DIAGNÓSTICO DE LABORATORIOMicroscopia:

Tinción de Gram de las muestras de esputo constituye un método rápido de diagnosticar una neumonía y meningitis neumococica. Esto se puede confirmar con quellung(hinchazón); en esta prueba se mezclan anticuerpos anticapsulares polivalentes con las bacterias para después examinarlas al microscopio. La presencia de mayor refringencia alrededor de las bacterias se interpreta como una reacción positiva para S.pneumoniae.

• Detección de Antígenos

▫El polisacárido C del neumococo se excreta en la orina y se puede detectar por medio de un inmunoanalisis comercializado.

• Pruebas basadas en los ácidos nucleicos Se han desarrollado sondas de acidos nucleicos y pruebas de

PCR para la identificacion de S.pneumoniae en cultivo• Cultivo

El cultivo requiere la utilización de medios

enriquecidos con nutrientes (p.ejem agar

de sangre de cordero); el microorganismo

es muy sensible a un gran número de

antibióticos, por lo que el cultivo puede

arrojar resultados negativos en los pacientes

sometidos a un tratamiento parcial

Identificación de Streptococcus pneumoniae

Inoculación de la muestra

Revisión de cultivos

Incubación

35°C/20-24hy 5% CO2

CULTIVO

MÉTODOS MICROBIOLÓGICOSIdentificación de Streptococcus pneumoniae

PRIMOAISLAMIENTO

Colonias alfa hemoliticas

Reaislamiento

Prueba de Optoquina (5 µg/mL de etilhidrocupreina)

Incubación 20-24 hs 35°C y 5% CO2

Streptococcus pneumoniae

Incubación 20-24 hs 35°C y 5% CO2

5μg

10mm

6mm

5μg

Se usa el disco de optoquina para diferenciar entre S. pneumoniae (sensibles) y otras especies de estreptococos a hemolíticos (resistentes). La sensibilidad a la optoquina es una medida de la fragilidad de la membrana celular bacteriana.

Prueba de Optoquina

INTERPRETACIÓN

Prueba de OptoquinaDISCO 6 mm

S: ≥ 14 mm = S. pn9-13 mm= P. Solubilidad

DISCO 10mm

S: ≥ 16 mm = S. pn< 16 mm = P. Solubilidad

Interpretación: Sensible, cuando hay inhibición alrededor del disco. Se considera como punto de corte 16 mm. (discos de 10 mm) o 14 mm (discos de 6 mm). Resistente, cuando el crecimiento no es inhibido alrededor del disco. Los casos de halos intermedios deben resolverse por acumulación de pruebas a favor o en contra.

Solubilidad en bilis

0.5 McFarland

0.25 mL

0.25mLSS 0.25 mL desoxicolato sodio 2%

INCUBACIÓN35°C/ 2h

Identificación de S. pneumoniae

Cultivo puro

Se utiliza esta prueba para diferenciar entre S. pneumoniae, soluble, en bilis y otras especies de estreptococos alfa hemolíticos, “insolubles” en bilis. Esta prueba controla la capacidad de las células bacterianas de producir lisis en presencia de sales biliares, en un tiempo y a una temperatura específica.

Identificación de Streptococcus pneumoniaeSolubilidad en bilis

INTERPRETACIÓN

INHIBICIÓN DE LA TURBIDEZ S. pneumoniae

1 gota desoxicolato al 10%

Desaparición de la colonia

10 min

Sensibilidad: 98%Especificidad: 100%

Positiva cuando se observa un aclaramiento del tubo con desoxicolato respecto al de solución fisiológica. Negativo, cuando no hay diferencia de turbidez entre ambos tubos.