“DETERMINACIÓN DE BACTERIAS DE ORIGEN FECAL EN LA LECHUGA VENDIDAS

EN EL MERCADO DE ABASTO”

OBJETIVO•Determinar la presencia de bacterias coliformes fecales en las muestras de lechugas compradas en el Mercado de Abasto.•Detectar si la muestra comprada en el Mercado de Abasto es apta para el consumo humano

INTRODUCCION

Este proyecto se inicia al momento de observar en el Mercado de Abasto diferentes productos que requieren de una buena conservación, y que los mismos son comprados en su mayoría por personas que desconocen las condiciones que debe tener un de alimento al momento de ser consumido. Por lo que la lechuga” fue el alimento más atractivo. Además, es una de las hortalizas fundamentales para una dieta saludable. Según estudios realizados este tipo de hortalizas ha sido asociada con brotes de origen Microbiano, por ser un alimento de consumo crudo, lo que agrega un riesgo en la transmisión de microorganismos. algunos factores como fertilización, agua de riego contaminada, las practicas de cosecha, los riesgos en la preparación y hábitos de consumo contribuyen a la proliferación microorganismos de patógenos humanos. La lechuga es una planta delicada que merece ser comida fresca, en el caso de necesitar conservarse, lo ideal es aplicar una temperatura de 0ºC y una humedad relativa mayor del 95%.

 

METODOLOGÍA

Se seleccionó 2 lechugas que son usadas comúnmente en la dieta de los panameños. Las dos muestras fueron compradas en el Mercado de Abasto y cosechadas en Tierras Altas de la Provincia de Chiriquí.Los muestreos se realizaron el día jueves 21 de junio, aproximadamente una de la tarde (1:00 pm) luego al llegar a la universidad las muestras fueron colocadas en la refrigeradoraMuestra 1 y 2: Esta lechuga fue comprada en los establecimientos que se encuentran en la entrada del local estaba colocada sobre un mueble de madera.Se coloca en una bolsa ziploc sobre la balanza y se pesan 10g de hoja de lechuga luego se tapa y se le vierte los 90ml de agua peptonada se cerró la bolsa y se comenzó a homogenizar y triturar las hojas de lechugas dentro de la bolsa esto se hizo por un minuto.

Realización de la Prueba PresuntivaDe este homogenizado se inocularon nueve tubos de ensayo:

•Los primeros tres tubos tenían caldo Lauril Triptosa doble con capsula de durhan se inocularon utilizando una pipeta para luego poder pasar el homogenizado al caldo colocándole 10ml a cada tubo.•Los siguientes tres tubos tenían el medio de cultivo de caldo Lauril Triptosa simple y capsula de durhan con la ayuda de una pipeta le colocamos a cada tubo 1ml del homogenizado.•Los tres últimos tubos tenían caldo Lauril Triptosa simple y capsula de durhan con la ayuda de una pipeta le colocamos 0.1ml del homogenizado a cada tubo. Luego se incubaron los tubos entre 35-37C durante 48 horas. Todo este procedimiento se realizo con la muestra 2 los mismos parámetros a seguir.Los tubos positivos deben mostrar crecimiento y presentar gas en la capsula de durhan.

Para realizar esta prueba tomamos todos los tubos positivos que nos dieron en la prueba presuntiva y para esto necesitamos 9 tubos de caldo bilis verde brillante con capsula de durhan y con la ayuda de una pipeta se pudo pasar las diferentes muestras (0.1, 1ml, 10ml)•Se tomó 1ml de cada tubo en el cual se le había colocado 0.1, 1 y 10 ml del homogenizado que tenía como medio de cultivo caldo Lauril Triptosa simple cuyo resultados fueron positivos y se colocaron los tubo de bilis verde brillante. Este procedimiento se realizo con la muestra # 2. Luego se incubaron los tubos entre 35-37C durante 48 horas.

PRUEBA CONFIRMATIVA

Los tubos positivos que dieron en la prueba confirmativa se utilizaron para inocular en platos Petri que tiene como medio de cultivo Agar el cual es un medio selectivo y diferencial recomendado para el cultivo y aislamiento de Microorganismos Gram negativos En este medio se aíslan y diferencian bacilos entéricos Gram negativos fermentadores y no fermentadores de la lactosa. El Agar MacConkey contiene cristal violeta y sales biliares como inhibidores de organismos Gram positivos. Las colonias aisladas de bacterias que fermentan la lactosa son rosadas y pueden estar rodeadas de una zona de precipitado de sales biliares el cual es debido a una caída en el pH por la fermentación de la Lactosa. Las colonias que no fermentan la lactosa permanecen incoloras.

PRUEBA COMPLETA

PASAR A MEDIOS EMBLuego de hacer el esparcido se puede ver que en todos los platos hubo crecimiento se utilizaron tres platos EMB para sembrar las colonias más diferenciadas que fueron las de color, morada, lila, rosada.Se realizó tinción y luego se procedió a montar las placas

OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO Se pudieron ver bacterias gran negativas ya que este medio es solo para que pueden crecer bacterias gram negativas.

RESULTADOSMuestras # 1 (Lechuga) Muestra # 2 (Lechuga Romana)

Tubo 1 (10ml) Tubo 2 (10ml) Tubo 3 (10ml) Tubo 1 (10ml) Tubo 2 (10ml) Tubo 3 (10ml)

+ + + + + +

Tubo 1(1ml)

Tubo 2(1ml)

Tubo 3(1ml)

Tubo 1(1ml)

Tubo 2(1ml)

Tubo 3(1ml)

+ + + + + +

Tubo 1(0.1ml)

Tubo 2(0.1ml)

Tubo 3(.01ml)

Tubo 1(0.1ml)

Tubo 2(0.1ml)

Tubo 3(0.1ml)

+ + + + + +

Cuadro # 1Cremiento en Caldo Lactosado Simple y doble .Podemos ver que el cuadro #1 todos los tubos fueron positivos de (0.1, 1ml, 10ml) esto nos permitió buscar en la tabla la combinación de números más probables el cual fue 3-3-3 lo que nos indica que el numero de bacterias por tubo fue de mayor o igual a 2,400 NMP/100ml en un numero de confianza de 95%

Muestras # 1 (Lechuga) Muestra # 2 (Lechuga Romana)

Tubo 1 (10ml) Tubo 2 (10ml) Tubo 3 (10ml) Tubo 1 (10ml) Tubo 2 (10ml) Tubo 3 (10ml)

- + + + + -

Tubo 1(1ml)

Tubo 2(1ml)

Tubo 3(1ml)

Tubo 1(1ml)

Tubo 2(1ml)

Tubo 3(1ml)

+ + + + - +

Tubo 1(0.1ml)

Tubo 2(0.1ml)

Tubo 3(.01ml)

Tubo 1(0.1ml)

Tubo 2(0.1ml)

Tubo 3(0.1ml)

- + + + + +

Cuadro #2 Crecimiento en Caldo Bili Verde Brillante.

Muestra #1 Tubo 1 (10ml) Tubo2(1ml) Tubo3(0.1ml)Combinación de numero

3 3 2

Muestra #2 Tubo 1 (10ml) Tubo2(1ml) Tubo3(0.1ml)Combinación de numero

3 2 2

Numero más probable: 11OONMP/100ml

Numero más probable: 210NMP/100ml

Número más probableEl método se basa en determinar la presencia o ausencia (positivo o negativo) de atributos específicos de microorganismos en copias obtenidas por diluciones consecutivas a partir de muestras

DISCUSIÓNSegún los resultados obtenidos, los niveles en las dos muestras sobrepasaron los límites permitidos por la FDA para este tipo de alimento. Es por esto que se debe tomar en cuenta la desinfección de la lechuga y la correcta manipulación que incluye diariamente el cuidado personal.En este estudio se encontró un alto contenido de Klebsiella ssp, Enterobacter y un bajo contenido de E.coli. Esto lo sustentamos en base a que las colonias lactosa (+) dan colonias de color violeta, las de E. coli presentan un característico brillo verde metálico, las de Enterobacter presentan un color violeta sin brillo metálico (ojo de buey) y estos fueron los resultados obtenidosEl grupo de coliformes ha sido siempre el principal indicador de la calidad de agua y alimento. El numero de coliforme en una muestra se usa como criterio de contaminación y por lo tanto de calidad sanitaria de la misma.Este tipo de alimento con alto contenido de coliforme puede provocar en la población, sobre todo en las más susceptible en (niños,embarazadas y adultos mayores) enfermedades gastrointestinales, que podrían incluso causar la muerte.Diversos estudios señalan que los índices de contaminación fecal de los productos hortículados son mayores en las áreas de mercado en las de cultivo.

CONCLUSIÓN •La calidad de la lechuga nacional en este puesto de venta no es óptima y la humedad excesiva ha mermado los rendimientos.•Los lechugas que se comercializan en algunos puestos de ventas en el mercados de abastos presentan elevados niveles de contaminación por especies de Kliebsiellasp •En base a los resultados obtenidos en la lechuga, la presencia de bacterias (Klebsiella y E. Coli), puede ser producto de la contaminación accidental de agua, suelo, o actividades humanas no higiénicas, incluyendo manipulación , almacenamiento y conservación.•La contaminación fecal de los productos hortícolas son mayores en las áreas de mercado que en las de cultivo

RECOMENDACIONES •Es oportuno señalar que para la descontaminación de los vegetales de organismos patógenos, además de la limpieza se recomienda el empleo de una operación de desinfección con alguna sustancia clorada, •Deben manipularse adecuadamente para eliminar los agentes contaminantes y patógenos•Lave adecuadamente sus manos con agua y jabón.•Desinfecte las superficies que tendrán contacto con alimentos.•Separe los utensilios que se utilizan para alimentos cocidos de las herramientas usadas para la preparación de otros de consumo crudo.•Si se preparan alimentos en grandes cantidades las medidas se deben extremar•Educar a las personas de los cuidados y medidas que se deben tomar al momento de consumir alimentos crudos.

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REFERENCIAS BIBLIOGRAFÍA