EFECTO DE NH4 NO3, KNO3 y Ca (NO3)2 EN LA CALIDAD DE BROTES DE STEVIA rebaudiana BERTONI PROPAGADA...

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El siguiente anteproyecto se realizará en el laboratorio de biotecnología del ITVM en Morelia Michoacán, y tiene como finalidad conocer los requerimientos nutricionales para una mayor producción de brotes y mayor área foliar, se utilizarán segmentos del tallo de 2 cm de longitud aproximadamente, y se sembrarán en un medio de cultivo modificado por Villegas. Se realizarán 3 experimentos sucesivos utilizando un diseño completamente al azar; el primer experimento consistirá en evaluar niveles de NH4 NO3 a 0, 6, 12, 24 (mM) el segundo experimento consistirá en evaluar niveles de KNO3 a 5, 10, 15,20 (mM) y el tercer experimento consistirá en evaluar niveles de 0, 0.7, 1.4, 2.1, 2.8 (mM). Los expantes se encubaran en la sala de incubación por un periodo de cuatro semanas, donde recibirán una temperatura de 22-25°C y un foto periodo de 16 horas luz y 8 horas obscuridad. Las variables a estudiar: i) Conductividad eléctrica (CE), ii) pH, iii) Longitud de brotes, iv) Número de brotes, v) contaminación, vi) contenido de NO3, K y Ca en el medio de cultivo a los 15, 21 y 30 días después de la siembra, vii) Contenido de NO3, K y Ca en los tejidos 30 días después de la siembra, viii) área foliar y ix) clorofila total.

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    SECRETARA DE EDUCACIN PBLICA

    SISTEMA NACIONAL DE EDUCACIN SUPERIOR TECNOLGICA

    DIRECCIN GENERAL DE EDUCACIN SUPERIOR TECNOLGICA

    SUBSECRETARA DE EDUCACIN SUPERIOR

    INSTITUTO TECNOLGICO DEL VALLE DE MORELIA

    EFECTO DE NH4 NO3, KNO3 y Ca (NO3)2 EN LA CALIDAD DE BROTES DE

    STEVIA rebaudiana BERTONI PROPAGADA in vitro.

    PROTOCOLO DE TALLER INVESTIGACIN 2

    QUE PRESENTA:

    SALAS GARCIA MARBELLA

    71

    INGENIERA EN AGRONOMIA

    Dr. Santana Huicochea Gerardo Edmundo MORELIA, MICHOACN,15 DE MAYO DE 2014

  • 2

    NDICE

    1. INTRODUCCIN ...................................................................................................................................... 4

    2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ............................................................................................... 6

    3. OBJETIVOS ................................................................................................................................................ 7

    3.1. Objetivo general ............................................................................................................................. 7

    3.1.1. Objetivo especfico ..................................................................................................................... 7

    4. HIPTESIS ................................................................................................................................................. 8

    4.1. Hiptesis nula .................................................................................................................................. 8

    5. JUSTIFICACIN........................................................................................................................................ 9

    5.1. Social ................................................................................................................................................... 9

    5.1.1. Justificacin econmica ........................................................................................................... 9

    5.1.2. Justificacin ecolgica .............................................................................................................. 9

    5.1.3. Justificacin tecnolgica .......................................................................................................... 9

    6. MARCO TERICO Y ANTECEDENTES ........................................................................................ 10

    6.1. Clasificacin taxonmica de S. rebaudiana ....................................................................... 10

    6.2. Descripcin botnica de la Stevia rebaudiana Bertoni ................................................. 11

    6.3. Contenido nutricional ............................................................................................................... 11

    6.4. Requerimientos edafoclimaticos .......................................................................................... 11

    6.5 Requerimientos nutricionales ................................................................................................ 12

    6.7. Produccin in vitro de S. rebaudiana .................................................................................. 13

    7. METODOLOGA .................................................................................................................................... 15

    7.1. Preparacin del medio de cultivo ......................................................................................... 15

    7.2. Obtencin de los explantes y establecimiento del cultivo asptico. ....................... 16

    7.2.1. Protocolo de desinfeccin ................................................................................................... 16

    7.3Tratamientos a evaluar ............................................................................................................... 17

    8. RESULTADOS ESPERADOS .............................................................................................................. 19

    9. CRONOGRAMA ..................................................................................................................................... 20

    10. BIBLIOGRAFA ................................................................................................................................... 21

    10.1 Bibliografa en lnea ................................................................................................................. 22

  • 3

    NDICE DE CUADROS

    Cuadro 1. Composicin del medio de cultivo propuesto por Murashige y Skoog

    (1962)...14

    Cuadro 2. Soluciones empleadas en el medio de cultivo segn. (Villegas

    1993).15

  • 4

    RESUMEN

    La S. rebaudiana es una especie perteneciente a la familia de las Asteraceae; su

    importancia incide en el sabor dulce caracterstico debido a los esteviosidos y

    rabaudiosidos que posee toda la planta en particular las hojas, es un azcar

    simple debido a esto no es perjudicial al organismo adems que desde un punto

    de vista medicinal regula la glucosa, es antidiurtica, ayuda a combatir la caries.

    Desde el punto de vista econmico es un cultivo que ha tenido un gran impulso ya

    que se ha estado buscando una nueva alternativa para poder sustituir el azcar

    obtenido de la caa de azcar por edulcorantes naturales, S. rebaudiana es un

    cultivo nuevo y muy bien aceptado por algunos pases, la S. rebaudiana se

    propaga principalmente por semilla pero no es viable ya que tarda mucho en

    germinar, y por esquejes se pierde la homogeneidad de cultivo es por esto que se

    han buscado nuevas alternativas de propagacin y la propagacin in vitro es una

    muy buena alternativa ya que se obtiene mayor nmero de plantas en poco tiempo

    y con condiciones aspticas muy buenas, pero para este cultivo no se cuenta con

    la informacin nutrimental necesaria para el medio de cultivo es por esto que est

    trabajo se pretende definir las concentraciones adecuadas de NH4 NO3, NO3 Y Ca

    (NO3)2 que la plata necesita para su crecimiento y desarrollo en condicin in vitro.

    El siguiente anteproyecto se realizar en el laboratorio de biotecnologa del ITVM

    en Morelia Michoacn, y tiene como finalidad conocer los requerimientos

    nutricionales para una mayor produccin de brotes y mayor rea foliar, se

    utilizarn segmentos del tallo de 2 cm de longitud aproximadamente, y se

    sembrarn en un medio de cultivo modificado por Villegas. Se realizarn 3

    experimentos sucesivos utilizando un diseo completamente al azar; el primer

    experimento consistir en evaluar niveles de NH4 NO3 a 0, 6, 12, 24 (mM) el

    segundo experimento consistir en evaluar niveles de KNO3 a 5, 10, 15,20 (mM) y

    el tercer experimento consistir en evaluar niveles de 0, 0.7, 1.4, 2.1, 2.8 (mM).

    Los expantes se encubaran en la sala de incubacin por un periodo de cuatro

    semanas, donde recibirn una temperatura de 22-25C y un foto periodo de 16

    horas luz y 8 horas obscuridad. Las variables a estudiar: i) Conductividad elctrica

    (CE), ii) pH, iii) Longitud de brotes, iv) Nmero de brotes, v) contaminacin, vi)

    contenido de NO3, K y Ca en el medio de cultivo a los 15, 21 y 30 das despus de

    la siembra, vii) Contenido de NO3, K y Ca en los tejidos 30 das despus de la

    siembra, viii) rea foliar y ix) clorofila total.

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    1. INTRODUCCIN

    Debido al incremento en la utilizacin de la caa de azcar como biocombustible,

    se ha buscado la forma de encontrar sustitos directos del azcar de caa, ya que

    el tipo de azcar glucosa provoca daos a la salud ante este problema se han

    buscado alternativas como la S. rebaudiana (Jaramillo et al., 2014).

    El problema ocasionado por los efectos secundarios de los edulcorantes qumicos

    ha ocasionado un aumento en la demanda de los edulcorantes naturales, entre los

    que se encuentra la S. rebaudiana. Japn se ha optado por el uso de cristales de

    S. rebaudiana en lugar del consumo de caa de azcar, afectando ya el 50 % del

    mercado en ese pas. Esto tambin se debe a que los edulcorantes sintticos

    estn prohibidos desde 1970. En la mayor parte del mundo se comienza con este

    cambio, siguiendo los pasos de Japn, sobre todo en los pases primermundistas

    (INIFAP 2012).

    La S. rebaudiana tiene propiedades edulcorantes con un contenido nfimo de

    caloras. Los glucsidos que se extraen de esta planta, estevisidos,

    rebaudisidos y dulcsidos, endulzan hasta 300 veces ms que el azcar refinado,

    mientras que la planta en su forma natural es 15 veces ms dulce que el azcar

    de mesa o sacarosa. Las hojas secas son entre 20 y 35 veces ms dulces que el

    azcar (Brandle, 2005).

    Por lo tanto, el cultivo de la S. rebaudiana es innovador y muy rentable, pues

    presenta condiciones promisorias en los mercados nacionales y mundiales. Es

    interesante observar cmo el consumo de esta planta, ya sea como hierba o como

    productos industrializados derivados de esta especie vegetal, est destinado a

    sustituir el mercado del uso de edulcorantes sintticos tales como el aspartame,

    las sacarinas y los ciclamatos (SAGARPA 2011).

    La alta demanda de esta plant