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Detección de productos PCR por Electroforesis

en Gel de Agarosa

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1. Preparación de la cámara Gel

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1. Preparación de la cámara de Gel

1.1 Añadir 1g de Agarosa a 33 ml TAE- Buffer en un matraz Erlenmeyer de

100ml1.2 Hervir la mezcla en un microondas,

agítala e hiervela de nuevo.1.3 Deja enfriar la solución de agarosa

hasta 55 °C ( test del dorso de la mano)y vierte el gel.

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1.4 Después de que el gel está sólido, quita las varillas metálicas de la cámara de electroforesis .

1.5 Rellena la cámara de electroforesis con 270 ml TAE-Buffer para cubrir el gel

1.6 Retira el peine!

1. Preparación de la cámara de Gel

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2. Preparación de las muestras para la Electroforesis en gel

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2. Preparación de las muestras para la electroforesis en Gel

2.1 Saca tus 6 tubos de PCR deltermociclador!2.2 Ponlos en sus correspondientes gradillas!

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2.3 Pipetea 10 µl Naranja G descargando el colorante (LD) en cada uno de los 6 tubos con PCR y mézclalos, golpeándo ligeramente el fondo del tubo con tus dedos.

2. Preparación de muestras para Electroforesis en gel

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3. Rellenar los pocillos del Gel

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3. Rellenar los pocillos del Gel

3.1 Rellena los pocillos del gel de izquierda a derecha con:

- 20 µl patrón de pesos moleculares (MWR)- 20 µl –GMO control con PMM (1)- 20 µl –GMO control con GMM (2)- 20 µl muestra de comida(T) con PMM (3)- 20 µl muestra de comida (T) con GMM (4)- 20 µl +GMO-DNA con PMM (5)- 20 µl +GMO-DNA con GMM (6)

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4. Corriendo la Electroforesis

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4. Corriendo la Electroforesis

4.1 Cierra la cámara de electroforesis y conéctala a 120 V.4.2 Detén la electroforesis cuando el colorante Naranja G haya migrado a 1 cm antes del final del gel.

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5. Haciendo visibles los fragmentos de DNA

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5. Haciendo visibles los fragmentos de ADN

5.1 Abre la cámara de electroforesis saca la placa con el gel. Cuidado con el gel es muy escurridizo!(recoge el TAE buffer, podría utilizarse de nuevo )

5.2 Transfiere el gel en una bandeja de tinción y añade 70 ml de solución de tinción (50x) agitándolo ligeramente durante 2 minutos

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5.3 Quitar la solución de colorante después de dos minutos y desteñir en agua caliente del grifo (40 - 50 °C) agitarlo suavemente por 20 minutes.!

Guarda el colorante para un futuro uso

5. Haciendo visibles los fragmentos de ADN

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6. Evaluación

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6. Evaluación

6.1 Identificar las bandas de ADN en el gel con la ayuda de el patrón de pesos moleculares, con las siguientes longitudes: 100 bp, 200 bp, 500 bp,700 bp, 1000 bp!

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6.2 Está tu muestra de alimento (T) genéticamente modificado?

Prepara una breve charla sobre tus resultados

6. Evaluación

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6.2 Está tu muestra de alimento (T) genéticamente modificado?

Prepara una breve charla sobre tus resultados

6. Evaluación