DETERMINACION DE BLEE Muestra 2 / 2015 Bacteriología Por: Floridalma Cano - Coordinadora

PEEC/Bacteriología

PEEC

betalactamasas de espectro extendido (BLEE)

• Uno de los mecanismos de resistencias con mayor trascendencia clínica son las enzimas beta-lactamasas de espectro extendido (BLEE) que por lo general se presenta en bacilos Gram negativos especialmente en Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca.

• Son el mayor problema actual de resistencia entre las enterobacterias que causan infecciones nosocomiales, pero que también se están aislando en pacientes ambulatorios

Que son BLEE? • Las BLEE se definen como enzimas capaces de hidrolizar

las penicilinas, monobactamicos y cefalosporinas de tercera generación (oxymino-cefalosporinas) como ceftriaxona (CRO), cefotaxima (CTX), ceftazidima (CAZ), y al aztreonam (ATM)

• Son inhibidas por el ácido clavulánico, sulbactam o tazobactam (inhibidores de beta-lactamasas)

• Susceptibles frente a las cefamicinas (cefoxitin,cefotetam) y carbapenemicos (imipenem, meropenem,ertapenem)

Como se detectan en el laboratorio?

• Las BLEE de Escherichia coli y Klebsiella spp. se detectan en 2 pasos importantes:

1) Prueba de tamizaje: La resistencia de la cepa al menos a uno de los antibióticos (oxyimino/cefalosporinas ó cefalosporinas 3ª generacion ) que permiten sospechar la presencia de BLEE de acuerdo con las guías de CLSI (ver tabla 1 y 2)

2) Prueba de confirmacion: evalúa la sinergia entre una oxyimino-cefalosporinas y ácido clavulánico. Puesto que la afinidad de las BLEE para distintos sustratos es variable, el uso de más de uno de estos agentes mejora la sensibilidad de detección. Ver los métodos diapositivas

CLSI M100-S24 - Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing, 2014.

PRUEBAS DE DETECCION “tamizaje” de

BLEE) ANTIBIÓTICO DIFUSION POR

DISCO MICRODILUCION

Cefpodoxima ó ≤ 17 mm ≥ 8 µg/mL

Cefotaxima ó ≤ 27 mm ≥ 2 µg/mL

Ceftriaxona ó ≤ 25 mm ≥ 2 µg/mL

Ceftazidima ó ≤ 22 mm ≥ 2 µg/mL

Aztreonam ≤ 27 mm ≥ 2 µg/mL

• Criterios para E. coli y K. pneumoniae

• Confirmación en todas las cepas en que se observe una reducción de los halos de inhibición o aumento de la CIM

Estos criterios son los establecidos antes del 2011 por CLSI

a) Prueba de sinergia de doble disco (DDST):

• Es suficiente y adecuado utilizar la pareja cefotaxima ó ceftriaxona y ceftazidima.

• La distancia entre los discos es crítica y 20 mm a 30mm centro a centro se ha encontrado para ser óptimo para los discos de 30 μg de cefalosporina.

(ver diapositiva siguiente)

PRUEBAS DE CONFIRMACION FENOTIPICAS DE BLEE

Método del doble disco para la detección de

BLEE.

• Obsérvese el efecto sinérgico (tapón de corcho o distorsión de los halos de inhibición) que se produce entre los discos de ceftriaxona (CRO), cefepime (FEP), ceftazidima (CAZ) y aztreonam (AZM) con el disco central de amoxicilina/ácido clavulánico (AMC). Confirmación de la presencia de BLEE.

SINERGIA

SINERGIA

PRUEBAS DE CONFIRMACION DE BLEE b) Método del Incremento del halo de inhibicion del

disco con clavulanato

La zona de inhibición alrededor del disco de la cefalosporina combinada con ácido clavulánico se compara con la zona alrededor del disco con la cefalosporina sola. La prueba es positiva si el diámetro de la zona de inhibición es ≥ 5 mm más grande con ácido clavulánico.

Método del incremento del halo de inhibición con clavulanato (resultado positivo)

Ceftazidima

Ceftazidima/

clavulanato

Cefotaxima

Cefotaxima / clavulanato

Flo

rid

alm

a C

ano

Incremento del halo de inhibicion de ≥ 5 mm cuando la cefalosporina esta combinada con clavulanato (acido clavulinico)

Tabla 1: CRITERIOS ACTUALES PARA LECTURA DE SUSCEPTIBILIDAD PARA LOS ANTIMICROBIANOS A ENSAYAR

ANTIMICROBIANO DISCO (mm) MIC (µg/mL)

S I R S I R

Amoxicilina –acido clavulanico

≥18 17-14 ≤13 ≥8/4 16/8 ≤32/16

Amikacina ≥17 16-15 ≤14 ≥16 32 ≤64

Ceftriaxona ó ≥23 20-22 ≤19 ≥1 2 ≤4

Cefotaxima ≥26 23-25 ≤22 ≥1 2 ≤4

Ceftazidima ≥21 18-20 ≤17 ≥4 8 ≤16

Norfofloxacina ≥17 16-13 ≤12 ≥4 8 ≤16

Nitrofurantoina ≥17 15-16 ≤14 ≥32 64 ≤128

Trimetroprim/ Sulfametoxazole

≥16 11-15 ≤10 ≥2/38 -- ≤4/76

Nota:

• Los criterios de interpretación (tabla1, diapositiva anterior ) informados a partir del 2011 por CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute), para las cefalosporinas (cefotaxima, ceftriaxona, ceftazidima) indican que no se hace necesario los test para BLEE y el de anotar los resultados de cefalosporinas, aztreonam o penicilinas de susceptible a resistente . Sin embargo hasta que los laboratorios implementen estos nuevos criterios deben ser realizados como se indica en la pagina 48, tabla 2A-SI * (ver nota 7, pagina 44)*.

• VER DOCUMENTOS DE APOYO EN “DESCARGA DE DOCUMENTOS” *

Referencias que se adjuntan

• M100-S21, : Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Twenty Fifth Informational Supplement 2011 . CLSI (pagina 43-48)

• www.nebraskamed.com/...programs/.../panel-change. ( panel -changes -

2014