DNA IN A BOTTLE - SEBBM...Condensación del ADN Agitar invirtiendo el tubo 5 veces para ayudar a la...
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María de los Angeles Pajares
Gemma Rodríguez-Tarduchy
Colaboradores
DNA IN A BOTTLE
Material y consejos
Pipetas de plástico
Tubos eppendorf
Vasos de precipitado
Tubos Falcon
Guantes Recipiente para el ADN
Enjuagar antes de reutilizar
Utilizar de forma continuada
NO introducir más de 1ml de DNA y sellar
Obtención de células epiteliales del interior de la boca
Durante 30 segundos rascar CUIDADOSAMENTE con los dientes la parte interna de la boca
Introducir los 3 ml de agua del tubo de tapa azul en la boca. NO TRAGAR. Enjuagar durante 30 segundos. CUIDADOSAMENTE verter el agua nuevamente en el tubo de tapa azul.
Las células epiteliales que recubren el interior de la boca se renuevan
contínuamente, especialmente cuando masticamos y comemos. Las células viejas
de desprenden dejando paso a células nuevas.
Rotura (lisis) de células epiteliales
Añadir 2 ml de buffer de lisis (tubo tapa verde) sobre los 3 ml del eluido de la boca
Eluido
Buffer de lisis
Rotura (lisis) de células epiteliales
Para extraer el ADN del núcleo celular necesitamos romper las membranas plasmática
y nuclear de las células. El buffer de lisis contiene detergentes capaces de disgrerar los fosfolípidos de las membranas y disolver otros componentes celulares como azúcares y grasas
Detalle de una membrana celular
Esquema de las partes de una célula
Degradación de la proteínas “contaminantes”
Añadir 5 gotas de proteasa (tubo eppendorf) al tubo. Tapar y agitar la solución invirtiendo el tubo cuidadosamente varias veces. Incubar los tubos durante 10 minutos a 50ºC.
La proteasa es un enzima con capacidad proteolítica que utilizamos para degradar las proteínas de la mezcla incluidas
las enzimas capaces de degradar el ADN que queremos obtener. La temperatura óptima a la que esta enzima actua
son 50ºC
Proteasa
Condensación del ADN
Añadir MUY LENTAMENTE sobre el tubo colocado en un ángulo de 45º 10 ml de etanol al 95% (tubo tapa azul con pegatina amarilla). Mantener el tubo en la gradilla sin agitar durante 5 minutos.
Las hebras de ADN son tan finas que es imposible visualizarlas en solución. Para observarlas podemos “concentrarlas” precipitando el ADN en presencia de sales y
alcohol. Las sales neutralizan la carga negativa del ADN permitiendo que las moléculas se agreguen unas a otras. El ADN es insoluble en presencia de sal y alcohol
Condensación del ADN
Agitar invirtiendo el tubo 5 veces para ayudar a la agregación del ADN.
Las sales neutralizan la carga negativa del ADN permitiendo que las moléculas se agreguen unas a otras. El ADN es insoluble en presencia de sal y alcohol
DNA in a bottle
Con ayuda de la pipeta transferir el ADN (no más de 1 ml) al tubo de cristal. Cerrar con el tapón de plástico y sellar con pegamento