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QUiMICA CLiNICA 1993; 12 (6); 428-432
Efecto de los detergentes ionicos y no ionicos en los inmunoanalisisturbidimetricos y nefelometricos
L. Borque de Larreaa , A. Iglesias Garriz. A. Rus Martinez
Resumen
En el preseme trabajo SI! lIa eSl/lCliado el ejeclO de diversos detergellfes ion;cQS, an/alitos )' no ionicos ell das tljJOSde inmllllO(mdlisis homogeneos: (urbidimerricQ J' nejelometrieo.
Los resultados obullidos indican que fa inclusion de detergentes especialmente de lipo no i6nico. en primer fllgarpueden eliminar las prec;pilaciones inespecificas produd.tlas por eJ polietilenglico/ en los mitodos de innulnopreci.pi/acio" ell fase liquida en mas de /In 7/%. a 'ilia propor·cioll final de detergeme tiel 0,1%. En segwu/o II/gar esposible optimizar 51/ proporcion eIflre 0,01 y 0,05% filial,para garum;1,/1r 10 estabilidad de los reac/il'os tIe latex sellsibili:.odos COli ant/geno 0 antlcllerpo. sin a/eclar a la respuesta obtenlda.
Introduccion
Existen nurnerosos inll1unoamiJisis basados en la capacidadpara dispersar la luz que presentan los inmunocomplejosformados mediante In reaccion antigeno-anticuerpo, y enlos que se utilizan metodos lurbidimetricos y nefelometricos de medida. La imroduccion de las micropaniculas delatex recubiertas de amigeno 0 amicuerpo ha potenciadola ulilizaci6n de este tipo de inmunoamilisis, debido a quese mejora la detectabilidad alcanzada (I). Este lipo detccnicas homogeneas estan limitadas por la lurbidez quepresentan los especirnenes y por las precipilaciones quepueden producirse de forma inespecifica durante la determinacion (2). En este scmido, el uso de polietilenglicol comopotenciador de la reaccion amigeno-amicuerpo puedeproducir una interfertncia al inducir 1a precipilacion de laslipoproleinas y de otros conslituyemes endogenos (3).Por otra parte, en los inmunoanalisis con reactivo de lalexpueden producirse agregaciones no especificas de las micropanlculas, ya sea como consecucncia de una faha de eslabilidad de los reactivos de lalex en el medio de reacciono por la presencia de cienos constituyentes sericos, distinlOS del que sc desea cuamificar, capaces de aglutinar ellalex (4).
La adicion de delergemes (5) al medio de reaccion es unprocedimienlo ampliamente usado para reducir la lurbidezde los especimenes y c1iminar las reacciones inespecificas.Ademas, aunque muchas protcinas son solub1cs en la soluci6n acuosa ell la que se desarrolla la reacci6n antigcnoanticucrpo, sus propiedades funcionales 0 inmunologicas amenudo depcnden de la presencia en el medio de un deler-
'Hospiull .san Millin•. ubol'alorio Cmllal.".lb. Aulooomia de: La Rioja. n· 1. 2t1Cll:M.1.0&",,1'10. 1.4 Rioja.Recibido: 11-11·92AcrpladO: I)..PH
428 Quhnica Clinica 1993: 12 (6)
Summary
III this work, we have stlldied differellt ionic, amphotericamll/ol/-ionic (Ietergents in two different types ofhomogenOllS latex Immlllloan'ays: tlIrbldimetric ami nephelometric.
Resllits obtained Indicated that the addition ofdetergents.mainl)' ofnon-ionic t)·pe, has two effects: detergents can eliminate non-specific precipitations callsed by polyethyleneglieol in a liquid-phase InllllllllopreclpltQtion melhod in morethan 7/% of the cases IIsillg a detergent proportion of0.10/,.Ami In acldition they make possible the optimization oft/ieirproportion of between 0.01% and 0.05% to warrant the SUlhility of latex reagelllS semitlz,ed ",ItII Qlltigen or Qlltibocl)~
with no effect 01/ further a/lfigell-Qlltibody response.
genic adecuado (6). Sin embargo, es conocido que algunosdetergelllcs puedcn afectar a fa reacci6n antigeno-anlicuerpodisminuycndo la delectabilidad y el inlervalo analitico dela medida (7).
En estc trabajo se ha esludiado el componamiento de ungrupo amplio de detergenles de diferenles lipos: ionicos, anfolitos y no ionicos, seleccionandose aqueUos que sin aCectar la reaccion 3ntigeno-anlicuerpo son capaces de eliminarlas precipitaciones inespedficas producidas por el polietilenglicol en metodos lurbidim~lricos y de evilar las aglulinaciones no especificas de un reactivo lalex en metodos nefclom~lricos.
Material )' metodos
EspecimenesPara el estudio de las precipilaciones no cspecificas se seleccionaron 10 sueros que presentaban un cambio de absorbancia en allsencia de anticuerpo superior al corrcspondienle al segundo punlO de la curva de calibraci6n delm~lodo turbidimetrico recientemente descrito para 1a albumina (8).
ReaClivQsThrbidimelria: se emple6 una solucion de anlicuerpos (de
cabral contra la albumina humana (fechnicon, Tournai, Belgica, ref TOI-3009-01) y una solucion amortiguadom de fosfato 0,1 mol/L cOllleniendo: 0,05 molll de NnCI, 0,015mollL de NaN). 50 giL de polietilenglicol y un pH de 7.4.Como calibrador se us6 una mezcln de sueros valorado paraalbumina como se ha descrito prcviameme (8).
Nefelometria: se emple6 un reaClivo prtparado can microparliculas de I:ito( recubiertas covalememente con anticuerpos contra la proteina C rcacliva, segun un procedirniento anteriormenle dcscrito (9). EI latex se diluy6 1:15 en
Tabla I, Detergenles analizados, caracterislicas generales
Tipo HD D M, CMC (mmoI/L)---o IONICO$Tween 2~ Polioxielileno Baja No 1242 0,059Tween 4O!I Polioxielileno Baja No 0,027Tween 80!l Polioxielileno Baja No 1324 0,012Triton X-lOO!l Polioxietileno Baja No 647 0,240Triton X-405~ Polioxietileno 0,810Brij.35~ Polioxietileno Baja No 1200 0,091ThesitO!l Polioxietileno Baja No 583 0,090
IONICOSDimclilbenceno acido sulfonieo AIquil-aril-sulfonalO 222Cloruro de benzelonio Amonio cualernario 466Cloruro de benzalconio Amonio cualernarioCloruro de cetilpiridinio Alquil piridinio JS8Bromuro celilmelilamonio Amonio cUalemario 365Acido desoxicolico Acido biliar Alta No 417 20SDS Alquil sulfato Alta 51 288 1,1
ANFOLITOSAnfolito 3-08 Sulfobetaina Aha No 279 140Anfolito 3-10 Sulfobelaina Alta No 307 14Anfolito 3-12 Sulfobetaina Alta No JJ5 1,4Anfolito 3-14 Sulfobctaina Alta No 363 0,14
HD: Habilidad para di~pena! al!'~ados prolriros. 0: Oc:snatUr.l!iQ p.otrirw. Mr: Masa molar. CMC: Corn:eolraci6n mKdar crili<::l (0.1-0.2 moI/L <k /'laO).
solucion amortiguadora de glicina 0,1 mol/L, aCI 0,17mol/l, pH de 8,2 conteniendo 3 gil de albumina serica bovina (Miles Martin-Bayer, ref 81003.4). Como soluci6n amorliguadora de diluci6n y reaccion se uso el N diluent (lnstituto Behring, Barcelona, Espana; ref. OUMT 50/5\). Lacalibraci6n se realiz6 con cI N CRP standard (InstitutoBehring, Espana: ref OUSS lOll\) con un valor asignadode 16 mg/L de proteina C react iva.
Se buscaron aquellas condiciones en las que el reactivoresultaba inestable durante la reaccion produciendose ademas una pobre rtSpuesta de sei\al en la curva de ealibraci6n.Para ello se seleccion6 en un estudio previo un nnticuerpocontra In proteina C reactiva (NIT-antiserum Human-CRP,OSCD 14/15, lote nr> 154525 D) que resultaba inestable sobre el latex induciendo su autoagrcgacion. Ademas, en Indilucion de las particulas de latex recubiertas de anticuerpos se emplc6 una soluci6n amortiguadora con una proporcion de albumina (3 gil) 3 veces menor a la usada en el procedimiento original (9).
DetergentesLa mayoria de los detergentes (tnbla I) fueron suminsilrn·dos por Senoa (Serva, Feinbiochemica, Heidelberg, Alemania) cxcepto los anfolitos, suministrados por Calbiochem(Calbiochent Corporation, la Jolla, EEUU) y el detergenteThesit«l suministrado por Boehringer Mannhcim (Boehringer Mannhcim, Mannhcim, Alemania).
Instrumentaci6nTurbidimelria: las mcdidas se realizaron en un analiza
dor centrifugo Cobas-Bio (Hoffman-La Roche. Basilea. Suiza) equipado con la opti6n DE S (C\'3luaci6n de datos parafunciones de calibrnci6n no lineales).
Nefelometria: sc utiliw el analizador nefelOffietrico de Behring BNA (lnstituto Behring, Espann). EI BNA es un siSlerna para amilisis inmunoquimicos tOlalmente autom:itico yfacilmente programab1c. Las medidas se realizaron a 2 ticmpos fijos: 10 scgundos y 6 minutos despues. Como fuenteluminosa sc utiliza un diodo que emite a 840 nm, estandocI detector colocado en un angulo entre 12 y 24r>.
ProcedimientoA) Condiciones de reaccion
Turbidimetria. En el procedimiemo IUrbidimetrico elCobas-Bio mezda 15 III del especimen y 200 J.(l de solucion amorliguadora de fosfato conteniendo 50 giL de polietilenglicol. Tras un periodo de incubaci6n de 20 segundos y una lcetum inicial (blanco de especimen), anade 7J.(lde soluci6n de amicuerpos contra la albumina humana. EIinstrumemo realiza una medida a los 0.5 segundos. acontinuaci6n realiza 10 lceturas mas con un intervalo de30 segundos entre cada una de elias. La temperatura delanalisis es 25r>C y la longitud de onda de medida de340 nm.
Nefelometria. En el procedimicnto ncfelomctrico eI ana·lizador BNA mezda 40 J.(L de especimen 0 calibrador prediluido en N diluent con 20 J.(L de dislimas soluciones delos detergentes en solucion salina, 40 p.L de reactivo 1:'ite.1(de proteina C reactiva y 120 J.(L de solud6n amortiguadornde reacci6n (N reaclion Buffer). La mezela se incuba a temperatura ambieme 6 minutos. La cur,'3 de calibration consta de 7 puntOS obtenidos por diludones seriadas y autom3ticas del calibrador, progrnmadas en el analizador desde 1:40(v:v) en N diluem.8) EJeclo de los detergemes sabre /u rellct.:i6" owlgelloul1licuerpo.
Para cstudiar el cfecto de los detergenles sabre la reacci6nantigeno·anticuerpo se adicionaron ell distintas proporciones que fueron de 0,05 a 0,2a/o en la soluci6n amortiguadora de reaccion usada en el metodo turbidimetrico, procediendose a continuaci6n a la calibracion del metodo. Se calcul6en tanto por ciemo las desviaciones de las absorbnncias decada pumo de eslas cunoas respttto a los ,oalortS medios correspondiemes a 10 curvas de calibraci6n oblenidas en ausencia de delergeme.C) EJeclo de los detergemes sabre Ius precipilUciofles inespecificus en rurbidimelda.
Para cstudiar cl efecto de los detergcntcs sobre las prccipilaciones illcspecificas en lurbidimetria que se presentancon algunos sueros, se midi6 el incremenlo de absorbanciaproducido en presencia de diferentes proporciones de
Quimka Clillka 1993: 12 (6) ·U9
SDS550
500
4500 40000
x 350
"" 300'ut:: 250"".D;:; 200'".0 150~
100
50
00 0,02 0,04 0.06 0,0 0.10 0,12 0,14 0.16
bumina. L
Thesit
0,06 0,08 0,10 0.12 0,14 0,16
Ibumina. giL
0,02 O.
550
500
4500 4000;::
350x'" 300"u<::
250'".0...2000
'".0 150~
100
50
00
Fi Ur:l I . Ermo dcl lklcrseme Thesil' bre I CUf'\'3 dc calibration CDlurbidimcuilJ. Thesil 0.5 • cn wludon amoniguadorn lkrosralo; x 2s dc 10 CUI'\ lk caJibr.ldon sin delcrg DIe.
Iguna Ib Ermo dd dnCfiC:Jlu: 0 rc la 011'\'" de caJibrnci6n enIUrbudimenia. 0 0.5". en tucion aIDOIuguadota de~ falO;~ xi.l.S d I cun d cali rncion sin det"'!lente.
detergeme en la 0luci6n amoniguadora de reacdon y enau enda de anti uero.
EI tanto por ciemo de inhibici6n producida por cada detergeme se e tablecio efectuando la media de 10 incremen£0 de ab orbancia en 10 10 uero analizados y calculandosu valor en tanto por demo respecto a Ia misma media ob~
tenida en au encia de delergeme.D) EJecto de los detergenles en 10 eliminocion de los oglu
tinaciones no espedjicas del MIa en nejelometr{aLa influencia de 10 derergenre sobre la estabilidad del
reactivo de lale a i como obre la reaccion antigenoanticuerpo, se estudi6 di poniendo 10 detergeme como segundo reactivo en el procedimienlo nefelometrico. Mediante la programacion de di ferenres vohimene de egundo reactivo (de 5 a 40 ~.L) e obtuvieron diferentes proporcionesfinale de detergente en el medio de reacci6n. Obteniendoselas curvas de calibraci6n en las di timas condiciones establecidas. La proporcione utilizadas de detergente fueroninferiore ala. empleada en turbidimetria en funcion dela mayor diluci6n del esptkimen empleada en el procedimiento nefelometrico.
Resultados
Ejecta de {as detergenles sabre la reaccion anligenoonlicuerpo en (urbidimetria.
En la figura Ja se pre entan las cur as de calibracion obrenida para distima proporcione de The it ,asi como lax±2 s de la 10 curva de ealibracion obtenida con el metOdo original. Re uhado imilare e obtuvieron con el re to de 10 detergente no ionico, iendo, 10 porcentajes dedesviacion de 10 alore de ab orbancia corre pondiemesa 10 distimo pUnlO de la curva de calibraei6n respeclO almetodo original ~ I 070 n todo 10 caso . En la figura Ibe expre an 10 r uhado obtenido para el delergeme DS.
Efeeto de inhibi ion imiJare 0 uperiore obre la curvade calibra ion fueron ob ervado on el re to de 10 derergeme i6ni o. I omportamielllo d 10 detergent de tipoanfolilo fu imilar a la ob ervada con 10 detergemes noioni 0 on de ia ione < 22 0 en lodo 10 ca 0 .Eliminacion de las precipitaciones inespedjicas en turbidimetria.
En la figura 2 e repre ema el tanto por ciemo de inhibici6n de la pr ipitacion ine pecilicas con r peelO a la
proporoon en tantO por demo en peso) de detergenre en laoludon amoniguadora de reaccion para Thesi y Tween
20 . Resultado semejames e ob ervaron con el resta de 10detergeme no ionjco con inhibiciones mayores del 10:0 auna proporcion final de delergeme de 0 2 0 aumentando dicha inhibicion al ir aumemando la proporci6n de de(ergeme.
La detergente ianico a excep ion del bromuro de cetilmetilamonio a las proporcione analizadas no on solubleso como en el ca 0 del dimetilbenceno acido sulf6n.ico tienen poco efeclO sobre la precipitaciones inespecifiea . Lodetergeme anfolilico produjeron un incremento en las precipitacione inespecifica que aumentaba con la proporcionde detergeme utilizada (dalo no mostrados).
E te incremento no e ob er 0 en ausencia de especimen y cuando la condi ione de medida se reprodujeronen un espectr6metro con encional a temperatura ambieme.Un efecto amilogo e pre ento con eJ acido desoxicoljco.Ejecta de los deter>elltes en el flu!todo lIejelomeTrico canreactivo Idtex
La resultados obtenido con 10 detergente para estabilizar el reactivo de J::\tex durante la reaccion asi como para mejorar la respue ra en la calibraci6n e exponen en la labia 11.
La diferencia en 10 incremento de luz dispersada entreeJ ealibrador de alIa y baja proporcion aumema can la adj·cion de detergente al medio de reaccion. Sin embargo, enel intervalo de proporcione utilizada , eSte incremento traalcanzar un maximo, di minuye al aumentar la proporcionde deterg nre.
Por otra parte, el incremento de eoal correspondiente alPUntO ma bajo de la cur a de calibracion, di minuye al adicionar el detergeme al aumemar u propor ion 10 que indica un aumento en la e labilidad del reacti o. En el inter·valo de propor ione e IUdiado con todo los detergemeno ionico ceptO el Triton -40 a i omo en el bromuro de cetiJmetilamonio y con 10 anfolito 3-12. 3-14 fuepo ible alcanzar un ompromi 0 entre e labilidad e inhibicion que permite la obten ion de una curva de calibracionoptima.
n la figura 3 pre man algun de e 1a urvas de calibra ion oplimizada. n la curva 1 que repr ema la diferen ia entre do puntO de medida (10 egundo y 6 minuto de pu' ) en ausen ia de proteina C rea (iv3. se ob ervala autoagrega ion dcllcit. decir. eJ latex e inc table enlas condicion de reaccion. ya que en au encia de antigenoproduce un aum mo de la eoal de 1000 bit en estas on-
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120
100
Los detergentes anfolitos 3-08, 3-10, asi como los ionicosacido desoxicolico, SOS y el cloruro de benzalconio parecen producir una agregacion inespecifica durame la reacciOn.
Discusion
Los delergentes se han utilizado habitualmeme en procedimientos de aislamiento y separacion de proteinas, asi comoen todas aquellas situaciones en las que es necesario estabilizar las soluciones de las mismas (JO).
La estabilidad de algunas proteinas sericas y de los real'tivos de lalex, especialmeme en presencia de polietilenglicol, SOD un requisito basico para el desarrollo de inmunoanalisis sin imerferencias debidas a reacciones inespecificasde precipitacion 0 agregacion de las paniculas de latex. Ellose consigue medianle la utilizacion de diversos adith'os, enIre los euales deslacan los detergemes. Sin embargo las condiciones cstablecidas en estOS procedimiemos no deben afectar a la reaccion anligeno-anticuerpo.
Los resultados del presente trabajo indican que cuando seutilizan soludones amortiguadoras de reaceion con elevadasproporciones de polietilenglicol (superiores a 50 giL), los detergentes que mejor eliminan las precipilaciones no especificas, con minima afmacion de Ia reaccion 3nligeno-amicuerpo(desviaciones < 18~,), son los de lipo no ionico en properciones finales enlre 0,2 y 0.5':•. En estas condiciones los detergentes i6nicos producen mayores desviaciones. disminu~n la
20,5 1,0 1,5Concentracion detergerlle ('J.)
o+---~--~-~--~o
~ 40
2J)
diciones no se puede medir. Sin embargo. al observar las curvas 2 y 3 se puede ver como el empleo de pequeilas proporciones de dislimos detergemes en el medio de reaction reduce la autoagregati6n del latex y ademas se obtienen cuevasde calibracion adecuadas para In medida nefelometrica.
.1_.fI 2. Eliminadon de la~ prttipiladona ;ne5peeifieas en rundon de unmngtfl lI.mpl;o de rol\Cl:mracion para dos dele'lemes no i6nico~: • __ •The,il. :tl~ T"'~ll 20".
Tabla II. Inrlucncia del detergente sobre la eslabilidad del hilex en el melodo nefelometrico
DETERGENTE Conccntrad6n en volumen final (010)
0.00 0.011 0,023 0,045 0.068 0.090
NO IONICOSThesit· 69' 1]68- 1241- 11]4 104' 911
1158 903-- 434 69 58 47Brij-3S· 69' 1168 660 459 189 36
1150 46 20 13Twecn-8~ 69' 1023 955 707 634 498
1150 87 '6 25Twcen-4~ 69' 1309 1328 1258 1115 980
1150 3'6 150 58 36 37Twcen-2~ 69' 1197 980 687 478 245
1150 180 120 42 38Triton X~I~ 69' 1078 918 768 659 367
1150 62 " 47 30 13Triton X-405 69' 1189 1303 128] 1276 1225
1150 698 550 488 .., 343IONICOS
SDS 69' 19191150 1953
Addo desoxic6lico 69' 1754 1698 12381150 1282 1087 789
Cloruro de benzalconio 69' 1955 653 1871150 1354 86' 302
Dimctilbc::nccno acido sulf6nico 69' 882 453 1971150 1301 734 J25
Bromuro cetilmetilamonio 69' 1254 1220 1070 867 3671150 345 153 18
ANFOllTOSAnfolilo ]..Q8 69' 1754 1527
1150 787 678AnfolilO ]·10 69' 1805 1834 1731
1150 637 '87 632Anfolilo ]-12 69' 1198 661 322 156 78
1150 J8 18 15Anfolito 3-14 69' 1450 1387 1338 983 9'0
1150 489 398 270 154 40
'Pif(fenda del ir>crenlCmo de I.. dispcnion tic.' luz en unid:&del: nddomo!1ric:as arbllrlr;ai emre los pumo' de Ihl ). baja ro"""mraciOn o:k l:l an":1 o:k calibraci6n."lnc:rememo tic: la di~lXniOn de lll.luz en unidadc5 ndelornt1ricas ~..,rr0:5pondio:nle al punlo o:k ron~lrll.ci6n m!5lQja de 1.1 t\lr'o'a tic.' calibrarian.
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Bibliogrnfia
cion antigeno-anticuerpo 0 para eliminar la reaccione noespecificas ha sido menos estudiada.
En este uabajo no se ha encontrado ninguna relaci6n singificativa entre la proporcion micelar critica de los detergentes y su capacidad para elimjnar las precipitaciones noespeciJicas en turbidimetria 0 para eSlabilizar las particuJasde latex durante la inmunorreaccion en nefelometria, en lascondiciones utilizadas. Hay que tener en cuenta que se disuelven en una soluci6n que contiene ele adas proporciones de polietilenglicol.
Los detergentes anfolitos, debido a sus ele ada concentraciones micelares criticas, han sido citados como buenoscandidatos para mantener proreinas en solucion y no afectar a su union a un sopone plastico de poliestireno (15).
Sin embargo, excepto el anfoUto 3-14 y el anfoLito 3-12,que tienen un aceptable comportamiemo en nefelometria,los detergentes anfolitOs producen una precipitacion inespecifica dependiente de la concentraci6n de proteinas presente y de las condiciones de reaccion y 00 son utile en estas tecnicas.
En conclusion, e puede afirmar que la inclusion de detergentes en los inmunoanalisis homogeneos basados en lacapacidad para dispersar la luz por los inmunoagregados,especialmente de tipo no ionico, puede en primer lugar eLiminar las precipitaciones inespecificas atribuibles al empleode las elevadas concentraciones de poLietiJenglicol habituales en los metodos de inmunoprecipitacion en fase liquiday, en segundo lugar, es posible optimizar su proporcion paragarantizar la eSlabilidad de los reacrivos de laleX sensibilizados con antigeno 0 anticuerpo sin afectar su tanciaLmentea la respuesta obtenida.
° ,o 0,020 0,0400,0600,0800,1000,1200,1400,160
Proleina C reacliva, giL
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respuesta producida por la reacci6n amigeno-anticuerpo 0
algunos no son solubles.Por otra parte, es conocido que los reactivos de micro
particulas de latex sensibilizados con antigeno 0 con anticuerpo poseen una tendencia a la autoagregaci6n cuandolas condicione no son las adecuadas para garantizar su eslabilidad en soluci6n acuosa (11). En nuestro caso, el reactivo uliLizado presentaba una pobre respuesta en la curva decaJibracion junto a una imponante tendencia a la autOagregaci6n en ausencia de antigeno.
La adkion de detergente en el medio de reaccion provocoun aumento inmediato de la reactividad y un aumenro gradual en la estabilidad del reactivo. Sin embargo, el aumentoen la proporcion de detergente determino, en todos los casos, un descenso posterior de reactividad incluso con losdetergentes que tenlan poco efecto sobre la reaccionantigeno-anticuerpo en el estudio realizado en turbidimetria.
La raz6n de esta discrepancia, tal vez se encuentre relacionada con la di ferente forma de presentacion del anticuerpo sobre una superficie s61ida 0 en soluci6n acuosa y conel probable aumento en la repulsion entre las microparticulas sensibilizadas de latex al aumentar la proporcion de detergente. En todo caso, la importancia cuantitativa de esteefecLO va a depender de la afinidad/avidez del anticuerpomilizado, de las condicione de reacci6n y de la naturalezay propiedade de la micropaniculas de laleX empleadas (12).
Una primera cooelu i6n que se puede oblener de los resultados obtenidos es que los detergentes no ionico en general, el brol11uro de cetill11etilal11onio y 10 anfoliro 3-12y 3-14, permitirian la facil optimizacion de su proporci6npara obtener la maxima estabilidad del reactivo de latex conla minima afectacion en la reacci6n antigeno-amicuerpo.
A menudo, la propiedades de los detergentes estan engran parte determinada por do parametros caracteri ticocomo son la concentracion micelar critica y el lamano medio de la micela en 0luci6n (13). Detergente de elevada concentracion micelar critica son adecuados cuando e deseasu facil eliminacion po terior con procedimientos como ladialisis y similares (14). Dtras caracteristicas, como son lacapacidad para inhibir la union de la proteinas a un soporteplastico, parecen aumentar al disminuir la concentraci6n l11icelar critica del detergente (15). La relacion de e to parametros con la capacidad del detergente para inhibir la reac-
Figu ..... 3. Unidadcs ncfclometrica; arbitrarias en funci6n de la conccmraci6nde proteina C react iva. La Curva I reprc cOla la diferencia entre dos pumosde medida (10 segundos y 6 minutos despues) en ,llIscncia dc dctcrgcme. Enlas curvas 2 y 3 se rcprcscnta cI creelO de la adiei6n de detergeme: 2.Thesit al 0,5 "10; 3. AnfolilO 3·12 al 0,5 oro.
432 Quimica Iinica 1993; 12 (6)