeños rumiantes en los cuales se ha informado sobre parásitos gastrointestinales
resistentes principalmente a Levamisoles, Benzimidazoles y Lactonas Macrocíclicas
(Eddi y col., 1996; Romero y col., 1998). En los bovinos se ha reportado resistencia
particularmente a las Lactonas Macrocíclicas y a los Benzimidazoles (Anziani y col.,
2004; Anziani y Fiel, 2004). En los equinos el estudio de resistencia antihelmíntica ha
llevado a reportarla frente a la Fenotiazina, Bencimidazoles, Pirantel y en la actualidad
a las lactonas Macrocíclicas (Prada, 2002).
Se entiende por resistencia antihelmíntica la capacidad heredable de los
parásitos de sobrevivir a tratamientos con antihelmínticos que a dosis terapéuticas
normalmente causan la inhibición del crecimiento o muerte del mismo (Prichard,
1994). En forma general, la presentación del fenómeno de resistencia comienza
cuando solo una pequeña parte de la población parasitaria posee tolerancia genética
al tratamiento, ante reiteradas desparasitaciones con un mismo principio activo, la
población susceptible muere y sobreviven de esta forma los individuos resistentes que
luego de los sucesivos tratamientos, aumentan en número y transmiten esta
capacidad de generación en generación (Cristel y Suárez, 2006).
11
La resistencia puede ser intrínseca (natural) o adquirida (parásitos inicialmente
susceptibles que dejan de serlo), las modificaciones genéticas por las que puede
ocurrir resistencia adquirida pueden ser:
• Mutación, donde es alterado el ADN en producción o función del componente
celular que permite que el fármaco actúe, evitando que éste produzca su acción
farmacológica.
• Amplificación génica, la que ocurre por un aumento en la síntesis de sustancias
que intervienen con la acción del fármaco convirtiendo a la célula en resistente a
concentraciones que normalmente son efectivas.
• Tolerancia génica, donde una célula susceptible incorpora información de
resistencia de otra impidiendo que el fármaco cumpla su función.
Si la resistencia ocurre para uno o más antihelmínticos con mecanismos de
acción similares o diferentes se presentan tres tipos de resistencia: cruzada, cuando
un parásito es resistente a fármacos con mecanismos de acción diferentes, paralela
cuando el parásito es resistente a otro compuesto con mecanismo de acción similar o
múltiple, cuando la resistencia ocurre para más de un grupo de antiparasitarios
(Hubert y Kerboeuf, 1992; Márquez, 2003).
1.5.1. Factores que favorecen el desarrollo de resistencia antihelmíntica.
Si bien se citan una serie de factores que inducen la aparición de resistencia
antihelmíntica, sin lugar a dudas los principales se centran en la alta frecuencia de
desparasitaciones, el uso indiscriminado de antiparasitarios y la falta de rotación de
principios activos (Llorens y col., 2004).
En general estos factores se han clasificado como intrínsecos y extrínsecos u
operativos, los primeros hacen referencia a características del parásito tales como
genética, ecología, comportamiento y fisiología; los segundos se relacionan con
12
factores controlados por el hombre como, la elección del antihelmíntico, dosis, vías de
administración, tiempo y frecuencia de aplicación (Smith y col., 1999).
Uno de los principales factores involucrados con el desarrollo de resistencia
antihelmíntica es la población en refugio, término que se refiere a los individuos de
una población parasitaria (parásitos de la pradera) que no fue expuesta a un
tratamiento en particular, evitando así la selección por resistencia; cuando la
población en refugio es baja, el uso de antihelmínticos puede llevar a una rápida
selección de resistencia, por el contrario la selección de resistencia es menor cuando
la población en refugio es grande debido a que los parásitos susceptibles producirán
un mayor efecto de dilución (Coles, 2005),
Las dosificaciones frecuentes son particularmente riesgosas cuando el intervalo
entre dosificaciones es cercano al período prepatente, teniendo en cuenta además el
período de persistencia de los principios activos, en donde los antihelmínticos de
mayor persistencia seleccionarán más sostenidamente que los menos persistentes
(Sangster, 1999).
El uso intensivo de un mismo principio activo, es también importante, ya que
seleccionará a aquellos especimenes que son genéticamente resistentes, los cuales
transmitirán esta característica a su descendencia. Posteriores tratamientos
continuarán seleccionando progresivamente e incrementando el nivel de resistencia,
en este momento los antiparasitarios serán marcadamente ineficaces en la
disminución de la carga parasitaria.
1.5.2 Estrategias para limitar el desarrollo de resistencia antihelmíntica.
En la actualidad cualquier programa de control que pretenda ser efectivo debe
incorporar la utilización de antihelmínticos, pero el uso de éstos debe basarse en el
13
conocimiento epidemiológico y las diferentes alternativas de pastoreo en relación con
el riesgo parasitario.
El reto es como frenar el desarrollo de la resistencia. La clave posiblemente está en la
necesidad de conservar el estado de susceptibilidad antihelmíntica en los predios,
para lo que será necesario que los productores admitan cierta disminución en la
producción ocasionada por parásitos gastrointestinales, en áreas de este objetivo
(Márquez, 2007)
Por lo menos cinco medidas han sido recomendadas para demorar el desarrollo de
resistencia (Antonelli, 2004):
1. Disminución de la frecuencia de aplicaciones antihelmínticas.
2. Utilización de antihelmínticos de espectro reducido.
3. Ajustar las dosis correctamente, evitando subdosificaciones y previniendo el
escape de nemátodos sobrevivientes.
4. Rotación de grupos químicos.
5. Utilizar medidas integrales de control que no se basen exclusivamente en la
aplicación de antihelmínticos.
Igualmente se puede citar una larga lista de alternativas que apunten a
disminuir el número de desparasitaciones, basadas en alternativas de manejo del
pastoreo tales como, descanso de pasturas (Barger, 1999), pastoreo alterno, pastoreo
rotativo (Castells y col., 2001), silvopastoreo (Thomas y Kevan, 1993) entre otros, y el
conocimiento de la epidemiología parasitaria.
Es claro que si se establece un programa de control integrado a través de la
combinación de tratamientos antihelmínticos y pasturas con bajos niveles de
infectividad (verdeos, rastrojos, praderas nuevas y/o controladas, etc.) sin dudas se
14
disminuiría la frecuencia de desparasitaciones y con ello el riesgo de resistencia
antihelmíntica.
1.5.3 Resistencia a la Ivermectina.
La resistencia hacia la Ivermectina es relativamente baja y se reporta que es
más frecuente que la desarrollen los parásitos de ovinos y caprinos (Echeverria y col.,
1992; Paiva y col., 2001; Sumano y Ocampo, 2006), en equinos la resistencia solo se
ha demostrado, para el grupo de Pequeños strongylus (Pérez y Col., 2001; Ralston,
2000; Lichtenfels y Col, 2001; Vitaliy y Col, 2001; Prada 2002).
Esta resistencia ha sido explicada por dos rutas principales, la primera
corresponde a una explicación desde su mecanismo de acción, en cuanto a
modificaciones de los receptores GluCl (mutación), que impedirían que el fármaco
alcance las concentraciones efectivas (Geary y col., 1999), lo que podría estar
asociado a alteraciones propias de las subunidades del receptor GluCl y/o a la
expresión aumentada de una glicoproteína (glicoproteína P), la que se cree impide
alcanzar las concentraciones activas de la molécula antiparasitaria en el receptor
GluCl α del parásito resistente (Geary y col, 1999).
La segunda ha sido relacionada con una disminución en la permeabilidad de la
cutícula de los nemátodos por mutación de los genes Dfy responsables de la captación
del fármaco y cuya modificación genética haría a los parásitos menos permeables a la
Ivermectina, con lo cual no podría alcanzar el receptor y ejercer su mecanismo de
acción (Dent y col, 2000).
15
Finalmente, estudios in vivo han demostrado que la resistencia a las Lactonas
Macrocíclicas, se debe a una reducción en la sensibilidad de sus efectos sobre el
desarrollo y motilidad larvaria, lo cual implica una disminución en la inhibición de la
actividad de la bomba faríngea y de la musculatura somática.
La resistencia antihelmíntica es un fenómeno actual que involucra la selección
de nemátodos resistentes por factores propios de los antihelmínticos, los parásitos, los
hospedadores y del medio ambiente donde se desarrolla el fenómeno (President,
1985), por lo que al utilizar un antiparasitario es necesario evaluar dosis, ruta de
administración, frecuencia de tratamiento y mecanismo de acción (Prada, 2002).
1.5.4 Técnicas para determinar resistencia antihelmíntica.
Se han desarrollado diversas técnicas para la determinación de resistencia
antihelmíntica, sin embargo, cualquiera que sea el método utilizado, la correcta
anamnesis es imprescindible, la información sobre el propósito del animal, tipo de
alimentación, plan sanitario, manejo de potreros, historial de desparasitaciones,
frecuencia, principios activos y dosis utilizadas en cada vermifugación, son
importantes en el momento en que se quiera establecer la posibilidad de este
fenómeno, no obstante aunque la resistencia se pueda sospechar en base a los
resultados arrojados por los datos epidemiológicos y clínicos, es necesario la
implementación de pruebas de laboratorio que confirmen o descarten la presencia del
proceso.
La asociación mundial para el avance de la parasitología veterinaria (WAAVP) ha
estandarizado las pruebas para parásitos nemátodos (Coles y col., 1992), Tabla 1.
Éstas, son pruebas biológicas, bioquímicas, in vivo e in vitro que detectan los grados
16
de susceptibilidad o resistencia antihelmíntica de un respectivo antiparasitario (Pook y
col., 2002; Taylor y col., 2002; Coles y col., 2006).
Tabla 1. Pruebas para la detección de resistencia antihelmíntica.
IN VIVO - IN VITRO NOMBRE ESPECTRO TIPO DE PRUEBA
In vivo
Prueba de eficacia controlada Todos los antihelmínticos
Biológica
Test de reducción de la oviposición
Todos los antihelmínticos
In vitro
Eclosión de Huevos Benzimidazol Parálisis de Huevos Levamisol
Morantel Parálisis larval Levamisol Inhibición de la ingestión larvaria
Ivermectina Benzimidazol
Análisis del desarrollo de larvas Benzimidazol Levamisol Ivermectina
Fijación a la Tubulina Benzimidazol Bioquímica
Pruebas PCR Benzimidazol Pruebas de biología molecular
Modificado de: Prada, 2002 y Márquez, 2003.
1.5.4.1 Métodos in vivo
1.5.4.1.1 Test de reducción de la oviposición
(Faecal Egg Count Reduction - FERCT).
Es el método de detección de resistencia más simple, puede ser utilizado en
rumiantes, equinos y porcinos, con todo tipo de antihelmínticos y con todas las
especies de nemátodos cuyos huevos sean eliminados con la materia fecal y puedan
ser cuantificados.
17
Para esta prueba se recomienda la utilización de animales jóvenes, menores de
un año de edad, dado que la respuesta inmune del huésped puede disminuir o anular
la oviposición en gran parte de los géneros parasitarios luego del año de edad con un
adecuado nivel nutricional (Fiel y col., 1998).
Diferentes métodos para calcular el porcentaje de reducción de huevos en las
heces se han desarrollado, una de las recomendaciones de la WAAVP es utilizar un
grupo testigo que se mantiene sin tratar para conocer los posibles cambios en la
eliminación de huevos durante el periodo de estudio (Coles y col., 1992; Coles y col.,
2006), metodología que ha sido estandarizada para ovinos y caprinos pero no en
equinos (Kaplan, 2002).
Otra opción consiste en utilizar como grupo testigo a los mismos animales antes
del tratamiento, en este caso puede estimarse el porcentaje de reducción individual ya
que cada animal es su propio control (Álvarez y col., 2002; Sievers y Alocilla, 2007).
La técnica se basa en la valoración de la eficacia de un antihelmíntico
comparando el recuento de huevos fecales de un grupo de animales antes y 10-15
días después del tratamiento.
La forma recomendada para calcular la reducción de los conteos de huevos es:
Donde es la media aritmética del grupo control o media aritmética de hpg
pretratamiento y es la media aritmética de los animales tratados o media aritmética
de hpg postratamiento (Young y col., 1999).
18
Algunos autores, (President, 1985), indican que los resultados de este test son
sólo una estimación de la eficacia antihelmíntica debido a que la postura de huevos no
siempre guarda una estrecha correlación con la carga parasitaria y sólo mide el efecto
sobre hembras maduras.
Sin embargo para esta prueba se asume que una reducción de la oviposición ≥
al 95% indican que la población de parásitos es susceptible, con una reducción de la
oviposición entre el 80% - 94%, se considera que la población es moderadamente
resistente, mientras que reducciones menores o iguales al 79% indican que la
población es altamente resistente, tabla 2. (Coles y col., 1992; Probst, 1999; Sangster,
1999; Prada, 2002).
Tabla 2. Indicadores del Porcentaje de reducción de la oviposición.
% reducción de la oviposición Indicador
≥ al 95% Población susceptible
80% - 94% Población moderadamente resistente
≤ 79% Población altamente resistente
Cabe resaltar que a pesar de tener limitaciones como sensibilidad baja y
requerir un mínimo de 10 días para obtener los resultados, su utilización conjunta con
un coprocultivo pre y post tratamiento permite valorar la resistencia adecuadamente
(Jackson y Coop, 2000; Álvarez y col., 2002).
19
1.5.4.2 Métodos in vitro.
1.5.4.2.1 Análisis del desarrollo de larvas (LDA).
Se han publicado diferentes descripciones sobre el LDA para la detección de
resistencia antihelmíntica en nemátodos gastrointestinales. Mientras que las
diferencias entre las metodologías se deben al tipo de medio de cultivo empleado, la
base de la técnica es la misma en todos los casos; los huevos se incuban hasta L3 y
luego se someten a distintas diluciones de antihelmíntico (Álvarez y col, 2002; Prada,
2002).
Es una prueba que se emplea para detectar resistencia frente a miembros de
las tres familias de antihelmínticos de amplio espectro. Como ocurre con la eclosión de
huevos, en esta prueba también se han observado variaciones en la DE50 en función
del momento de la infección, alcanzándose el valor más alto para la DE50 entre el día
50-60 post-infección.
Respecto a la eclosión de huevos, tiene la ventaja de que no son necesarios
huevos recién recuperados de las heces para realizar la prueba. Además no es tan
subjetiva como la prueba de motilidad larvaria, cuando se realiza la lectura de la
muestra. Se considera una buena técnica para emplear en los estudios de resistencia
antihelmíntica y para complementar a otras pruebas in vitro e in vivo con las que
muestra una buena correlación (Varady y Corba, 1999).
20
2. MARCO DE REFERENCIA
Equinos dedicados a la reproducción en estado silvestre de los municipios de
Aguazul, El Yopal, Maní y Paz de Ariporo departamento del Casanare fueron el objeto
de estudio, el presente trabajo de investigación se orientó con el fin de otorgar
información sobre las poblaciones de endoparásitos presentes en esta región, así
como la determinación de resistencia antihelmíntica frente a la Ivermectina por parte
de larvas L3 de nemátodos gastrointestinales de éstos equinos mediante la prueba in
vivo Test de reducción de la oviposición (FECRT).
2.1 MARCO DEMOGRÁFICO
Se muestreó un predio por cada uno de los municipios en estudio (Aguazul, El
Yopal, Maní y Paz de Ariporo), se analizaron un total de 80 muestras de materia fecal
equina, recolectadas directamente del recto, que se distribuyeron de la siguiente
manera:
• 40 muestras de materia fecal recolectadas en Mayo de 2008 (día cero), de
equinos de los predios en estudio antes de administrar vía oral la dosis
correspondiente del antihelmíntico (Ivermectina no genérica), a las cuales se
les realizó la técnica coprológica de MacMaster para determinar la presencia y
el número de huevos por gramo de materia fecal (hpg) y la técnica de
Coprocultivo para determinar las poblaciones de parásitos gastrointestinales.
• 40 muestras recolectadas 14 días post tratamiento con Ivermectina, a las que
igualmente se les realizó la técnica de MacMaster para determinar el
porcentaje de reducción de la oviposición y la técnica de Coprocultivo para
corroborar la presencia o ausencia de larvas L3 luego del tratamiento con el
antihelmíntico.
21
2.2 MARCO GEOGRÁFICO
Generalidades. El Departamento del Casanare se encuentra dentro de la región
oriental de la Orinoquía “llanos orientales colombianos”. Posee una extensión
territorial de 44.640 Km2 donde más del 60% de su territorio es plano; altura
promedio es de 220 metros sobre el nivel del mar (msnm), la temperatura promedio
en las sabanas es de 30ºC, las lluvias ocurren durante los meses de Abril a Octubre, la
red hidrográfica del Departamento está constituida principalmente por los ríos
Casanare, Ariporo, Upía, Cusiana, Cravo Sur y Pauto. El Departamento limita por el sur
con el Departamento del Meta, al oriente con el Departamento del Vichada, al
Occidente con el Departamento de Boyacá y al norte con el Departamento de Arauca
(Figura 4) (www.casanare.gov.co/esp/casanare_hoy/cas_historia.htm, 2008).
Figura 4. Ubicación geográfica Departamento del Casanare.
www.casanare.gov
22
2.2.1 Ubicación Y Localización Geográfica
El Departamento del Casanare se encuentra localizado entre los 04º 17´25” y 06º
50´22” de latitud norte y 73º 04´33” de longitud oeste.
2.2.2 Municipios De Investigación
Los municipios en estudio como ya se ha mencionado fueron: Aguazul, El Yopal,
Maní y Paz de Ariporo (Figura 5).
Figura 5. Municipios de estudio.
www.casanare.gov
2.2.2.1 Municipio de Aguazul.
El municipio de aguazul, se encuentra ubicado geográficamente a 5º 10`latitud
norte y a 72º 33` longitud oeste, a 290 msnm; tienen una extensión de 1.330 km2 y
una temperatura promedio de 27ºC, su clima es predominantemente cálido
(www.aguazul.gov.co).
23
2.2.2.1.1 Finca la Esperanza.
Se encuentra ubicada al oriente del municipio de Aguazul, a 30 minutos del
casco urbano (Figura 6).
Figura 6. Finca La Esperanza municipio de Aguazul.
(Chaparro, 2008)
2.2.2.2 Municipio de El Yopal.
El Yopal, es la capital del Departamento del Casanare, se encuentra a 350
msnm, tiene una extensión de 2.771 km2, su temperatura promedio es de 29ºC, su
clima es húmedo y dista de la ciudad de Bogotá a 350 Km.
2.2.2.2.1 Finca Santa Lucía
Se encuentra ubicada a 20 minutos de la ciudad de El Yopal, vía Matapantano y
a 30 minutos a caballo se ubica el potrero donde se encontraban los equinos a la
fecha de los muestreos (Figura 7).
24
Figura 7. Finca Santa Lucía municipio de El Yopal.
(Chaparro, 2008)
2.2.2.3 Municipio de Maní
Se encuentra a 55 km del municipio de Aguazul y a 80 Km del municipio de El
Yopal, se encuentra a 200 msnm, tiene una extensión de 3.860 km2, una temperatura
promedio de 30ºC, con un clima que oscila entre cálido y húmedo
(www.casanare.gov.co).
2.2.2.3.1 Finca Titiriji.
Se encuentra ubicada hacia el occidente del municipio de Maní, a 30 minutos
del casco urbano (Figura 8).
Figura 8. Finca Titiriji municipio de Maní.
(Chaparro, 2008)
25
2.2.2.4 Municipio de Paz de Ariporo
Con aproximadamente 13.800 Km2, es el municipio del departamento del
Casanare con más extensión territorial, se encuentra a 150 km de la capital del
Departamento y a 460 km2 de la ciudad de Bogotá, está localizado a 275 msnm, tiene
una temperatura promedio de 34ºC y la mayor parte del año el clima es húmedo,
siendo los meses más secos Enero y Febrero, donde las temperaturas pueden llegar a
superar los 36ºC (www.casanare.gov.co)
2.2.2.4.1 Finca La Defensa.
Se encuentra ubicada al oriente del municipio a aproximadamente 2 horas del
centro urbano.
Figura 9. Finca La Defensa Municipio de Paz de Ariporo
(Chaparro, 2008)
2.3 CONDICIONES CLIMÁTICAS DURANTE EL MUESTREO
2.3.1 Temperaturas máxima, media y mínima.
26
Tabla 3. Temperatura máxima, media y mínima de los municipios de estudio. (Aeropuerto Internacional el Alcaraván de El Yopal; Chaparro, 2008.)
Día Municipio Tº Máxima Tº Media Tº Mínima 19/05/08 Aguazul 32 26.9 24 20/05/08 El Yopal 31 25.35 31 21/05/08 Maní 34 27 23 22/05/08 Paz de Ariporo 30 24 20 2/06/08 Aguazul 32 26 25 3/06/08 El Yopal 31 25.13 23 4/06/08 Maní 33 26.3 24 5/06/08 Paz de Ariporo 30 25 22
2.3.2 Precipitación.
Figura 10. Mapas de precipitación en milímetros del departamento del Casanare
durante el muestreo. www.ideam.com /2008.
02/06/08 19/05/08
20/05/08 03/06/08
21/05/08 04/06/08
05/06/08 22/05/08
27
3. METODOLOGÍA
3.1 MÉTODOS Y PROCEDIMIENTOS.
Se recolectó una muestra de materia fecal de aproximadamente 200 gramos,
con una manga de palpación humedecida con agua directamente del recto de los
equinos de los cuatro municipios en estudio (10 por municipio), posterior a la
obtención de la muestra, ésta fue identificada con el nombre del municipio al que
corresponde y el número o nombre del equino del cual se obtuvo, la muestra se
refrigeró en una nevera de icopor con hielo a una temperatura inferior a 10°C, lo cual
evitó la eclosión de los huevos de los parásitos antes de que las muestras fueran
procesadas, luego de su recolección se analizaron mediante las técnicas coprológicas
de MacMaster y coprocultivo para obtener el número de huevos por gramo de materia
fecal y los géneros de parásitos gastrointestinales presentes en los animales.
Una vez recolectada la muestra de materia fecal se procedió a administrar vía
oral 200 mcg/kg de un producto comercial a base de Ivermectina (no genérico) a cada
uno de los equinos (40 equinos en total, 10 por municipio) y 14 días post
administración del antihelmíntico, se recolectó nuevamente una muestra de materia
fecal directamente del recto de los animales tratados, igualmente fue identificada y
refrigerada y se les realizó la técnica de MacMaster obteniendo el número de huevos
por gramo de materia fecal post tratamiento y con ello el porcentaje de reducción de la
oviposición, además de corroborar los resultados con la Técnica de Coprocultivo para
identificar o no la presencia de larvas L3. (Los animales tratados fueron muestreados
para determinar poblaciones parasitarias en 3 ocasiones, 2 en invierno y 1 en verano
dentro de la investigación “Determinación de poblaciones de endoparásitos en
equinos de las sabanas de Bogota y Casanare, así como los grados de resistencia
antihelmíntica frente a las lactonas Macrocíclicas, mediante el Test de reducción de la
28
oviposición y Análisis del desarrollo de larvas” siendo los muestreos de invierno los de
este trabajo de investigación)
Cada muestra recolectada fue dividida de la siguiente manera:
• 3 gramos para la técnica de MacMaster.
• 100 – 150 gramos para la técnica de coprocultivo.
Este procedimiento se realizó de la misma forma, el día cero y el día 14 post
tratamiento antihelmíntico con Ivermectina.
3.1.1 Descripción De Las Técnicas
3.1.1.1 Técnica De MacMaster Modificada Por Schmidt (1971)
• Se vierte en un frasco plástico una solución saturada de cloruro de sodio (360
gr. / litro de agua) hasta la marca que indica 42 ml (envase plástico con
capacidad para 50 ml).
• Luego se agrega materia fecal hasta alcanzar una marca que indica 45 ml, lo
que quiere decir que aproximadamente se colocaron 3 g de materia fecal en el
envase.
• La muestra de materia fecal debe deshacerse con un baja lenguas.
• Se tapa el frasco y se agita suavemente para asegurar una suspensión
homogénea.
29
• Se destapa el frasco y con un gotero se toma una muestra de la parte media del
frasco, luego se procede a llenar las dos secciones de la Cámara de
MacMaster. Debe evitarse el ingreso de burbujas de aire, ya que desplazan los
huevos de nemátodos y puede causar recuentos erróneos.
• Se deja la cámara en reposo 2 minutos. Se realiza el recuento de huevos en
ambas secciones (cuadriculas o ventrículos), con los aumentos 4X, 5X o 10X.
• El número de huevos encontrados se multiplica por 13 para obtener el número
de huevos por gramo de materia fecal (hpg) (Romero, 2007).
3.1.1.1.1 Identificación y diferenciación de huevos eliminados en la materia fecal
(Técnica de MacMaster).
Para la clasificación de huevos y larvas de parásitos gastrointestinales del equino, se utilizo como referencia a Monteiro (2005), y Bûrger y Stoye (1968), técnicas descritas en las tablas 4 y 5 y figura 11.
Tabla 4. Identificación y diferenciación de huevos eliminados en la materia fecal de los equinos. Monteiro, 2005.
Tipo de Huevo
Descripción y Características morfológicas
Figura
Strongylido spp.
Agrupan a los huevos de pequeños y grandes strongylus, puesto que son indistinguibles entre si. Huevos de tamaño medio de 100-110 micras de largo por 40-50 micras de diámetro. Forma alargada. Posee dos paredes aplanadas. Superficie lisa. Contiene mórula con un pequeño número de blastómeros.
30
Strongyloide spp.
Huevos de tamaño pequeño de 40-50 micras de largo por 30-40 micras de diámetro. Ovoide. Paredes simétricas. Polos largos. Pared fina y superficie lisa. Contiene una pequeña larva.
Parascaris spp.
Los huevos son irregularmente esféricos, midiendo 90-100 џm de diámetro. En su interior contienen al ser puestos una simple célula encerrada en tres cubiertas: una delgada membrana vitelina interior, una gruesa cubierta media, formada por laminillas proteicas y una tercera capa externa, salpicada de diminutos hoyuelos y protuberancias.
Triodonthoforus spp.
Huevos de tamaño grande: 130-140 micras de largo por 55-65 micras de diámetro. Ovoide. Paredes lisas. Contiene mórula con blastómeros grandes y muy juntos.
Habronema spp.
Huevos de tamaño pequeño de 40-55 micras de diámetro por 8-16 micras de largo. Cilíndrico o baciliforme, fuertemente comprimido. Paredes laterales en forma de barril. Contiene una larva en su interior.
Oxyuris spp.
Huevos de tamaño medio de 80-95 micras de largo por 40-45 micras de diámetro. Levemente asimétrico. Una de sus paredes es ligeramente aplanada. Siempre contiene un estadio de mórula tardía o larva L1.
Anoplocephala spp.
Huevos de tamaño medio de 50-80 micras de largo por 8-16 micras de diámetro. Esféricos en la mayoría de los preparados. Ligeramente aplanados en varios de sus lados. Superficie lisa. Contienen un embrión cercado por un aparato quitinoso piriforme que le da apariencia de pera.
3.1.1.1.2 Coprocultivo (Roberts y Sullivan, 1950).
• En un vaso desechable se colocan de 100 a 150 gr. de materia fecal en
porciones pequeñas con el fin de garantizar la aireación apropiada de la
muestra. Los vasos se llenan hasta ¾ partes.
31
• Los vasos se tapan con hojas de papel y se sujetan con bandas elásticas, una
vez el vaso es tapado se hacen múltiples perforaciones (preferiblemente con
una aguja calibre 18) a la hoja que lo cubre, para que la muestra reciba aire y
se evite la deposición de huevos de insectos sobre ella, lo que podría interferir
con el desarrollo de las larvas de los nemátodos.
• Las muestras se almacenan en el laboratorio en repisas protegidas de la luz
solar. Diariamente cada muestra debe ser agitada suavemente para mejorar la
aireación y mantener una humedad uniforme.
• Luego de 15 – 21 días de cultivo se procede a extraer las larvas L3, mediante
la técnica de migración activa o técnica de Baermann-Wetzel descrita en
Rommel y col (2000). Donde se envuelve aproximadamente 15gr de materia
fecal en una porción de gasa, la cual se coloca en un colador que se suspende
del borde de un embudo lleno de agua el cual se encuentra empatado con una
manguera de goma que en su parte inferior sujeta a un tubo de ensayo sin
anticoagulante. Después de 24 horas se recoge el líquido que contiene las
larvas en el tubo de ensayo.
• Posterior a la extracción del líquido que contiene las larvas con un gotero se
extrae una gota del sedimento (agitando previamente la muestra para
homogenizar su contenido) que se coloca sobre una lámina portaobjetos para
proceder a realizar la observación en un microscopio a 4X, 5X, 10X y 40X.
32
33
3.1.1.1.2.1 Identificación y diferenciación del Larvas L3 por coprocultivo.
Tabla 5. Características de larvas L3 de Strongylidos del equino.
Género y/o
especie
Forma y Tamaño de
la larva
Esófago
Células
intestinales
Extremo posterior
de la larva
Forma de la cola
Tamaño
de la cola
Relación Cuerpo:
cola.
Strongylus edentatus
Bastante delgada; (800µ) de longitud
Bastante largo y filarigorme
18-20, poco nítidas
Adelgaza de apoco
Forma de hilo
Mediana-larga
2:1
Strongylus equinus
Muy delgada; (1000µ) de longitud
Largo y filariforme
16-18 Adelgaza muy lento
Forma de hilo
Corta 2.8:1
Strongylus vulgaris
Grueso y grande; (1000µ) de longitud
Corto y filarigorme
28-32, muy nítidas, con granulaciones
Adelgaza muy lento
Forma de hilo
Corta 2.5:1
Pequeños estróngilos
Gruesas y chicas (850µ) de longitud
Largo y filariforme
8-12, nítidas Adelgaza muy rápido
Forma de hilo
Muy larga
1.5:1
Trichostrongylus spp.
Delgada y chica (700µ) de longitud
Corto y filarigorme
16 Corto y redondo
Strongyloides westeri
Muy delgada y chica (600µ) de longitud
Muy largo 1/3 de la larva
Poco claras Corto y redondo
Bûrger y Stoye, 1968.
Figura 11. Forma y Tamaño larvas L3 del equino.
Bûrger y Stoye, 1968.
34
3.1.1.1.3 Test de reducción de la oviposición (Young y col., 1999).
Con los resultados obtenidos con la técnica de MacMaster del número de hpg
de materia fecal de los días 0 (pretratamiento) y 14 (post- tratamiento), se realizó el
Test de reducción de la oviposición, que como ya se mencionó dentro de la revisión de
literatura, consiste en el cálculo de la presencia de cepas de parásitos resistentes
mediante la prueba de reducción de la oviposición, la cual compara los recuentos de
huevos antes y después del tratamiento de los animales en este caso con Ivermectina,
determinando el porcentaje de reducción de la oviposición por la fórmula:
(Young y col., 1999).
= Media aritmética de hpg pretratamiento.
= Media aritmética de hpg postratamiento.
Para el presente trabajo de investigación se tuvo en cuenta los siguientes
porcentajes para determinar la presencia o no de poblaciones resistentes a la
Ivermectina Tabla 6:
Tabla 6. Interpretación del porcentaje de reducción de la oviposición.
% de reducción en la oviposición. Interpretación.
≥ al 95% Parásitos susceptibles
80% - 94% Parásitos moderadamente resistentes
≤ 79% Parásitos altamente resistentes.
35
3.1.2 Materiales de las técnicas desarrolladas.
Técnica Materiales
MacMaster
(Romero, 2007)
Cámaras de MacMaster de 4 retículos. Frascos de 50 ml. Baja lenguas. Goteros. Microscopio.
Coprocultivo
(Roberts y Sulivan, 1950)
Vasos desechables. Resma de papel tamaño carta. Bandas de caucho. Laminas porta objetos. Laminas cubre objetos. Embudos. Coladores. Gasa. Manguera de goma. Pinzas. Tubos de ensayo tapa roja. Microscopio.
Test de reducción de la oviposición (FERCT)
(Young y col., 1999).
Mangas de palpación Ivermectina oral (no genérica) Resultados hpg de materia fecal pre tratamiento (Técnica de MacMaster). Resultados hpg de materia fecal 14 días post tratamiento (Técnica de MacMaster).
36
4. ANÁLISIS DE DATOS.
Para determinar las poblaciones de parásitos se realizó un análisis mediante
estadística descriptiva a través del programa computacional Statistix.
Antes de realizar el análisis de los datos obtenidos, se comprobaron los
supuestos de normalidad de los errores y homogeneidad de varianzas del error
experimental mediante las pruebas de Shapiro & Wilk (P > 0.05) y Levene (P > 0.05)
respectivamente, puesto que son premisas que se deben cumplir antes de realizar
cualquier procedimiento estadístico.
Se realizaron Análisis de Varianza de una vía para establecer las diferencias
estadísticas del promedio de eliminación de hpg entre los 4 predios en estudio con un
nivel de significacia del 0.05 y posteriormente la prueba de Tukey para determinar qué
municipios se comportaron estadísticamente diferentes en la eliminación de hpg de
materia fecal, de igual forma se procedió para determinar las diferencias estadísticas
entre el Test de reducción de la oviposición y para la comparación de resultados entre
las técnicas Test de reducción de la oviposición y Análisis del desarrollo larval técnica
realizada simultáneamente a los mismos equinos, dentro del proyecto de investigación
“Determinación de poblaciones de endoparásitos en equinos de las sabanas de
Bogota y Casanare, así como los grados de resistencia antihelmíntica frente a las
lactonas Macrocíclicas, mediante el Test de reducción de la oviposición y Análisis del
desarrollo de larvas”, los procedimientos antes descritos se realizaron en el programa
Statistical Analysis System (SAS) versión 9.1.
37
5. RESULTADOS 5.1 TÉCNICA DE MACMASTER PRETRATAMIENTO CON IVERMECTINA. Nota: La letra X señala los tipos de huevos observados. 5.1.1 Municipio de Aguazul.
Tabla 7. Resultados de la técnica de MacMaster municipio de Aguazul.
MUESTRA Hpg Strongylidos spp.
Strongyloides spp.
Triodonthoforus spp.
Habronema spp.
Anoplocephala spp.
Oxyuris spp.
Parascaris spp.
A1 230 X X
A2 581 X X
A3 351 X
A4 176 X
A5 135 X
A6 418 X X
A7 27 X
A8 189 X
A9 108 X
A10 122 X X
TOTAL 2336
Promedio de hpg
234
Los equinos de la finca La Esperanza del municipio de Aguzul, resultaron
positivos a huevos de tipo Strongylido spp y Triodonthoforus spp. El recuento total de
huevos por gramo de materia fecal (hpg) en la finca fue de 2.336 con un promedio de
234 hpg.
38
5.1.2 Municipio de El Yopal.
Tabla 8. Resultados técnica de MacMaster municipio de El Yopal.
MUESTRA hpg Strongylidos spp.
Strongyloides spp.
Triodonthoforus spp.
Habronema spp.
Anoplocephala spp.
Oxyuris spp.
Parascaris spp.
Y1 918 X X
Y2 770 X X
Y3 1256 X X X
Y4 338 X X
Y5 1134 X X
Y6 284 X
Y7 999 X X
Y8 351 X X
Y9 365 X X
Y10 918 X X
TOTAL 7331
Promedio de hpg
734
Las muestras de materia fecal analizadas de la finca Santa Lucía del municipio
de El Yopal, resultaron positivas a huevos de tipo Strongylido spp, Triodonthoforus spp
y Anoplocephala spp. El total de hpg de materia fecal fue de 7.331 y el promedio de la
finca estuvo en 734 hpg.
39
5.1.3 Municipio de Maní.
Tabla 9. Resultados técnica de MacMaster municipio de Maní.
MUESTRA hpg Strongylidos spp.
Strongyloides spp.
Triodonthoforus spp.
Habronema spp.
Anoplocephala spp.
Oxyuris spp.
Parascaris spp.
M1 54 X
M2 135 X X
M3 108 X
M4 68 X X
M5 68 X
M6 95 X
M7 162 X X
M8 108 X
M9 122 X
M10 176 X X
TOTAL 1094
Promedio de hpg 110
Los equinos de la finca Titiriji del municipio de Maní, fueron positivos a huevos
de tipo Strongylido spp y Triodonthoforus spp. El número total de hpg de materia fecal
fue de 1.094 y el promedio de eliminación de hpg estuvo en 110 hpg.
40
5.1.4 Municipio de Paz de Ariporo
Tabla 10. Resultados técnica de MacMaster municipio de Paz de Ariporo.
MUESTRA hpg Strongylidos spp.
Strongyloides spp.
Triodonthoforus spp.
Habronema spp.
Anoplocephala spp.
Oxyuris spp.
Parascaris spp.
P1 675 X X
P2 986 X X
P3 959 X X
P4 2673 X X X
P5 3847 X X X
P6 446 X X
P7 702 X X
P8 1526 X X
P9 189 X
P10 702 X X X
TOTAL 12704
Promedio de hpg
1271
Las muestras de la finca La Defensa del municipio de Paz de Ariporo, resultaron
positivas a huevos de tipo Strongylido spp, Triodonthoforus spp y Habronema spp. El
número total de hpg de materia fecal fue de 12.704 con un promedio de eliminación
de hpg de 1.271.
41
5.1.5 Resultados generales técnica de MacMaster para los 4 predios.
El número total de hpg en los predios de los 4 municipios fue de 23.465; las
muestras analizadas resultaron positivas a huevos de tipo Strongylido spp,
Triodonthoforus spp, Habronema spp y Anoplocephala spp.
El tipo de huevo que se presentó con mayor frecuencia fue el de Strongylido
spp, observado en el 100% de las muestras (40 muestras) y en orden descendente,
Triodonthoforus spp. el cual se observó en el 42.5% de las muestras (17 muestras) y
en los 4 predios; Habronema spp presente en el 7.5% de las muestras (3 muestras)
procedentes del municipio de Paz de Ariporo y por último Anoplocephala spp. con un
porcentaje de observación del 2.5% (1 muestra) presente en el municipio de El Yopal
Grafica 1.
42
El municipio con el mayor promedio de eliminación de hpg de materia fecal fue
Paz de Ariporo con 1.271, seguido por los municipio de El Yopal con 734 hpg , Aguazul
con 234 hpg y Manί con 110 hpg Gráfica 2.
5.1.6.1 Comparación de los 4 predios de eliminación de hpg de materia fecal.
Se realizó la prueba de Tukey con un nivel de significacia del 0.05 (Martínez y
Martínez, 1997), con el fin obtener las diferencias entre los municipios de estudio
(Anexo 1), obteniendo:
• Los municipios Aguazul y Maní, tienen un promedio de eliminación de hpg
estadísticamente similar.
• Los municipios de Paz de Ariporo y El Yopal se comportan de forma similar
en cuanto a la eliminación de hpg de materia fecal.
43
5.2 COPROCULTIVOS PRETRATAMIENTO CON IVERMECTINA.
• Siglas para la identificación de larvas.
PS: Pequeños strongylus SEQ: Strongylus equinus. SW: Strongiloides westeri. SV: Strongylus vulgaris. SED: Strongylus edentatus. TA: Trichostrongylus axei.
5.2.1 Municipio de Aguazul.
Tabla 11. Resultados identificación de larvas L3 municipio de Aguazul.
ID MUESTRA PS SW SED SEQ SV
TA
A1 94 2 1 3
A2 95 5
A3 93 2 2 3
A4 98 2
A5 100
A6 99 1
A7 98 2
A8 95 2 3
A9 98 1 1
A10 96 1 1 2
El 96.6% del total de larvas L3 corresponden a Pequeños strongylus presentes
en todas las muestras, el 2.2% a larvas L3 de Strongylus vulgaris observadas en 9
muestras, el 0.8% a larvas L3 Strongylus edentatus en 5 muestras y el 0.2% a larvas
L3 de Strongylus equinus observadas en 3 de las 10 muestras Grafica 3.
44
5.2.2 Municipio de El Yopal
Tabla 12. Resultados identificación de larvas L3 municipio de El Yopal.
ID
MUESTRA PS SW SED SEQ SV
TA
Y1 100
Y2 97 3
Y3 100
Y4 98 2
Y5 100
Y6 100
Y7 99 1
Y8 100
Y9 98 2
Y10 97 1 2
El 98.9 % del total de larvas L3 corresponden a Pequeños strongylus presentes
en todas las muestras, el 1% a larvas L3 de Strongylus vulgaris observadas en 5
muestras y el 0.1% a larvas L3 Strongylus edentatus presentes en 1 muestra Grafica
4.
45
5.2.3 Municipio de Maní
Tabla 13. Resultados identificación de larvas L3 municipio de Maní.
ID MUESTRA PS SW SED SEQ SV
TA
M1 100
M2 99 1
M3 100
M4 100
M5 100
M6 96 2 2
M7 100
M8 92 2 6
M9 100
M10 100
El 98.7 % del total de larvas L3 corresponden a Pequeños strongylus presentes
en todas las muestras, El 0.9 % a larvas L3 de Strongylus vulgaris presentes en 3 de
las muestras y el 0.4% a larvas L3 Strongylus edentatus presentes en 2 de las 10
muestras Grafica 5.
46
5.2.4 Municipio de Paz de Ariporo
Tabla 14. Resultados identificación de larvas L3 municipio de Paz de Ariporo.
ID
MUESTRA PS SW SED SEQ SV
TA
P1 100
P2 98 2
P3 100
P4 97 1 2
P5 96 1 1 2
P6 100
P7 99 1
P8 100
P9 96 2 2
P10 98 1 1
El 98.4% del total de larvas L3 corresponden a Pequeños strongylus presentes
en todas las muestras, el 1% a larvas L3 de Strongylus vulgaris observadas en 6
muestras, el 0.4% a larvas L3 Strongylus edentatus en 3 muestras y el 0.2% a larvas
L3 de Strongylus equinus observadas en 2 de las 10 muestras Grafica 6.
47
5.2.5 Resultados generales técnica de Coprocultivo para los 4 predios.
Se encontraron larvas L3 de Pequeños strongylus, Strongylus vulgaris,
Strongylus edentatus y strongylus equinos, en los siguientes porcentajes: el 98.15% al
género de Pequeños strongylus presentes en 100% de las muestras analizadas; el
1.275% al género de Strongylus vulgaris presentes en el 50% de las muestras (20); el
0.375% al género Strongylus edentatus observadas en el 27.5% de las muestras (11
muestras) y el 0.1% restante al género Strongylus equinus Grafica 7.
48
5.3 TEST DE REDUCCIÓN DE LA OVIPOSICIÓN (FECRT) 5.3.1 Municipio de Aguazul.
Tabla 15. Resultados del test de reducción de la oviposición municipio de Aguazul.
MUESTRA Hpg día 0 Hpg día 14 % reducción A1 230 0 100 A2 581 0 100 A3 351 0 100 A4 176 0 100 A5 135 0 100 A6 418 0 100 A7 27 0 100 A8 189 0 100 A9 108 0 100
A10 122 0 100 TOTAL 2336 0 100
Promedio de hpg 234 0 100
5.3.2 Municipio de El Yopal
Tabla 16. Resultado del test de reducción de la oviposición municipio de El Yopal.
MUESTRA Hpg día 0 Hpg día 14 % reducción
Y1 918 0 100 Y2 770 0 100 Y3 1256 0 100 Y4 338 0 100 Y5 1134 0 100 Y6 284 0 100 Y7 999 0 100 Y8 351 0 100 Y9 365 0 100
Y10 918 0 100 TOTAL 7334 0 100
Promedio de hpg 734 0 100
49
5.3.3 Municipio de Maní.
Tabla 17. Resultado del test de reducción de la oviposición
Municipio de Maní.
MUESTRA Hpg día 0 Hpg día 14 % reducción M1 54 0 100 M2 135 0 100 M3 108 0 100 M4 68 0 100 M5 68 0 100 M6 95 0 100 M7 162 0 100 M8 108 0 100 M9 122 0 100
M10 176 0 100 TOTAL 1094 0 100 Promedio de hpg 110 0 100
5.3.4 Municipio de Paz de Ariporo
Tabla 18. Resultado del test de reducción de la oviposición municipio de Paz de Ariporo.
MUESTRA Hpg día 0 Hpg día 14 % reducción
P1 675 0 100 P2 986 0 100 P3 959 0 100 P4 2673 0 100 P5 3847 0 100 P6 446 0 100 P7 702 0 100 P8 1526 0 100 P9 189 0 100
P10 702 0 100 TOTAL 12704 0 100
Promedio de hpg 1271 0 100
50
5.4 COPROCULTIVO POST TRATAMIENTO CON IVERMECTINA (Roberts y Sullivan,
1950).
La tabla 19. Muestra los resultados del número de larvas L3 observadas luego
del tratamiento con Ivermectina, en cada uno de los municipios.
PS: Pequeños strongylus SEQ: Strongylus equinus. SW: Strongiloides westeri. SV: Strongylus vulgaris. SED: Strongylus edentatus. TA: Trichostrongylus axei.
Tabla 19. Resultados coprocultivo 14 días post tratamiento con Ivermectina.
MUNICIPIO PS SW SED SEQ SV
TA Aguazul 0 0 0 0 0 0
El Yopal 0 0 0 0 0 0
Maní 0 0 0 0 0 0
Paz de Ariporo 0 0 0 0 0 0 5.5 ANÁLISIS ESTADÍSTICO. 5.5.1 Resultados técnica de MacMaster modificada por Schmidt (1971),
pretratamiento con Ivermectina.
Antes de comprobar los supuestos de normalidad y homogeneidad de varianzas
para el error experimental (premisas que se deben tener en cuenta previa realización
de los análisis de varianzas), los resultados obtenidos fueron transformados a
logaritmo en base 10 dado los datos extremos iniciales.
51
5.5.1.1 Prueba de Shapiro & Wilk para normalidad de los errores.
Se consideró un P > 0.05.
Shapiro- Pr < W 0.4952 = Errores normales
5.5.1.2 Prueba de Levene para homogeneidad de varianzas.
Se consideró un P>0.05.
Pr > F 0.2681 = Varianzas homogéneas.
5.5.1.3 Análisis De Varianza De Una Vía
La tabla 20. Muestra los resultados del análisis de varianza para la técnica de
MacMaster con los resultados obtenidos antes del tratamiento con Ivermectina.
Tabla 20. Anova resultados técnica de MacMaster pre tratamiento con Ivermectina.
FV Gl SC CM FC Pr > F
Municipios 3 6,08 2,06 21,75 <0.0001
Error 36 3,35 0,09
Total 39 9,43
Considerando un P < 0.05 como estadísticamente significativo, el resultado del
análisis de varianza (Pr> F = < 0.0001) indica que hay por lo menos uno de los
promedios de eliminación de hpg de materia fecal de los predios que se comporta
diferente.
52
5.5.1.4 Comparación no Planeada - Tukey.
Tabla 21. Comparación de medias de eliminación de hpg de materia fecal.
Tukey Media (logaritmo) Municipio
A 2,96 Paz de Ariporo
A 2,80 El Yopal
B 2,24 Aguazul
B 2,01 Maní
Medias con la misma letra no son significativamente diferentes.
Resultados indican que:
• El municipio de Paz de Ariporo y el municipio de El Yopal tienen un comportamiento
similar en cuanto a la eliminación de hpg de materia fecal.
• El de Aguazul tiene un promedio de eliminación de hpg similar al municipio de
Maní.
• El promedio de eliminación de hpg de materia fecal del municipio de Paz de
Ariporo es diferente al municipio de Aguazul y de Maní.
• El promedio de eliminación de hpg de materia fecal del municipio de El Yopal es
diferente al promedio de eliminación de hpg de materia fecal de los municipios de
Aguazul y de Maní.
53
5.5.2 Test de Reducción de la oviposición.
La tabla 22. Muestra los porcentajes del Test de reducción de la oviposición de
cada uno de los municipios.
Tabla 22. Resultados test de reducción de la oviposición.
MUNICIPIO % reducción de la oviposición Aguazul 100 El Yopal 100 Maní 100 Paz de Ariporo 100
5.5.2.1 Comparación no Planeada - Tukey.
La tabla 23. Muestra los resultados de la prueba de Tukey con un nivel de
significacia del 0.05.
Tabla 23. Comparación de medias de eliminación de hpg de materia fecal.
Tukey Media Municipio
A 100 Paz de Ariporo
A 100 El Yopal
A 100 Aguazul
A 100 Maní
Medias con la misma letra no son significativamente diferentes.
Resultados indican que el porcentaje de reducción de la oviposición en todos
los municipios fue similar por tanto no hubo diferencias estadísticamente significativas
entre los cuatro predios en estudio.
54
5.5.3 Comparación Test De Reducción De La Oviposición (FECRT) Y Análisis Del
Desarrollo De Larvas (LDA).
Antes de realizar la prueba de Tukey para comparar los resultados del Test de
reducción de la oviposición con los resultados obtenidos en el Test análisis del
desarrollo de larvas (LDA), los resultados se trasformaron a logaritmo dado los datos
extremos de los dos procedimientos cuyo rango fue de 0 para el Test de reducción de
la oviposición (FECRT) y 7 para el Análisis del desarrollo de larvas (LDA), con el fin de
probar los supuestos de normalidad y homogeneidad de los errores Tabla 24.
Tabla 24. Resultados mortalidad de Larvas L3 para
FERCT y LDA por municipio.
Municipio FERCT LDA
Aguazul 0 7
El Yopal 0 6
Maní 0 6
Paz de Ariporo 0 7
5.5.3.1 Prueba de Shapiro & Wilk para normalidad de los errores.
Se consideró un P > 0.05.
Shapiro- Pr < W 0.0894 = Errores normales
5.5.3.2 Prueba de Levene para homogeneidad de varianzas.
Se consideró un P>0.05.
Pr > F 0.0715 = Varianzas homogéneas.
55
5.5.3.2 Análisis de varianza
La tabla 25. Muestra los resultados del análisis de varianza de la comparación
de los métodos Test de reducción de la oviposición (FECRT) y la prueba Análisis del
desarrollo de larvas (LDA).
Tabla 25. Anova resultados comparación FECRT y LDA.
FV Gl SC CM FC Pr > F
Procedimientos 1 0,66 0,66 144,27 < 0.0001
Error 6 0,02 0,004
Total 7 0,68
Considerando un P < 0.05 como estadísticamente significativo, el resultado del
análisis de varianza (Pr> F = < 0.0001) indica que hay diferencias de los resultados
obtenidos en el Test de reducción de la oviposición y la prueba Análisis del desarrollo
larval (LDA), es decir que el promedio de eliminación de larvas L3 tuvo un diferente
Pr>F (< 0.0001) en los procedimientos utilizado FECRT y LDA.
56
6. DISCUSIÓN.
TÉCNICA DE MacMaster.
Fue posible clasificar los huevos eliminados en la materia fecal de los equinos
de los cuatro predios en estudio a través de la técnica de MacMaster según las
características morfológicas descritas por Monteiro (2005), pero sin poder identificar la
especie de los huevos strongilidos dado la similitud morfológica que se presenta entre
ellos.
Mediante la técnica de MacMaster se observaron huevos de tipo Strongylido
spp, Triodonthoforus spp, Habronema spp y Anoplocephala spp, al respecto de éste
último, a pesar de no ser ésta la técnica específica para su diagnóstico, su observación
durante el procedimiento se debió muy probablemente a la densidad de la solución
utilizada (solución salina sobresaturada con densidad de 1.18), la que hizo que los
huevos de Anoplocephala spp. con una densidad menor flotaran hasta la parte
superior de la cámara de MacMaster permitiendo de esta manera su visualización al
microscopio (Baroni y Sievers, 1999; Romero, 2007).
En el presente estudio no se encontraron huevos de Parascaris spp a pesar de
la presencia de este parásito en la región (Prada, 2008), lo que podría ser explicado
porque los animales muestreados correspondían a equinos mayores de un año de
edad y se sabe que los équidos mayores a 6 meses desarrollan una marcada
inmunidad contra la infección por Parascaris spp, lo que lleva a una disminución e
incluso la total desaparición de huevos de este tipo de parásito en la materia fecal del
adulto (Soulsby, 1987; Cordero del Campillo y Rojo, 1999; Traversa y col., 2008), de
esta manera se puede deducir que tanto la presencia como la prevalencia de este
parásito está condicionada por la edad de los animales de la población o muestra
poblacional en estudio.
57
No se encontraron huevos de Oxyuris spp., el que no se hayan observado en
esta investigación puede deberse a que muy pocos huevos del Oxiurys equi caen a la
materia fecal dado que las hembras de esta especie depositan los huevos junto con
una sustancia pegajosa en la región perineal y para su confirmación se requiere de
técnicas mas especificas como la prueba del celofán (Prada, 2004) y raspado de los
depósitos céreos alrededor del ano (Cordero del Campillo y Rojo, 1999), además tiene
una muy baja incidencia de infección (MacAllister y Freeman, 2007).
Tampoco se observaron huevos de tipo strongyloides spp. pero al igual que el
Parascaris equorum este parásito afecta más animales jóvenes que adultos y de
hecho es en animales menores a un año donde se reportan problemas tales como,
diarrea aguda, debilidad y emaciación en comparación con animales adultos que a
pesar de una alta carga parasitaria no presentan manifestaciones clínicas (Greer y col.,
1974; Linchtenfels, 1975; Ludwig y col., 1983; Lyons y col., 1973; Solsby, 1987,
Cordero del Campillo y Rojo, 1999; Uslu y Gluclu, 2007).
El tipo de huevo que mas se observó en la materia fecal fue el de tipo
Strongylido spp con un porcentaje del 100%. Lichthenfels y col., (1999); Guthurie
(1999); Romero (2007), reportan que del 100% de los huevos de nemátodos
gastrointestinales eliminados en la materia fecal más del 70% corresponden a este
tipo de huevo, resultados que concuerdan con los datos obtenidos en el presente
trabajo, indicando que a la fecha se constituye el tipo de huevo de parásito
gastrointestinal más frecuente e importante para los equinos en esta región del país.
Se encontraron huevos de tipo Triodonthoforus spp. y Habronema spp, con un
porcentaje de observación del 42.5% y 7.5% respectivamente; las prevalencias de
estos varían del 6.3% al 50% según los reportes encontrados (Kulkarni y col., 1989;
Ricci y Sabatini, 1992; Bucknell y col., 1995; Tieri y col., 1998; Anderson, 2000;
Pusterla y col., 2003; Gasthuys y col., 2004; Valentin, 2005; Ugur y Uslu, 2007). Este
58
rango tan amplio, permite presumir que la prevalencia de éstos parásitos está sujeta al
tipo de estudio, animales, tipo de manejo, programas de desparasitación y latitudes
donde se desarrollen los trabajos de investigación, por tanto comparar el resultado
encontrado en el presente estudio con los antes mencionados es imposible dadas las
diferencias en el desarrollo del modelo de investigación y las regiones estudiadas.
La literatura señala que el diagnóstico antemortem de la habronemiasis equina es
difícil debido a que los huevos y larvas que se eliminan no son fáciles de encontrar en
las heces por tanto se necesita de técnicas tales como: lavado gástrico con HCO3Na
al 2% a través de sonda, vía esofágica o biopsia de masas tumorales post mortem
(Erdogan y col., 1973; Macruz y col., 1973; Krecek y col., 1987; Cordero del Campillo y
Rojo, 1999), sin embargo en el presente trabajo y en estudios anteriores se reporta la
presencia de Habronema spp. en esta región del país (Romero, 2007; Prada, 2008).
En cuanto a los promedios de eliminación de hpg de materia fecal de los
municipios, el predio ubicado respectivamente en los municipios de Paz de Ariporo y El
Yopal, no presentaron diferencias estadísticamente significativas entre sí,
encontrándose 1.271 y 734 hpg de materia fecal respectivamente, relación que
ocurrió igualmente para los predios de los municipios de Aguazul y Maní donde no se
encontraron diferencias estadísticas en la eliminación de hpg de materia fecal con 234
hpg y 110 hpg respectivamente, pero si se encontraron diferencias estadísticas entre
los predios de Paz de Ariporo y El Yopal con los predios de Aguazul y Maní. Lo anterior
puede ser explicado por las diferencias en las temperaturas de los sitios muestreados,
mientras que Paz de Ariporo y El Yopal presentaron unas temperaturas promedios de
24,5ºC y 25,2ºC respectivamente, durante los días de muestreo, Aguazul y Maní
presentaron temperaturas promedios de 26ºC y 26.6ºC (Ideam, 2008), al respecto
Castro y Duran (2006) sugieren que cuando la temperatura aumenta, la eliminación de
hpg disminuye, esto como mecanismo de defensa de los parásitos, los que disminuyen
la eliminación de huevos al medio ambiente bajo temperaturas altas para evitar la
desecación de los mismos y su muerte garantizando la supervivencia de la mayor
59
cantidad de huevos que sea posible para que de esta forma una gran población de
esos huevos pueda continuar su ciclo biológico, en épocas con condiciones
medioambientales mas favorables.
TÉCNICA DE COPROCULTIVO.
Fue posible diferenciar, identificar y caracterizar larvas L3 de nemátodos
gastrointestinales del equino utilizando la técnica de coprocultivo mediante las
características morfológicas descritas por Burger y Stoye (1968) y Johnstone (1998) y
veintiún días después de la siembra el total de larvas observadas eran larvas en
estadío L3, obteniendo que el 98,15% correspondían a larvas L3 de Pequeños
strongylus, el 1.275% a Strongylus vulgaris, el 0.375% a Strongylus edentatus y el
0.1% a Strongylus equinus, coincidiendo con lo reportado por (Johnstone, 1998; Prada
2002).
La mayor eliminación de larvas L3 fue de Pequeños strongylus, hallazgos que
coinciden con los de Prada (2003), Romero (2007), Prada, (2008), quienes reportan
porcentajes superiores al 80% de L3 de Pequeños strongylus obtenidas por
coprocultivo de materia fecal de equinos; no se encontraron diferencias
estadísticamente significativas en el promedio de larvas L3 de los predios en estudio,
los rangos de eliminación fueron estadísticamente similares para los cuatro
municipios, encontrándose entre el 96.6% y el 98.9%.
Es necesario mencionar que aunque se reportaron huevos de Anoplocephala
spp. mediante la técnica de coprocultivo no es posible identificar los estados
infectantes de éstos parásitos ya que requieren de un hospedador intermedio como el
ácaro oribatidae para desarrollarse (Fogarty y col., 1994; Lyons y col., 2004; Kania y
Craig, 2005; Traversa y col., 2008; Trotz y col., 2008).
60
TEST DE REDUCCIÓN DE LA OVIPOSCIÓN (FECRT)
Según la metodología propuesta por Coles y col. (1992), Young y col. (1999),
para el Test de reducción de la oviposición, un porcentaje ≥ al 95% indican que la
población de parásitos es susceptible a la acción antihelmíntica del producto evaluado,
la anterior afirmación refleja que, en los cuatro predios al obtener un porcentaje de
reducción de la oviposición del 100%, existen nemátodos gastrointestinales altamente
susceptibles al antiparasitario que no sobrevivieron a la dosis administrada y que por
tanto no lograron oviponer después del tratamiento farmacológico.
Los resultados de los coprocultivos realizados post tratamiento con Ivermectina
confirman la acción del antiparasitario sobre los nemátodos gastrointestinales, puesto
que no se encontraron larvas L3 en los cultivos de materia fecal realizados, no
encontrándose resistencia antihelmíntica en los parásitos gastrointestinales de los
equinos en los cuatro predios evaluados, resultados que concuerdan con los
reportados por Romero (2007), Prada (2008), que a pesar de utilizar una prueba
diferente para la detección de resistencia antihelmíntica (Prueba in vitro - LDA),
encontrándose que en esta región del país los Pequeños strongylus de los equinos son
altamente susceptibles a la acción de la Ivermectina. (Ya que el 98.15% de las larvas
aisladas correspondieron a este tipo de parásito)
Ante tal situación cabe mencionar que este tipo de hallazgo en la actualidad es
poco frecuente puesto que la resistencia a las Lactonas Macrocíclicas y dentro de ellas
a la Ivermectina está ampliamente reportada para los Pequeños strongylus de los
equinos en muchas regiones del mundo (Larsen y col., 1996; Kharchenko y col., 1996;
Paulrt y col., 1997; Craven y col., 1999; Probst, 1999, Ralston, 2000; Sangester,
1999; Young y col., 1999; Linchtenfels y col., 2001; Pérez y col., 2001; Vitaliy y col.,
2001; Prada, 2002; FAO, 2003). Por lo que estos resultados constituyen un hallazgo
61
atípico dado el creciente auge del fenómeno de resistencia en los animales
domésticos.
TEST DE REDUCCIÓN DE LA OVIPOSICIÓN (FECRT) Vs. ANÁLISIS DEL DESARROLLO
LARVAL (LDA).
El método in vivo más común de detección de resistencia antihelmíntica es el
FECRT e in vitro el más frecuente es el LDA (Ihler and Bjorn, 1996; Craven et al., 1999;
Young et al., 1999), sin embargo los resultados encontrados en uno y en otro tienden
a variar, Craven y col (1999) compararon los resultados entre el Test de reducción de
la oviposición (FECRT), Eclosión de huevos (EHA) y el Análisis del Desarrollo Larval
(LDA), para detectar resistencia a los Benzimidazoles y al Pyrantel en strongylus de los
equinos, encontrando que, el 79% de las granjas fueron positivas a resistencia
antihelmíntica con el FECRT, el 62% con EHA y con el LDA el 37.5%, concluyendo que
la correlación entre los test es pobre y que no es posible usar el resultado de uno para
predecir el resultado del otro. En el presente estudio aunque se encontró una
diferencia estadísticamente significativa entre el FECRT y el LDA en cuanto a la
mortalidad de larvas L3 post tratamiento con Ivermectina, siendo más efectivo el
método del FECRT que el LDA, el criterio de decisión no cambia, puesto que con las
dos técnicas no se encontró resistencia antihelmíntica por parte de los Pequeños
strongylus en los equinos de los predios en estudio.
Varios autores recomiendan realizar una prueba in vivo y una prueba in vitro
para comparar y confirmar la presencia o la ausencia de resistencia antihelmíntica
frente a un antiparasitario (Coles et al., 1988; Giordano et al., 1988; Lacey et al.,
1990; Taylor, 1990; Hubert y Kerboeuf, 1992) y no dejar como resultados fijos una
sola prueba de detección de resistencia.
62
7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
• Mediante la técnica de MacMaster, se identificaron huevos de tipo Strongylido
spp, Triodonthoforus spp, Habronema spp y Anoplocephala spp. Y no se
observaron huevos de tipo Parascaris equorum, strongyloides spp, y Oxyuris
equi.
• Se identificaron mediante coprocultivo los géneros de parásitos Pequeños
strongylus con 98.15%, Strongylus vulgaris con el 1,275%, Strongylus
edentatus con el 0.375% y Strongylus equinus con el 0.1%, en los predios de
los 4 municipios en estudio.
• Puesto que la mayor proporción de larvas L3 encontradas correspondió a
Pequeños strongylus, se puede decir que el Test de reducción de la oviposición
permitió detectar poblaciones de Pequeños strongylus altamente sensibles a la
acción de la Ivermectina, hallazgo poco frecuente en la actualidad donde los
reportes sobre la presencia de resistencia antihelmíntica de este grupo de
parásitos es frecuente.
• Antes de introducir un antihelmíntico a una población de equinos, es necesario
identificar cuales géneros de parásitos están presentes y de esta manera
seleccionar el producto indicado que controle y elimine la mayor cantidad de
parásitos posible.
• Las pruebas para detectar resistencia antihelmíntica deben constituir una
herramienta de trabajo del médico veterinario para estimar y detectar
resistencia antihelmíntica, por lo que el desarrollo de una prueba in vivo como
el Test de Reducción de la oviposición puede implementarse como prueba
63
rutinaria para evaluar la función y alertar la disminución en la eficiencia de un
producto antiparasitario.
64
8. BIBLIOGRAFÍA
ALVAREZ, M.A., J. PEREZ., F.A, ROJO. 2002. Resistencia a los antihelmínticos en rumiantes, métodos de diagnóstico y situación en España. Departamento de Sanidad Animal, Universidad de León.
ANDERSON, R.C., 2000. The superfamily Habronematoidea. In: Anderson, R.C. (Ed.), Nematode Parasites of Vertebrates. Their Development and Transmission. CABI Publishing, Guilford, UK, pp. 428–430.
ANTONELLI, A.I. 2004. Resistencia a de los endoparásitos a la Ivermectina. Monografía. Universidad Nacional del Litoral - Argentina. http://www.zoovet.com.ar/monografias/
ANZIANI O.S., V, SUAREZ., A.A, GUGLIELMONE., O, WANKER., H, GRANDE., G, COLES. 2004. Resistance to benzimidazole and avermectin anthelmintics in cattle nematodes in Argentina. Veterinary Parasitology. Vol 122: 303-306.
BARGER, I.A. 1999. The role of epidemiological knowledge and grazing management for helminth control in small ruminants. International Journal for Parasitology. 29: 41-47.
BARONI, E., G. SIEVERS. 1997. Cestodosis del equino y las posibilidades de su control. Parasitología al día. Vol. 21: 40-41. BUCKNELL D.G., R.B, GASSER., I, BEVERIDGE. 1995. The prevalence and epidemiology
of gastrointestinal parasites of horses in Victoria, Australia. Int J Parasitol;25:711–24.
BURGER, H. J., M. STOYE. 1968. Parasitologische Diagnostik (Teil II). Institut fur Parasitologie der Tierarztlichen Hochschule Hannover.
CASTELLS, D., A. NARI, Y J. SALLES. 2001. Evaluación del sistema de pastoreo y la parasitosis: comparación de tiempos de descanso prolongados y tiempos de pastoreo cortos. Informe de Avance. Agosto 2001. Secretariado Uruguayo de la Lana (SUL). Montevideo. 12p.
CASTRO, D, M. G. DURAN. 2006. Determinación de curvas de eliminación de huevos de Parásitos gastrointestinales a lo largo de 6 meses en equinos de la sabana de Bogotá. (Tesis Universidad de La Salle) COLAHAN, P., G. MAYHEW, M. MERRIT, N. MOORE. 1998. Medicina y Cirugía Equina. 4ª ed., Editorial Intermédica, Buenos Aires. COLES, G.C., J.P. Tritschler., D.J. Giordano., N.J, Laste., A.L, Schmidt. 1988. Larval
development test for detection of anthelmintic resistant nematodes. Res. Vet. Sci. 45, 50–53.
COLES, G.C., C. BAUER, F.H.M. BORGSTEEDE, S. GEERTS, T.R. KLEI, M.A. TAYLOR, P.J. WALLER. 1992. World Association for the Advancement of Veterinary Parasitology (W.A.A.V.P) methods for the detection of anthelmintic resistance in nematodes of veterinary importance. Vet. Parasitol. 44: 35-44.
COLES, G.C. 2005. Anthelmintic resistance – looking to the future: a UK perspective. Veterinary Science. 78: 99–108.
65
COLES, G.C., F. JACKSON., W.E. POMROY., R.K. PRICHARD., W.E. SAMSON-HIMMELSTJERNA., A. SILVESTRE., M.A. TAYLOR., J. VERCRUYSSE. 2006. The detection of resistance in nematodes of veterinary important. Veterinary Parasitology. 136: 167-185.
CORDERO DEL CAMPILLO, M., F.A. ROJO, 1999. Parasitología Veterinaria. 1ª ed., McGraw-Hill. Interamericana. México.
CORWIN, R.M., J. NAHM. 1997. Small Strongyles. University of Missouri College of Veterinary Medicine,http: // us. merial. Com / pdf / page _ pdf / Anthelmintic _ Resistance _ in _ the _ Equine. Pdf.
CHAPMAN, M.R., M.T. KEARNEY, T.R. KLEI. 1999. An experimental evaluation of methods used to enumerate mucosal cyathostome larvae in ponies. 1999. Vet. Parasitol. 86: 191-202.
CHAPMAN, M.R., M.T. KEARNEY, T.R. KLEI. 1999. An experimental evaluation of Methods used to enumerate mucosal cyathostome larvae in ponies. 1999. Vet. Parasitol. 86: 191-202. CRISTEL, S.L., V.H. SUARÉZ., 2006. Resistencia antihelmíntica: evaluación de la prueba
de reducción del conteo de huevos. RIA, 35 (3): 29-43. Diciembre 2006. INTA, Argentina. Pdf.
CRAVEN J, H BJORN, EH BARNES, SA HENRIKSEN, P NANSEN. 1999. A comparison of in vitro tests and a faecal egg count reduction test in detecting anthelmintic resistance in horse strongyles. Vet Parasitol 85, 49-59.
DENT, J. A., DAVIS, M. W., AVERY, L., 2000. The genetics of ivermectina resistance in Caenorhabditis elegans. Proc. Nat. Acad. Sci., USA, 97, 2674-2679. ECHEVERRIA, F.A.M., J. ARMOUR, M.F. BORBA, J.L DUNCAN. 1992. Response to
ivermectin treatmen of parasitic stages of Haemonchus contortus resistant or susceptible to ivermectin. J. Parasitol. 78: 894-898.
EDDI C. 1996. Caracostantogolo J., Schapiro J., Marangunich L., Waller P.J. & Hansen J.W..The prevalence of anthelmintic resistance in nematode parasites of sheep in Southern Latin America: Argentina. Veterinary Parasitology 62, 189-197.
ERDOGAN E., M, PAMUKCU., F, TANZER. 1973. Infectious, non-infectious and neoplastic diseases of horses in Ankara in the period 1961–1972. Ankara Univ Vet Fak Der; 20:625–34.
FIEL, C.A., P.E., STEFFAN., D.A. FERREYRA. 1998. Manual para el diagnóstico de nematodes en bovinos. Técnicas de frecuente utilización en la práctica veterinaria: su interpretación. Ed: Bayer Argentina S.A. División animal: 1-61.
FAO. 2003. Resistencia a los antiparasitarios. Estado actual con énfasis en América Latina. Boletín 157. Roma.
FOGARTY, U., F. PIERO., R.E. PURNEL., K.R. MOSURSKI. 1994. Incidence of anoplocephala perfoliata in horses examined at on Iris abattoir. The Vet Record. Vol 134. No. 20: 515-518.
GACHARNA, N. G., M. OSPINA. 1975. Efectividad antihelmíntica del haloxan en equinos. Universidad Nacional de Colombia. Tesis.
66
GASTHUYS, F.M.R., M, HEERDEN., J, VERCRUYSSE., 2004. Conjuntival habronemiosis in a horse in Belgium. Vet. Rec. 154, 757–758.
GEARY, J.L., SANGSTER, N.C., THOMPSON, D.P., 1999. Frontiers in anthelmintic pharmacology. Vet. Parasitol, 84: 275-295. GIORDANO, D.J., J.P,TRITSCHLER., G.C. COLES. 1988. Selection of ivermectin resistant
Trichostrongylus colubriformis in lambs . J. Vet. Pharmacol. Therap. 30, 139–148.
GREER, G.J., T.R. BELLO.,G.F. AMBORSKI. 1974. Experimental infection of strongyloides westeri in parasite free ponies. The Journal of parasitology. Vol 60. No. 03: 466-472.
HARDMAN, J.G., L.E. LIMBIRD. 2001. The Pharmacological Basis of Therapeutics. 10ª ed. International Edition. Iowa.
HUBERT, J., D. Kerboeuf. 1992. A microlarval development assay for the detection of anthelmintic resistance in sheep nematodes. Vet. Rec. 130, 442–446.
IHLER, C.F., H, BJORN. 1996. Use of two in vitro methods for the detection of benzimidazole resistance in equine small strongyle (Cyathostoma spp.). Vet. Parasitol. 65, 117–125.
JACKSON, F., R.L. COOP. 2000. The development of anthelmintic resistance in sheep nematodes. Cambridge University Press. Parasitol. 120: S95-S107.
JOHNSTONE, C. 1998. Parasites and parasitic diseases of domestic animals. University of Pennsylvania. http://cal.nbc.upenn.edu/merial/.
JUB, K.V.F., P.C. KENNEDY, N. PALMER. 1985. Pathology of Domestic Animals. Vol. 1. 4ª Ed. Academic Press. San Diego.
KAPLAN R.M. 2002. Anthelmintic resistance in nematodes of horses. Veterinary Research. 33: 491-507.
KANIA, S., R. CRAIG. 2005. Anoplocephala perfoliata coproantigen detection: a preliminary study. Veterinary Parasitology. Vol. 127: 115-119.
KHARCHENKO, V.A., G.M. DVOJNOS, R.C. KRECEK, J.R. LICHTENFELS. 1996. A redescription of Cylicocyclus triramosus (Nematoda: Strongyloidea): a parasite of the zebra, Equus burchelli antiquorum. J. Parasitol. 83: 922-926.
KLEI, R.T., M.R. CHAPMAN. 1999. Inmunity in equine cyathostome infections. Vet Parasitol. 85: 123-136. KLEI, R.T., D.D. FRENCH. 1998. Small Strongyles: an emerging parasite problem for horses. Equine Practice. 20: 26-30. KRECEK R.C., F.S, MALAS., R.K, REINECKE., DE VOS V. 1987. Nematode parasites from
Burchell’s zebras in South Africa. J Wildl Dis;23:404–11. KULKARNI S., S.K.V, SARAGHI., M.S, JAGANNATH., R.N.S, GOWDA., S.J, SESHADRI.
1989. A report on the complication of gastric habronemosis in horses. Curr Res Univ Agric Sci;18:130–1.
LACEY, E., J.M REDWIN., J.H, GILL., V.M, DEMARGHERITI., P.J, WALLER., 1990. A larval development assay for the simultaneous detection of broad spectrum anthelmintic resistance. In: Boray, J.C., P.J, Martin., T.R. Roush. (Eds.), Resistance of Parasites to Antiparasitic Drugs, MSD Agvet, Rahway, NJ, pp. 177–184.
67
LARSEN, M., P. NANSEN, C. GRONDAHL, S.M. THAMSBORG, J. GRONVOLD, J. WOLSTRUP, S.A. HENRIKSEN, J. MONRAD. 1996. The capacity of the fungus Duddingtonia flagrans to prevent Strongyle infections in foals on pasture. The journal parasitology of Cambridge. 113: 1-6.
LICHTENFELS, J.R., A. McDONNEL, S. LOVE, J.B. MATTHEWS. 2001. Nematodes of the Tribe Cyathostominea (Strongylidae) collected from Horses in Scotland. Comp. Parasitol. 68: 265-269.
LICHTENFELS, J.R., P.A. PILITT, V.A. KHARCHENKO, G.M. DVOJNOS. 1999. Differentiation of Coronocyclus sagittatus and Coronocyclus coronatus (Nematoda: Cyathostominea) of Horses. J. Helminthol. Soc. Wash. 66: 56-66. LICHTENFELS, J.R., V.A. KHARCHENKO, R.C. KRECEK, L.M. GIBBONS. 1998. An
annotated checklist, by genus and species, of 93 species level names for 51 recognized species of small strongyles (Nematoda: Strongyloidea: Cyathostominea) of horses, asses and zebras of the world. Vet Parasitol. 79: 65-79.
LICHTENFELS, J.R., V.A. KHARCHENKO, C. SOMMER, M. ITO. 1997. Key characters for the Microscopical Identification of Cylicocyclus nassatus and Cylicocyclus ashworthi (Nematoda: Cyathostominae) of the Horse, Equus caballus. J. Helminthol. Soc. Wash. 64: 120-127.
LICHTENFELS, J.R. 1975. Helminths of Domestic Equids. The Helminthological Society of Washington. Vol. 42.
LOMBARDERO, O. 1990. 60 Ciclos Biológicos de Interés Veterinario. 1ª ed., Editorial Hemisferio Sur S.A.
LUDWIG KG, TM, CRAIG., J.M. BOWEN., M.M. ANSARI., W.B. LEY. 1983. Efficacy of Ivermectin in controlling strongylides westeri infection in foals. Am J. Vet. Res. Vol 4 No. 2: 314-316.
LYONS, E.T., S.C. TOLLIVER, J.H. DRUDGE. 1999. Historical perspective of cyathostomes: prevalence, treatment and control programs. Vet. Parasitol.. 85: 97-112.
LYONS, E.T., S.H. DRUDGE., S.C. TOLLIVER. 1973. On the life cycle of strongyloides westeri in the equine. The Journal of parasitology. Vol 59. No. 5: 780-787.
LLORENS Y.G., J.D. PONCE., A. VÁZQUEZ., FLORES., YV, PEGUERO., E.M. LÓPEZ Y S.G. NOYA. 2004. Principales causas que propician la aparición de resistencia antihelmíntica en unidades de explotación bovina. REDVET. Vol. VI, Nº 4.
MACALLISTER, C., D.W. FREEMAN. 2007. Controlando los parásitos internos comunes del caballo. http://www.engormix.com/s_articles_view.asp?art=330
MACRUZ R., W, GIORNI., M, SANTOS. 1973. Gastric habronemiasis in the horse. Bacteriological examination of the nodules. Atualidades Veterinarias Brasil; 2:54.
MARQUÉZ, D. 2007. Resistencia a los antihelmínticos en nematodos de rumiantes y estrategias para su control. CORPOICA. Pág. 166.
MARQUÉZ, D. L. 2003. Resistencia a los antihelmínticos: origen, desarrollo y control. Programa Nacional de Salud Animal. REV CORPOICA. VOL 4. N°1
68
MARTIN, P. J., LF, LE JAMBRE. (1979). Larval paralysis as an vitro assay of levamisole and morantel tartrate resistance in Ostertagia. Vet. Science Communications (3): 159-164.
MARTIN, R.J., A.P. ROBERTSON. 2000. electrophysiological investigation of anthelmintic resistance. The Journal Parasitology of Cambridge. 120: 87-94-
MERIAL, Laboratorio. 2006. Enfermedades parasitarias. El parasistismo en el caballo. http://uy.merial.com/equine/disease_info.asp
MONAHAN, C. 2002. Anthelmintic control strategies for horses. International Veterinary Information Service (www.ivis.org), Ithaca, New York, USA.
MONTEIRO, S.G. 2005. Ovos e oocistos equinos. Parasitología Veterinaria. Universidad Federal de Santa Maria. http//:w3.usfm.br/parasitologia.jtm. NARI, A., J. HANSEN., C. HEDÍ., F. ECHEVARRIA., E. MACIEL., C. CARACOSTANGOLO., J.
SALLES y CH. CUTULLE. 2000. Protocolo de trabajo para la evaluación a campo de cepas potencialmente resistentes a los antihelmínticos. Prueba de reducción del recuento de huevos en materia fecal (FECRT).www.inia.gov.ar/producto/helminto/ protdiag.htm. 4 pp.
NICHOLAS, C.S., S.C. BANNAN, A.S. WEISS, S.C. NULF, R.D. KLEIN, T.G. GEARY. 1999. Haemonchus contortus: sequence heterogeneity of internucleotide binding domains from PGlycoproteins and an association with Avermectin / Milbemycin Resistance. Exp. Parasitol. 91: 250-257. PAIVA, F., M.O. SATO, A.H. ACUÑA, J.R. JENSEN, M.C.R.V. BRESSAN. 2001. Resistencia
a Ivermectina constatada en Haemonchus placei y Cooperia punctata en bovinos. Hora Veterinaria. 120: 29-34.
PAULRUT, C.O., R.E. PEDERSEN, M. EYDEL. 1997. Field efficacy of ivermectin (Ivomec) injection on faecal strongyle egg output of Icelandic horses. Icel. Agr. Sci. 11: 131-139.
PEREZ, R., I. CABEZAS, J.F. SUTRA, P. GALTIER, M. ALVINERIE. 2001. Faecal excretion profile of Moxidectin and Ivermectin after oral administration in horses. The veterinary journal. 161: 85-92.
PRESIDENT, P.J.A. 1985. Methods for detection of resistance to anthelmintics. In: resistance in nematodes to anthelmintic drugs. Ed: Anderson, N. and Waller, P.J. CSIRO Division Animal Health: 13-27.
PRICHARD, R.K. 1994. Anthelmintic resistance, Veterinary Parasitology 54, 259–268. POOK, J.F., M.L. POOK., N.C. POWER., J.L. SANGSTER., D.R. HODGSON. 2002.
Evaluation of tests for anthelmintic resistance in cyathostomes. Veterinary Parasitology. 106: 331–343.
PRADA, G.A. 2004. Parasitismo en equinos. Revista Consensus. Publicación Novartis de Colombia. Vol. 18.
PRADA, G.A. 2003. Mecanismo de acción de las Lactonas Macrociclicas en nemátodos del equino. Revista de medicina veterinaria – Universidad de La Salle. Vol. 6.
PRADA, G.A. 2002. Determinación de resistencia antihelmíntica de nemátodos gastrointestinales del equino frente a Lactonas Macrociclícas. Tesis, MSc. Universidad Austral de Chile, Facultad de Ciencias Veterinarias, Valdiavia, Chile.
69
PROBST, S. 1999. Controlling Parasites in Foals and Horses. University of Illinois College of Veterinary Medicine. Vet. Med. Basic Sciences. Bldg.
PUSTERLA, N., J.L, WATSON., W.D, WILSON., V.K, AFFOLTER., S.J, SPIER., 2003. Cutaneous and ocular habronemiasis in horses: 63 cases (1988–2002). J. Am. Vet. Med. Assoc. 222, 978–982.
RALSTON, S.L. 2000. Anthelmintic resistance in the equine. Merial Veterinary Bulletin. TSB-0-00014: 1-5. http: // us. merial. Com / pdf / page _ pdf / Anthelmintic _ Resistance _ in _ the _ Equine. Pdf
RICCI M., A, SABATINI. 1992. Notizie sugli elminti parassiti del cieco e del colon degli equidi in Italia. Parassitologia. 34:53–60.
ROBERTS, F., P. J. O. SULLIVAN. 1950. Methods for eggs counts and larval cultives for strongylus infesting the gastrointestinal tract of cattle. J. Agr. Res. 1; 99 – 102.
ROMERO, C.S. 2007. Determinación de géneros de endoparásitos que afectan a los equinos de las sabanas del Casanare y grados de susceptibilidad que presentan éstos a las Lactonas Macrocíclicas mediante el Test análisis del desarrollo de larvas (LDA). Universidad de la Salle. Tesis.
ROMERO J., C, BOERO., R, VAZQUEZ ., M.T, ARISTIZABAL., A, BALDO . 1998. Estudio de resistencia a antihelmínticos en majadas de la mesopotamia argentina. Revista de Medicina Veterinaria (Bs.As.) 79, 342-346.
ROMMEL, M., J. ECKERT, E. KUTZER, W. KORTIN, T. SCHNIEDER. 2000. Veterinarmedizinische Parasitologie. Begrundet von Josef Boch und Rodolf Supperer. 5. Auflage. Parey Buchverlag, Berlin.
SANGSTER NC. 1999. Pharmacology of anthelmintic resistance in cyathostomes: will it occur whith the avermectin/milbemycins? Vet Parasitol 85, 189-204.
SANGSTER, N. 1999. Anthelmintic resistance: past, present and future. Int. J. Parasitol. 29: 115-124.
SCHMIDT, U. 1971. Parasitologische Kotuntersuchung durch ein neues Verdunnungs verfahren. Tieräztl. Umsch. 26: 229 – 230.
SIEVERS, P., G. VALENZUELA. 1998. Parasitología General. Universidad Austral de Chile, Facultad de Ciencias Veterinarias, Instituto de Patología Animal, Valdivia, Chile.
SIEVERS G., A. ALOCILLA. 2007. Determinación de resistencia antihelmíntica frente a ivermectina de nemátodos del bovino en dos predios del sur de Chile. Arch. Med. Vet. 39, Nº 1.
SMITH, G.; GRENFELL, B.T.; ISHAM, V. & CORNELL, S. 1999. Anthelmintic resistance revisited: under-dosing, chemoprophylactic strategies, and mating probabilites. International Journal for Parasitology 29: 77-91.
SOLIS, J.P. 2004. Parásitos internos importancia en la salud equina. http://www.rodeocriollo.cl/veterinaria/antiparasitario.html
SOULSBY, E.J. 1987. Parasitología y Enfermedades Parasitarias de los Animales Domésticos. 7 Edición. México. SUMANO, H.S., L. OCAMPO. 2006. Farmacología veterinaira. Antiparasitarios. 3ª
edición. McGRawHill.Parte VI. Pág. 451-524.
70
71
TIERI E., A, GIANGASPERO., A, GATTI., C, ALLEGRETTO. 1998. L’abronemosi degli equini. O DV;5:7–17.
THOMAS, V.G. Y P.G. KEVAN. 1993. Basic Principles of Agroecology and Sustainable Agriculture. Journal of Agriculture and Environmental Ethics 6(1): 1-19.
TAYLOR, M.A. 1990. A larval development test for the detection of anthelmintic resistance in nematodes of sheep. Res. Vet. Sci. 49, 198–202.
TAYLOR, M., K, Hunt,. K, Goodyear, 2002. Anthelmintic resistance detection methods. Veterinary Parasitology. Vol. 103. p. 183- 194.
TRAVERSA, D., G. FICHI., M. CAMPLIGLI., A. RONDOLOTTI., R. LORIO., C. PROUDMAN., D. PELLEGRINE., S. PERRUCCI. 2008. A comparation of coprological, serological and molecular methods for dyagnosis of horses with anoplocephala perfoliata (Cestoda, cyclophillidea). Veterinary Parasitology. Vol 152: 271-277.
TORRES, J.F., S. MARBEL., V. ALVAREZ., F.R. ARÉVALO., I.S. GUTIERREZ., M.A. DIAZ. 2003. Diagnóstico de nemátodos gastrointestinales resistentes a bencimidazoles e imidazotiazoles en un rebaño caprino de Yucatán, México. Rev Biomed 2003; 14:75-81. Pdf.
TROTZ, W., P SHEARD., H. MACFARLANCE., D. PEARL., S. WAYNS., A. PEREGRINE. 2008. Occurrence of anoplocephala perfoliata infection in horses in Ontario, Canada and associations with colic and management practices. Veterinary Parasitology. Vol 153: 73-84.
UGUR, A., USLU, U., F. GUCLU. 2007. Prevalence of endoparasites in horses and donkeys in Turkey. Bull Vet inst pulowy. Vol. 51: 237-240.
VALENTINE, B.A., 2005. Equine cutaneous non-neoplastic nodular and proliferative lesions in the Pacific Northwest. Vet. Dermatol. 16, 425–428.
VARADY M., J. CORBA. 1999. Comparison on six in vitro tests in determining benzimidazole and levamisole resistance in Haemonchus contortus and Ostertagia circumcicta of sheep. Vet Parasitol; 80: 239- 249.
VITALIY, A., KHARCHENKO, J.R. LICHTENFELS, R.C. KRECEK. 2001. Cyathostomun montgomeryi and its place in the Cyathostominae (Nematoda: Strongylidae). Comp. Parasitol. 68: 97-102.
www.aguazul.gov.co / características del municipio de Aguazul. www.casanare.gov.co / municipios de El Yopal, Maní y Paz de Ariporo, Departamento
del Casanare. www.casanare.gov.co/esp/casanare_hoy/cas_historia.htm www.Ideam.com YOUNG, K.E., V. GARZA., K. SNOWDEN., R.J. DOBSON., D. POWELL., T.M. CRAIG. 1999.
Parasite diversity and antihelmintic resistance in two herds of horses. Vet. Parasitol. 85: 205 – 214.
9. ANEXOS.
9.1 ANEXO 1. Estadística
Sistema SAS 9.1
TECNICA DE MacMaster.
Obs Muestra Municipio huevos log huevos 1 1 1 230 2.36173 2 2 1 581 2.76418 3 3 1 351 2.54531 4 4 1 176 2.24551 5 5 1 135 2.13033 6 6 1 418 2.62118 7 7 1 27 1.43136 8 8 1 189 2.27646 9 9 1 108 2.03342 10 10 1 122 2.08636 11 1 2 918 2.96284 12 2 2 770 2.88649 13 3 2 1256 3.09899 14 4 2 338 2.52892 15 5 2 1134 3.05461 16 6 2 284 2.45332 17 7 2 999 2.99957 18 8 2 351 2.54531 19 9 2 365 2.56229 20 10 2 918 2.96284 21 1 3 54 1.73239 22 2 3 135 2.13033 23 3 3 108 2.03342 24 4 3 68 1.83251 25 5 3 68 1.83251 26 6 3 95 1.97772 27 7 3 162 2.20952 28 8 3 108 2.03342 29 9 3 122 2.08636 30 10 3 176 2.24551 31 1 4 675 2.82930 32 2 4 986 2.99388 33 3 4 959 2.98182 34 4 4 2673 3.42700 35 5 4 3847 3.58512 36 6 4 446 2.64933 37 7 4 702 2.84634 38 8 4 1526 3.18355 39 9 4 189 2.27646 40 10 4 702 2.84634
Procedimiento MEANS Analysis Variable : lhuevos lhuevos Número de Desviación observaciones Media estándar Mínimo Máximo 40 2.5070968 0.4918467 1.4313638 3.5851222
72
‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ Municipio=1 ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ Procedimiento MEANS Analysis Variable : lhuevos lhuevos Número de Desviación observaciones Media estándar Mínimo Máximo 10 2.2495843 0.3742735 1.4313638 2.7641761 ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ Municipio=2 ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ Analysis Variable : lhuevos lhuevos Número de Desviación observaciones Media estándar Mínimo Máximo 10 2.8055179 0.2515084 2.4533183 3.0989896 ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ Municipio=3 ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ Analysis Variable : lhuevos lhuevos Número de Desviación observaciones Media estándar Mínimo Máximo 10 2.0113704 0.1692386 1.7323938 2.2455127 ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ Municipio=4 ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ Analysis Variable : lhuevos lhuevos Número de Desviación observaciones Media estándar Mínimo Máximo 10 2.9619146 0.3752165 2.2764618 3.5851222
Procedimiento GLM Información de nivel de clase Clase Niveles Valores Municipio 4 1 2 3 4
Número de observaciones leídas 40
Número de observaciones usadas 40
73
Variable dependiente: lhuevos lhuevos Suma de Cuadrado de Fuente DF cuadrados la media F‐Valor Pr > F Modelo 3 6.07971744 2.02657248 21.75 <.0001 Error 36 3.35489573 0.09319155 Total correcto 39 9.43461317 R‐cuadrado Coef Var Raiz MSE lhuevos Media 0.644406 12.17635 0.305273 2.507097 Cuadrado de Fuente DF Tipo I SS la media F‐Valor Pr > F Municipio 3 6.07971744 2.02657248 21.75 <.0001 Cuadrado de Fuente DF Tipo III SS la media F‐Valor Pr > F Municipio 3 6.07971744 2.02657248 21.75 <.0001 Observación Observado Predichos Residual 1 2.36172784 2.24958430 0.11214354 2 2.76417613 2.24958430 0.51459184 3 2.54530712 2.24958430 0.29572282 4 2.24551267 2.24958430 ‐0.00407163 5 2.13033377 2.24958430 ‐0.11925053 6 2.62117628 2.24958430 0.37159199 7 1.43136376 2.24958430 ‐0.81822053 8 2.27646180 2.24958430 0.02687751 9 2.03342376 2.24958430 ‐0.21616054 10 2.08635983 2.24958430 ‐0.16322447 11 2.96284268 2.80551793 0.15732475 12 2.88649073 2.80551793 0.08097280 13 3.09898964 2.80551793 0.29347171 14 2.52891670 2.80551793 ‐0.27660123 15 3.05461305 2.80551793 0.24909513 16 2.45331834 2.80551793 ‐0.35219959 17 2.99956549 2.80551793 0.19404756 18 2.54530712 2.80551793 ‐0.26021081 19 2.56229286 2.80551793 ‐0.24322506 20 2.96284268 2.80551793 0.15732475 21 1.73239376 2.01137040 ‐0.27897664 22 2.13033377 2.01137040 0.11896337 23 2.03342376 2.01137040 0.02205336 24 1.83250891 2.01137040 ‐0.17886149 25 1.83250891 2.01137040 ‐0.17886149 26 1.97772361 2.01137040 ‐0.03364679 27 2.20951501 2.01137040 0.19814462 28 2.03342376 2.01137040 0.02205336 29 2.08635983 2.01137040 0.07498943 30 2.24551267 2.01137040 0.23414227
74
31 2.82930377 2.96191459 ‐0.13261081 32 2.99387691 2.96191459 0.03196233 33 2.98181861 2.96191459 0.01990402 34 3.42699896 2.96191459 0.46508437 35 3.58512219 2.96191459 0.62320760 36 2.64933486 2.96191459 ‐0.31257973 37 2.84633711 2.96191459 ‐0.11557747 38 3.18355453 2.96191459 0.22163995 39 2.27646180 2.96191459 ‐0.68545278 40 2.84633711 2.96191459 ‐0.11557747 Suma de residuales ‐0.00000000 Suma de residuales cuadrados 3.35489573 Suma de residuales cuadrados ‐ SS de error 0.00000000 Autocorrelación de primer orden ‐0.13965335 Durbin‐Watson D 2.27157641
Test para normalidad Test ‐‐Estadístico‐‐ ‐‐‐‐‐P‐valor‐‐‐‐‐‐ Shapiro‐Wilk #11 X 0.974557 Pr < W 0.4952 Kolmogorov‐Smirnov D 0.077053 Pr > D >0.1500 Cramer‐von Mises W‐Sq 0.035204 Pr > W‐Sq >0.2500 Anderson‐Darling A‐Sq 0.29838 Pr > A‐Sq >0.2500
Test de Levene para homogeneidad de la varianza lhuevos ANOVA de las desviaciones cuadradas de las medias de grupo Cuadrado Suma de de la Fuente DF cuadrados media F‐Valor Pr > F Municipio 3 0.0772 0.0257 1.37 0.2681 Error 36 0.6769 0.0188 Sistema
Media del Error Experimental Variable: rlhuevos Momentos N 40 Pesos de la suma 40 Media 0 Observaciones de la suma 0 Desviación típica 0.29329672 Varianza 0.08602297 Asimetría ‐0.4326796 Kurtosis 0.93971986 Suma de cuadrados no corregidos 3.35489573 Suma de cuadrados corregidos 3.35489573 Coeficiente de variación . Media de error estándar 0.04637428 Prueba del rango estudentizado de Tukey (HSD) para lhuevos NOTA: Este test controla el índice de error experimentwise de tipo I, pero normalmente tiene un índice de error de tipo II más elevado que REGWQ.
75
Medias con la misma letra no son significativamente diferentes. Número de Tukey Agrupamiento Media observaciones Municipio A 2.9619 10 4 A 2.8055 10 2 B 2.2496 10 1 B 2.0114 10 3
TEST DE REDUCCIÓN DE LA OVIPOSICIÓN Obs Muestra Municipio huevos 1 1 1 100 2 2 1 100 3 3 1 100 4 4 1 100 5 5 1 100 6 6 1 100 7 7 1 100 8 8 1 100 9 9 1 100 10 10 1 100 11 1 2 100 12 2 2 100 13 3 2 100 14 4 2 100 15 5 2 100 16 6 2 100 17 7 2 100 18 8 2 100 19 9 2 100 20 10 2 100 21 1 3 100 22 2 3 100 23 3 3 100 24 4 3 100 25 5 3 100 26 6 3 100 27 7 3 100 28 8 3 100 29 9 3 100 30 10 3 100 31 1 4 100 32 2 4 100 33 3 4 100 34 4 4 100 35 5 4 100 36 6 4 100 37 7 4 100 38 8 4 100 39 9 4 100 40 10 4 100
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Procedimiento MEANS Analysis Variable : huevos huevos Número de Desviación observaciones Media estándar Mínimo Máximo 40 100.0000000 0 100.0000000 100.0000000 ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ Municipio=1 ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ Procedimiento MEANS Analysis Variable : huevos huevos Número de Desviación observaciones Media estándar Mínimo Máximo 10 100.0000000 0 100.0000000 100.0000000 ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ Municipio=2 ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ Analysis Variable : huevos huevos Número de Desviación observaciones Media estándar Mínimo Máximo 10 100.0000000 0 100.0000000 100.0000000 ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ Municipio=3 ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ Analysis Variable : huevos huevos Número de Desviación observaciones Media estándar Mínimo Máximo 10 100.0000000 0 100.0000000 100.0000000 ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ Municipio=4 ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ Analysis Variable : huevos huevos Número de Desviación observaciones Media estándar Mínimo Máximo 10 100.0000000 0 100.0000000 100.0000000 Procedimiento GLM Información de nivel de clase Clase Niveles Valores Municipio 4 1 2 3 4 Número de observaciones leídas 40 Número de observaciones usadas 40
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Prueba del rango estudentizado de Tukey (HSD) para huevos NOTA: Este test controla el índice de error experimentwise de tipo I, pero normalmente tiene un índice de error de tipo II más elevado que REGWQ. Alfa 0.05 Error de grados de libertad 36 Error de cuadrado medio 0 Valor crítico del rango estudentizado 3.80880 Diferencia significativa mínima 0 Medias con la misma letra no son significativamente diferentes. Número de Tukey Agrupamiento Media observaciones Municipio A 100.0 10 1 A A 100.0 10 2 A A 100.0 10 3 A A 100.0 10 4
COMPARACIÓN TEST DE REDUCCIÓN DE LA OVIPOSCIÓN Y ANÁLISIS DEL DESARROLLO LARVAL (LDA)
Sistema SAS 19:28 Tuesday, May 18, 2004 1 Obs Municipio Procedimiento Larvas 1 1 1 0.0 2 2 1 0.0 3 3 1 0.0 4 4 1 0.0 5 1 2 0.6 6 2 2 0.5 7 3 2 0.5 8 4 2 0.7 Procedimiento MEANS Analysis Variable : Larvas Larvas Número de Desviación observaciones Media estándar Mínimo Máximo 8 0.2875000 0.3136764 0 0.7000000
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‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ Procedimiento=1 ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ Procedimiento MEANS Analysis Variable : Larvas Larvas Número de Desviación observaciones Media estándar Mínimo Máximo 4 0 0 0 0 ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ Procedimiento=2 ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ Analysis Variable : Larvas Larvas Número de Desviación observaciones Media estándar Mínimo Máximo 4 0.5750000 0.0957427 0.5000000 0.7000000 Variable dependiente: Larvas Larvas Suma de Cuadrado de Fuente DF cuadrados la media F‐Valor Pr > F Modelo 1 0.66125000 0.66125000 144.27 <.0001 Error 6 0.02750000 0.00458333 Total correcto 7 0.68875000 R‐cuadrado Coef Var Raiz MSE Larvas Media 0.960073 23.54794 0.067700 0.287500 Cuadrado de Fuente DF Tipo I SS la media F‐Valor Pr > F Procedimiento 1 0.66125000 0.66125000 144.27 <.0001 Cuadrado de Fuente DF Tipo III SS la media F‐Valor Pr > F Procedimiento 1 0.66125000 0.66125000 144.27 <.0001
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Procedimiento GLM Observación Observado Predichos Residual 1 0.00000000 0.00000000 0.00000000 2 0.00000000 0.00000000 0.00000000 3 0.00000000 0.00000000 0.00000000 4 0.00000000 0.00000000 0.00000000 5 0.60000000 0.57500000 0.02500000 6 0.50000000 0.57500000 ‐0.07500000 7 0.50000000 0.57500000 ‐0.07500000 8 0.70000000 0.57500000 0.12500000 Suma de residuales 0.00000000 Suma de residuales cuadrados 0.02750000 Suma de residuales cuadrados ‐ SS de error ‐0.00000000 Autocorrelación de primer orden ‐0.20454545 Durbin‐Watson D 1.84090909 Test de Levene para homogeneidad de la varianza Larvas ANOVA de las desviaciones cuadradas de las medias de grupo Cuadrado Suma de de la Fuente DF cuadrados media F‐Valor Pr > F Procedimiento 1 0.000095 0.000095 4.78 0.0715 Error 6 0.000119 0.000020 Test para normalidad Test ‐‐Estadístico‐‐ ‐‐‐‐‐P‐valor‐‐‐‐‐‐ Shapiro‐Wilk #11 X 0.847262 Pr < W 0.0894 Kolmogorov‐Smirnov D 0.25 Pr > D 0.1446 Cramer‐von Mises W‐Sq 0.122887 Pr > W‐Sq 0.0448 Anderson‐Darling A‐Sq 0.655498 Pr > A‐Sq 0.0550 Momentos N 8 Pesos de la suma 8 Media 0 Observaciones de la suma 0 Desviación típica 0.06267832 Varianza 0.00392857 Asimetría 0.8702444 Kurtosis 1.93801653 Suma de cuadrados no corregidos 0.0275 Suma de cuadrados corregidos 0.0275 Coeficiente de variación . Media de error estándar 0.02216013
9.2 Anexo 2. Fotos de tipos de huevos observados (Algunos).
Strongylido spp.
Anoplocephala spp.
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9.3 Anexo 3. Fotos de Larvas L3 identificadas (Algunas).
Pequeño strongylus
Strongylus vulgaris
Pequeño strongylus
Strongylus edentatus
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