DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIHELMÍNTICA IN VITRO DE LOS EXTRACTOS DE LAS HOJAS DE Ambrosia...

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD DEL CUSCO

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS, FÍSICAS, MATEMÁTICAS, FARMACIA E INFORMÁTICA

CARRERA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

TESIS PRESENTADO POR:

Br. AMILCAR PUMA CÁRDENAS

PARA OPTAR AL TÍTULO PROFESIONAL

DE QUÍMICO FARMACÉUTICO

ASESORA:

MCs. CARLA DEL CARPIO JIMÉNEZ

COASESORA: MCs. FLAVIA CAROLL MUÑIZ PAREJA

CUSCO - PERÚ2011

DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIHELMÍNTICA IN VITRO DE LOS EXTRACTOS DE LAS HOJAS DE Ambrosia arborescens

Mill “MARCU” FRENTE A Fasciola hepatica

DEDICATORIA

A mi madre L. Marina, por todo su apoyo

sobre todo el económico.

A mi hermana Mildred y mi abuelita Rosenda,

por sus buenos consejos.

A todos mis compatriotas que luchan

cada día por salir adelante.

Amilcar

AGRADECIMIENTOS

A mi asesora, Mcs. Carla del Carpio Jimenez, docente de la Carrera

Profesional de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de San

Antonio Abad del Cusco, por su colaboración y el tiempo dedicado para la

realización del presente trabajo.

A mi coasesora, Mcs. Flavia Caroll Muñiz Pareja, docente de la Carrera

Profesional de Biología de la Universidad Nacional de San Antonio Abad del

Cusco, por su colaboración y facilitarme el uso del laboratorio de Parasitología.

Al Lic. Médico Veterinario Michael Paez, por el acceso al camal de San

Jerónimo, Cusco.

A la Lic. Matemática-Estadística, Rocio Callahui Pagan, por su apoyo en el

análisis estadístico de la presente investigación.

Al Br. Hugo Inocencio Caceres, por facilitarme el uso del laboratorio de

Industria Farmacéutica de la Carrera Profesional de Farmacia y Bioquímica de

la Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusco.

A mi primo Waldir Cárdenas, por su apoyo como asistente de tesis.

INDICE

RESUMEN

SUMMARY

GLOSARIO DE TÉRMINOS

INTRODUCCIÓN

CAPÍTULO I

GENERALIDADES

1.1 Planteamiento del problema 1

1.2 Formulación del problema 3

1.3 Objetivos

3

1.3.1 Objetivos generales 3

1.3.2 Objetivos específicos

3

1.4 Limitaciones de la investigación

3

1.5 Justificación e importancia

3

1.6 Hipótesis

5

CAPÍTULO II

MARCO TEÓRICO CONCEPTUAL

2.1 Antecedentes 6

2.1.1 Antecedentes etnofarmacológicos 6

2.1.2 Antecedentes fitoquímicos 6

2.1.3 Antecedentes farmacológicos 7

2.2 Bases teórico científicas

10

10

2.2.1 Aspectos botánicos de la especie en estudio 10

2.2.1.1 Identificación botánica

10

2.2.1.2 Descripción botánica

11

2.2.1.3 Hábitat y distribución

11

2.2.1.4 Fitoquímica 11

2.2.1.5 Usos medicinales populares

11

2.2.2 Fasciola hepatica

13

2.2.2.1 Posición sistemática de Fasciola hepatica

13

2.2.2.2 Aspectos morfológicos y fisiología

14

2.2.3 Fasciolosis

19

2.2.3.1 Fasciolosis animal

20

2.2.3.2 Fasciolosis humana

26

2.2.4 Principios de los ensayos biológicos de toxicidad

30

2.2.4.1 Principios generales

30

2.2.4.2 Principios de metodología toxicológica experimental

30

2.2.4.3 Concentración respuesta en los ensayos toxicológicos

31

2.2.4.4 Curva dosis-respuesta

31

2.2.4.5 Parámetros fármaco-toxicológicos

32

2.2.4.6 Determinación de la concentración letal media 33

2.2.4.7 Potencia frente a toxicidad 34

CAPITULO III

MATERIALES Y MÉTODOS

3.1 Material biológico 35

3.1.1 Muestra vegetal

35

3.1.2 Muestra parasitológica

35

3.1.3 Medio de cultivo

35

3.2 Materiales e instrumentos de laboratorio

35

3.2.1 Materiales de campo 35

3.2.2 Materiales de laboratorio

36

3.2.3 Instrumentos de laboratorio 36

3.2.4 Reactivos

36

3.2.5 Otros materiales

37

3.3 Recursos e infraestructura

37

3.4 Metodología

37

3.4.1 Tipo de investigación

37

3.4.2 Diseño de la investigación 38

3.4.3 Variables 41

3.4.3.1 De la actividad antihelmíntica de los extractos 41

3.4.3.2 De la concentración letal media de los extractos 43

3.5 Procedimiento 45

3.5.1 Preparación de la muestra 46

3.5.1.1 Recolección 46

3.5.1.2 Secado y molienda 46

3.5.2 Obtención de los extractos y porcentaje rendimiento 46

3.5.3 Obtención de los parásitos 47

3.5.4 Pruebas in vitro para determinar la actividad antihelmíntica 48

3.5.5 Pruebas in vitro para determinar la concentración

letal media sobre fasciola adulta 49

3.5.6 Análisis estadístico

50

CAPITULO IV

ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Tabla Nº 01 Porcentaje de extracción de los extractos acuoso, etanólico 70°

y clorofórmico de las hojas de Ambrosia

arborescens Mill "Marcu”

51

Tabla Nº 02 Tiempo promedio de muerte de los miracidios con los extractos

acuoso, etanólico 70° y clorofórmico al 0.25% de las

hojas de Ambrosia arborescens Mill “Marcu”

52




53




54

Tabla Nº 05 Tiempo promedio de muerte de las fasciolas adultas con los

extractos acuoso, etanólico 70° y clorofórmico al 1% de las

hojas Ambrosia arborescens Mill “Marcu”

55


extractos acuoso, etanólico 70° y clorofórmico al 0.5% de las


56


extractos acuoso etanólico 70° y clorofórmico al 0.25% de las


57

Tabla Nº 08 Valores de la CL50-18hrs estimadas por el metodo probit de los

extractos acuoso, etanólico 70° y clorofórmico de las hojas de

Ambrosia arborescens Mill “Marcu” frente a fasciola adulta 58

DISCUSIÓN 60

CONCLUSIONES

62

SUGERENCIAS 63

BIBLIOGRAFÍA 64

ANEXOS 71

INDICE DE ANEXOS

Anexo Nº 01: Certificado de la planta 72

Anexo Nº 02: Medio de cultivo 73

Anexo Nº 03: Reporte de morbilidad de fasciolosis Dirección Regional

de Salud Cusco 74

Anexo Nº 04: Reporte de morbilidad de fasciolosis Servicio Nacional

de Sanidad Agraria Cusco 75

Anexo Nº 05: Fichas de recolección de los tiempos de la actividad

antihelmíntica 76

Anexo N° 06: Resultados experimentales de la actividad antihelmíntica 78

Anexo N° 07: Resultados experimentales de la cl50-18hrs 80

Anexo N° 08: Análisis estadístico de cada extracto 81

Anexo N° 09: Análisis estadístico de los extractos al 0.25% 85



Anexo N° 12: Análisis estadístico de los extractos al 1% 91



Anexo Nº 15: Cálculo de la CL50-18 hrs método probit 97

Anexo Nº 16: Ph de los extractos ensayados frente a miracidio 103

Anexo Nº 17: Ph de los extractos ensayados frente a fasciola adulta 104

Anexo N° 18: Solubilidad de los extractos 105

Anexo N° 19: Construcción de la incubadora artesanal 106

Anexo N° 20: Fotografías 107

RESUMEN

La fasciolosis es una enfermedad parasitaria distribuida mundialmente,

causante de múltiples trastornos fisiológicos que pueden comprometer la vida

del hombre así como la de los animales. El objetivo del estudio fue determinar

la actividad antihelmíntica de los extractos (acuoso, etanólico a 70º y

clorofórmico) de las hojas de Ambrosia arobrescens Mill “Marcu” in vitro frente

a Fasciola hepatica, el estudio fue de tipo cuasi experimental; se utilizó dos

modelos experimentales in vitro, en placa Petri para fasciola adulta y placa

multipozo para miracidio de Fasciola hepatica. Los resultados fueron los

siguientes: en la determinación de la actividad antihelmíntica se tuvo que, para

el miracidio se registró el menor tiempo de muerte con el extracto seco

etanólico a 70º a las concentraciones de 0.25, 0.125 y 0.0625%, seguido del

extracto seco clorofórmico y finalmente el extracto acuoso el cual no presentó

actividad antihelmíntica; para la fasciola adulta se registró el menor tiempo de

muerte con el extracto seco clorofórmico a las concentraciones de 1, 0.5 y

0.25%, seguido del extracto seco etanólico a 70º y finalmente el extracto

acuoso; en la determinación de la Concentración Letal Media a las 18 horas

para la fasciola adulta, se tuvo, para el extracto clorofórmico de 346.219 ppm,

seguido del extracto seco etanólico a 70º de 398.216 ppm y finalmente el

extracto acuoso de 456.503 ppm. Se concluye que los extractos (acuoso,

etanólico a 70º y clorofórmico) de las hojas de Ambrosia arborescens Mill

“Marcu” presentan actividad antihelmíntica frente a Fasciola hepatica, siendo el

de mayor actividad frente a fasciola adulta el extracto clorofórmico, y para el

miracidio el extracto etanólico a 70°.

Palabras clave: Ambrosia arborescens Mill “Marcu”, actividad antihelmíntica,

Fasciola hepatica, concentración letal media.

ABSTRACT

Fascioliasis is distributed worldwide by a parasite, which causes multiple

physiological disorders that can compromise the life of man and animals. The

aim of this study was to determine the anthelmintic activity of the extracts

(aqueous, ethanolic 70º and chloroform) from the leaves of Ambrosia

arobrescens Mill "Marcu" in vitro against Fasciola hepatica, the study was quasi

experimental; we used two experimental models in vitro, in Petri dishes for adult

fluke and plate multiwell for miracidium of Fasciola hepatica. The results were

as follows: in the determination of the anthelmintic activity had to be, for

miracidium the lowest time of death with dry ethanol 70° at 0.25, 0.125 and

0.0625%, followed by dry chloroform and finally the aqueous extract in which no

activity anthelmintic; for fluke adult has the lowest time of death with dry

chloroform to 1, 0.5 and 0.25%, followed by dry ethanol 70° and finally the

aqueous extract; in determining the Median Lethal Concentration at 18 hours for

the adult fluke, it had, for the chloroform extract of 346.219 ppm, followed by dry

ethanol 70 º of 398.216 ppm and finally the aqueous extract of 456.503 ppm.

We conclude that the extracts (aqueous, ethanolic 70 º and chloroform) from

the leaves of Ambrosia arborescens Mill "Marcu" against Fasciola hepatica has

anthelmintic activity, being the most active anthelmintic the chloroform extract to

fasciola adult and the busiest anthelmintic for the ethanol extract to miracidium.

Keywords: Ambrosia arborescens Mill "Marcu" anthelmintic activity, Fasciola

hepatica, median lethal concentration.

GLOSARIO DE TÉRMINOS

Antihelmíntica: Capacidad inherente de una sustancia de origen natural o

sintético que provoca la expulsión de los helmintos ya sea matándolos e

incitando en ellos una conducta de huida. (18)

Anemia: Trastorno que se produce por la disminución de hemoglobina o del

número de glóbulos rojos en la sangre. (18)

Cercaría: Larva caudada de los digeneos, se originan por reproducción

asexual a partir de un esporocisto o redia. (17)

Concentración Letal Media (CL50): Es aquella que causa la muerte del 50 %

de animales expuestos experimentalmente a ella, durante un tiempo específico

y bajo condiciones controladas. (17)

Fasciolasis: Infección ampliamente distribuida, causada por Fasciola

hepatica, parásito de numerosos mamíferos (ovinos y bovinos) y humanos. (17)

Helmintiasis: Infección producida por helmintos, gusanos que residen o

migran a los tejidos, órganos o cavidades del hospedador, en estadio juvenil o

adulto. (17)

Hepatomegalia: Aumento de volumen del hígado. (17)

Hospedero: Es un animal vivo (hombre, otros mamíferos, aves, artrópodos,

etc.) que en circunstancias naturales permite la subsistencia o el alojamiento de

un agente infeccioso. (17)

Hospedero definitivo: Es aquel donde el parásito llega a la madures o pasa

por su fase sexual. (17)

Hospedero intermediario: Es aquel donde el parásito se encuentra en su

forma larvaria o asexual. (17)

In vitro: Investigación que se realiza fuera del organismo, en el vidrio de un

tubo de ensayo. (17)

Metacercaria: Último estadio entre cercaría y adulto en el ciclo de vida de la

mayoría de los digeneos. (17)

Miracidio: Larva ciliada de algunos digeneos, es de vida libre por corto tiempo

hasta que penetra en el hospedador intermediario apropiado, un molusco

(gastrópodo o bivalvo). (17)

Opérculo: Cubierta en forma de tapón en uno de los extremos del huevo de

trematodos. (17)

Parálisis flácida: Estado en el cual los músculos presentan una disminución

del tono muscular. (18)

Parálisis espástica: Estado en cual los músculos están rígidos y es muy difícil

movilizarlos. (18)

Redia: Estadio larvario de trematodos digeneos que se desarrolla entre los

estadios de miracidio o esporocisto, según sea la especie. (17)

Zoonosis: Infecciones e infestaciones que se transmiten en forma natural entre

humanos y animales domésticos o silvestres. (17)

ABREVIATURAS

SHFM: Solución Hedon Fleig modificado

HM: Hojas molidas

mL: Mililitro

g: Gramo

ppm: Partes por millón (mg/ L)

CL50: Concentración letal media

QP: Químicamente puro

INTRODUCCIÓN

El uso de plantas medicinales en el Perú es tan antiguo como nuestra cultura

andina, muchos conocimientos se encuentran arraigados en el saber popular,

sin embargo, la excesiva modernización de la Medicina Occidental ha hecho

que estos conocimientos sean relegados, y en ciertos aspectos, hasta

olvidados. (43)

Las enfermedades parasitarias constituyen una de las problemáticas

fundamentales que presentan la mayoría de los países del Tercer Mundo;

dentro de estas se tiene a la distomatosis hepática o fasciolosis, que es una

zoonosis parasitaria causada por el tremátodo denominado Fasciola hepatica,

la misma que se encuentra extendida por todo el mundo y es la causante tanto

en el hombre como en los animales, de múltiples trastornos fisiológicos y de

grandes pérdidas económicas que van desde el decomiso de los hígados de

los animales infectados hasta disminución del peso, retraso del crecimiento,

reducción de la producción de carne, leche o lana, descenso de la resistencia a

otras enfermedades, inhibición de la reproducción, abortos e incluso la muerte.

Todo esto unido a los altos costos derivados del tratamiento antihelmíntico, la

convierte en una de las parasitosis más costosas de la ganadería mundial.

Por otra parte el uso incrementado de compuestos antihelmínticos ha generado

resistencia a los tratamientos y favorecido la parasitosis, por lo que se hace

indispensable la utilización de medicamentos de origen natural, como una vía

de sustituir aquellos medicamentos sintéticos de elevados costos en el

mercado.

El diagnóstico clínico de esta infección en humanos es en ocasiones muy difícil

de hacer por la complejidad de sus síntomas y la multiplicidad de los síndromes

que es capaz de producir, lo cual hace pasar como asintomático o mostrar

cuadros graves e incluso localizaciones aberrantes. (42)

Con todo lo expuesto se ve por conveniente realizar un estudio que contribuya

a la validación del uso terapéutico tradicional de Ambrosia arborescens Mill

“Marcu” como antihelmíntico ya que existen reportes sobre su uso como tal.

CAPÍTULO I

GENERALIDADES

1.1 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Los helmintos al ingresar al organismo humano pueden localizarse en la luz del

tubo digestivo las formas adultas o en los órganos profundos invadidos ya sea

por las formas adultas o larvarias, provocando en el hospedero una

enfermedad parasitaria que se manifiesta con los siguientes síntomas anorexia,

nauseas, cansancio, dolor abdominal, diarrea, fiebre, prurito perianal, rash

cutáneo, anemia, etc. (1) (6)

Una de las infecciones parasitarias por helmintos que se da a nivel mundial es

la fasciolosis producida por Fasciola hepatica, según estimaciones se sabe

que hay entre 2,6 y 17 millones de personas infectadas en el mundo (46) y

además se ha demostrado que las más importantes regiones endémicas de

fasciolosis humana están localizadas en América del Sur. (8) (14) (20) (45) (65)

El Perú no escapa a esta realidad ya que se tiene un significativo incremento

de casos reportados en las últimas cuatro décadas por fasciolosis humana (14)

(46) (65); así mismo la droga de elección para tratar esta infección es el

triclabendazol (29), el cual no se encuentra disponible en Perú,

administrándose otros medicamentos que no son específicos para dicha

infección o utilizándose el triclabendazol para uso veterinario. (60)

Por otro lado las grandes pérdidas económicas que causa en el sector

ganadero ya que se ve reducida la ganancia en peso, en la producción de

leche, lana, y reducción en la vida útil del animal por mortalidad o al ser

tempranamente llevado al camal. (48)

Todo esto aunado a la resistencia de Fasciola hepatica al triclabendazol en

animales (58), hace que sea considerado como una problemática de salud

pública a nivel mundial.

1

Según la Organización Mundial de la Salud, actualmente, el 80% de la

población mundial recurre a la medicina tradicional para atender sus

necesidades primarias de asistencia médica, por lo que recomienda el estudio

de los recursos vegetales de uso medicinal a fin de incorporales a la política

nacional de salud de cada país miembro. (52)

A la especie Ambrosia arborescens Mill “Marcu” dentro de la medicina

tradicional se le atribuye muchas propiedades terapéuticas, una de ella como

antihelmíntico, al realizarse la revisión bibliográfica solo se ha encontrado los

usos que se le da con esta propiedad a nivel tradicional (43) (19), además de

algunas investigaciones sobre su composición fitoquímica. (12) (36) (3)

Con este marco, se plantea el presente estudio cuyo propósito es el de

comprobar la actividad antihelmíntica de los extractos (acuoso, etanólico 70º y

clorofórmico) y determinar la concentración letal media in vitro de las hojas de

Ambrosia arborescens Mill “Marcu” frente a Fasciola hepatica, de modo que

sirva de base para posteriores investigaciones y tal vez como una sustancia

alternativa para tratar la fasciolosis.

2

1.2 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA

¿Los extractos de las hojas de Ambrosia arborescens Mill “Marcu”

presentarán actividad antihelmíntica in vitro frente a Fasciola hepatica?

1.3 OBJETIVOS

1.3.1 OBJETIVOS GENERALES

Determinar la actividad antihelmíntica de los extractos de las hojas de

Ambrosia arborescens Mill “Marcu” frente a Fasciola hepatica.

1.3.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

Obtener los extractos (acuoso, etanólico 70º y clorofórmico) a partir de

las hojas de Ambrosia arborescens Mill “Marcu”.

Evaluar in vitro la actividad antihelmíntica de los extractos (acuoso,

etanólico 70º y clorofórmico) frente a miracidio y fasciola adulta.

Determinar el tiempo de muerte del miracidio y fasciola adulta al ser

expuestos a los extractos (acuoso, etanólico 70º y clorofórmico).

Determinar la Concentración Letal Media de los extractos (acuoso,

etanólico 70º y clorofórmico) que presenten actividad antihelmíntica

frente a miracidio y fasciola adulta.

1.4 LIMITACIONES DE LA INVESTIGACIÓN

No se determinó la concentración letal media frente a miracidio, porque

debido a su tamaño y dificultad de manipularlo no se ajusta para el ensayo

toxicológico.

1.5 JUSTIFICACIÓN E IMPORTANCIA

Desde tiempos antiguos las plantas han constituido una fuente de remedios al

alcance del ser humano para la curación de sus enfermedades, en la

3

actualidad las plantas siguen siendo utilizadas en la medicina tradicional, por lo

cual es necesario tener un conocimiento integral de los recursos vegetales por

ende mejorar su aprovechamiento.

En el Perú, la fasciolosis humana es una enfermedad infecciosa parasitaria

emergente, según el estudio realizado por un equipo multidisciplinario de la

Universidad Peruana Cayetano Heredia, se tiene un total de 1701 personas (1-

71 años) infectadas que fueron reportadas en el Perú entre 1963 y 2005. Del

total de casos, 191 eran casos agudos (11%); 1313 en fase crónica (77.1%); y

167 crónicos asintomáticos (9.8%); el número de sujetos infectados se

presentan por décadas apreciándose un paulatino aumento alcanzando a 54.1

casos por año en la última década analizada. Así mismo menciona para el

Cusco una morbilidad de 13% y a nivel nacional el 71% del territorio andino

peruano estaría afectado por esta zoonosis. (44)

Según el reporte obtenido de la Dirección Regional de Salud del Cusco, se tuvo

una morbilidad de 21 pacientes entre el 2005 y 2008; en cuanto a la fasciolosis

animal, se tiene una morbilidad de 53030 bovinos beneficiados entre 2005 y

2009, reporte obtenido del Servicio Nacional de Sanidad Agraria del Cusco.

(ANEXO N° 03, 04)

En la población humana, la fasciolosis causa múltiples trastornos fisiológicos

como fiebre, dolor abdominal, cólico biliar, ictericia, anemia, cirrosis hepática,

hepatomegalia e incluso puede conducir a la muerte; la carencia de

fasciolicidas de uso humano como el triclabendazol, ya que existe sólo el de

uso veterinario, hace que la necesidad de contar con un tratamiento eficaz,

inocuo y oportuno para prevenir las secuelas irreversibles que ocasiona el

parásito en el hígado de los seres humanos, en especial entre los niños, sea

urgente. (44) (60)

En la población pecuaria, este parásito, causa grandes pérdidas económicas

que van desde el decomiso de los hígados de los animales infectados,

reducción de la producción de carne, leche o lana, inhibición de la

reproducción, abortos e incluso la muerte; los altos costos derivados del

4

tratamiento antihelmíntico así como la resistencia de Fasciola hepatica al

triclabendazol en animales. (58)

Con estas referencias, se plantea la realización del presente estudio con el fin

de encontrar fuentes alternativas de agentes de origen natural con actividad

antihelmíntica, los cuales podrían sustituir aquellos medicamentos sintéticos de

elevados costos en el mercado.

1.6 HIPÓTESIS

Los extractos de las hojas de Ambrosia arborescens Mill “Marcu”, presentan

actividad antihelmíntica in vitro frente a Fasciola hepatica

5

CAPÍTULO II

MARCO TEÓRICO CONCEPTUAL

2.1 ANTECEDENTES

2.1.1 ANTECEDENTES ETNOFARMACOLÓGICOS

Esta especie vegetal está distribuida desde América Central hasta

Bolivia, en el Perú en la Costa, Sierra y Selva Alta entre 500 y 4000

msnm, arbusto silvestre y cultivado al cual se le atribuye muchas

propiedades terapéuticas como antirreumática, antihelmíntica (tomar

infusión de las hojas) (43) (19), contra las hemorroides (aplicación tópica

de la hojas), analgésico (la infusión de las hojas), ginecológico (infusión

de las hojas estimula el flujo menstrual), e insecticida (colocar la planta

bajo la cama para ahuyentar las pulgas). (9)

2.1.2 ANTECEDENTES FITOQUÍMICOS

Alvarado Chávez Britt “Plantas medicinales de la Cordillera Negra”

Rev Acad Perú Salud 14(2), 2007.

El estudio se realizó en el distrito de Cotaparaco ubicado en la Cordillera

Negra de la provincia de Recuay, departamento de Ancash; se colectó

35 especies vegetales para inventario, identificación botánica y base

para estudios fitoquímicos de plantas medicinales usados por los

habitantes de la zona. Se utilizó Screening fitoquímico: Identificación con

reacciones químicas, cromatografía en capa fina (cromatofolios Al de

silicagel F254) y cromatografía en papel (papel Watman Nº 2, relación

entre fluorescencia UV visible y la estructura del flavonoide). El resultado

que se tiene señala que el 100% de las especies contienen flavonoides,

para Ambrosia arborescens Mill “Marcu” (hojas y tallos) se identificó

antraquinonas, azúcares reductores, flavonoides, taninos, alcaloides y

aminoácidos libres.

6

Se concluye que en la zona de la Cordillera Negra la mayor

biodiversidad vegetal se encuentra en el piso bioclimático mesoandino

(2.500-4.000 m.s.n.m); considerando a los alcaloides, glucósidos

sapónicos, antraquinonas, lactonas sesquiterpénicas y flavonoides,

como los de mayor responsabilidad de las propiedades medicinales, su

presencia en las especies estudiadas representan 91,42%, 40%,

77,14%, 80% y 100%, respectivamente; las especies estudiadas están

distribuidas en 18 familias, donde las Asteráceas

(Ambrosia arborescens Mill “Marcu”) representan el 28,6%, las

Solanáceas y Lamiáceas el 8,6%.

Lezama Melchor; Susana Marina: “Aislamiento y elucidación

estructural de lactonas sesquiterpenicas de Ambrosia arborescens

Mill.”. Universidad Nacional de Mayor de San Marcos, Facultad de

Farmacia y Bioquímica, Lima, 1993.

En el estudio se determinó que Ambrosia arborescens Mill contiene

cuatro lactonas sesquiterpénicas; fueron identificadas dos lactonas

damsina comprobada mediante cromatografía en capa fina y punto de

fusión, y que la coronopulínea cuya estructura fue determinada mediante

sus constantes físicas, espectroscópicas, UV, IR y formación de

derivados, una tercera lactona sesquiterpénica cristalizable y una cuarta,

que sólo se llegó a aislar; no pudieron ser identificadas por la proporción

en que se encontraban presentes en la muestra.

2.1.3 ANTECEDENTES FARMACOLÓGICOS

Lema N.; Castro G.; Arias G.; Lozano N.: “Determinación de la

Actividad Antimicrobiana de Plantas Medicinales de Huarochiri y

Huancayo”. Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima Perú,

1994.

El estudio se realizó en Huancayo y Huarochiri, se colectó 17 plantas

medicinales. Se utilizó el método disco-placa-cultivo, los diversos

extractos obtenidos fueron ensayados frente a bacterias gran positivas y

gran negativas y frente a levadura (Candida albicans).

7

Se tiene como resultado de las 17 plantas estudiadas, el 76% presentó

actividad antimicrobiana, de las cuales 13 plantas medicinales tienen

actividad frente a bacterias gran positivas dentro de la cual se tiene a

Ambrosia arborescens Mill “Marcu”; de los ensayos biocromatográficos

se observa que las fracciones responsables de la actividad podrían ser

los tripterpenos y/o esteroides.

Concluyéndose que existe una gran correlación entre el uso medicinal

tradicional y la actividad farmacológica.

Guauque Maria del Pilar; Castaño Jhon; Gomez Milton: “Detección

de metabolitos secundarios en Ambrosia peruviana Willd,

determinación de la actividad antibacteriana y actividad

antihelmíntica”. Universidad del Quindio, Armenia. Colombia, 2010.

En el estudio se realizó una tamización fitoquímica por desengrase en

extractor soxhlet; para la concentración letal media se analizó por el

método Probit; para el efecto antibacteriano se utilizó el método de

concentración inhibitoria mínima en caldo nutritivo LB y para el efecto

antihelmíntico se utilizo un modelo experimental in vitro, en placa de

Petri. Se identificó la presencia de alcaloides, glucósidos cardiotónicos,

quinonas, flavonoides, carbohidratos, taninos y saponinas. La

concentración letal media (Artemia salina) para el extracto etanólico seco

fue 64,2 mg/ml, mientras que para el extracto acuoso fue de 840,4

mg/ml; los extractos no presentaron actividad antibacteriana; los

ejemplares adultos de T. canis presentaron disminución de la motilidad

frente a extractos secos, mientras que en la fracción de alcaloides

murieron luego de 4 horas de exposición; los extractos de A. peruviana

sobre huevos de T. canis permitieron una disminución en el porcentaje

de huevos con embrión que no dependía del extracto observado sino de

la concentración empleada. Se concluyó que Ambrosia peruviana

Willd, tiene actividad antihelmíntica frente a Toxocara canis, y que no

presenta actividad antibacteriana.

8

Romero J. Marialina; Olazabal M. Ervelio; Martinez Yusnel; Serrano

Hector; Monteagudo Alcides: “Actividad fasciolicida in vitro de

Portulaca oleracea L”. Universidad Central de las Villas, Cuba, 2002.

Se evaluó la actividad fasciolicida in vitro del extracto seco de Portulaca

oleracea L, obtenido a partir de la liofilización del extracto acuoso al

10% de la planta completa y se emplearon varias concentraciones del

mismo. Se utilizaron dos modelos experimentales in vitro, en placa de

Petri frente a fasciola adulta y en placas multipozos frente al miracidio de

Fasciola hepática. Los resultados fueron, para el miracidio con el

extracto al 1%, 0.5%, 0.25% y 0.125%, se produce la muerte en una

hora del 100% de los parásitos; para fasciola adulta el extracto al 1%

produce la muerte en 24 horas del 100% de los parásitos. Se concluyó

que Portulaca oleracea L tiene actividad fasciolicida, dicha actividad

podría deberse a metabolitos con características polares como los

alcaloides, aminoácidos y saponinas.

9

2.2 BASES TEÓRICO CIENTÍFICAS

2.2.1 ASPECTOS BOTÁNICOS DE LA ESPECIE EN ESTUDIO

Fotografía N° 01 Ambrosia arborescens Mill “Marcu”Fuente: APC

2.2.1.1 IDENTIFICACIÓN BOTÁNICA

Reino : Vegetal

División : Magnoliophyta

Clase : Magnoliopsida

Subclase : Asteridae

Orden : Asterales

10

Familia : Asteraceae

Género : Ambrosia

Especie : Ambrosia arborescens Mill

Sinónimos : Ambrosia artemisioides Willd.,

Franseria artemisioides Willd.,

Artemisia artemisiodes (10) (19)

N. vulgar : Marcju, Marcu, artemisa

Fuente : Herbario Vargas (Anexo Nº 1)

2.2.1.2 DESCRIPCIÓN BOTÁNICA

Arbusto perenne, silvestre con 1,5 m de altura. Tallos y hojas puberulentos a

pilosos. Hojas basales opuestas, superiores alternas profundamente pinnadas,

nervadura pinnada, haz y envés con glándulas resinosas.

Inflorescencias monoicas; estaminadas terminales, en elongados racimos;

pistiladas axilares, en cabezuelas fasciculadas o solitarias en hojas superiores.

Cabezuelas masculinas con pedicelos; brácteas involucrales en una serie,

connadas, herbáceas, esparcido pubescente; receptáculo, subconvexo, con

páleas filiformes. Flores campanuladas, lobadas, amarillas, anteras obtusas en

la base, con apéndices apicales. Cabezuelas femeninas subsésiles; brácteas

involucrales biseriadas, externas libres, las internas fusionadas al único ovario

presente, corola y androceo ausente, estilo bífido, obtuso en la parte distal.

Aquenio ovoide, rostrado en el ápice, envuelto por un involucro espinuloso y

esparcido pubescente; vilano ausente. (30) (10)

2.2.1.3 HÁBITAT Y DISTRIBUCIÓN

Arbusto silvestre y cultivado, está distribuida desde América Central hasta

Bolivia. En el Perú, en la costa, sierra y selva Alta entre 500-4000 msnm. (9)

2.2.1.4 FITOQUÍMICA

11

La planta contiene aceites esenciales; contonina; damsina; franserina (10-

hidroxitetrahidroxi ambrosina); dos alcaloides en las flores; absintina, proteínas

y aceites etéreos. (9)

2.2.1.5 USOS MEDICINALES POPULARES

En el libro “Las Plantas Medicinales de nuestra Madre Tierra Valle Sagrado de

los Inkas-Cusco”, menciona que las semillas maceradas en vino o tomar la

infusión de las hojas de Marcu como antihelmíntico, para el reumatismo la

hojas soasadas se frotan en la parte afectada o también se puede realizar una

tintura con la cual se friccionan, para el dolor de dientes se mastican las yemas

y como diurético tomar la infusión de las hojas. (43)

En el libro “Las plantas en la medicina indígena y la dieta: enfoque

bioconductual” (1986), menciona que la especies Ambrosia artemissifolia

contiene psilostachyn y Ambrosia marítima ambrosin y damsin, las cuales

tienen propiedades anticancerígenas. (23)

En la Enciclopedia de las Plantas Útiles del Ecuador “Plantas Tóxicas” (2008),

menciona el uso de Ambrosia arborescens Mill “Marcu” para eliminar pulgas

con 23 registros de uso, todos provenientes de ocho de las diez provincias de

la Sierra (de donde esta especie es nativa). (22)

En el libro “Plantas medicinales de America Latina”, menciona la infusión de las

hojas de Ambrosia arborescens Mill como antihelmíntico, analgésico,

dismenorrea y oliguria. (19)

En el “Diccionario Enciclopédico de Plantas Útiles del Perú”, menciona el uso

de Ambrosia artemisioides como antirreumática, antihelmíntica (infusión de

las hojas), hemorroides, analgésico e insecticida. (9)

En otros estudios realizados se menciona que Ambrosia arborescens Mill

“Marcu”, se usa para afecciones como cefalea, sarna reumas limpiados de

baño caliente, baño vaginal, insecticida, circulación, sarpullido, abortivo y

12

retraso de la menstruación, y que produce efectos tóxicos debido a la presencia

de principios amargos, aceite esencial y glucósidos cianogénicos (12) (50)

(66); Ambrosia cumanensis, se usa en casos de diarrea. (35)

2.2.2 Fasciola hepatica

Fotografía N° 02 Fasciola hepatica “Alicuya”Fuente: APC

2.2.2.1 POSICIÓN SISTEMÁTICA DE Fasciola hepatica

Reyno : Animalia Linneo, 1758

Subreino : Metazoa Linneo, 1758

Phylum : Platyhelminthes Schneider, 1873

Clase : Trematoda Rudolphi, 1859

Subclase : Digenea Van Beneden, 1858

Orden : Echinostomida Erasmus, 1972

Familia : Fasciolidae Railliet, 1895

Género : Fasciola Linneo, 1758

Especie : Fasciola hepatica Linneo, 1758

13

Nombre vulgar: Alicuya, Duela del hígado, Palomilla, Qallutaca,

Saguaipé, Ojuela, Conchuela (27) (54)

2.2.2.2 ASPECTOS MORFOLÓGICOS Y FISIOLOGÍA

ESTADIO ADULTO

Fasciola hepatica, es un tremátode hermafrodita pudiendo alcanzar un

tamaño de 3,5 cm de largo por 1 cm de ancho. (64)

Posee un cono cefálico, dos ventosas de sujeción y una cubierta cuticular

espinosa, presenta el extremo anterior más ancho que se va adelgazando

hacia el extremo posterior que es obtuso a manera de una pequeña

prolongación cónica (característico de la especie), se desplaza a través de

movimientos reptantes. (34) (37)

La parte externa del tegumento está formada por una cutícula de naturaleza

plasmática, con espinas voluminosas que llegan hasta la membrana basal,

vesículas pinocíticas básales, mitocondrias y retículo endoplásmico tubular.

La parte interna está formada por tubos protoplásmicos, músculos circulares y

longitudinales, responsables de los movimientos de las espinas que causan

acción irritativa sobre el epitelio de los conductos biliares, abundantes células

parenquimatosas, cuerpos de golgi y vacuolas citoplásmicas (32), entre las

funciones del tegumento esta la absorción de sustancias nutritivas, la

respiración y otras funciones sensoriales. (59)

Principalmente se ha comprobado que los nutrientes que Fasciola hepatica

necesita, son una mezcla de tejidos o detritos tisulares epiteliales, sangre,

contenido intestinal, bilis y moco (fundamental en la fase juvenil). (59) (63)

HUEVO

14

Son elipsoidales, operculados de color amarillo, miden de 130-150 X 63-90 µm;

de superficie lisa con estriaciones o dentículos en el opérculo y la abertura.

La primera división del huevo origina dos células desiguales (micro y

macrómero); posteriores divisiones originan la mórula, cuya posición es

inconstante; la gastrulación es de tipo epibólico. La temperatura es un factor

importante para el desarrollo del miracidio, después de dos a tres semanas (16

días a 22 ºC) a mayor temperatura disminuye el periodo de incubación (13 días

a 28 ºC), pero a una temperatura mayor de 30 ºC los huevos no llegan a

embrionar. Los huevos al momento de la puesta no están segmentados y su

evolución requiere de la separación de la masa fecal y condiciones

termohigrométricas adecuadas siendo indispensable que también estén

recubiertas de una fina película de agua, en estas condiciones se forma el

miracidio lo cual se lleva a cabo dentro de la membrana vitelina que presenta

una estructura que actúa como amortiguador viscoso y coloidal en el extremo

operculado. (15) (53)

La eclosión del huevo para la salida del miracidio depende de la luz, la banda

de 650 nm del espectro estimula la producción de una enzima proteolítica

fotoactiva que debilita la unión del opérculo con la cáscara del huevo. La

actividad del miracidio y la hipertonía del medio interno del huevo presionan el

opérculo que se abre y permite su salida al exterior. (4)

MIRACIDIO

Tiene forma ovalada, más ancha en su parte anterior donde presenta una

papila apical mide aproximadamente 130 a 180 µm. El ectodermo presenta

pestañas vibrátiles cuyo extremo anterior presenta una especie de rostro o

papila cefálica, corta, retráctil y desprovista de pestañas, algo por detrás

presenta una doble mancha ocular pigmentada con función fotorreceptora. La

cavidad del cuerpo está constituida por grupos de células germinativas, células

del miracidio que serán transmitidas a los estadios larvarios siguientes y que

forman numerosos elementos de estos estadios evolutivos. (29) (34)

Al salir del huevo nada con geotropismo negativo y con fototropismo positivo,

presentan cuatro tipos de agrupamientos celulares (33) (34):

El primero corresponde a las células de la superficie del cuerpo donde se

encuentran los cilios.

15

El segundo grupo de células se encuentra en el polo posterior, constituyendo el

primordio de células germinales.

El tercer grupo lo forman las células excretoras y el cuarto grupo constituye el

primordio del aparato digestivo.

Debajo del epitelio existen dos capas de fibras musculares una circular y otra

longitudinal; la musculatura está compuesta por fibras musculares que están

exactamente debajo de las placas epidérmicas y de la papila apical, algunas de

estas fibras sirven como retractores de la papila. (33) (34)

ESPOROCISTO

Es de forma oval alargada con un extremo redondeado y el otro cónico, el

miracidio al momento de penetrar el caracol pierde sus cilios y se convierte en

esporocisto joven, pasando a ubicarse en el manto del caracol hospedero.

Su tamaño es aproximadamente de 500 a 600 µm. La membrana o pared que

forma el esporocisto es de tipo citoplasmático y sin espinas. (13) (63)

El desarrollo del esporocisto involucra la transformación de células germinales

en la cavidad del esporocisto maduro, para formar masas germinales de

células que posteriormente se diferenciarán en los sucesivos estadios larvarios.

(4) (34)

REDIA

Son larvas a manera de sacos alargados miden 1 a 3 mm de largo presentan

movimientos activos migratorios y se localizan en la parte distal del caracol

principalmente en la glándula digestiva tienen abundantes células germinales

que originan posteriormente redias hijas y cercarías. Si las condiciones

ambientales y nutritivas para los caracoles son desfavorables pueden formarse

una segunda generación de redias aunque lo normal es que la primera

generación de redias da lugar a las cercarías, en el último tercio del cuerpo

presenta dos proyecciones laterales en forma de dos pequeñas aletas, en el

extremo anterior presenta una ventosa conectada internamente con una faringe

esférica la cual se continúa con tubo recto y ciego que se extiende hasta la

mitad de la longitud del cuerpo. Las redias se alimentan de las células de los

tejidos del hepatopáncreas del caracol hospedero a través de la boca y del

16

aparato digestivo simple, como también a través de la pared del tegumento.

(13)

CERCARÍA

La cercaría sale de la redia a través del poro de nacimiento, es de tipo

gimnocéfala de cuerpo alargado cuando esta activa y redondeado al estar en

reposo; mide entre 250 a 330 µ de ancho máximo, la cola mide 700 µm de

largo. Presenta típicas glándulas citógenas distribuidas principalmente en los

márgenes del cuerpo, con vesícula excretora en forma de “Y” invertida presenta

una ventosa oral, una ventosa ventral, una faringe y un primordio genital. El

número de cercarías formadas en cada caracol es muy variable y no depende

del número de miracidios que lo infectaron; se han evidenciado emisiones

desde 10 a 4000 cercarias siendo la media de 100 cercarias por Lymnea su

liberación se da después de 38 a 45 días de que el miracidio penetró en el

caracol. (34)

Una vez liberada del hospedero intermediario la cercaría presenta tendencia a

enquistarse sobre cualquier superficie que esté en contacto con ella,

incluyendo el agua. El tiempo aproximado que requiere el proceso de

transformación en metacercaría es de 20 a 30 minutos. (4) (7)

METACERCARIA

Estadio infectante par los hospederos vertebrados mide de 180 a 120 µm de

diámetro, se forma después que las cercarías pierden la cola, son de forma

redondeada, estas pueden fijarse en las plantas acuáticas o en plantas que se

hallan en las riveras de los riachuelos o acequias. Eliminan una secreción que

rápidamente se solidifica formando una especie de quiste de doble pared, la

parte externa de esta pared está constituida de una capa de proteína tánica

que cubre los lados dorsal y lateral y una capa interna fina que rodea a toda la

metacercaria, estas capas sirven de protección por lo que pueden tolerar de 4 a

6 ºC lo que posibilitaría su supervivencia durante el invierno, llegando a ser

infectiva a las 24 horas después del enquistamiento. (15)

Después de la ingestión de metacercarias por parte del hospedero definitivo en

el proceso de desenquistamiento ocurren dos etapas: activación de la joven

duela, que comienza en el rúmen a temperatura de 38 ºC y emergencia, que

17

tiene lugar en el duodeno, donde son activados las enzimas de las

metacercarias, provocando apertura de los orificios de emergencia del quiste,

alimentándose posteriormente de la mucosa intestinal, para luego perforar

rápidamente la pared intestinal y ubicarse en los conductos biliares del hígado,

después de 2 a 6 días, y a los 30 días aproximadamente se convierten en

fasciolas adultas después de la infestación. (1) (54)

CICLO DE VIDA

Consta de seis etapas bien definidas (42):

1. Salida de los huevos desde el hospedero definitivo al medio.

2. Desarrollo embrionario de los huevos.

3. Ruptura de los huevos en el agua y salida del miracidium en busca del

hospedero intermediario.

4. Desarrollo y multiplicación de los parásitos dentro del hospedero

intermediario.

5. Emisión cercariana y formación de las metacercarias o cercarías

enquistadas (estadio infectante) sobre plantas acuáticas.

6. Ingestión de las plantas acuáticas por el hospedero definitivo y desarrollo del

parásito hasta su forma adulta.

RESPIRACIÓN Y CIRCULACIÓN

No existen órganos especiales para la respiración de Fasciola hepatica, la

ventilación y la absorción ocurren utilizando el cilio epidérmico. (49)

La respiración es principalmente anaerobia pudiendo ser facultativa porque el

oxigeno es raras veces disponible, la respiración por lo general implica la

degradación de glucosa y el dióxido de carbono, siendo el consumo de oxigeno

dependiente de factores que incluyen temperatura, tamaño del cuerpo etc. (59)

Existe un sistema linfático para el sistema de circulación a manera de senos

apareados muy delgados que son longitudinales y horizontales, con sincitio

epitelial cuya función es el transporte de aminoácidos y lípidos así como

contribución al sistema excretor. (59)

SISTEMA NERVIOSO

18

En Fasciola hepatica, este sistema está formado por un par de ganglios

cerebrales y un plexo submuscular, los cuales se comunican por medio de

cordones transversos y longitudinales generalmente son tres pares de

cordones longitudinales, dorsal, ventral y lateral. (2) (4) (32)

Existe un anillo nervioso alrededor de la faringe y es considerado como un

sistema autónomo y tiene inervaciones hacia el intestino y el sistema excretor

equivalente a un sistema nervioso simpático; se ha descrito abundantes células

neurosensoriales y motoras localizadas en las ventosas. (38) (32)

ENERGÉTICA Y CRECIMIENTO (59) (67) (61)

Fasciola hepatica, obtiene energía por la degradación de carbohidratos tanto

del glicógeno como de glucosa, son anaerobios facultativos pero pueden

utilizar el oxigeno cuando esté presente para la respiración aerobia, llegando a

excretar incluso grandes cantidades de ácidos de cadena corta como producto

final lo que indica que ellos no consumen toda la energía posible que pudieran

conseguir de la glucosa, debido a que tienen un suministro inagotable del

hospedero, lo que hace que la glucosa no catabolice completamente.

Para conseguir la energía se produce el piruvato para convertirlo en acetil CoA,

que entonces pasa al ciclo de Krebs generando energía ; cuando el oxigeno

está presente, este será el aceptor final de electrones y cuando está ausente el

aceptor final de electrones será el piruvato cuyo producto final será lactato.

Otra forma de conseguir la energía adicional es mediante enzimas

catabolizadoras intermedias del ciclo de Krebs. En etapas larvales y libres que

presentan durante el ciclo de vida, utilizan una cadena clásica de electrones de

transporte a través de la citocromo C oxidasa.

En adultos de Fasciola hepatica, bombean hacia el exterior los ácidos de

cadena corta para crear un gradiente de protones a través de sus membranas

celulares la energía de gradientes es utilizada para generar ATP; los estadios

larvarios como miracido y cercaría son aerobios obligados y tienen que

conseguir la energía a través del metabolismo de la glucosa debido a que no se

alimentan; tanto el miracidio como la cercaría tienen un ciclo principal de Krebs,

19

una vez que la cercaría sale del hospedero sufre un cambio principal

metabólico, los lípidos son utilizados para realizar el reemplazo de tegumento.

2.2.3 FASCIOLOSIS

La fasciolosis es una zoonosis parasitaria causada por Fasciola hepatica,

interviniendo en su ciclo de vida como hospedadores definitivos animales

herbívoros y el hombre, y como hospedero intermediario un pequeño caracol

de agua dulce. (1) (42)

La fasciolosis podemos clasificarla en fasciolosis animal y humana.

2.2.3.1 FASCIOLOSIS ANIMAL

PATOGENIA Y FISIOLOGÍA

La patogenia depende del número de vermes que invaden el hígado, con las

formas parasitarias inmaduras migrantes en el parénquima hepático y con la

actividad hematófaga de las fasciolas adultas en los conductos biliares. (13)

La fasciolosis cursa con anemia, hipoalbuminemia e hiperglobulinemia y

dependiendo de la intensidad y duración de la infección, con hiper o

hipoproteinemia, la anorexia y la pérdida de peso o el retraso del crecimiento.

(64)

En la fasciolosis ovina subclínica durante el período de prepatencia existe una

reducción del flujo biliar y secreción biliar de ácidos biliares, como resultado de

la hepatopatía ocasionada por la migración de las fasciolas inmaduras; también

se incrementa la bilirrubina sérica y se observa un descenso significativo de la

bilirrubina biliar; en cambio se han detectado fenómenos hipercoleréticos

durante la fase de patencia en el ganado vacuno. La alimentación hematófaga

es propia de las fasciolas adultas, siendo los vermes inmaduros histiófagos.

(13) (57)

En el curso de la fasciolosis, el hígado se encuentra en un estado hipercinético

respecto a las proteínas plasmáticas con un marcado incremento de las

síntesis de hemoglobina, albúmina e inmunoglobulinas; también la médula

ósea aumenta notablemente su actividad eritropoyética. En cambio, en los

20

estados terminales la capacidad del hospedador para incrementar la síntesis de

hemoglobina en respuesta a la hemorragia está comprometida por la falta de

hierro y de proteínas. El crecimiento corporal, como las proteínas plasmáticas y

los glóbulos rojos, se mantiene hasta la madurez sexual de las fasciolas en los

conductos biliares (a las 8-12 semanas post infección); a partir de entonces, el

descenso de peso y la eliminación consecuente van parejos al incremento de

las pérdidas sanguíneas. (7) (13) (64)

La anorexia que acompaña a la fasciolosis es en parte responsable de la

hipoalbuminemia y de la pérdida de peso; la ingestión voluntaria de alimento

desciende progresivamente después de la infección y alcanza su mayor

intensidad al final de la fase de prepatencia, momento en el que la hepatopatía

originada por las fasciolas inmaduras es máxima. En procesos más graves la

depresión del apetito continúa e incluso aumenta con la patencia y el deterioro

físico del animal; existe cierta correlación entre la aparición e intensidad de la

inapetencia con el descenso de la capacidad metabólica hepática; y con el

desarrollo de la anemia y pérdida de proteínas plasmáticas asociadas a las

fasciolas adultas. Quizás la anemia, la hipoalbuminemia y el deterioro de las

reservas proteicas extravasculares determinen de algún modo la ingestión. El

desarrollo de todas estas alteraciones depende fundamentalmente de la fase,

la duración y la intensidad de la infección y del estado nutritivo e inmunitario del

hospedador. (13) (64)

MANIFESTACIONES CLÍNICAS

Se presenta tres formas clínicas aguda, subaguda y crónica, esta clasificación

se basa en los hallazgos de necropsia y del número de parásitos que se

encuentran en el hígado y de su estado de desarrollo. (13)

FASE AGUDA

La fasciolosis ovina se origina por la ingestión, casi simultánea de un millar de

metacercarias y afecta a corderos expuestos por primera vez al parasito.

En esta fase se tiene dos tipos de fasciolosis aguda, el primero se caracteriza

por la existencia de 1000-2500 vermes en el hígado, de los cuales el 60% se

encuentran migrando por el parénquima hepático; en el segundo se encuentran

21

700-1000 vermes inmaduros, albergando los conductos biliares un porcentaje

de duelas mayor que en el tipo anterior. (34) (64)

Los animales afectados muestran un cuadro de anemia hemorrágica aguda tipo

normocítico y normocrómico, la evolución de la anemia puede ser tan rápida

que es posible observar muertes repentinas durante el periodo de prepatencia,

debidas a la enorme pérdida de sangre y el fallo de la función hepática. Otras

características son marcada eosinofilia, elevada actividad plasmática de la

aspartato aminotransferasa, hiperglobulinemia y en los casos terminales, los

animales muestran un valor hematócrito de 7-10%. (34)

La sintomatología se caracteriza por debilidad, palidez de las mucosas,

taquipnea o evidente disnea cuando se obliga al animal a moverse y en

algunos casos hepatomegalia palpable con dolor abdominal y ascitis; el curso

de la enfermedad es corta muriendo los animales después de 12 días tras la

aparición de los síntomas. Es frecuente la complicación de la fasciolosis aguda

con hepatitis necrótica infecciosa. (13)

FASE SUB AGUDA

Se debe a la ingestión de un número elevado de metacercarias durante un

período de tiempo suficientemente largo como para no provocar un proceso

agudo. En el hígado se hallan por término medio de 1000 vermes (500-1500)

existiendo un equilibrio entre las formas adultas y las inmaduras. Las ovejas

afectadas pierden peso durante 1-2 semanas antes de la aparición de los

síntomas y se muestran letárgicas e incapaces de mantenerse con el resto del

rebaño. (13)

En este estado la palidez de las mucosas es patente y las ovejas afectadas se

resienten a la palpación de la parte anterior del abdomen, aunque sólo un

pequeño número tiene hepatomegalia palpable, algunos pueden mostrar

edema submandibular y ascitis. (13) (64)

Gradualmente se desarrolla anemia hipocrómica y macrocítica; existe también

reticulocitosis marcada (8-30%) que sólo se observa en animales con el valor

hematocrito menor de 25%. Las modificaciones de los valores sanguíneos se

acompañan con alteraciones de las proteínas séricas, inicialmente se produce

hiperproteinemia, debida principalmente al incremento de la fracción

globulínica, fundamentalmente inmunoglobulinas como respuesta a los

22

antígenos parasitarios. A continuación evoluciona a hipoproteinemia, debido a

la marcada disminución de los valores plasmáticos de albúmina; las ovejas

generalmente sobreviven durante 1-2 semanas desde la aparición de los

síntomas. (7) (13)

FASE CRÓNICA

La más frecuente en la oveja, la población parasitaria está formada por vermes

adultos (250-300) y los síntomas se originan por la presencia de duelas en los

conductos biliares. El síntoma más aparente es la pérdida de peso,

acompañada por una anemia hemorrágica crónica e hipoalbuminemia. Los

afectados están delgados, muestran palidez de las mucosas y suelen presentar

ascitis y edema submandibular, el valor hematócrito puede llegar a ser 11-19%;

los animales enfermos pueden sobrevivir durante varias semanas e incluso,

meses. (13) (34)

En los bovinos la fasciolosis aguda y subaguda puede presentarse también, el

síndrome clínico más frecuente es la forma crónica, la cual se puede

observarse principalmente en los animales jóvenes, los síntomas que presenta

son pérdida de peso, anorexia y palidez de las mucosas la anemia es

hemorrágica y de tipo macrocítico y normocrómico. Los animales se muestran

poco vivaces e incluso letárgicos, el edema submandibular y la ascitis no son

características constantes y en ningún momento se palpa el hígado ni existe

dolor a la palpación o percusión en la región hepática, la constipación intestinal

es intensa. Al comienzo de la infección existe un incremento de las proteínas

plasmáticas totales por el aumento de las inmunoglobulinas, principalmente de

la función gamma, que desciende posteriormente por la pérdida de albúmina a

las 10-11 semanas post infección, existe también eosinofilia periférica muy

marcada. Los animales infectados muestran diarrea acompañada con pérdida

de peso y anemia, en la necropsia se pueden encontrar 200-500 fasciolas en

los conductos biliares. (7) (34) (64)

DIAGNÓSTICO

CLÍNICO (13) (24) (42) (51)

23

Consiste en determinar la actividad plasmática de algunas enzimas de origen

hepático. El incremento de la glutamato deshidrogenasa enzima mitocondrial

hepatocitaria, indica un proceso agudo reciente, descendiendo su actividad

cuando las fasciolas alcanzan la madurez sexual y se localizan en los

conductos biliares.

La actividad plásmatica de la aspartato aminotransferasa y la sorbitol

deshidrogenasa también aumentan durante la migración de los vermes por el

parénquima hepático aunque son enzimas menos hepatoespecíficas.

La gamma-glutamil transferasa, procedente del epitelio de los conductos

biliares, alcanza valores más elevados cuando los trematodos se encuentran

en los conductos biliares.

En ausencia de otros datos, el incremento de la actividad plásmatica de la

glutamato deshidrogenasa o la gamma glutamil transferasa indican fasciolosis

aguda y subaguda o crónica, respectivamente pudiendo utilizarse también para

comprobar la eliminación de los parásitos tras el tratamiento terapéutico.

PARASTIOLÓGICO

Se realiza mediante la detección de huevos de Fasciola hepatica en las heces

de los animales sospechosos es útil para diagnosticar fasciolosis crónica. Se

tiene mediante métodos de flotación o sedimentación, consiste en utilizar

sustancias de alta densidad como el sulfato de zinc o el yodo mercuriato

potásico, el inconveniente de las técnicas de flotación es la deformación y

colapso de los huevos por fenómenos osmóticos, debido a las soluciones

utilizadas. La flotación con sulfato de zinc es una técnica muy difundida pero

ineficaz ante escasas eliminaciones de huevos, recomendándose entonces los

métodos de sedimentación. (13) (64)

Los métodos de sedimentación se basan en la mayor densidad de los huevos

de los trematodos que el detritus que se hallan en las heces, lo que permite

concentrarlos en el sedimento tras repetidos lavados. La adición de un

colorante de contraste al sedimento permite destacar el color amarillo dorado

de los huevos. (34) (64)

INUMODIAGNOSTICO

24

Se han descrito varias técnicas, la técnica más difundida es el ELISA con

diferentes modificaciones, consiste en utilizar antígenos somáticos o de

excreción-secreción del parásito. La mejora de los métodos de purificación

antigénica ha incrementado la sensibilidad y especificidad de esta prueba. (40)

En la actualidad, se trata, mediante técnicas de biología molecular, consiste en

caracterizar genes de Fasciola hepatica que codifiquen antígenos específicos,

cuya expresión en un sistema heterólogo permitiría su obtención en cantidad

suficiente y aumentaría la especificidad y sensibilidad de estas pruebas. Las

técnicas de inmunodiagnotstico permite detectar la infección por F. hepática

durante el período de prepatencia y para la realización de estudios

epidemiológicos. (13)

HALLAZGOS DE NECROPSIA

Se le practica en animales recientemente muertos o se sacrifica al animal que

presente signos graves de la enfermedad. Mediante esta se evidencia un

hígado hipertrofiado y hemorrágico, con numerosas fasciolas en el parénquima

hepático e incluso en el peritoneo, bazo, páncreas y pulmones, también se

aprecia colangitis crónica, oclusión biliar, fibrosis hepática, engrosamiento y

calcificación de los conductos biliares. (13) (52)

TRATAMIENTO

La terapéutica de la fasciolosis debe ir dirigida tanto contra las fasciolas adultas

como contra las formas inmaduras en migración por el parénquima hepático,

con el fin de restaurar la función hepática. (13) (48)

En la fasciolosis aguda el fármaco de elección es el triclabendazol por su alta

eficacia sobre fasciolas inmaduras. En la fasciolosis subaguda, el

triclabendazol también es el de elección, también se puede utilizar el clorsulón,

netobimín, nitroxinil y la brotianida. En la fasciolosis crónica se pueden utilizar

todos los antihelmínticos eficaces contra fasciolas adultas (triclabendazol,

clorsulón, closantel, netobimin, nitroxinil brotianida, oxiclozanida, albendazol y

sulfoxido de bitionol). La oxiclozanida es el único fasciolicida utilizable durante

la lactación ya que no es necesario el período de supresión. (13) (48)

25

Cuadro N° 01 Fármacos usados contra Fasciola hepatica

FÁRMACO DOSIS (mg/Kg)

7.5 (oveja)10 (vaca)60 (vaca)60 (vaca)

Brotianida 6 (oveja)Clorsulón 7 (vaca)

3 (vaca)5 (oveja)20 (vaca)20 (oveja)10 (vaca)10 (oveja)10 (vaca)15 (oveja)10 (vaca)15 (oveja)

Oxiclozanida

Triclabendazol

Albendazol

Bitionol

Closantel

Neotibimín

Nitroxinil

Fuente: Elaboración propia según bibliografía (13) (48)

2.2.3.2 FASCIOLOSIS HUMANA

PATOGENIA Y FISIOLOGÍA

Fasciola hepatica realiza tres acciones en su mecanismo patógeno (42):

1. Acción expoliadora: esta acción tiene importancia debido a que el parasito es

hematófago.

2. Acción mecánica: el parasito oblitera los pequeños y gruesos conductos

biliares, con lo que interrumpe las secreciones del coléodoco.

3. Acciones tóxicas e irritativas: son las más importantes en la determinación

de las lesiones del hígado y la causa de los síntomas de la fasciolosis hepática.

La anatomía patológica de la fasciolosis en humanos no se ha estudiado

debidamente, pero se considera que la enfermedad provocada en los hígados

animales sea similar a la que ocurre en el hombre. (42)

El hígado se encuentra hipertrofiado y presenta gruesos cordones fibrosos de

color blanco, que contrasta con el color pardo normal de este órgano; estos

cordones ocupan con preferencia la cara inferior del hígado y la recorren

superficialmente bajo la cápsula fibrosa, durante una parte de su trayecto, para

luego profundizar en el parénquima hepático. Dichos cordones son conductos

biliares hipertrofiados y esclerosados; al corte la luz de estos conductos se

encuentra estrechada a veces muy reducida y dejan salir una materia oscura

26

mucopurulenta de huevos, a veces de una arenilla oscura, de excretas del

parásito y de dístomas en número variable. En las infecciones antiguas e

intensas, la arenilla (concreciones arenosas) forma tubos calcáreos de color

negro, que tapizan interiormente los conductos biliares hipertrofiados. (42) (48)

MANIFESTACIONES CLÍNICAS

FASE AGUDA O INVASIVA

Esta fase coincide con el período durante el cual los parásitos inmaduros

migran a través de la cavidad peritoneal, penetran la cápsula de Glisson y

alcanzan el parénquima hepático. Los síntomas se deben al mecanismo

destructivo que sufre el peritoneo y el tejido hepático por el paso de estas

formas inmaduras, que causan reacciones tóxicas y alérgicas, esta fase puede

durar 2 a 4 meses; sin embargo, en áreas endémicas la reinfección con

Fasciola hepatica suele ser frecuente, entonces las lesiones aguda pueden

superponerse a la enfermedad crónica. El paciente presenta un elevada

eosinofilia sanguínea, fiebre, dolor abdominal, trastornos gastrointestinales,

urticaria y hepatoesplenomegalia. (27) (42)

FASE LATENTE

Cuando el parásito llega a los conductos biliares, alcanza la madurez sexual e

inicia la oviposición, comienza el período conocido como fase patente o latente,

que puede durar mese o años. El paciente presenta una inexplicable y elevada

eosinofilia sanguínea, podría sugerir una infección helmíntica y además los

pacientes suelen referir trastornos gastrointestinales u otro de los síntomas

mencionados en la fase aguda. (27) (42)

FASE OBSTRUCTIVA

En esta la presencia del parásito adulto dentro del conducto biliar causa

inflamación e hiperplasia del epitelio del mismo, así como engrosamiento y

dilatación, lo que trae como resultado colangitis y colecistitis, lo cual constituye

junto con el cuerpo del parásito la causa de una obstrucción mecánica del

conducto biliar. (27) (42)

27

DIAGNÓSTICO

DIRECTO

El diagnóstico de certeza de fasciolosis está basado en el hallazgo de los

huevos del parásito en heces o en el fluido duodenal del individuo parasitado.

Sin embargo, este diagnóstico nunca podría realizarse durante la fase aguda

de la enfermedad, debido a que el parásito se encuentra migrando en el

parénquima hepático sin llegar a la madurez sexual. Una vez iniciada la

oviposición aún es difícil el diagnóstico puesto que la excreción de huevos es

intermitente y muchos casos no son diagnosticados mediante un simple

examen parasitológico. Por estas razones, en estos casos el hallazgo de los

huevos del parásito requiere del empleo de técnicas coproparasitológicas de

concentración. La realización de varios exámenes seriados o de la intubación

dudodenal que provoca molestias y es traumática para el paciente. Las

técnicas parasitológicas empleadas en la fase crónica de la infección van

desde un simple examen directo de las heces, hasta la aplicación de varias

técnicas de concentración como la copa cónica, el método de Ritchie y técnicas

de cuantificación como la de Kato Katz; pero en general todas estas técnicas

poseen baja sensibilidad, por lo que son utilizadas en el diagnóstico individual.

(1) (42) (5)

INDIRECTO

INMUNODIAGNÓSTICO

TÉCNICAS PARA MEDIR LA RESPUESTA CELULAR

La evaluación de la respuesta celular específica requiere generalmente del

empleo de técnicas complejas, caras y de difícil uso como diagnóstico de rutina

por lo que no son utilizadas; la intradermorreacción o reacción cutánea se

emplea ocasionalmente porque es simple y sensible, pero debido a su elevada

inespecificidad ya no se usa actualmente. (42)

TÉCNICAS DE DETECCIÓN DE ANTICUERPOS

28

Los métodos de inmunodiagnóstico basados en la detección de anticuerpos

son mucho más rápidos y factibles para el diagnóstico diario, dentro de estas

se tiene las de precipitación en gel, de aglutinación, fluorescencia, ensayos

inmunoenzimáticos, etc., la desventaja de estas técnicas es la incapacidad de

diferenciar una infección pasada de una reciente y el elevado número de

reacciones cruzadas que se presentan con otras entidades parasitarias. Una

de las de mejores resultados ha sido el ELISA indirecto en la cual se utilizan

antígenos de excreción-secreción de parásitos adultos de Fasciola hepatica.

(40) (42)

DETECCIÓN DE ANTÍGENOS

Mediante la cual es capaz de detectar la infección activa. Se tiene ELISA tipo

“sandwich”, que utiliza para la captura de los antígenos un anticuerpo

monoclonal antiantígenos de excreción-secreción de gusanos adultos de

Fasciola hepatica de la clase IgG2, (AcM ES78). Mediante este método es

posible detectar la infección activa en todas sus etapas, mediante la detección

de antígenos en suero o antígenos circulantes en las primeras 5 semanas de

infección, a partir de la sexta semana posinfección y durante toda su evolución,

antígenos en heces o coproantígenos. (42) (62)

TRATAMIENTO

La emetina fue una de las primeras de gran eficacia utilizadas en el tratamiento

de fasciolosis hepática; hoy en día aún se sigue utilizando, así como la

dihidroemetina pero la aplicación debe ser muy cuidadosa, con el paciente

hospitalizado. Otra droga de gran eficacia es el bithionol, que aunque menos

que la emetina, produce severos efectos secundarios, además de requerir

muchos días de tratamiento. Tanto la emetina como el bithionol no poseen gran

eficacia cuando se trata de las formas migratorias del parásito. (42)

La droga de elección sería el triclabendazol, la cual es segura por los efectos

secundarios son mínimos y se utiliza en dosis únicas o repetirse una segunda

dosis a las 24 horas, se han obtenido grandes éxitos en el tratamiento de

fasciolosis aguda y crónica, además de ser la única con eficiencia en la

eliminación de los parásitos inmaduros, tanto en el hombre como en los

animales. (28) (42) (48)

29

En el cuadro N° 02, se tiene los diferentes fármacos que se usan tanto para

fasciolosis aguda y crónica.

Cuadro N° 02 Fármacos usados contra la Fasciola hepatica

FÁRMACO DOSIS

Emetina 60 mg/día (por 10 días IM)

Dihidroemetina 90 mg/día (por 10 días IM)

40 mg/Kg/día (por 40 días fasciolosis aguda)

25 mg/Kg/día (por 40 días fasciolosis crónica)

Nitazoxanida 500 mg/día (por 7 días VO)

Triclabendazol 10 mg/Kg (una dosis, fasciolosis aguda y crónica)

Bithionol

Bithionol

Fuente: Elaboración propia según bibliografía (42) (28)

2.2.4 PRINCIPIOS DE LOS ENSAYOS BIOLÓGICOS DE TOXICIDAD

2.2.4.1 PRINCIPOS GENERALES (41)

La toxicología ha sido definida como el estudio de los efectos de los agentes

químicos sobre los materiales biológicos, con especial énfasis en las acciones

perjudiciales. En esencia abarca la comprensión de todos los efectos de

prácticamente todas las sustancias químicas sobre todos los tipos de materia

viva; es evidente que toda sustancia química es capaz, en algunas

condiciones, de producir algún tipo de efecto sobre cualquier tejido biológico.

2.2.4.2 PRINCIPIOS DE METODOLOGÍA TOXICOLÓGICA EXPERIMENTAL

Los principios de metodología toxicológica están basados en la premisa de que

todos los efectos de las sustancias químicas en los tejidos vivos son el

resultado de una reacción con o interacción entre cualquier entidad química

dada y algún componente del sistema biológico vivo, esta reacción inicial

puede no ser evidente. El resultado de esta reacción se manifiesta como un

efecto en una función y en muchos casos en la estructura del sistema biológico.

30

El efecto en la función puede ir no necesariamente acompañado por un cambio

detectable en la estructura del sistema biológico, es decir sólo una lesión

bioquímica. Este efecto puede se reversible a falta de una exposición

continuada a la sustancia química, o bien puede ocasionar la muerte de la

célula. (41)

Como resultado del desarrollo de esta metodología toxicológica, han llegado a

ser evidentes ciertos principios generales. Estos principios se aplican a muchos

o quizás a todos los procedimientos de ensayo toxicológico

Son los siguientes (41):

Para que un agente químico produzca un efecto biológico, debe entrar en

contacto inmediato con las células en consideración.

1. Para cada sustancia química existe una cantidad por debajo de la cual no

produce efecto detectable en ningún sistema biológico y una cantidad con la

cual produce un efecto significativo en todos los sistemas biológicos. Entre

estos extremos se encuentra el intervalo de cantidades en el que toda

sustancia química ocasionará un efecto significativo en algunos tipos de

sistemas biológicos.

2. Las células que tienen funciones parecidas y vías metabólicas similares en

varias especies por lo general se verán afectadas de forma parecida por una

entidad química dada.

3. Pequeños cambios en la estructura de un agente químico pueden influir en

gran manera en su acción biológica.

2.2.4.3 CONCENTRACIÓN RESPUESTA EN LOS ENSAYOS

TOXICOLÓGICOS

Siempre que se determinan el efecto de una sustancia química en un único

animal de experimentación, se pueden obtener dos tipos de datos. Uno es el

dato de tipo “todo o nada”, en el que un efecto se da o no se da (el animal vive

o muere). El segundo tipo de datos son las respuestas graduales en las que se

da un efecto que puede ser de una intensidad específica, como un efecto en

algún tipo de función, una disminución del ritmo cardiaco o incluso un aumento

en el número de tumores. Este último tipo de efecto debe ser siempre

cuantificado. Esto frecuentemente se hace, para un efecto dado en forma de

31

porcentaje con respecto a la normalidad o como incidencia del efecto en un

grupo determinado de animales de experimentación. (41)

2.2.4.4 CURVA DOSIS-RESPUESTA

Si se obtiene una respuesta de una magnitud definida para cada dosis, dentro

de un rango de dosis, se dice que la respuesta es gradual. Es decir que a

diferentes dosis se observan los efectos que varían en forma continua y tienen

un valor único para cada dosis. En algunas ocasiones la relación dosis-efecto

no es tan definida y dentro de una población se observa una distribución de

respuestas para cada dosis. En este caso el efecto que se mide no es la

magnitud, se mide el porcentaje de la población en estudio que presenta una

determinada respuesta para cada dosis suministrada. Este tipo de efecto se le

denomina cuantal. En estos casos se acostumbra graficar, en la ordenada, el

por ciento de la población que presenta un determinado valor de la respuesta y

en la abscisa, el logaritmo de la dosis suministrada. (55)

2.2.4.5 PARÁMETROS FÁRMACO-TOXICOLÓGICOS (55)

DE50: Si se trata de la curva dosis-efectos terapéuticos se le llama DE50

(Dosis Efectiva, nivel 50%). Cuando se midieron efectos graduales la DE50 es

la dosis que produce una respuesta igual a la mitad de la respuesta máxima. Si

se midieron efectos cuantales, entonces la DE50 es la dosis que produce una

respuesta deseable determinada en el 50 % de la población. Este parámetro se

obtiene trazando una line horizontal del punto del 50% de respuesta en la

región lineal de la curva de dosis-efectos deseables; en el punto de

intersección con la curva se traza una línea vertical. El punto en el cual la línea

intercepta la abscisa es la DE50.

DL50: Dosis Letal 50, dosis individual de una sustancia que provoca la muerte

del 50% de la población animal debido a la exposición a la sustancia por

cualquier vía distinta a la inhalación. Normalmente expresada como miligramos

o gramos de material por kilogramo de peso del animal.

CL50: Concentración letal 50, es la concentración, obtenida por estadística, de

una sustancia de la que puede esperarse que produzca la muerte, durante la

32

exposición o en un plazo definido después de ésta, del 50% de los animales

expuestos a dicha sustancia durante un periodo determinado. El valor de la

CL50 se expresa en peso de sustancia por unidad de volumen de aire normal

(miligramos por litro, mg/L).

INDICE TERAPÉUTICO (IT) Y MARGEN DE SEGURIDAD (MS): Son

números útiles en estudios farmacológicos. El índice terapéutico (Ec. 01) es el

cociente que resulta de dividir la dosis requerida para producir un efecto letal

por la dosis requerida para producir un efecto deseado, usualmente se hace la

comparación de las dosis medias.

¿=DL50DE 50

(Ec .01)

El margen de seguridad (Ec. 02) se calcula dividiendo la DL1 (efectos letales

en el 1% de la población) por la DE99 (efectos deseables en el 99% de la

población)

MS= DL1DE 99

(Ec .02)

2.2.4.6 DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN LETAL MEDIA (41)

La concentración letal media conocida generalmente como CL50 es aquella

concentración de compuesto que produce la muerte del 50% de los animales.

La CL50 es un valor virtual obtenido estadísticamente, se trata de un valor

calculado que representa la mejor estimación de la concentración requerida

para producir la muerte en el 50 % de los animales y, por lo tanto siempre va

acompañada de algunos tipos de estimación del error del valor hallado, tal

como su intervalo de probabilidad.

Los límites del intervalo de probabilidad se escogen arbitrariamente para

indicar que se obtendrían resultados similares en un 90 o 95 por 100 de los

ensayos llevados a cabo de una forma idéntica a la descrita. Se dispone de

varios métodos para efectuar este cálculo uno de ellos el método del papel

cuadriculado logarítmico de probit de Miller y Tainter (1994).

33

La CL50 se obtiene a partir de la curva trazando una line horizontal desde el

punto correspondiente al 50 % de mortalidad del eje de ordenadas hasta su

intersección con dicha curva. A partir de dicho punto de intersección se traza

una línea vertical que corta al eje de las abscisas en el punto correspondiente a

la CL50. Es evidente que a partir de esta curva y por un procedimiento similar

se puede obtener información con respecto a la concentración letal para el 95%

o el 5% de los animales. La CL84 (concentración letal para el 84% de los

animales) representa +1 DT (desviación típica) de la CL50, y la CL16

(concentración letal para el 16 % de los animales) representa -1 DT de la CL50.

El tanto por ciento de mortalidad puede convertirse en probits, que son

números asignados a porcentajes, de manera que una mortalidad del 50 % es

igual a un probit de 5, una mortalidad del 50% ± 1 DT es igual a un probits de 6

o 4, respectivamente, una mortalidad del 50% ± 2 DT es igual a un probit de 7 o

3.

2.2.4.7 POTENCIA FRENTE A TOXICIDAD

Cuando se obtiene datos para dos compuestos, designados como A y B, las

curvas que representan la relación entre la concentración y la incidencia de la

muerte.

Si la CL50 del compuesto B es mayor que la de A, puede decirse que el

compuesto B es menos potente que el A. Además, si sólo se consideran

concentraciones y letalidad, cabe decir que el compuesto A es más toxico que

el compuesto B.

Esto indica que potencia (expresada como cantidad de sustancia química

implicada) y toxicidad (expresada como nocividad) son términos relativos que

solo pueden ser empleados con respecto a otra sustancia química. Por lo tanto

uno de los criterios que se pueden seguir para describir las toxicidades

relativas de dos compuestos es el de la relación de las concentraciones

requeridas para producir un mismo efecto. (41)

34

CAPITULO III

MATERIALES Y MÉTODOS

3.1 MATERIAL BIOLÓGICO

3.1.1 MUESTRA VEGETAL

En la realización del presente estudio se utilizaron las hojas secas de la

especie vegetal Ambrosia arborescens Mill “Marcu”, las cuales fueron

recolectadas en la localidad de Kasakhunka (3800 msnm), provincia de Anta,

Departamento del Cusco.

3.1.2 MUESTRA PARASITOLÓGICA

Los miracidios (huevos de fasciola adulta) y las fasciolas adultas, se

recolectaron del camal de Ka’yra, distrito de San Jerónimo, Departamento del

Cusco.

3.1.3 MEDIO DE CULTIVO

Se utilizó solución de Hedon Fleig modificado (Anexo N° 02)

35

3.2 MATERIALES E INSTRUMENTOS DE LABORATORIO

3.2.1 MATERIALES DE CAMPO

Bolsa de tela

Cuchillo

Cámara fotográfica

Cuaderno de campo

3.2.2 MATERIALES DE LABORATORIO

Vasos de precipitado de 100, 200 mL

Tubos de ensayo

Embudos de vidrio

Pipetas de 1 mL a 10 mL

Micropipetas

Frascos ISO de 250 mL y 500 mL

Probeta de 100 mL y 1000 mL

Baguetas

Gradilla

Placas de Petri

Pinzas

3.2.3 INSTRUMENTOS DE LABORATORIO

Balanza analítica electrónica Sartorius, sensible a 0.01-0.0001g

Refrigeradora marca Inresa

Autoclave artesanal capacidad 14L

Cocinilla a gas

Evaporador de extractos Sirema modelo E40L

Estufa Citecil Mod 2001

36

Incubadora Memmert Tº máx.70 ºC

Ph-metro HACH EC20 Portable

Microscópio Labor Tech binocular (10x, 20x, 40x, 100x oil)

Rotavapor Buchi Mod B-491

Molino de granos artesanal

3.2.4 REACTIVOS

Agua destilada

Etanol 70º

Cloroformo QP

3.2.5 OTROS MATERIALES

Guantes

Detergente

Barbijos

Incubadora artesanal

Gorras quirúrgicas

Frascos de vidrio 130, 500 y 700 mL

Jeringas 1, 20 mL

Equipo de venoclisis

Bisturí Nro. 24

Cronómetro

Colador (Nro 16 y 60)

Mechero artesanal

3.3 RECURSOS E INFRAESTRUCTURA

Laboratorio de Microbiología Farmacéutica e Industria Farmacéutica de la

Carrera Profesional de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional

de San Antonio Abad del Cusco.

Laboratorio de Parasitología de la carrera Profesional de Biología de la

Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusco.

37

Laboratorio de Química Orgánica de la Carrera profesional de Química de

la Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusco.

3.4 METODOLOGÍA

3.4.1 TIPO DE INVESTIGACIÓN

La presente investigación constituye un estudio cuasi experimental ya

que tuvo como propósito determinar la actividad antihelmíntica in vitro de

los extractos de las hojas de Ambrosia arborescens Mill “Marcu” frente

a Fasciola hepatica.

3.4.2 DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN

DEL ENSAYO DE LA ACTIVIDAD ANTIHELMÍNTICA DE LOS EXTRACTOS

Se realizó un diseño con post prueba y grupo control negativo

A. MIRACIDIO

5G1 X1 O1

5G2 X2 O2

5G3 X3 O3

5G4 X4 O4

5G5 X5 O5

5G6 --- O6

Donde:

5G1, 5G2, 5G3, 5G4, 5G5, 5G6: Miracidios cada grupo formado por

uno con 5 repeticiones.

X1: Concentración de los extractos (acuoso, etanólico 70º y clorofórmico) al

1%.


0.5%.


0.25%.

38


0.125%.


0.0625%.

------: Solución usada como blanco (agua destilada).

O1, O2, O3, O4, O5, O6: Observación de la motilidad del miracidio vivo (rápida,

lenta) y muerte durante 62 minutos.

B. FASCIOLA ADULTA

5 G1 X1 O1

5 G2 X2 O2

5 G3 X3 O3

5 G4 --- O4

Donde:

5G1, 5G2, 5G3, 5G4: Fasciolas adultas cada grupo formado por dos con

cinco repeticiones.


1%.


0.5%.


0.25%.

-----: Solución usada como blanco (SHFM, Anexo Nº 02).

O1, O2, O3, O4: Observación de la motilidad de la fasciola adulta viva

(móvil, semimóvil, parálisis espástica, parálisis flácida) y muerte durante el

tiempo que dure el experimento

DE LA PRUEBA PARA DETERMINAR LA CONCENTRACIÓN LETAL MEDIA

Se realizó un diseño con post prueba y un grupo control negativo

39

A. PRUEBA PRELIMINAR

3 G1 X1 O1

3 G2 X2 O2

3 G3 X3 O3

3 G4 --- O4

Donde:

3G1, 3G2, 3G3, 3G4: Fasciolas adultas cada grupo formado por diez, con

tres repeticiones.

X1: Concentración de los extractos (acuoso, etanólico 70º y clorofórmico) a

1000 ppm.


100 ppm.


10ppm.

-----: Solución usada como blanco (solución Hedon Fleig modificado).

O1, O2, O3, O4: Conteo de fasciolas adultas muertas transcurrido a las 18

horas.

B. PRUEBA DEFINITIVA

3 G1 X1 O1

3 G2 X2 O2

3 G3 X3 O3

3 G4 --- O4

Donde:

3G1, 3G2, 3G3, 3G4: Fasciolas adultas cada grupo formado por diez, con

tres repeticiones


1000 ppm.

40


900 ppm.


600 ppm.


300 ppm.

-----: Solución usada como blanco (solución Hedon Fleig modificado).

O1, O2, O3, O4: Conteo de fasciolas adultas muertas transcurrido a las 18

horas.

41

3.4.3 VARIABLES

3.4.3.1 DE LA ACTIVIDAD ANTIHELMÍNTICA DE LOS EXTRACTOS

VARIABLE INDEPENDIENTE

DEFINICIÓN NATURALEZA MEDICIÓN ESCALA INDICADOR INSTRUMENTO

Extracto acuoso: Es la cantidad de hojas (molidas) expuestas a SHFM (Droga obtenida por infusión (25))

Cuantitativa Directa Razón g/mLBalanza analíticaProbeta

Extracto seco hidroalcohólico: Es la cantidad del extracto (producto sólido obtenido por evaporación del etanol (25)) disueltas en SHFM


Extracto seco clorofórmico: Es la cantidad del extracto (producto sólido obtenido por evaporación del cloroformo (25) ) disueltas en SHFM


42

VARIABLE DEPENDIENTE

MIRACIDIODEFINICIÓN NATURALEZA MEDICIÓN ESCALA INDICADOR INSTRUMENTO

Actividad antihelmíntica: Capacidad inherente de una sustancia de origen natural o sintético que provoca la expulsión de los helmintos ya sea matándolos e incitando en ellos una conducta de huida (17)

Cuantitativa Directa RazónMiracidio muertoMiracidio vivo

Microscopio

FASCIOLA ADULTA


Actividad antihelmíntica: Capacidad inherente de una sustancia de origen natural o sintético que provoca la expulsión de los helmintos ya sea matándolos e incitando en ellos una conducta de huida. (17)

Cuantitativa Directa RazónFasciola adulta muertaFasciola adulta viva

Vista

43

3.4.3.2 DE LA CONCENTRACIÓN LETAL MEDIA DE LOS EXTRACTOS

VARIABLE INDEPENDIENTE


Extracto acuoso: Es la cantidad de hojas (molidas) expuestas a SHFM (Droga obtenida por infusión (25))

Cuantitativa Directa Razón ppm (mg/L)Balanza analíticaProbeta

Extracto seco hidroalcohólico: Es la cantidad del extracto (producto sólido obtenido por evaporación del etanol (25)) disueltas en SHFM


Extracto seco clorofórmico: Es la cantidad del extracto (producto sólido obtenido por evaporación del cloroformo (25)) disueltas en SHFM


44

VARIABLE DEPENDIENTE


Concentración letal: Es aquella que causa la muerte de un porcentaje de animales expuestos experimentalmente a ella, durante un tiempo específico y bajo condiciones controladas. (41)

Cuantitativa Directa RazónNúmero de fasciolas muertas Vista

45

3.5 PROCEDIMIENTO

FLUJOGRAMA DE LA INVESTIGACIÓN

Fuente: Elaboración propia

46

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

RECOLECCIÓN DE Ambrosia arborescens Mill “MARCU”

OBTENCIÓN DE LOS PARÁSITOS

SECADOY

MOLIENDA

PRUEBAS IN VITRO PARA DETERMINAR LA CONCENTRACIÓNLETAL MEDIA

ANÁLISIS ESTADÍSTICO

OBTENCIÓN DE LOS EXTRACTOS Y PORCENTAJE

DE RENDIMIENTO

FASCIOLAS ADULTAS

MIRACIDIOS

PRUEBAS IN VITRO PARA DETERMINAR LA ACTIVIDAD ANTIHELMÍNTICA Y EL TIEMPO DE MUERTE DE LOS PARÁSITOS

3.5.1 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

3.5.1.1 RECOLECCIÓN

Las hojas de Ambrosia arborescens Mill “Marcu”, fueron recolectadas de la

comunidad Kasakhunka, perteneciente a la provincia de Anta, departamento

del Cusco, zona situada a 3800 msnm, en el mes de enero durante horas de la

mañana en una bolsa de tela.

3.5.1.2 SECADO Y MOLIENDA

El material recolectado (hojas) fue secado a la sombra en un ambiente

ventilado durante 30 días, y la molienda se realizó con un molino de granos.

3.5.2 OBTENCIÓN DE LOS EXTRACTOS Y PORCENTAJE DE

RENDIMIENTO

El material seco y molido se sometió a un proceso de extracción de la siguiente

manera:

Extracto acuoso: Se obtuvo por infusión con solución Hedon Fleig modificado

a una temperatura de ebullición, luego se dejo hasta que alcance la

temperatura ambiente.

Extracto etanólico a 70º: Se obtuvo por maceración en un frasco oscuro con

etanol a 70º a temperatura ambiente por 10 días, después se procedió a

concentrar el extracto a sequedad haciendo uso de un evaporador de extractos

a 37 ºC.

Extracto clorofórmico: Se obtuvo por maceración en un frasco oscuro con

cloroformo a temperatura ambiente por 10 días, después se procedió a

concentrar el extracto a sequedad haciendo uso de un rotavapor a 37 ºC,

finalmente se dejó evaporar al medio ambiente por 7 días.

47

Seguidamente se procedió a determinar el porcentaje de rendimiento mediante

la siguiente fórmula:

%E=PfPiX 100

Donde:

%E: Porcentaje de rendimiento

Pf: Peso final (extracto seco)

Pi: Peso inicial (muestra molida)

3.5.3 OBTENCIÓN DE LOS PARÁSITOS

Miracidio: Se recolectaron del camal de San Jerónimo de los hígados de los

animales que presentaban lesiones compatibles con la fasciolosis. Las

vesículas biliares fueron separadas, luego el líquido biliar fue depositado en un

frasco con tapa rosca (capacidad 4 L) para su traslado al laboratorio.

En el laboratorio la bilis fue tamizada con un colador (Nro 60), hacia un frasco

(700 mL), aforando con agua destilada hasta 400 mL, dejando sedimentar por

30 minutos, después se eliminó el sobrenadante haciendo uso de una jeringa y

una manguera de equipo de venoclisis dejando en el recipiente 100 mL, dicho

procedimiento se repite hasta obtener una solución límpida, después al

recipiente que contiene los huevos de fasciola adulta se afora con agua

destilada hasta 600 mL, luego el frasco se introduce a una incubadora

artesanal dejando por un tiempo de 13 días y temperatura de 28 ºC, finalmente

se induce la eclosión de los huevos por cambios bruscos de temperatura frío -

calor.

Fasciola adulta: Se recolectaron del camal de San Jerónimo, para lo cual se

inspeccionaron los hígados de los animales para detectar al parásito, después

se recolectaron las fasciolas en un colador (Nro. 16) y fueron lavadas con

solución fisiológica, después se depositaron en un termo conteniendo solución

Hedon Fleig modificado (ANEXO Nº 02) a 37 ºC, finalmente fueron trasladados

al laboratorio.

48

En el laboratorio las fasciolas fueron lavadas nuevamente con solución

fisiológica.

3.5.4 PRUEBAS IN VITRO PARA DETERMINAR LA ACTIVIDAD

ANTIHELMÍNTICA (56)

ACTIVIDAD ANTIHELMINTICA FRENTE A MIRACIDIO

Se evaluaron 5 concentraciones diferentes de los extractos (acuoso, etanólico

a 70º y clorofórmico) de las hojas de Ambrosia arborescens Mill “Marcu”

obtenidas a partir de una solución madre al 2%. Se realizaron 5 réplicas de

cada una, se utilizaron placas multipozos (12x8 pozos) con pozos de 300 µL

de capacidad, cada pozo contenía 100 µL de agua destilada (contiene un

miracidio, que fue capturado mediante el uso de un microscopio y una

micropipeta) y 100 µL de la solución de los extractos secos (acuoso, etanólico a

70º y clorofórmico), para obtener un volumen final de 200 µL y una

concentración final de 1%, 0.5%, 0.25%, 0.125% y 0.0625% respectivamente.

Se mantuvo un grupo control negativo en agua destilada y para medir la

actividad antihelmíntica se evaluó la motilidad del miracidio vivo (movimiento

rápido, movimiento lento) y muerte, la cual fue observada con un microscopio

en tiempos fraccionados adecuadamente para cada extracto (duración del

experimento fue de 62 minutos). Así mismo para coadyuvar a la solubilidad del

extracto clorofórmico en la solución Hedon Fleig modificado se utilizo tween 80

(1 mL).

ACTIVIDAD ANTIHELMINTICA FRENTE A FASCIOLA ADULTA

Se utilizaron placas de Petri (9.5 X 2 cm), todos los materiales (placa de Petri,

solución Hedon Fleig y otros) fueron autoclavados por 15 minutos y la

manipulación se realizó usando un mechero. Se evaluaron 3 concentraciones

diferentes con 5 réplicas cada una de los extractos secos de las hojas de

Ambrosia arborescens Mill “Marcu” (1%, 0.5% y 0.25%), obtenidas mediante

la disolución de 1, 0.5 y 0.25 g de los extractos secos en 100 mL de solución

Hedon Fleig modificado.

En cada placa de Petri se depositaron 25 mL de la solución a ensayar y 2

fasciolas adultas con un tamaño de 1.7-2.5 cm (11), luego se colocaron en una

49

incubadora (Memmert) a 37 ºC, las lecturas se realizaron cada 10 minutos (se

observo a cada fasciola por 10 segundos) para medir la actividad antihelmíntica

se evaluó la motilidad en la fasciola viva (móvil, semimovil, parálisis espástica,

parálisis flácida) y muerta.

Así mismo para coadyuvar a la solubilidad del extracto clorofórmico en la

solución Hedon Fleig modificado se utilizo tween 80 (2-1 mL).

3.5.5 PRUEBAS IN VITRO PARA DETERMINAR LA CONCENTRACIÓN

LETAL MEDIA SOBRE FASCIOLA ADULTA (26) (18)

A. PRUEBA PRELIMINAR

Se utilizaron frascos de vidrio (capacidad 130 mL); todos los materiales fueron

autoclavados incluyendo la solución Hedon Fleig por 15 minutos.

Se evaluaron 3 concentraciones diferentes, con 3 réplicas cada uno de los

extractos secos (acuoso, etanólico a 70º y clorofórmico) de las hojas de

Ambrosia arborescens Mill “Marcu” (1000 ppm, 100 ppm y 10 ppm),

obtenidas mediante la disolución de 1000 mg, 100 mg y 10 mg de los extractos

secos en 1L de solución Hedon Fleig modificado (Anexo Nº 02). En cada frasco

se depositaron 100 mL de la solución a ensayar y 10 fasciolas adultas. Luego

se colocaron en una incubadora (Memmert) a 37 ºC. Las lecturas se realizaron

a las 18 horas; para medir el efecto de los extractos secos se evaluó la

motilidad de la fasciola.

B. PRUEBA DEFINITIVA

Se utilizaron frascos de vidrio (capacidad 130 mL); todos los materiales fueron

autoclavados incluyendo la solución Hedon Fleig por 15 minutos.

Se evaluaron 3 concentraciones diferentes, con 3 réplicas cada uno de los

extractos secos (acuoso, etanólico a 70º y clorofórmico) de las hojas de

Ambrosia arborescens Mill “Marcu” (300 ppm, 600 ppm y 900 ppm),

obtenidas mediante la disolución de 300 mg, 600 mg y 900 mg de los extractos

secos en 1L de solución Hedon Fleig modificado (Anexo Nº 02). En cada frasco

se depositaron 100 mL de la solución a ensayar y 10 fasciolas adultas. Luego

se colocaron en una incubadora (Memmert) a 37 ºC. Las lecturas se realizaron

50

a las 18 horas; para medir el efecto de los extractos secos se evaluó la

motilidad de la fasciola.

3.5.6 ANÁLISIS ESTADÍSTICO

Para el análisis estadístico de los datos obtenidos en la determinación de la

actividad antihelmíntica de la especie Ambrosia arborescens Mill “Marcu”, se

utilizó el paquete estadístico Statistical Package for Social Sciences (SPSS)

versión 17.0.

El procesamiento de variables cuantitativas se realizó mediante el análisis de

varianza ANOVA y la prueba de DUNCAN con el 95% de confianza. Así mismo

para hallar la concentración letal media (método Probit) se utilizó el paquete

estadístico Statistical Package for Social Sciences (SPSS) versión 17.0.

51

CAPITULO IV

ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

TABLA Nº 01PORCENTAJE DE EXTRACCIÓN DE LOS EXTRACTOS ACUOSO,

ETANÓLICO 70° Y CLOROFÓRMICO DE LAS HOJAS DE Ambrosia arborescens Mill "Marcu”

EXTRACTOPESO INICIAL

MUESTRA MOLIDA (g)

PESO FINAL EXTRACTO SECO

(g)

PORCENTAJE DE EXTRACCIÓN

(%)

Acuoso - - -Etanólico 70º 367.8 44 11.96Clorofórmico 370.8 17.6 4.74

Fuente: Elaboración propia 2010

ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN:

En la tabla Nº 01 se observan los resultados del porcentaje de extracción,

donde el extracto etanólico a 70º tiene 11.96 % y el extracto clorofórmico tiene

4.74 %; se observa que el extracto etanólico a 70º tuvo un porcentaje de

rendimiento medio y el extracto clorofórmico tuvo un porcentaje de rendimiento

bajo debido al solvente usado el cual es selectivo para sustancias apolares.

Con respecto al extracto acuoso no se determinó el porcentaje de extracción

porque la droga se obtuvo por infusión.

52

TABLA N° 02TIEMPO PROMEDIO DE MUERTE DE LOS MIRACIDIOS CON LOS EXTRACTOS ACUOSO, ETANÓLICO 70° Y CLOROFÓRMICO AL 0.25% DE LAS HOJAS DE

Ambrosia arborescens Mill “Marcu”

EXTRACTOS NNRO. DE

PARÁSITOS MUERTOS

TIEMPO PROMEDIO DE MUERTE Y/O VIVO

(MINUTOS)

DESVIACIÓN ESTÁNDAR

ETANÓLICO 5 5 5.2 0.4CLOROFÓRMICO 5 5 6.0 0.7ACUOSO 5 0 62.0 0.0BLANCO 5 0 62.0 0.0

P= 0,000Fuente: Elaboración propia 2010 (Anexo N° 09)

GRÁFICO Nº 01

Fuente: Elaboración propia 2010 (Anexo N° 09)

5.2 6

62 62

0

10

20

30

40

50

60

70

Etanólico Clorofórmico Acuoso Blanco

Min

uto

s (p

rom

ed

io)

Extractos

Muerte Vivo

ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN

En la tabla y gráfico precedente se observan los resultados del tiempo promedio de

muerte de las muestras obtenidas, miracidios, con sus respectivas desviaciones

estándar, donde el extracto que produce el menor tiempo de muerte es el etanólico

con 5.2 minutos, seguido del clorofórmico con 6 minutos y finalmente el acuoso en el

cual se mantuvieron vivos con 62 minutos. Al comparar la actividad antihelmíntica

de los extractos etanólico, clorofórmico y acuoso al 0.25%, se apreció una

efectividad superior del extracto etanólico encontrándose diferencias significativas

(p<0.05), lo que demuestra que esta última es más eficaz en la extracción de la

droga activa responsable de la actividad antihelmíntica.

53



EXTRACTOS NNRO. DE

PARÁSITOS MUERTOS

TIEMPO PROMEDIO DE MUERTE Y/O VIVO (MINUTOS)



P= 0,000 Fuente: Elaboración propia 2010 (Anexo N° 10)

GRÁFICO Nº 02


7.2 8.2

62 62

0

10

20

30

40

50

60

70


Min

uto

s (

pro

me

dio

)

Extractos

Muerte Vivo


En la tabla y gráfico adjunto se observan los resultados del tiempo promedio de

muerte de las muestras obtenidas, miracidios, con sus respectivas desviaciones


con 7.2 minutos, seguido del clorofórmico con 8.2 minutos y finalmente el acuoso en

el cual se mantuvieron vivos con 62 minutos. Al comparar la actividad antihelmíntica

de los extractos etanólico, clorofórmico y acuoso al 0.125%, se apreció una

efectividad superior del extracto etanólico encontrándose diferencias significativas

(p<0.05), lo que demuestra que esta última es más eficaz en la extracción de la

droga activa responsable de la actividad antihelmíntica.

54



EXTRACTOS NNRO. DE

PARÁSITOS MUERTOS

TIEMPO PROMEDIO DE MUERTE Y/O VIVO

(MINUTOS)




GRÁFICO Nº 03


11.4 13.4

62 62

0

10

20

30

40

50

60

70


Min

uto

s (

pro

me

dio

)

Extractos

Muerte Vivo


En la tabla Nº 04 y gráfico Nº 03 se observan los resultados del tiempo promedio de

de muerte de las muestras obtenidas, miracidios, con sus respectivas desviaciones


con 11.2 minutos, seguido del clorofórmico con 13.4 minutos y finalmente el acuoso

en el cual se mantuvieron vivos con 62 minutos. Al comparar la actividad

antihelmíntica de los extractos etanólico, clorofórmico y acuoso al 0.0625%, se

apreció una efectividad superior del extracto etanólico encontrándose diferencias

significativas (p<0.05), lo que demuestra que esta última es más eficaz en la

extracción de la droga activa responsable de la actividad antihelmíntica.

55

TABLA N° 05TIEMPO PROMEDIO DE MUERTE DE LAS FASCIOLAS ADULTAS CON LOS EXTRACTOS ACUOSO, ETANÓLICO 70° Y CLOROFÓRMICO AL 1% DE LAS

HOJAS DE Ambrosia arborescen0s Mill “Marcu”

EXTRACTOS NNRO. DE

PARÁSITOS MUERTOS

TIEMPO PROMEDIO DE MUERTE (MINUTOS)


CLOROFÓRMICO 10 10 70.0 4.7ETANÓLICO 10 10 201.0 5.7ACUOSO 10 10 245.0 7.1BLANCO 10 0 510.0 10.5P= 0,000Fuente: Elaboración propia 2010 (Anexo N° 12)

GRÁFICO Nº 04


70

201

245

510

0

100

200

300

400

500

600

Clorofórmico Etanólico Acuoso Blanco

Min

uto

s (

pro

me

dio

)

Extractos

Muerte Vivo



muerte de las muestras obtenidas, fasciolas adultas, con sus respectivas

desviaciones estándar, donde el extracto que produce el menor tiempo de muerte es

el clorofórmico con 70 minutos, seguido del etanólico con 201 minutos y finalmente

el acuoso con 245 minutos. Al comparar la actividad antihelmíntica de los extractos

clorofórmico, etanólico y acuoso al 1%, se apreció una efectividad superior del

extracto clorofórmico encontrándose diferencias significativas (p<0.05), lo que

demuestra que esta última es más eficaz en la extracción de la droga activa

responsable de la actividad antihelmíntica.

56

TABLA N° 06TIEMPO PROMEDIO DE MUERTE DE LAS FASCIOLAS ADULTAS CON LOS

EXTRACTOS ACUOSO, ETANÓLICO 70° Y CLOROFÓRMICO AL 0.5% DE LAS HOJAS DE Ambrosia arborescens Mill “Marcu”

EXTRACTOS NNRO. DE

PARÁSITOS MUERTOS



CLOROFÓRMICO 10 10 99.0 5.7ETANÓLICO 10 10 268.0 12.3ACUOSO 10 10 374.0 5.2BLANCO 10 0 510.0 10.5


GRÁFICO Nº 05


99

268

374

510

0

100

200

300

400

500

600


Min

uto

s (

pro

me

dio

)

Extractos

Muerte Vivo


En la tabla y gráfico adjunto se observan los resultados del tiempo promedio de





clorofórmico, etanólico, y acuoso al 0.5%, se apreció una efectividad superior del




57

TABLA N°07TIEMPO PROMEDIO DE MUERTE DE LAS FASCIOLAS ADULTAS CON LOS

EXTRACTOS ACUOSO, ETANÓLICO 70° Y CLOROFÓRMICO AL 0.25% DE LAS HOJAS DE Ambrosia arborescens Mill “Marcu”

EXTRACTOS NNRO. DE

PARÁSITOS MUERTOS



CLOROFÓRMICO 10 10 147.0 6.7

ETANÓLICO 10 10 383.0 11.6

ACUOSO 10 10 510.0 10.5

BLANCO 10 0 510.0 10.5P= 0,000Fuente: Elaboración propia 2010 (Anexo N° 14)

GRÁFICO Nº 06


147

383

510

510

0

100

200

300

400

500

600


Pro

me

dio

(m

inu

tos

)

Extractos

Muerte Vivo







clorofórmico, etanólico, y acuoso al 0.25%, se apreció una efectividad superior del




58

TABLA N° 08VALORES DE LA CL50-18hrs ESTIMADAS POR EL METODO PROBIT DE LOS EXTRACTOS ACUOSO, ETANÓLICO 70° Y CLOROFÓRMICO DE LAS HOJAS

DE Ambrosia arborescens Mill “Marcu” FRENTE A FASCIOLA ADULTA

EXTRACTOSCL50-18hrs

(ppm)

LIMITE DE CONFIANZA AL 95%

LIMITE INFERIOR

LIMITE SUPERIOR

ACUOSO 456.503 334.351 569.186ETANÓLICO 398.216 302.821 478.356CLOROFÓRMICO 346.219 273.075 406.349


GRÁFICO Nº 07


334.4

456.5

569.2

302.8

398.2

478.4

273.1

346.2

406.3

200.0

300.0

400.0

500.0

600.0

LIM INF. CL 50 LIM SUP.

pp

m ACUOSO

ETANÓLICO

CLOROFÓRMICO


En la tabla y gráfico adjunto se muestra los resultados del análisis estadístico según

el método Probit, de la concentración letal media a las 18 hrs, de los extractos de las

hojas de Ambrosia arborescens Mill “Marcu” frente a fasciola adulta, con sus

respectivos limites de confianza al 95%, los cuales nos indican que la variación de

los promedios se hallen entre límite superior e inferior. Se observa que la menor

CL50-18 hrs se obtiene con el extracto seco clorofórmico con 346.219 ppm, seguido

del extracto seco etanólico con 398.216 ppm y finalmente el extracto acuoso con

456.503 ppm.

CURVA SIGMOIDEA Y RECTA DE REGRESIÓN LINEAL DE LAS CL50-18 hrs DE LOS EXTRACTOS ACUOSO, ETANÓLICO 70° Y CLOROFÓRMICO DE LAS

59

HOJAS DE Ambrosia arborescens Mill “Marcu” FRENTE A FASCIOLA ADULTA

GRÁFICO Nº 08 GRÁFICO Nº 09

Fuente: Elaboración propia 2010 (Anexo N° 15 )

0102030405060708090

100

0 250 500 750 1000 1250 1500

Prob

it (%

mor

talid

ad)

Concentración (ppm)

Extrac clorofórmico Extrac etanólico Extrac acuoso



En los gráficos precedentes se observa la curva sigmoidea en relación a las

concentraciones en la abscisa y Probit en la ordenada; y la linealización de la curva

sigmoidea en relación al logaritmo de la concentración en la abscisa y Probit en la

ordenada, encontrándose que para el 50% de unidades Probit les corresponde

como CL50-18h para los extractos clorofórmico, etanólico y acuoso de 346.219,

398.2166 y 456.503 ppm respectivamente. Así mismo se observa en el gráfico Nº 08

que la curva sigmoidea del extracto clorofórmico se encuentra más cerca a la

ordenada a diferencia del extracto etanólico y acuoso; en el gráfico Nº 09 se observa

que el extracto clorofórmico presenta una mayor pendiente a diferencia del extracto

etanólico y acuoso.

DISCUSIÓN

60

Con respecto a los miracidios, según los resultados obtenidos en la tabla N° 02, 03

y 04, el extracto etanólico de 70° al 0.25, 0.125 y 0.0625% es el más eficaz

(p<0.005) con los tiempos de 5.2, 7.2 y 11.4 minutos respectivamente, seguido del

extracto clorofórmico al 0.25, 0.125 y 0.0625% con los tiempos de 6, 8.2 y 13.4

minutos respectivamente y finalmente del extracto acuoso al 0.25, 0.125 y 0.0625%

en el cual sólo se observó disminución de la motilidad, más no muerte de los

miracidios, probablemente porque el tiempo de exposición fue muy corto (62

minutos). Así mismo se tiene el estudio realizado por Romero (2002), en el que se

demuestra que el extracto acuoso liofilizado al 1% de Portulaca oleracea L

“Verdolaga”, provocó la muerte de los miracidios a los 60 minutos, en tanto que en

nuestro trabajo, el extracto acuoso al 1% (infusión) de Ambrosia arborescens Mill

“Marcu”, provocó sólo la disminución de la motilidad de los miracidios a los 62

minutos, sin producir la muerte de los mismos.

Con respecto a la fasciola adulta, según los resultados obtenidos en la tabla N° 05,

06 y 07, el extracto clorofórmico al 1, 0.5 y 0.25% es el más eficaz (p<0.005) con los

tiempos de 70, 99, y 147 minutos respectivamente, seguido del extracto etanólico de

70° al 1, 0.5 y 0.25% con los tiempos de 201, 268 y 383 minutos respectivamente y

finalmente el extracto acuoso al 1, 0.5 y 0.25% con los tiempos de 245, 374 y 510

minutos respectivamente; además se observó, que después de la exposición a la

droga la muerte del parásito es precedida de parálisis espástica en el extracto

acuoso y etanólico de 70°, y parálisis flácida en el extracto clorofórmico. Así mismo

se tiene el estudio realizado por Romero (2002), en donde el extracto acuoso al 1%

(liofilizado) de Portulaca oleracea L “Verdolaga”, produce la muerte de todas las

fasciolas adultas a las 24 horas, a diferencia de nuestro extracto acuoso al 1%

(infusión) de Ambrosia arborescens Mill “Marcu”, en la que a las 4 horas (245

minutos) las fasciolas adultas mueren. La evidencia de la actividad antihelmíntica in

vitro determinada en el presente trabajo, se presume que se pueda deber a la

presencia de saponinas para el extracto acuoso, alcaloides para el extracto

clorofórmico y lactonas sesquiterpénicas para el extracto clorofórmico de acuerdo a

lo reportado por Lezama (1993), Alvarado (2007) y Guauque (2010). De los

resultados obtenidos en la tabla N° 08 de la CL50 a las 18hrs, se tiene que los

61

extractos acuoso, etanólico 70° y clorofórmico son tóxicos para fasciola adulta de

Fasciola hepatica, obteniéndose 456.503, 398.216 y 346.219 ppm

respectivamente.

Loomis (1982) manifiesta que uno de los criterios que debe seguirse para describir

las toxicidades relativas de dos compuestos es el de la relación de las

concentraciones requeridas para producir el mismo efecto; en el presente trabajo se

evidencia que el extracto clorofórmico es el que presenta mayor potencia tóxica,

frente a los extractos etanólico de 70° y acuoso ya que para producir el 50% de

mortalidad solo se necesita de 346.219 ppm.

62

CONCLUSIONES

Se determinó la actividad antihelmíntica de los extractos y la concentración letal

media in vitro de las hojas de Ambrosia arborescens Mill “Marcu” frente a

Fasciola hepatica.

Se obtuvieron los extractos secos de las hojas de Ambrosia arborescens Mill

“Marcu”, hallándose para el extracto etanólico 70º y extracto clorofórmico un

porcentaje de extracción de 11.96 % y 4.74 % respectivamente.

En la determinación de la actividad antihelmíntica se tuvo que, para los miracidos

se registró el menor tiempo de muerte con el extracto seco etanólico a 70º,así, a

las concentraciones de 0.25, 0.125 y 0.0625% los tiempos fueron de 5.2, 7.2 y 11

minutos respectivamente; seguido del extracto seco clorofórmico a las

concentraciones de 0.25, 0.125 y 0.0625% los tiempos fueron de 6, 8.2 y 9

minutos respectivamente y finalmente del extracto acuoso en el cual se

mantuvieron vivos hasta los 62 minutos. Para la fasciola adulta se registró el

menor tiempo de muerte con el extracto seco clorofórmico, así, a las

concentraciones de 1, 0.5 y 0.25% los tiempos fueron de 70, 99 y 147 minutos

respectivamente; seguido del extracto seco etanólico a 70º a las concentraciones

de 1, 0.5 y 0.25%, los tiempos fueron de 201, 268 y 383 minutos respectivamente

y finalmente del extracto acuoso a las concentraciones de 1, 0.5 y 0.25%, los

tiempos fueron de 245, 374 y 510 minutos respectivamente.

En la determinación de la Concentración Letal Media frente a Fasciola hepatica,

el extracto clorofórmico mostró una CL50 de 346.219 ppm a las 18 horas, seguido

del extracto seco etanólico a 70º con una CL50 de 398.216 ppm y finalmente el

extracto acuoso con una CL50 de 456.503 ppm.

SUGERENCIAS

63

Realizar nuevos ensayos de actividad antihelmíntica de Ambrosia arborescens

Mill “Marcu” frente a Fasciola hepatica en otros estadios (metacercaria).

Realizar nuevos ensayos de actividad antihelmíntica de Ambrosia arborescens

Mill “Marcu” frente a otros parásitos (Ascaris lumbricoides, Giardia lamblia,

Toxocara canis).

Determinar los metabolitos secundarios del extracto clorofórmico, responsables

de la actividad antihelmíntica.

Continuar con los estudios farmacológicos para evaluar otras propiedades

atribuidas a Ambrosia arborescens Mill “Marcu”.

BIBLIOGRAFÍA

64

1. Atias Antonio: “Parasitología Clínica”. Tercera Edición, Editorial Mediterraneo,

Santiago, Chile, 1996.

2. Acha P.; Szyfres B.: “Zoonosis y enfermedades Transmisibles comunes al

Hombre y a los Animales”. Publicación Científica Nro. 580, Tercera Edición,

OPS, 2003.

3. Alvarado Chávez Britt: “Plantas medicinales de la Cordillera Negra” Rev Acad

Perú Salud 14(2), 2007. [fecha de acceso 06 de abril de 2009]. URL disponible

en:

http://www.ippn.org.pe/files/pdf/07%20Plantas%20Medicinales%20de%20la

%20Cordillera%20Negra.pdf

4. Becerril R.: “Parasitología Médica de las Moleculas a la Enfermedad”. Editorial

Mc Graw Hill Interamericana S. A., Mexico, 2004.

5. Beltrán F. Maria; Tello C. Rául ; Náquira V. César: “Manual de Procedimientos

de Laboratorio para el diagnóstico de los Parásitos Intestinales del Hombre”.

Serie de Normas Técnicas N° 37, Lima Perú, 2003. [fecha de acceso 23 de abril

de 2009]. URL disponible en:

http://bvs.minsa.gob.pe/archivos/INS/165_NT37.pdf

6. Botero David; Restrepo Marcos: “Parasitosis Humanas”. Corporación para

Investigaciones Biológicas, Medellin Colombia, 1998.

7. Boch J.; Supperer R.: “Parasitología en Medicina Veterinaria”. Editorial

Hemisferio Sur S. A., Buenos Aires Argentina, 1988.

8. Bjorland J, Bryan RT, Strauss W, Hillyer G, Mcauley J.: “Un brote de fasciolasis

aguda entre los indígenas Aymaras en el altiplano Boliviano. Enfermedades

infecciosas clínicas, 1995.

9. Brack E. Antonio: “Diccionario Enciclopédico de Plantas Útiles del Perú”. Centro

de Estudios Regionales Andinos Bartolomé de las Casas, Cusco Perú, 1999.

10. Brako Lois; Zaruchi James: “Catalogo de las Angioespermas y Gimnospermas

del Perú”. Editorial Missouri Botanical Garden, 1993.

11. Bravo Juan: “Métodos Normalizados para el Análisis de Aguas Potables y

Residuales”. Ediciones Diaz de Santos S.A., Madrid, España, 1996.

65

12. Cordoba S. Adriana; Soto Vallejo Beatriz; Polo G. Carlos; Isaza M. Gustavo;

Gallego A. Jose. “Plantas Tóxicas Caseras en la Ciudad de Manizales”. Revista

Biosalud Ciencias Básicas, n. 2 (2003), 15-29 Colombia.

13. Cordero del Campillo M.: “Parasitología Veterinaria”. Editorial Mc Graw Hill

Interamericana, Madrid España, 2000.

14. Cornejo William; Alva Pilar; Sevilla Carlos; Huiza Alina: “Inmunodiagnóstico de

la fasciolosis humana en la provincia de Chupaca-Junin, mediante un ELISA de

captura basado en cistatina”. Perú, 2003. [fecha de acceso 29 de abril de 2009].

URL disponible en:

http://www.scielo.org.pe/pdf/afm/v64n4/a09v64n4.pdf

15. Chester P.: “Parasitología Clínica”. Segunda Edición, Editores Salvat, Barcelona

España, 1994

16. Cruz Reyes Alejandro; Camargo C. Blanca: “Glosario de términos en

parasitología y ciencias afines”. Primera Edición, Ediciones Plaza y Váldes,

México, 2001.

17. Dorland Diccionario Enciclopédico Ilustrado de Medicina. 30ª Edición, Editorial

Elsevier, España, 2005.

18. Díaz B. Maria; Bustos L. Martha; Espinosa R. Adriana: “Pruebas de

toxicidad acuática”. Primera Edición, Universidad Nacional de Colombia, Bogota,

Colombia, 2004.

19. Duke A. James: “Plantas medicinales de America Latina”. Editorial Grupo Taylor

& Francis, EE.UU., 2009.

20. .JG Esteban Flores A, Ángeles R, Mas-Coma MS.:”Alta endemicidad de la

fasciolasis humana entre el lago Titicaca y el valle de La Paz, Bolivia.

Transacciones de la Sociedad Real de Medicina Tropical e Higiene de 1999.

21. Esteban JG, Flores A, Angeles R, Mas-Coma MS: “Alta endenmicidad de

fasciolosis humana entre el lago Titicaca y el valle de la Paz, Bolivia. Sociedad

Real de Medicina Tropical e Higiene, 1999.

22. Enciclopedia de las Plantas Útiles del Ecuador “Plantas Tóxicas”, 2008. [fecha

de acceso 02 de abril de 2009]. URL disponible en:

http://www.biologia.puce.edu.ec/imagesFTP/10468.Toxicas.pdf

66

http://www.biologia.puce.edu.ec/imagesFTP/10468.Toxicas.pdf

23. Etkin Nina: “Las Plantas en la Medicina Indígena y la dieta: enfoque

bioconductual”. Departamento de Antropología, Universidad de Minessota,

Minneapolis Minessota, 1986.

24. Faria S. Luis; Quiroz R: Hector; Ibarra V. Reyna; Sanchez S. Reyna;

Salcedo E. Rosalba: “Tiempo de normalización de los niveles de gammaglutamil

transpeptidasa en ovinos con fasciolosis experimental tratados con

triclabendazol”. México, 1996. [fecha de acceso 02 de abril de 2009]. URL

disponible en:

http://www.fmvz.unam.mx/fmvz/revvetmex/a1996/rvmv27n3/rvm27308.pdf

25. Faulli Trillo C.: “Tratado de Farmacia Galénica”. Primera Edición, Ediciones

Madrid, España, 1993.

26. Fernandez-Calienes V. Ayme; Mendiola M. Judith: “Evaluación de la

toxicidad de extractos de plantas cubanas con posible acción antiparasitaria

utilizando larvas de Artemia salina L.”. Cuba, 2009. [fecha de acceso 04 de abril


http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S0375-07602009000300009&script=sci_

arttext

27. Fredes Fernando: “Fasciolosis Animal y Humana”. Monografías Electrónicas de

Patología Veterinaria, 2004. [fecha de acceso 05 de mayo de 2009]. URL

disponible en:

http://patologiaveterinaria.cl/Monografias/Numero1/05-2004.pdf

28. Gilbert David, Moellering Robert: “La guía Sanford a la terapia antimicrobiana”.

Trigesimo octava Edición, EE.UU., 2008

29. Guiart J.: “Manual de Parasitología”. Editorial Nacional S. A., Mexico, 1989.

30. GRIN Taxonomia de las plantas. [fecha de acceso 14 de abril de 2009]. URL

disponible en:

http://www.ars-grin.gov/cgi-bin/npgs/html/taxon.pl?416922

31. Guauque Maria del Pilar; Castaño Jhon; Gomez Milton: “Detección de

metabolitos secundarios en Ambrosia peruviana Willd y determinación de la

actividad antibacteriana”. Universidad del Quindio, Armenia. Colombia, 2010.

[fecha de acceso 02 de enero de 2011]. URL disponible en:

67

http://www.ars-grin.gov/cgi-bin/npgs/html/taxon.pl?416922

http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S0375-07602009000300009&script=sci_

http://www.revistainfectio.org/site/Portals/0/vol_14_3/7_

%20DETECCION_METABOLITOS.pdf

32. Halton D. W.; Gustafsson M. K.: “Morfología funcional del sistema Nervioso de

Platelminthes”, 1996.

33. Herculano E.: “Diagnóstico de Fasciola hepatica”, Departamento

Parasitología, Montevideo Uruguay, 2003.

34. Jacques E.: “Los Parásitos de las Carnes Epidemiología Fisiopatología

Incidencias Zoonosicas”. Primera Edición, Editorial Acribia S. A., Zaragoza

España, 2005.

35. Lans Cheryl: “Comparación de plantas utilizadas para problemas de la piel y el

estomago en Trinidad y Tobago con la etnomedicina de Asia”. Universidad de

Victoria, Columbia Británica, Canada, 2007. [fecha de acceso 25 de mayo de

2009]. URL disponible en:

http://www.biomedcentral.com/content/pdf/1746-4269-3-3.pdf

36. Lema N.; Castro G.; Arias G.; Lozano N.: “Determinación de la Actividad

Antimicrobiana de Plantas Medicinales de Huarochiri y Huancayo”. Universidad

Nacional Mayor de San Marcos, Lima Perú, 1994. [fecha de acceso 27 de abril


http://sisbib.unmsm.edu.pe/BVRevistas/rpm_trop/v08_n1-2/Pdf/a04.pdf

37. Leguia G.: “Distomatosis Hepática en el Perú Epidemiología y Control”. Segunda

Edición, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima Perú, 1991.

38. Levine N.: “Tratado de Parasitología Veterinaria”. Ediciones Jover, España,

1988.

39. Lezama Melchor; Susana Marina: “Aislamiento y elucidación estructural de

lactonas sesquiterpenicas de Ambrosia arborescens Mill.”. Universidad Nacional

Mayor de San Marcos, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Lima, 1993.

40. Li E. Olga; Leguía P. Guillermo; Espino M. Ana; Duménigo R. Blanca; Díaz Ailén;

Otero Oscar: “Detección de Anticuerpos y Antígenos para el Diagnóstico de

Fasciola hepatica en Alpacas Naturalmente Infectadas”. Rev. Inv. Vet. Perú

2005. [fecha de acceso 28 de mayo de 2009]. URL disponible en:

http://sisbib.unmsm.edu.pe/bVrevistas/veterinaria/v16_n2/pdf/a06.pdf

68

http://www.biomedcentral.com/content/pdf/1746-4269-3-3.pdf

41. Loomis A. Ted:”Fundamentos de Toxicología”. Tercera Edición, Editorial

Acribia, España,1982.

42. Llop H. Alina; Valdés-Dapena V. Margarita; Zuazo Silva Jorge: “Microbiología y

Parastiología Médicas”. Editorial Ciencias Médicas, La Habana, Cuba, 2001.

43. Mantilla Holguin Justo; Olazábal Castillo Oscar: “Las Plantas Medicinales de

nuestra Madre Tierra Valle Sagrado de los Inkas Cusco”. Instituto de Ecología y

Plantas Medicinales, Cusco Perú, 2008.

44. Marcos Luis; Terashima A.; Leguia G.; Canales M.; Espinoza J.R; Gotuzzo

Eduardo: “La Infección por Fasciola Hepática en el Perú: una Enfermedad

Emergente”. Rev Gastroenterol Perú; 2007; 27: 389-396. [fecha de acceso 29

de mayo de 2009]. URL disponible en:

http://sisbib.unmsm.edu.pe/BvRevistas/gastro/vol27n4/pdf/a08v27n4.pdf

45. Marcos R. Luis A., Maco F. Vicente, Terashima I. Angélica, Samalvides

C. Frine, Gotuzzo H. Eduardo: “Prevalencia de parasitosis intestinal en niños del

valle del Mantaro, Jauja, Perú.”, Rev. Med. Hered. 2002. [fecha de acceso 30 de

mayo de 2009]. URL disponible en:

http://www.upch.edu.pe/famed/rmh/13-3/v13n3ao2.pdf

46. Marcos A. Luis; Terashima Angelica: “Actualización en fasciolosis humana en el

Perú: diagnóstico, tratamiento y propuesta de clasificación clínica”, Perú, 2007.

[fecha de acceso 30 de mayo de 2009]. URL disponible en:

http://sisbib.unmsm.edu.pe/BVRevistas/neohel/v1n2/pdf/a04.pdf

47. Mas-Coma M.S.; Esteban J.G.; Bargues M.D.: “Epidemiologa de la fasciolasis humana:

revisión y propuesta de nueva clasificación” Boletin de la Organización Mundial de la

Salud, 1999. [fecha de acceso 02 de junio de 2009]. URL disponible en:

http://whqlibdoc.who.int/boletin/1999/RA_1999_1_70-76_spa.pdf

48. Mego Silva Jaime: “La Fascioliasis Humana y Animal”. Sistema de Revisiones en

Investigación Veterinaria de San Marcos, 2008. [fecha de acceso 02 de junio de


http://www.unmsm.edu.pe/veterinaria/files/fasciolasis_mego.pdf

49. Meglitsch P.; Schram F:: “Platyhelminthes en Zoología de Invertebrados”.

Parasitología Experimental, 1991.

50. Moraes M.; Olgaard B.: “Plantas Medicinales de los Andes Ecuatorianos”.

69

Escuela de Biología de la Universidad Central del Ecuador, Quito Ecuador, 2006.

[fecha de acceso 29 de mayo de 2009]. URL disponible en:

http://www.beisa.dk/Publications/BEISA%20Book%20pdfer/Capitulo%2018.pdf

51. Morales A. Gustavo; Pino de M. Luz: “Fasciola hepatica y Distomatosis hepática

bovina en Venezuela”. Red de helmintología de FAO para America atina y el

Caribe, 2004. [fecha de acceso 05 de junio de 2009]. URL disponible en:

http://cnia.inta.gov.ar/helminto/Fasciola/DISTOMATOSIS%20HEP%C3%81TICA

%20BOVINA%20Venezuela.pdf

52. Nuevas directrices de la OMS para fomentar el uso adecuado de las medicinas

tradicionales, 2004. [fecha de acceso 05 de junio de 2009]. URL disponible en:

http://www.who.int/mediacentre/news/releases/2004/pr44/es/index.html

53. Olsen O. Willford: “Parasitología Animal II”. Editorial Aedos, España, 1988.

54. Peres I.: “Parasitología”. Editorial Blume, Madrid España, 1990

55. Peña E. Carlos; Carter E. Dean:”Toxicológia ambiental”. Universidad de Arizona,

EUA, 2001.

56. Romero J. Marialina; Olazábal M. Ervelio; Martinez Yusnel; Serrano Héctor;

Monteagudo Alcides: “Actividad fasciolicida in vitro de Portulaca oleracea L.”,

Universidad Central de las Villas, Cuba, 2002.

[fecha de acceso 03 de febrero de 2009]. URL disponible en:

http://www.latamjpharm.org/trabajos/21/4/LAJOP_21_4_2_1_0O54CUU803.pdf

57. Rojas M.: “Parasitismo de los Rumiantes Domésticos”. Editorial Maijosa, Lima

Perú, 1990.

58. Rojas M. Juan de Dios: “Efectividad y Resistencia Antihelmintica de Fasciola

hepatica a Triclabendazol en el fundo el Cortijo, distrito Baños del Inca

Cajamarca, Perú”. Universidad Nacional de Cajamarca, Perú, 2006.

[fecha de acceso 05 de junio de 2009]. URL disponible en:

http://www.engormix.com/efectividad_resistencia_antihelmintica_fasciola_s_artic

ulos_1421_GDC.htm

59. Roberts L.; Janovi J.: “Ultra Estructura del Tegumento de Fasciola hepatica

Trematoda, forma y función de los Digeneos” en la Fundación de Parasitología

G. D. Schmidt y L. S. Roberts. MC Graw Hill Boston, 1996.

70

http://www.who.int/mediacentre/news/releases/2004/pr44/es/index.html

60. Salazar F. Judith: “Triclabendazol como antiparasitario de Fasciola hepatica en

humanos”. Universidad Nacional San Antonio Abad del Cusco, Biología, Perú,

1997.

61. Smyth J.: “Introducción a la Parasitología Animal”. Tercera Edición, Editado por

Universidad de Cambridge, EUA, 1994.

62. Tecnica de ELISA,2003. [fecha de acceso 04 de junio de 2009]. URL disponible

en:

http://www.ub.es/biocel/wbc/tecnicas/elisa.htm

63. Thomas y Leucart: “Fasciolasis”. Volumen Conmemorativo Centenario del

descubrimiento del Ciclo de Fasciola hepatica, México, 1986.

64. Urquhart G. M.: “Parasitología Veterinaria”. Segunda Edición, Editorial Acribia S.

A., Zaragoza España, 2001.

65. Valencia M. Nicasio; Pariona D. Andrea; Huamán A. Margarita; Miranda M. Fidel

Quintanilla C. Serapio; Gonzáles A. Ana: “Seroprevalencia de fasciolosis en

escolares y en ganado vacuno en la provincia de huancavelica, Perú”, 2005.

[fecha de acceso 01 de junio de 2009]. URL disponible en:

http://www.scielo.org.pe/scielo.php?pid=S1726-6342005000200003&script

=sci_arttext

66. Vidaurre de la Riva Prem Jai: “Plantas medicinales en los Andes de Bolivia”.

Herbario Nacional de Bolivia, Bolivia, 2006. [fecha de acceso 20 de febrero de



67. Woakes A.J.; Grieshaber M. K.; Bridges C.R.: “Estrategias fisiológicas para el

intercambio gaseoso y el metabolismo”. Primera edición, Editado por el Sindicato

de la Universidad de Cambridge, 1991.

71


http://www.scielo.org.pe/scielo.php?pid=S1726-6342005000200003&script

ANEXOS

ANEXO Nº 01

CERTIFICADO DE LA PLANTA

72

ANEXO Nº 02

MEDIO DE CULTIVO

73

Solución de Hedon Fleig (Romero, 2002)

10 g glucosa

7 g NaCl

0.3 g KCl

0.1 g CaCl

1.5 g bicarbonato de sodio

0.3 g MgSO4

Se diluye en un 1L agua destilada

Solución de Hedon Fleig modificado (por el autor de esta tesis)

17.5 g glucosa

7 g NaCl

0.3 g KCl

0.1 g CaCl

2 g bicarbonato de sodio

0.3 g MgSO4

Se diluye en un 1L agua destilada

74

ANEXO Nº 03

REPORTE DE MORBILIDAD DE FASCIOLOSISDIRECCIÓN REGIONAL DE SALUD CUSCO

75

ANEXO Nº 04

REPORTE DE MORBILIDAD DE FASCIOLOSISSERVICIO NACIONAL DE SANIDAD AGRARIA CUSCO

76

ANEXO Nº 05

FICHAS DE RECOLECCIÓN DE LOS TIEMPOS DE LA ACTIVIDAD ANTIHELMÍNTICA

MIRACIDIO

2 15 15 15 151 1 MR MR ML ML ML2 1 MR MR ML ML ML3 1 MR MR ML ML ML4 1 MR MR ML ML ML5 1 MR MR ML ML ML1 1 MR MR MR MR ML2 1 MR MR MR MR ML3 1 MR MR MR MR ML4 1 MR MR MR MR ML5 1 MR MR MR MR ML1 1 MR MR MR MR MR2 1 MR MR MR MR MR3 1 MR MR MR MR MR4 1 MR MR MR MR MR5 1 MR MR MR MR MR1 1 MR MR MR MR MR2 1 MR MR MR MR MR3 1 MR MR MR MR MR4 1 MR MR MR MR MR5 1 MR MR MR MR MR1 1 MR MR MR MR MR2 1 MR MR MR MR MR3 1 MR MR MR MR MR4 1 MR MR MR MR MR5 1 MR MR MR MR MR1 1 MR MR MR MR MR2 1 MR MR MR MR MR3 1 MR MR MR MR MR4 1 MR MR MR MR MR5 1 MR MR MR MR MR

Leyenda: MR: Movimiento rápido V: Vivo ML: Movimiento lento X: Muerte

Blanco

1

0.5

0.25

0.125

0.0625

Extracto Acuoso

MinutosParásito

Placa multipozos

Concentración (%)

Concentración (%) Placa multipozos

Parásito Tiempo (minutos)

Observación Tiempo (minutos)

Observación1 1 0.33 ML 0.67 X2 1 0.33 ML 0.67 X3 1 0.33 ML 0.67 X4 1 0.33 ML 0.67 X5 1 0.33 ML 0.67 X1 1 1 ML 1 X2 1 1 ML 1 X3 1 1 ML 2 X4 1 1 ML 1 X5 1 1 ML 2 X1 1 2 ML 3 X2 1 2 ML 4 X3 1 2 ML 3 X4 1 2 ML 3 X5 1 2 ML 3 X1 1 2 ML 6 X2 1 2 ML 5 X3 1 2 ML 5 X4 1 2 ML 5 X5 1 2 ML 6 X1 1 2 ML 9 X2 1 2 ML 10 X3 1 2 ML 9 X4 1 2 ML 10 X5 1 2 ML 9 X1 1 2 MR 9 MR2 1 2 MR 10 MR3 1 2 MR 9 MR4 1 2 MR 10 MR5 1 2 MR 9 MR

Extracto Etanólico 70°

1


0.5

0.25

0.125

0.0625

Blanco

Concentración (%) Placa multipozos

Parásito Tiempo (minutos)

Observación Tiempo (minutos)

Observación1 1 No se observa No se observa2 1 No se observa No se observa3 1 No se observa No se observa4 1 No se observa No se observa5 1 No se observa No se observa1 1 No se observa No se observa2 1 No se observa No se observa3 1 No se observa No se observa4 1 No se observa No se observa5 1 No se observa No se observa1 1 2 ML 4 X2 1 2 ML 4 X3 1 2 ML 3 X4 1 2 ML 4 X5 1 2 ML 5 X1 1 2 ML 6 X2 1 2 ML 6 X3 1 2 ML 6 X4 1 2 ML 6 X5 1 2 ML 7 X1 1 2 ML 11 X2 1 2 ML 12 X3 1 2 ML 12 X4 1 2 ML 11 X5 1 2 ML 11 X1 1 2 MR 11 MR2 1 2 MR 12 MR3 1 2 MR 12 MR4 1 2 MR 11 MR5 1 2 MR 11 MR


Blanco

Extracto Clorofórmico

1

0.5

0.25

0.125

0.0625

77

FASCIOLA ADULTA

Minutos Placa Parásito

A M S S E E E E E M S S S S E E E E E E E X M M M M M M M M S S S S E E E E E X M M M M M M M M M M M M M M M M M M

B M S S S E E E E X M S S S S S E E E E E E E M M M M M M M M S S S S E E E E E E M M M M M M M M M M M M M M M M M M

C M S S S E E E E M S S S S E E E E E E E X M M M M M M M M S S S S E E E E E M M M M M M M M M M M M M M M M M

D M S S E E E E E M S S S S S E E E E E E X M M M M M M M M S S S S E E E E E M M M M M M M M M M M M M M M M M

E M S S E E E E E E M S S S S E E E E E E E X M M M M M M M M S S S S S E E E E M M M M M M M M M M M M M M M M M

F M S S E E E E E M S S S S E E E E E E E E M M M M M M M M S S S S S E E E E X M M M M M M M M M M M M M M M M M M

G M S S E E E E E M M S S S S E E E E E E X M M M M M M M M S S S S E E E E E M M M M M M M M M M M M M M M M M

H M S S E E E E E X M M S S S S E E E E E E X M M M M M M M M S S S S E E E E E M M M M M M M M M M M M M M M M M

I M S S E E E E E X M S S S S E E E E E E E E M M M M M M M M S S S S E E E E E M M M M M M M M M M M M M M M M M

J M S S E E E E E M S S S S E E E E E E E E M M M M M M M M S S S S E E E E E M M M M M M M M M M M M M M M M M

A M S S E E E E E M S S S S E E E E E E E M M M M M M M M S S S S E E E E E M M M M M M M M M M M M M M M M M

B M S S E E E E E M S S S S S E E E E E E X M M M M M M M M S S S S E E E E E X M M M M M M M M M M M M M M M M M M

C M S S E E E E E M S S S S E E E E E E E M M M M M M M M S S S S E E E E E M M M M M M M M M M M M M M M M M

D M S S E E E E E M S S S S E E E E E E E M M M M M M M M S S S S E E E E E M M M M M M M M M M M M M M M M M

E M S S E E E E E X M S S S S E E E E E E E M M M M M M M M S S S S E E E E E M M M M M M M M M M M M M M M M M

F M S S E E E E E M S S S E E E E E E E E X M M M M M M M M S S S S E E E E E M M M M M M M M M M M M M M M M M

G M S S E E E E E M M S S S S E E E E E E M M M M M M M M S S S S E E E E X M M M M M M M M M M M M M M M M M

H M S S E E E E E M M S S S E E E E E E E M M M M M M M M S S S S E E E E X M M M M M M M M M M M M M M M M M

I M S S E E E E E M S S S S E E E E E E E X M M M M M M M M S S S S E E E E X M M M M M M M M M M M M M M M M M

J M S S E E E E E M S S S S E E E E E E E X M M M M M M M M S S S S E E E E X M M M M M M M M M M M M M M M M M

A S S E E E E E X M S S S S E E E E E E E M M M M M M M S S S S E E E E E E M M M M M M M M M M M M M M M M M

B M S S E E E E E M S S S S E E E E E E E M M M M M M M M S S S E E E E E E M M M M M M M M M M M M M M M M M

C S S S E E E E X M S S S S E E E E E E E M M M M M M M S S S S E E E E E X M M M M M M M M M M M M M M M M M

D S S S E E E E X M S S S S E E E E E E E M M M M M M M S S S S E E E E E X M M M M M M M M M M M M M M M M M

E M S E E E E E E M S S S S E E E E E E E M M M M M M M S S S S S E E E E X M M M M M M M M M M M M M M M M M

F S S E E E E E X M S S S E E E E E E E E M M M M M M M S S S S S E E E E E M M M M M M M M M M M M M M M M M

G S S S E E E E X M S S S S E E E E E E E M M M M M M M S S S S E E E E E M M M M M M M M M M M M M M M M

H S S E E E E E E M S S S S E E E E E E E M M M M M M M S S S S S E E E E M M M M M M M M M M M M M M M M

I M S E E E E E E M S S S E E E E E E E E M M M M M M M S S S S E E E E E M M M M M M M M M M M M M M M M

J S S E E E E E X M S S S S E E E E E E E M M M M M M M S S S S E E E E E M M M M M M M M M M M M M M M M

1 0.5 0.25 0

Extracto Acuoso (%)

10

1

2

3

4

5

Leyenda:

HM: Hipermotilidad M: Movil S: Semimovil E: Parálisis espástica F: Parálisis flacida X: Muerte

10

1

2

3

4

5

10

1

2

3

4

5


A M S S E E E E M M M S S E E E E M M M M S S S E E E E E E M M M M M M M M M M M M M

B M S S E E E E M M M S S E E E E M M M M S S S E E E E E E X M M M M M M M M M M M M M M

C M S S E E E E M M M S S E E E E M M M M S S S E E E E E E M M M M M M M M M M M M M

D M S S E E E E M M M S S E E E E M M M M S S S E E E E E E M M M M M M M M M M M M M

E M S S E E E E M M M S S S E E E X M M M M S S S E E E E E X M M M M M M M M M M M M M

F M S S E E E E M M M S S S E E E E M M M M S S S E E E E E X M M M M M M M M M M M M M

G M S S E E E E M M M S S E E E E X M M M M S S S E E E E E E M M M M M M M M M M M M M

H M S S E E E E M M M S S E E E X M M M M S S S E E E E E E M M M M M M M M M M M M M

I M S S E E E E M M M S S E E E E M M M M S S S E E E E E X M M M M M M M M M M M M M

J M S S E E E X M M M S S E E E E M M M M S S S E E E E E X M M M M M M M M M M M M M

A M S S E E E X M M M S S E E E E M M M S S S S E E E E E E M M M M M M M M M M M M M

B M S S E E E E M M M S S E E E X M M M S S S S E E E E E E M M M M M M M M M M M M M

C M S S E E E X M M S S S E E E X M M M M S S S E E E E E E M M M M M M M M M M M M M

D M S S E E E X M M M S S E E E X M M M S S S E E E E E E E M M M M M M M M M M M M M

E M S S E E E E M M M S S E E E E M M M S S S S E E E E E M M M M M M M M M M M M

F M S S E E E X M M M S S S E E E X M M M S S S S E E E E E M M M M M M M M M M M M

G M S S E E E X M M M S S E E E E M M M S S S S E E E E E E M M M M M M M M M M M M M

H M S S E E E X M M M S E E E E M M M S S S S E E E E E E M M M M M M M M M M M M M

I M S S E E E X M M M S S E E E E M M M S S S E E E E E E M M M M M M M M M M M M

J M S S E E E M M M S S E E E X M M M S S S E E E E E E M M M M M M M M M M M M

A S S E E E E M M S S E E E E X M M M S S S E E E E E E X M M M M M M M M M M M M M

B S S E E E E X M M S S S E E E M M M S S S E E E E E E E M M M M M M M M M M M M M

C M S E E E E M M S S S E E E M M M S S S E E E E E E X M M M M M M M M M M M M M

D S S E E E E M M S S E E E E M M M S S S E E E E E E X M M M M M M M M M M M M M

E M S S E E E X M M S S S E E E E M M M S S S E E E E E E M M M M M M M M M M M M

F S S E E E E M M S S S E E E E M M M S S S S E E E E E M M M M M M M M M M M M

G S S E E E E M M S S S E E E E M M M S S S E E E E E E X M M M M M M M M M M M M M

H S S E E E E M M S S E E E E M M M S S S E E E E E E X M M M M M M M M M M M M M

I S S E E E E M M S S S E E E X M M M S S S E E E E E E M M M M M M M M M M M M

J M S E E E E M M S S E E E E M M M S S S E E E E E E M M M M M M M M M M M M

Leyenda:

HM: Hipermotilidad M: Movil S: Semimovil E: Parálisis espástica F: Parálisis flacida X: Muerte

10

1

2

3

4

5

10

1

2

3

4

Extracto Etanólico 70° (%)1 0.5 0.25 0

5

10

1

2

3

4

5


A HM F HM S F HM S S F F M M M M M

B HM S X HM S F HM S S F F M M M M M

C HM S X HM S F X HM S S F X M M M M M

D HM S X HM S F X HM S S F X M M M M M

E HM S F HM S F X HM S S F F M M M M M

F HM S X HM S F X HM S S F F M M M M M

G HM S X HM S F X HM HM S F X M M M M M

H HM S X HM S F X HM HM S S X M M M M M

I HM S X HM S F X HM S S S F M M M M M

J HM F X HM S F F HM S S F F M M M M M

A HM F HM S F HM S S F F M M M M M

B HM F HM S F HM S S F F M M M M M

C HM F HM F F HM S S F M M M M

D HM F HM F F HM S S F M M M M

E HM S X HM S F HM S S F X M M M M M

F HM S HM S F HM S S F X M M M M M

G HM F HM S F HM S S F M M M M

H HM F HM F F HM S S F M M M M

I HM F HM S F HM S S F X M M M M M

J HM F HM S F X HM S S F X M M M M M

A S X HM S X HM S F F X M M M M M

B S F HM F X HM S S F X M M M M M

C S F S F F HM S S F M M M M

D S F S F F HM S F F M M M M

E HM F HM F F HM S F F M M M M

F HM F HM S F HM S F F M M M M

G S F S F F HM S S F M M M M

H S F S F F HM S S F M M M M

I S F HM S F HM S S F M M M M

J S F HM S F HM S F F M M M M

Leyenda:

HM: Hipermotilidad M: Movil S: Semimovil E: Parálisis espástica F: Parálisis flacida

X: Muerte

2

3

4

10

1

2

3

4

5

Extracto Clorofórmico (%)

1 0.5 0.25 0

5

10

1

2

3

4

5

10

1

78

ANEXO N° 06

RESULTADOS EXPERIMENTALES DE LA ACTIVIDAD ANTIHELMÍNTICA

MIRACIDIOEXTRACTO ACUOSO

TABLA N° 01

BLANCO

MR MR ML V MR MR ML V MR MR V MR MR V MR MR V V

2 15 45 62 2 45 15 62 2 60 62 2 60 62 2 60 62 62

62 62

PROMEDIO

62 2 60 62 2 602 45 15 62 2 605 1 2 15 45 62

62 2 60 62 6215 62 2 60 62 2

62

4 1 2 15 45 62 2 45

62 2 60 62 2 602 45 15 62 2 603 1

60

2 15 45 62

60 62 2 60 62

62

6215 62 2 60 62 2

62 622 60 62 2 60

2 1 2 15 45 62 2 45

622 45 15 62 2 601 1 2 15 45 62

TIEMPO DE MUERTE Y/O VIVO (MINUTOS)

PLACA MULTIPOZO

PARÁSITO1% 0.5% 0.25% 0.125% 0.0625%

Leyenda: MR: Movimiento rápido V: Vivo ML: Movimiento lento

EXTRACTO ETANÓLICO A 70ºTABLA N° 02

BLANCO

ML ML X ML ML X ML ML X ML ML X ML ML X V

0.33 0.67 1 1 1.4 2.4 2 3.2 5.2 2 5.2 7.2 2 9.4 11.4 11.4

TIEMPO DE MUERTE (MINUTOS)

PLACA MULTIPOZO

PARÁSITO1% 0.5% 0.25% 0.125% 0.0625%

6 8 2 9 113 5 21 0.33 0.67 1 1 1 2 2 11

2 1 0.33 0.67 1 1 1 2 2 4 6 2 5 7 2 10 12 12

1

7 2 9 11 113 1 0.33 0.67 1 1 2 3 2

4 1 0.33 0.67 1 1 1 2 2

5 1 0.33 0.67 1 1 2 3 2 3 5 2 5 7 2 9 11 11

3 5 2 5 7 2 10 12 12

3 5 2 5

PROMEDIOLeyenda: MR: Movimiento rápido V: Vivo ML: Movimiento lento X: Muerte

EXTRACTO CLOROFÓRMICOTABLA N° 03

BLANCO

ML ML X ML ML X ML ML X ML ML X ML ML X V

2 4 6 2 6.2 8.2 2 11.4 13.4 13.4PROMEDIO

11 13 13

5 1 2 5 7 2 7 9 2 11 13 13

4 1 2 4 6 2 6 8 2

14 14

3 1 2 3 5 2 6 8 2 12 14 14

1 2 4 6 2 6 8 2 12


PLACA MULTIPOZO

PARÁSITO1% 0.5% 0.25% 0.125% 0.0625%

1 1

NO SE OBSERVA

NO SE OBSERVA

2 4 6 2 6 8 2 11 13 13

2


79

FASCIOLA ADULTAEXTRACTO ACUOSO

TABLA N° 04

BLANCOM S E X M S E X M S E X M

1 20 60 160 240 30 120 220 370 230 120 170 520 5201 30 70 150 250 30 140 210 380 240 110 180 530 5301 20 80 140 240 30 120 220 370 230 120 160 510 5101 20 70 150 240 30 130 210 370 230 120 160 510 5101 30 50 180 260 30 120 220 370 230 140 140 510 5101 20 60 160 240 30 100 250 380 230 140 150 520 5201 20 70 150 240 50 120 200 370 230 120 150 500 5001 20 60 170 250 50 110 210 370 230 130 140 500 5001 30 50 170 250 30 110 240 380 230 120 150 500 5001 20 60 160 240 30 120 230 380 230 120 150 500 500

23 63 159 245 34 119 221 374 231 124 155 510 510PROMEDIO


PLACA PARÁSITO1% 0.5% 0.25%

1

2

3

4

5

Leyenda:S: Semimóvil M: Movil E: Parálisis espástica X: Muerte

EXTRACTO ETANÓLICO A 70ºTABLA N° 05

BLANCOM S E X M S E X M S E X M

1 20 60 120 200 80 60 130 270 100 100 190 390 3901 20 60 130 210 80 70 110 260 100 100 200 400 4001 30 50 120 200 70 80 110 260 110 90 190 390 3901 20 60 120 200 80 60 120 260 100 90 200 390 3901 30 60 120 210 80 80 120 280 100 100 170 370 3701 20 60 120 200 80 90 120 290 100 110 160 370 3701 20 60 120 200 80 70 130 280 100 100 190 390 3901 20 60 120 200 80 50 120 250 100 100 190 390 3901 20 60 120 200 80 70 120 270 100 90 180 370 3701 30 50 110 190 80 60 120 260 100 90 180 370 370

23 58 120 201 79 69 120 268 101 97 185 383 383PROMEDIO



1

2

3

4

5


EXTRACTO CLOROFÓRMICOTABLA N° 06

BLANCOHM S F X HM S F X HM S F X M

1 20 10 30 60 30 30 30 90 30 50 70 150 1501 20 20 30 70 30 20 40 90 30 60 70 160 1601 20 20 30 70 20 20 60 100 30 60 50 140 1401 20 20 30 70 20 20 60 100 30 50 60 140 1401 30 20 30 80 30 20 50 100 30 50 70 150 1501 30 20 20 70 30 30 40 100 30 60 60 150 1501 20 20 30 70 20 30 50 100 40 50 50 140 1401 20 20 30 70 20 20 60 100 40 60 40 140 1401 20 20 30 70 30 30 40 100 30 70 50 150 1501 20 10 40 70 30 30 50 110 30 60 60 150 150

22 18 30 70 26 25 48 99 32 57 58 147 147PROMEDIO



1

2

3

4

5


80

ANEXO N° 07

RESULTADOS EXPERIMENTALES DE LA CL50-18hrs

PRUEBA PRELIMINAR PRUEBA DEFINITIVA

EXTRACTO ACUOSO

CONCENTRACIÓN (ppm)

1 2 3CONCENTRACIÓN

(ppm) 1 2 3

BLANCO 0/10 1/10 1/10 BLANCO 1/10 0/10 0/10

10 1/10 0/10 1/10 300 4/10 3/10 3/10

100 3/10 2/10 2/10 600 5/10 6/10 5/10

1000 8/10 9/10 10/10 900 8/10 9/10 9/10

N° DE ENSAYO N° DE ENSAYO

EXTRACTO ETANÓLICO 70°

CONCENTRACIÓN (ppm) 1 2 3


BLANCO 1/0 0/10 0/10 BLANCO 1/10 0/10 1/10

10 0/10 0/10 3/10 300 3/10 4/10 4/10

100 2/10 2/10 3/10 600 7/10 6/10 6/10

1000 10/10 10/10 10/10 900 9/10 10/10 10/10


EXTRACTO CLOROFÓRMICO



BLANCO 1/10 1/10 0/10 BLANCO 0/10 0/10 1/10

10 3/10 0/10 2/10 300 4/10 3/10 5/10

100 3/10 2/10 3/10 600 9/10 7/10 9/10

1000 10/10 10/10 10/10 900 10/10 10/10 10/10


81

ANEXO N° 08

ANÁLISIS ESTADISTICO DE CADA EXTRACTO MIRACIDIO

EXTRACTO ACUOSO

CONCENTRACIÓN (%)

NTIEMPO DE VIVO MEDIA (MINUTOS)

DESVIACIÓN ESTANDAR

0.25 5 62.0 0.00.125 5 62.0 0.0

0.0625 5 62.0 0.0


CONCENTRACIÓN (%)

N

TIEMPO DE MUERTE MEDIA

(MINUTOS)


0.25 5 5.2 0.40.125 5 7.2 0.4

0.0625 5 11.4 0.5

ANOVASUMA DE

CUADRADOSgl

MEDIA CUADRATICA

F Sig.

INTER GRUPOS 100.133 2 50.067 214.571 0.000

INTRA GRUPOS 2.800 12 .233

TOTAL 102.933 14

PRUEBA DE DUNCAN

CONCENTRACIÓN (%)

NSUBCONJUNTO PARA ALFA=0.05

1 2 3

0.25 5 5.2

0.125 5 7.2

0.0625 5 11.4

Sig. 1.0 1.0 1.0

82


CONCENTRACIÓN (%)

N


(MINUTOS)


0.25 5 6.0 0.70.125 5 8.2 0.4

0.0625 5 13.4 0.5

ANOVASUMA DE

CUADRADOSgl

MEDIA CUADRATICA

F Sig.

INTER GRUPOS 144.400 2 72.200 216.600 0.000

INTRA GRUPOS 4.000 12 .333

TOTAL 148.400 14

PRUEBA DE DUNCAN

CONCENTRACIÓN (%)


1 2 3

0.25 5 6.00.125 5 8.2

0.0625 5 13.4Sig. 1.0 1.0 1.0

83

FASCIOLA ADULTA

EXTRACTO ACUOSO

CONCENTRACIÓN (%)

N


(MINUTOS)


1 10 245.0 7.10.5 10 374.0 5.2

0.25 10 510.0 10.5

ANOVASUMA DE

CUADRADOSgl

MEDIA CUADRATICA

F Sig.

INTER GRUPOS 351206.667 2 175603.333 2805.497 0.000

INTRA GRUPOS 1690.000 27 62.593

TOTAL 352896.667 29

PRUEBA DE DUNCAN

CONCENTRACIÓN (%) NSUBCONJUNTO PARA ALFA=0.05

1 2 3

1 10 245.0 0.5 10 374.0

0.25 10 510.0Sig. 1.0 1.0 1.0


CONCENTRACIÓN (%)

N


(MINUTOS)


1 10 201.0 5.70.5 10 268.0 12.3

0.25 10 383.0 11.6

ANOVASUMA DE

CUADRADOSgl

MEDIA CUADRATICA

F Sig.

INTER GRUPOS 169460.000 2 84730.000 799.899 0.000

INTRA GRUPOS 2860.000 27 105.926

TOTAL 172320.000 29

84

PRUEBA DE DUNCAN

CONCENTRACIÓN (%)


1 2 3

1 10 201.00.5 10 268.0

0.25 10 383.0Sig. 1.0 1.0 1.0


CONCENTRACIÓN (%)

N


(MINUTOS)


1 10 70.0 4.70.5 10 99.0 5.7

0.25 10 147.0 6.7

ANOVASUMA DE

CUADRADOSgl

MEDIA CUADRATICA

F Sig.

INTER GRUPOS 30246.667 2 15123.333 453.700 .000

INTRA GRUPOS 900.000 27 33.333

TOTAL 31146.667 29

PRUEBA DE DUNCAN

CONCENTRACIÓN (%) NSUBCONJUNTO PARA ALFA=0.05

1 2 3

1 10 70.0

0.5 10 99.0

0.25 10 147.0

Sig. 1.0 1.0 1.0

85

ANEXO N° 09

ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE LOS EXTRACTOS AL 0.25%

MIRACIDIO

TABLA N° 06

TIEMPO DE MUERTE Y/O VIVO (MINUTOS)ACUOSO ETANÓLICO CLOROFÓRMICO BLANCO

GRUPOS DE ESTUDIO

V M M V

1 62 5 6 622 62 6 6 623 62 5 5 624 62 5 6 625 62 5 7 62

PROMEDIO 62 5.2 6 62Leyenda:V: Miracidios vivosM: Miracidios muertos

ANÁLISIS DE VARIANZA

TABLA N° 06

ANOVASUMA DE

CUADRADOSgl

MEDIA CUADRÁTICA

F Sig.

INTER GRUPOS 10604.800 2 5302.400 22724.571 0.000

INTRA GRUPOS 2.800 12 0.233

TOTAL 10607.600 14

Leyenda:gl: Grados de libertadF: Distribución de FisherSig: Nivel de significancia


Según los resultados del Análisis de Varianza (ANOVA), se observa que

existen diferencias significativas entre la actividad antihelmíntica y los

diferentes extractos al 0.25% de las hojas de Ambrosia arborescens Mill

“Marcu”, con un nivel de significancia igual a 0.000 frente a miracidios.

86

PRUEBA DE DUNCAN

TABLA N° 06

EXTRACTO NSUBCONJUNTO PARA ALFA = 0.051 2 3

ETANÓLICO 5 5.2

CLOROFÓRMICO 5 6.0

ACUOSO 5 62.0

BLANCO 5 62.0

Sig. 1.0 1.0 1.0


Después de aplicar la prueba de Duncan para determinar cómo se agrupan los

subconjuntos de los extractos al 0.25%, se concluye que la actividad

antihelmíntica del extracto etanólico es más efectiva obteniendo el menor

tiempo de muerte de 5.2 minutos, seguido del extracto clorofórmico con 6

minutos y el extracto acuoso en el cual se mantuvieron vivos, con 62 minutos.

87

ANEXO N° 10


MIRACIDIO

TABLA N° 06

TIEMPO DE MUERTE Y/O VIVO (MINUTOS)ACUOSO ETANÓLICO CLOROFÓRMICO BLANCO

GRUPOS DE ESTUDIO

V M M V

1 62 5 6 622 62 6 6 623 62 5 5 624 62 5 6 625 62 5 7 62

PROMEDIO 62 5.2 6 62Leyenda:V: Miracidios vivosM: Miracidios muertos


TABLA N° 06

ANOVASUMA DE

CUADRADOSgl

MEDIA CUADRÁTICA

F Sig.

INTER GRUPOS 9830.800 2 4915.400 36865.500 0.000


TOTAL 9832.400 14






“Marcu”, con un nivel de significancia de 0.000 frente a miracidios.

PRUEBA DE DUNCAN

88

TABLA N° 06

EXTRACTO NSUBCONJUNTO PARA ALFA = 0.05

1 2 3

ETANÓLICO 5 7.2

CLOROFÓRMICO 5 8.2

ACUOSO 5 62.0

BLANCO 5 62.0

Sig. 1.0 1.0 1.0





tiempo de muerte de 7.2 minutos, seguido del extracto clorofórmico con 8.2


ANEXO N° 11


89

MIRACIDO

TABLA N° 06

TIEMPO DE MUERTE Y/O VIVO (MINUTOS)

ACUOSO ETANÓLICO CLOROFÓRMICO BLANCO

GRUPOS DE ESTUDIO

V M M V

1 62 11 13 622 62 12 14 623 62 11 14 624 62 12 13 625 62 11 13 62

PROMEDIO 62 11.4 13.4 62Leyenda:V: Miracidios vivosM: Miracidios muertos


TABLA N° 06

ANOVASUMA DE

CUADRADOSgl

MEDIA CUADRÁTICA

F Sig.

INTER GRUPOS 8210.533 2 4105.267 20526.333 0.000


TOTAL 8212.933 14

Leyenda: gl: Grados de libertad F: Distribución de Fisher

Sig: Nivel de significancia





“Marcu”, con un nivel de significancia de 0.000 frente a miracidios.

90

PRUEBA DE DUNCAN

TABLA N° 06

EXTRACTO 0.0625% NSUBCONJUNTO PARA ALFA = 0.05

1 2 3

ETANÓLICO 5 11.4

CLOROFÓRMICO 5 13.4

ACUOSO 5 62.0

BLANCO 5 62.0

Sig. 1.0 1.0 1.0





tiempo de muerte de 11.4 minutos, seguido del extracto clorofórmico con 13.4


91

ANEXO N° 12

ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE LOS EXTRACTOS AL 1%

FASCIOLA ADULTA

TABLA N° 06



GRUPOS DE ESTUDIO

M M M V

1240 200 60 520250 210 70 530

2240 200 70 510240 200 70 510

3260 210 80 510240 200 70 520

4240 200 70 500250 200 70 500

5250 200 70 500240 190 70 500

PROMEDIO 245 201 70 510Leyenda:V: Fasciolas vivasM: Fasciolas muerto


TABLA N° 06

ANOVA SUMA DE CUADRADOS gl

MEDIA CUADRÁTICA F Sig.

INTER GRUPOS 165740.000 2 82870.000 2380.309 0.000

INTRA GRUPOS 940.000 27 34.815

TOTAL 166680.000 29Leyenda:gl: Grados de libertadF: Distribución de FisherSig: Nivel de significancia




diferentes extractos al 1% de las hojas de Ambrosia arborescens Mill

“Marcu”, con un nivel de significancia de 0.000 frente a fasciola adulta.

92

PRUEBA DE DUNCAN

TABLA N° 06

EXTRACTO 1% NSUBCONJUNTO PARA ALFA = 0.05

1 2 3 4


ETANÓLICO 10 201.0

ACUOSO 10 245.0

BLANCO 10 510.0

Sig. 1.0 1.0 1.0 1.0



subgrupos de los extractos al 1%, se concluye que la actividad antihelmíntica

del extracto clorofórmico es más efectiva obteniendo el menor tiempo de

muerte de 70 minutos, seguido del extracto etanólico con 201 minutos y el

extracto acuoso con 245minutos.

93

ANEXO N° 13


FASCIOLA ADULTA

TABLA N° 06



GRUPOS DE ESTUDIO

M M M V

1370 270 90 520380 260 90 530

2370 260 100 510370 260 100 510

3370 280 100 510380 290 100 520

4370 280 100 500370 250 100 500

5380 270 100 500380 260 110 500



TABLA N° 06

ANOVASUMA DE

CUADRADOSgl

MEDIA CUADRÁTICA

F Sig.

INTER GRUPOS 384740.000 2 192370.000 2748.143 0.000

INTRA GRUPOS 1890.000 27 70.000

TOTAL 386630.000 29






“Marcu”, con un nivel de significancia de 0.000 frente a fasciola adulta.

94

PRUEBA DE DUNCAN TABLA N° 06

EXTRACTO 0.5% NSUBCONJUNTO PARA ALFA = 0.05

1 2 3 4


ETANÓLICO 10 268.0

ACUOSO 10 374.0

BLANCO 10 510

Sig. 1.0 1.0 1.0 1.0



subgrupos de los extractos al 0.5%, se concluye que la actividad antihelmíntica

del extracto clorofórmico es más efectiva obteniendo el menor tiempo de

muerte de 99 minutos, seguido del extracto etanólico con 268 minutos y el

extracto acuoso con 374 mintuos.

95

ANEXO N° 14


FASCIOLA ADULTA

TABLA N° 06



GRUPOS DE ESTUDIO

M M M V

1520 390 150 520530 400 160 530

2510 390 140 510510 390 140 510

3510 370 150 510520 370 150 520

4500 390 140 500500 390 140 500

5500 370 150 500500 370 150 500



TABLA N° 06

ANOVASUMA DE

CUADRADOSgl

MEDIA CUADRÁTICA

F Sig.

INTER GRUPOS 678646.667 2 339323.333 3496.844 0.000

INTRA GRUPOS 2620.000 27 97.037

TOTAL 681266.667 29






“Marcu”, con un nivel de significancia de 0.000 frente a fasciolas adultas.

96

PRUEBA DE DUNCAN

TABLA N° 06

EXTRACTO 0.25% N

SUBCONJUNTO PARA ALFA = 0.05

1 2 3


ETANÓLICO 10 383.0

ACUOSO 10 510.0

BLANCO 10 510.0

Sig. 1.000 1.000 1.000



subgrupos de los extractos al 0.25%, se concluye que la actividad

antihelmíntica del extracto clorofórmico es más efectiva obteniendo el menor

tiempo de muerte de 147 minutos, seguido del extracto etanólico con 383

minutos y el extracto acuoso con 510 mintuos.

97

ANEXO Nº 15

CÁLCULO DE LA CL50-18 hrs METODO PROBIT

EXTRACTO ACUOSO

Información sobre los datos Nº de casos

Válidos 9

Rechazados

Perdidos 0La transformación log no se puede realizar

0

Número de respuestas > número de sujetos

0

Grupo control 3Estimaciones de los parámetros

PROBITa

Parámetro Estimación Error típico Z Sig.

Intervalo de confianza al 95%

Límite inferior

Límite superior

Concentración 2.937 .735 3.995 .000 1.496 4.378

Intersección -7.811 2.006 -3.894 .000 -9.817 -5.805a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX (Las covariables X se transforman utilizando el logaritmo en base 10.000.)

98

Información sobre la convergancia

Número de iteraciones

Solucón optima

encontradaPROBIT 7 Sí

99

Contraste de chi-cuadrado Chi-cuadrado gl(a) Sig.

PROBIT Contraste de la bondad de ajuste de Pearson

3.301 7 ,856b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los estadísticos basados en casos agregados.b. Como el nivel de significación es mayor que .05, no se utiliza un factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.

Residuos y frecuencias de casillas

Número Concentración

Número de sujetos

Respuestas observadas

Respuestas esperadas Residuos Probabilidad

PROBIT 1 2.477 10 4 2.961 1.039 .296

2 2.477 10 3 2.961 .039 .296

3 2.477 10 3 2.961 .039 .296

4 2.778 10 5 6.363 -1.363 .636

5 2.778 10 6 6.363 -.363 .636

6 2.778 10 5 6.363 -1.363 .636

7 2.954 10 9 8.067 .933 .807

8 2.954 10 9 8.067 .933 .8079 2.954 10 8 8.067 -.067 .807

Limites de confianza

Probabilidad

Límites de confianza al 95% para Concentración

Límites de confianza al 95% para Log(Concentración)(a)

Estimación

Límite inferior

Límite superior

Estimación

Límite inferior

Límite superior

PROBIT ,010 73.692 10.817 144.246 1.867 1.034 2.159

,020 91.249 16.408 166.963 1.960 1.215 2.223

,030 104.499 21.365 183.267 2.019 1.330 2.263

,040 115.720 26.051 196.622 2.063 1.416 2.294

,050 125.730 30.606 208.240 2.099 1.486 2.319

,060 134.930 35.099 218.703 2.130 1.545 2.340

,070 143.549 39.573 228.340 2.157 1.597 2.359

,080 151.732 44.056 237.358 2.181 1.644 2.375

,090 159.578 48.566 245.897 2.203 1.686 2.391

,100 167.159 53.119 254.056 2.223 1.725 2.405

,150 202.573 76.870 291.231 2.307 1.886 2.464

,200 235.997 102.881 325.362 2.373 2.012 2.512

,250 269.035 131.774 358.718 2.430 2.120 2.555

,300 302.627 164.076 392.767 2.481 2.215 2.594

,350 337.488 200.258 428.860 2.528 2.302 2.632

,400 374.274 240.685 468.606 2.573 2.381 2.671

,450 413.677 285.486 514.257 2.617 2.456 2.711

,500 456.503 334.351 569.186 2.659 2.524 2.755

,550 503.763 386.401 638.424 2.702 2.587 2.805

,600 556.798 440.459 729.037 2.746 2.644 2.863

,650 617.489 495.878 850.418 2.791 2.695 2.930

,700 688.621 553.375 1015.577 2.838 2.743 3.007

,750 774.603 615.274 1245.266 2.889 2.789 3.095

,800 883.040 685.716 1577.857 2.946 2.836 3.198

,850 1028.740 772.042 2095.445 3.012 2.888 3.321

,900 1246.689 890.149 3014.902 3.096 2.949 3.479

,910 1305.914 920.602 3294.252 3.116 2.964 3.518

,920 1373.446 954.634 3628.026 3.138 2.980 3.560

,930 1451.739 993.254 4035.222 3.162 2.997 3.606

,940 1544.468 1037.952 4545.492 3.189 3.016 3.658

,950 1657.476 1091.063 5208.240 3.219 3.038 3.717

,960 1800.855 1156.546 6113.464 3.255 3.063 3.786

,970 1994.229 1241.936 7447.831 3.300 3.094 3.872

,980 2283.805 1364.505 9688.536 3.359 3.135 3.986

,990 2827.922 1581.138 14680.026

3.451 3.199 4.167

a. Base del logaritmo = 10.

EXTRACTO ETANÓLICO 70º

Información sobre los datos Nº de casos

Válidos 9

Rechazados

Perdidos 0

La transfroamción log no se puede realizar

0


0

Grupo control 3

Estimaciones de los parámetros

PROBITa

Parámetro Estimación Error típico Z Sig.Intervalo de confianza al

95%

Límite inferior

Límite superior

Concentración 3.713 .798 4.652 .000 2.149 5.278

Intersección -9.655 2.154 -4.484 .000 -11.809 -7.502

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX (Las covariables X se transforman utilizando el logaritmo en base 10.000.)



Número de sujetos



PROBIT 1 2.477 10 3 3.239 -.239 .324

2 2.477 10 4 3.239 .761 .324

3 2.477 10 4 3.239 .761 .324

4 2.778 10 7 7.457 -.457 .746

5 2.778 10 6 7.457 -1.457 .746

6 2.778 10 6 7.457 -1.457 .746

7 2.954 10 9 9.057 -.057 .906

8 2.954 10 10 9.057 .943 .906

9 2.954 10 10 9.057 .943 .906

100



Solucón optima


Contrastes de chi-cuadrado

Chi-cuadrado gl(a) Sig.

PROBITContraste de la bondad de ajuste de Pearson

4.990 7 ,661b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los estadísticos basados en casos agregados.

b. Como el nivel de significación es mayor que .05, no se utiliza un factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.


Probabilidad


Límites de confianza al 95% para Log(Concentración)(a)

Estimación

Límite inferior

Límite superior Estimación

Límite inferior

Límite superior

PROBIT ,010 94.113 27.601 157.272 1.974 1.441 2.197

,020 111.445 36.868 177.597 2.047 1.567 2.249

,030 124.061 44.287 191.895 2.094 1.646 2.283

,040 134.484 50.826 203.445 2.129 1.706 2.308

,050 143.606 56.843 213.384 2.157 1.755 2.329

,060 151.855 62.514 222.253 2.181 1.796 2.347

,070 159.477 67.943 230.357 2.203 1.832 2.362

,080 166.626 73.195 237.886 2.222 1.864 2.376

,090 173.406 78.318 244.968 2.239 1.894 2.389

,100 179.890 83.342 251.694 2.255 1.921 2.401

,150 209.418 107.704 281.848 2.321 2.032 2.450

,200 236.307 131.846 308.851 2.373 2.120 2.490

,250 262.110 156.576 334.607 2.418 2.195 2.525

,300 287.674 182.387 360.204 2.459 2.261 2.557

,350 313.584 209.648 386.479 2.496 2.321 2.587

,400 340.325 238.658 414.249 2.532 2.378 2.617

,450 368.365 269.659 444.462 2.566 2.431 2.648

,500 398.216 302.821 478.356 2.600 2.481 2.680

,550 430.485 338.218 517.639 2.634 2.529 2.714

,600 465.954 375.834 564.729 2.668 2.575 2.752

,650 505.688 415.662 623.041 2.704 2.619 2.795

,700 551.234 457.960 697.433 2.741 2.661 2.844

,750 604.998 503.654 795.208 2.782 2.702 2.900

,800 671.059 554.872 928.673 2.827 2.744 2.968

,850 757.221 615.986 1122.158 2.879 2.790 3.050

,900 881.517 696.877 1435.423 2.945 2.843 3.157

,910 914.479 717.302 1524.761 2.961 2.856 3.183

,920 951.687 739.946 1628.622 2.978 2.869 3.212

,930 994.347 765.426 1751.566 2.998 2.884 3.243

,940 1044.257 794.650 1900.526 3.019 2.900 3.279

,950 1104.245 829.033 2086.725 3.043 2.919 3.319

,960 1179.140 870.959 2329.923 3.072 2.940 3.367

,970 1278.211 924.932 2669.485 3.107 2.966 3.426

,980 1422.912 1001.182 3200.964 3.153 3.001 3.505

,990 1684.949 1132.936 4266.726 3.227 3.054 3.630


101


Información sobre los datos

Nº de casosVálidos 9

Rechazados

Perdidos 0

La transfroamción log no se puede realizar

0


0

Grupo control 3

Estimaciones de los parámetros

Parámetro Estimación Error típico Z Sig.

Intervalo de confianza al 95%

Límite inferior

Límite superior

PROBITa Concentración 4.872 .978 4.983 .000 2.956 6.789

Intersección -12.373 2.578 -4.799 .000 -14.951 -9.794

a. Modelo PROBIT: PROBIT(p) = Intersección + BX (Las covariables X se transforman utilizando el logaritmo en base 10.000.)



Número de sujetos



PROBIT 1 2.477 10 4 3.809 .191 .381

2 2.477 10 3 3.809 -.809 .381

3 2.477 10 5 3.809 1.191 .381

4 2.778 10 9 8.777 .223 .878

5 2.778 10 7 8.777 -1.777 .878

6 2.778 10 9 8.777 .223 .878

7 2.954 10 10 9.784 .216 .978

8 2.954 10 10 9.784 .216 .978

9 2.954 10 10 9.784 .216 .978

102



Solucón optima


Contrastes de chi-cuadrado

Chi-cuadrado gl(a) Sig.PROBIT Contraste de la

bondad de ajuste de Pearson

4.591 7 ,710b

a. Los estadísticos basados en casos individuales difieren de los estadísticos basados en casos agregados.b. Como el nivel de significación es mayor que .05, no se utiliza un factor de heterogeneidad en el cálculo de los límites de confianza.


Probabilidad


Límites de confianza al 95% para Log(Concnetración)(a)

Estimación

Límite inferior

Límite superior Estimación

Límite inferior

Límite superior

PROBIT ,010 115.316 48.138 170.986 2.062 1.682 2.233

,020 131.171 59.378 188.019 2.118 1.774 2.274

,030 142.343 67.816 199.752 2.153 1.831 2.300

,040 151.369 74.931 209.096 2.180 1.875 2.320

,050 159.133 81.254 217.046 2.202 1.910 2.337

,060 166.053 87.047 224.075 2.220 1.940 2.350

,070 172.368 92.455 230.446 2.236 1.966 2.363

,080 178.227 97.575 236.322 2.251 1.989 2.374

,090 183.727 102.469 241.815 2.264 2.011 2.383

,100 188.940 107.184 246.999 2.276 2.030 2.393

,150 212.145 129.023 269.896 2.327 2.111 2.431

,200 232.603 149.330 289.950 2.367 2.174 2.462

,250 251.720 169.079 308.704 2.401 2.228 2.490

,300 270.223 188.793 326.989 2.432 2.276 2.515

,350 288.581 208.814 345.382 2.460 2.320 2.538

,400 307.152 229.399 364.382 2.487 2.361 2.562

,450 326.257 250.758 384.504 2.514 2.399 2.585

,500 346.219 273.075 406.349 2.539 2.436 2.609

,550 367.402 296.513 430.686 2.565 2.472 2.634

,600 390.255 321.235 458.552 2.591 2.507 2.661

,650 415.369 347.431 491.397 2.618 2.541 2.691

,700 443.588 375.398 531.313 2.647 2.574 2.725

,750 476.194 405.697 581.471 2.678 2.608 2.765

,800 515.331 439.459 647.104 2.712 2.643 2.811

,850 565.028 479.041 738.117 2.752 2.680 2.868

,900 634.422 529.929 877.638 2.802 2.724 2.943

,910 652.423 542.510 915.958 2.815 2.734 2.962

,920 672.558 556.340 959.793 2.828 2.745 2.982

,930 695.415 571.759 1010.759

2.842 2.757 3.005

,940 721.863 589.269 1071.280

2.858 2.770 3.030

,950 753.256 609.644 1145.211

2.877 2.785 3.059

,960 791.888 634.182 1239.202

2.899 2.802 3.093

,970 842.107 665.318 1366.188

2.925 2.823 3.136

,980 913.829 708.520 1556.606

2.961 2.850 3.192

,990 1039.473 781.295 1914.683

3.017 2.893 3.282


103

ANEXO Nº 16

Ph DE LOS EXTRACTOS ENSAYADOS FRENTE A MIRACIDIO

EXTRACTO ACUOSO EXTRACTO ETANÓLICO 70ºConcentraciones pH Concentraciones pHAgua destilada 6.238 Agua destilada 6.219

1% 6.990 1% 5.7710.50% 7.035 0.50% 5.7730.25% 7.026 0.25% 5.7950.125% 6.580 0.125% 5.871

0.0625% 6.436 0.0625% 5.951

EXTRACTO CLOROFÓRMICOConcentraciones pHAgua destilada 6.221

1% 6.1870.50% 6.2530.25% 6.2080.125% 6.034

0.0625% 6.171

104

ANEXO Nº 17

Ph DE LOS EXTRACTOS ENSAYADOS FRENTE A FASCIOLA ADULTA

EXTRACTO ACUOSO

ACTIVIDA ANTIHELMÍNTICA CL50-18h

Concentraciones pH Concentraciones pH Concentraciones pH

Solución Hedon Fleig modificado 8.008 Solución Hedon Fleig modificado 8.168 Solución Hedon Fleig modificado 8.001

1% 7.929 10 ppm 8.187 900 ppm 7.9420.5% 7.884 100 ppm 8.173 600 ppm 8.008

0.25% 8.025 1000 ppm 8.033 300 ppm 8.052

EXTRACTO ETANÓLICO 70º



1% 7.656 10 ppm 7.937 900 ppm 7.8680.5% 7.742 100 ppm 7.797 600 ppm 7.838

0.25% 7.828 1000 ppm 7.716 300 ppm 7.944




1% 7.818 10 ppm 7.937 900 ppm 7.9100.5% 7.884 100 ppm 7.890 600 ppm 7.950

0.25% 7.957 1000 ppm 7.846 300 ppm 7.973

105

ANEXO N° 18

SOLUBILIDAD DE LOS EXTRACTOS

SOLVENTE

EXTRACTO

ETANÓLICO 70° CLOROFÓRMICO

AGUA DESTILADA - -

SOLUCIÓN FISIOLÓGICA + -

SHFM ++++ -

Leyenda

++++ : Altamente soluble

++ : Medianamente soluble

+ : Baja solubilidad

- : Insoluble

SHFM :Solución Hedon Fleig Modificado

106

ANEXO N° 19

CONSTRUCCIÓN DE LA INCUBADORA ARTESANAL

53.5 cm

34 cm

MATERIALES

Tripley

Tornillos

Clavos

Socket

Foco 50 watts

Enchufe

Cable mellizo 2x14 AWG.

107

DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIHELMÍNTICA IN VITRO DE LOS EXTRACTOS DE LAS HOJAS DE Ambrosia...

Documents

Transcript of DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIHELMÍNTICA IN VITRO DE LOS EXTRACTOS DE LAS HOJAS DE Ambrosia...